專利名稱：一種白樺高效轉基因方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種植物轉基因的方法。
背景技術：
白樺(Betula platyphylla Suk.)是東北地區(qū)珍貴闊葉樹種之一,但由于白樺育種周期長，遺傳改良進程緩慢，傳統(tǒng)的白樺育種技術不能按照育種目標設計改造性狀，滿足日益增長的社會需求。因此，開展白樺基因工程育種研究勢在必行。目前，現(xiàn)有的白樺轉基因技術選用的外植體葉片過于幼嫩或者衰老，幼嫩葉片容易被侵染的農(nóng)桿菌感染，需要每天或隔天進行外植體脫菌，這種被感染的葉片不易獲得轉化細胞；衰老葉片雖然不容易被農(nóng)桿菌感染，但葉片分化愈傷組織能力差，也不易獲得轉化細胞。上述原因導致傳統(tǒng)的白樺轉基因方法轉化過程復雜、轉化效率低的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有白樺轉基因方法轉化過程復雜、轉化效率低的問題，提供一種白樺高效轉基因方法。本發(fā)明的一種白樺高效轉基因方法按以下步驟進行:—、選取高度為I 1.5cm繼代培養(yǎng)的白樺無根苗,在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 26天，去除根部再次移入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)30 35天，選取苗高為5 6cm白樺植株的第2或第3片葉片基部的0.2 0.3cm處葉片組織，用于農(nóng)桿菌的侵染；二、將步驟一中葉片浸入農(nóng)桿菌菌液中侵染，其中菌液OD6tltl為0.1，侵染時間為3 5min，將侵染后的葉片放置在無菌濾`紙上吸去附著的菌液，更換濾紙再次吸取菌液；三、將步驟二中浸染后的葉片近軸面向下接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，在溫度為25°C的黑暗條件下進行共培養(yǎng)，培養(yǎng)至第二天，用無菌吸水紙擦拭葉片表面的農(nóng)桿菌，再將葉片移入新的愈傷誘導培養(yǎng)基中繼續(xù)共培養(yǎng)，每天脫菌I次，3 4d結束共培養(yǎng)；四、將步驟三中共培養(yǎng)的葉片轉接至含選擇劑和抑菌劑的愈傷誘導培養(yǎng)基上，25°C光照條件下進行選擇培養(yǎng)，15d后在切口處可見抗性愈傷組織形成，將抗性愈傷組織切下轉接到含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基中，15 20d后產(chǎn)生抗性不定芽，將抗性芽轉接到含選擇劑和抑菌劑的繼代培養(yǎng)基中，待不定芽長到I 1.5cm時，轉接到含選擇劑和抑菌劑的生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，15d后長出不定根，即獲得轉基因株系；其中步驟一中所述的生根培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.2 0.4mg/L的IBA ；步驟三中所述的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.2mg/L的6-BA和濃度為
0.02 0.06mg/L的NAA ;步驟四中所述的含選擇劑和抑菌劑的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.2mg/L的6-BA、濃度為0.02 0.06mg/L的NAA、選擇劑及抑菌劑，所述的含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.2mg/L的6-BA、濃度為0.02 0.06mg/L的NAA、濃度為0.4 0.5mg/L的GA3、選擇劑及抑菌劑，所述的含選擇劑和抑菌劑的繼代培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.0mg/L的6-BA、選擇劑及抑菌齊IJ，所述的含選擇劑和抑菌劑生根培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.2 0.4mg/L的IBA及選擇劑，其中所述的抑菌劑為濃度為250 300mg/L的頭孢霉素或濃度為250 300mg/L 的 Timentin。本發(fā)明所述的選擇劑是與轉入農(nóng)桿菌中質粒的抗生素相對應的，可能的選擇劑為濃度為40 50mg/L的卡那霉素、濃度為3 5mg/L的G418或濃度為5 8mg/L潮霉素等。本發(fā)明包含以下有益效果:該方法通過選擇適宜生理狀態(tài)的外植體，大大增強了葉片抵抗農(nóng)桿菌感染的能力、加速了傷口的侵染機率，脫菌次數(shù)由原來的20 25次減少到7 10次，白樺轉基因效率提高了 2.32 3倍。


圖1為實施例一中繼代培養(yǎng)的白樺外植體；圖2為實施例一中第一次生根培養(yǎng)的外植體；圖3為實施例一中第二次生根培養(yǎng)35天的外植體；圖4為實施例一中轉基因白樺葉片的選擇培養(yǎng)；圖5為實施例一中獲得的轉基因抗性愈傷組織；圖6為實施例一中愈傷組織形成的抗性不定芽。
具體實施方式
本發(fā)明技術方案不局限于以下所列舉具體實施方式
，還包括各具體實施方式
間的任意組合。
具體實施方式
一:本實施方式的一種白樺高效轉基因方法按以下步驟進行:一、選取高度為I 1.5cm繼代培養(yǎng)的白樺無根苗，在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 26天，去除根部再次移入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)30 35天，選取苗高為5 6cm白樺植株的第2或第3片葉片基部的0.2 0.3cm處葉片組織，用于農(nóng)桿菌的侵染；二、將步驟一中葉片浸入農(nóng)桿菌菌液中侵染，其中菌液OD6c 為0.1，侵染時間為3 5min，將侵染后的葉片放置在無菌濾紙上吸去附著的菌液，更換濾紙再次吸取菌液；三、將步驟二中浸染后的葉片近軸面向下接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，在溫度為25°C的黑暗條件下進行共培養(yǎng)，培養(yǎng)至第二天，用無菌吸水紙擦拭葉片表面的農(nóng)桿菌，再將葉片移入新的愈傷誘導培養(yǎng)基中繼續(xù)共培養(yǎng)，每天脫菌I次，3 4d結束共培養(yǎng)；四、將步驟三中共培養(yǎng)的葉片轉接至含選擇劑和抑菌劑的愈傷誘導培養(yǎng)基上，25°C光照條件下進行選擇培養(yǎng)，15d后在切口處可見抗性愈傷組織形成，將抗性愈傷組織切下轉接到含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基中，15 20d后產(chǎn)生抗性不定芽，將抗性芽轉接到含選擇劑和抑菌劑的繼代培養(yǎng)基中，待不定芽長到I 1.5cm時，轉接到含選擇劑和抑菌劑的生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，15d后長出不定根，即獲得轉基因株系；其中步驟一中所述的生根培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.2 0.4mg/L的IBA ；步驟三中所述的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.2mg/L的6-BA和濃度為
0.02 0.06mg/L的NAA ;步驟四中所述的含選擇劑和抑菌劑的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.2mg/L的6-BA、濃度為0.02 0.06mg/L的NAA、選擇劑及抑菌劑，所述的含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.2mg/L的6-BA、濃度為0.02 0.06mg/L的NAA、濃度為0.4 0.5mg/L的GA3、選擇劑及抑菌劑，所述的含選擇劑和抑菌劑的繼代培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.0mg/L的6-BA、選擇劑及抑菌齊IJ，所述的含選擇劑和抑菌劑生根培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.2 0.4mg/L的IBA及選擇劑，其中所述的抑菌劑為濃度為250 300mg/L的頭孢霉素或濃度為250 300mg/L 的 Timentin0本實施方式所述的選擇劑是與轉入農(nóng)桿菌中質粒的抗生素相對應的，可能的選擇劑為濃度為40 50mg/L的卡那霉素、濃度為3 5mg/L G418或濃度為5 8mg/L潮霉素
坐寸o具體實施方式
二:本實施方式與具體實施方式
一不同的是:步驟一中生根培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.4mg/L的IBA。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三:本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是:步驟一中用于農(nóng)桿菌侵染的葉片組織為第2或第3片健壯葉片基部的0.3cm處葉片。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四:本實施方式與具體實施方式
一至三之一不同的是:步驟三中愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L的6-BA和濃度為0.02mg/L的NAA。其它與具體實施方式
一至三之一相同。
具體實施方式
五:本實施方式與具體實施方式
一至四之一不同的是:步驟四中含選擇劑和抑菌劑的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L的6-BA、濃度為
0.02mg/L的NAA、選擇劑和抑菌劑。其它與具體實施方式
一至四之一相同。
具體實施方式
六:本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是:步驟四中含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L的6-BA、濃度為0.02mg/LNAA、濃度為0.5mg/L的GA3、選擇劑和抑菌劑。其它與具體實施方式
一至五之一相同。
具體實施方式
七:本實施方式與具體實施方式
一至六之一不同的是:步驟四中含選擇劑和抑菌劑的繼代培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L的6-BA、選擇劑和抑菌劑。其它與具體實施方式
一至六之一相同。
具體實施方式
八:本實施方式與具體實施方式
一至七之一不同的是:步驟四中含選擇劑和抑菌劑的生根培養(yǎng)基為包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.4mg/L的IBA、選擇劑和抑菌齊IJ。其它與具體實施方式
一至七之一相同。
具體實施方式
九:本實施方式與具體實施方式
一至八之一不同的是:步驟四中抑菌劑為濃度為250mg/L的頭孢霉素或濃度為250mg/L的Timentin。其它與具體實施方式
一至八之一相同。本實施方式所述的選擇劑是與轉入農(nóng)桿菌中質粒的抗生素相對應的，可能的選擇劑為濃度為40 50mg/L的卡那霉素、濃度為3 5mg/L G418或濃度為5 8mg/L潮霉素
坐寸o通過以下實施例驗證本發(fā)明的有益效果:實施例一:一種白樺高效轉GH3.5基因方法，按以下步驟進行:一、選取高度為I 1.5cm繼代培養(yǎng)的白樺無根苗(如圖1)，在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25天，結果如圖2所示，去除根部再次移入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)35天 ，至白樺植株生長至苗高為5 6cm，結果如圖3所示，取第2或第3片健壯葉片基部的0.2 0.3cm處葉片組織，用于農(nóng)桿菌的侵染；二、將步驟一中的葉片浸入農(nóng)桿菌EHA105 (pGH3.5)菌液中侵染，其中菌液OD6tltl為0.1，侵染時間為5min，將侵染后的葉片放置在無菌濾紙上吸去附著的菌液，確保葉表面無殘留的工程菌液；三、將浸染后的葉片近軸面向下接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，在溫度為25°C的黑暗條件下進行共培養(yǎng)，培養(yǎng)至第二天，用無菌吸水紙擦拭葉片表面的農(nóng)桿菌，再將葉片移入新的愈傷誘導培養(yǎng)基中繼續(xù)共培養(yǎng)，每天脫菌I次，3 4d結束共培養(yǎng)；四、將共培養(yǎng)的葉片轉接至含選擇劑的愈傷誘導培養(yǎng)基上，25°C光照條件下進行選擇培養(yǎng)(如圖4)，15d后在切口處可見綠色抗性愈傷組織形成(如圖5)，將抗性愈傷組織切下轉接到含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基中，20d后產(chǎn)生抗性不定芽(如圖6)，將抗性芽轉接到含選擇劑和抑菌劑的繼代培養(yǎng)基中，待不定芽長到I 1.5cm時，轉接到含選擇劑和抑菌劑的生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，15d左右長出不定根，即獲得轉基因株系。其中步驟一中所述的生根培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.4mg/L的IBA ;步驟三中所述的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L的6-BA和濃度為0.02mg/L的NAA ;步驟四中所述的含選擇劑和抑菌劑的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L的6-BA、濃度為0.02mg/L的NAA、濃度50mg/L的卡那霉素及濃度為300mg/L頭孢霉素，所述的含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L 6-BA、濃度為0.02mg/L NAA、濃度為0.5mg/L GA3、濃度50mg/L的卡那霉素及濃度為300mg/L頭孢霉素，所述的含選擇劑的繼代培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為1.0mg/L的6-BA、濃度50mg/L的卡那霉素及濃度為300mg/L頭孢霉素，所述的生根培養(yǎng)基為包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.4mg/L的IBA、濃度50mg/L的卡那霉素及濃度為300mg/L頭孢霉素。通過本實施例進行白樺轉GH3.5基因，通過選擇適宜生理狀態(tài)的外植體，大大增強了葉片抵抗農(nóng)桿菌感染的能力、加速了傷口侵染機率，僅通過7次脫菌即獲得了 48個轉GH3.5基因株系，轉化率為11.6%，比以往的白樺轉基因平均轉化率提高了 2.32倍。實施例二:一種白樺轉CCR基因方法，按以下步驟進行:一、選取高度為I 1.5cm繼代培養(yǎng)的白樺無根苗，在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)24天，去除根部再次移入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)30天，至白樺植株生長至苗高為5` 6cm，取第2或第3片健壯葉片基部的0.2 0.3cm處葉片組織，用于農(nóng)桿菌的侵染；二、將步驟一中的葉片浸入農(nóng)桿菌EHA105 (pCCR)菌液中侵染，其中菌液0D_為
0.1，侵染時間為3min，將侵染后的葉片放置在無菌濾紙上吸去附著的菌液，確保葉表面無殘留的工程菌液；三、將浸染后的葉片近軸面向下接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，在溫度為25°C的黑暗條件下進行共培養(yǎng)，培養(yǎng)至第二天，用無菌吸水紙擦拭葉片表面的農(nóng)桿菌，再將葉片移入新的愈傷誘導培養(yǎng)基中繼續(xù)共培養(yǎng)，每天脫菌I次，3 4d結束共培養(yǎng)；四、將共培養(yǎng)的葉片轉接至含選擇劑的愈傷誘導培養(yǎng)基上，25°C光照條件下進行選擇培養(yǎng)，15d后在切口處可見綠色抗性愈傷組織形成，將抗性愈傷組織切下轉接到含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基中，20d后產(chǎn)生抗性不定芽，將抗性芽轉接到含選擇劑的繼代培養(yǎng)基中，待不定芽長到I 1.5cm時，轉接到含選擇劑的生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，15d左右長出不定根，即獲得轉基因株系。其中步驟一中所述的生根培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.3mg/L的IBA ;步驟三中所述的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為1.0mg/L的6-BA和濃度為0.03mg/L的NAA ;步驟四中所述的含選擇劑和抑菌劑的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為
1.0mg/L的6-BA、濃度為0.03mg/L的NAA、濃度40mg/L的卡那霉素及濃度為250mg/L頭孢霉素，所述的含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為1.0mg/L 6-BA、濃度為0.03mg/L NAA、濃度為0.4mg/L GA3、濃度40mg/L的卡那霉素及濃度為250mg/L頭孢霉素，所述的含選擇劑和抑菌劑的繼代培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為1.2mg/L的6-BA、濃度40mg/L的卡那霉素及濃度為250mg/L頭孢霉素，所述的含選擇劑和抑菌劑的生根培養(yǎng)基為包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.3mg/L的IBA、濃度40mg/L的卡那霉素及濃度為250mg/L頭孢霉素O通過本實施例進行白樺轉CCR基因，通過選擇適宜生理狀態(tài)的外植體，大大增強了葉片抵抗農(nóng)桿菌感染的能力，加速了傷口侵染機率，僅脫菌10次即獲得了 78個抗性芽，轉化率為15%，比以往的 白樺轉基因平均轉化率提高了 3倍。
權利要求
1.一種白樺高效轉基因方法，其特征在于上述方法按以下步驟進行: 一、選取高度為I 1.5cm繼代培養(yǎng)的白樺無根苗，在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 26天，去除根部再次移入生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)30 35天，選取苗高為5 6cm白樺植株的第2或第3片葉片基部的0.2 0.3cm處葉片組織，用于農(nóng)桿菌的侵染； 二、將步驟一中葉片組織浸入農(nóng)桿菌菌液中侵染，其中菌液OD_為0.1，侵染時間為3 5min，將侵染后的葉片放置在無菌濾紙上吸去附著的菌液，更換濾紙再次吸取菌液； 三、將步驟二中浸染后的葉片近軸面向下接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，在溫度為25°C的黑暗條件下進行共培養(yǎng)，培養(yǎng)至第二天，用無菌吸水紙擦拭葉片表面的農(nóng)桿菌，再將葉片移入新的愈傷誘導培養(yǎng)基中繼續(xù)共培養(yǎng)，每天脫菌I次，3 4d結束共培養(yǎng)； 四、將步驟三中共培養(yǎng)的葉片轉接至含選擇劑和抑菌劑的愈傷誘導培養(yǎng)基上，25°C光照條件下進行選擇培養(yǎng)，15d后在切口處可見抗性愈傷組織形成，將抗性愈傷組織切下轉接到含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基中，15 20d后產(chǎn)生抗性不定芽，將抗性芽轉接到含選擇劑和抑菌劑的繼代培養(yǎng)基中，待不定芽長到I 1.5cm時，轉接到含選擇劑和抑菌劑的生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)，15d后長出不定根，即獲得轉基因株系； 其中步驟一中所述的生根培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.2 0.4mg/L的IBA ;步驟三中所述的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.2mg/L的6-BA和濃度為0.02 0.06mg/L的NAA ;步驟四中所述的含選擇劑和抑菌劑的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.2mg/L的6-BA、濃度為0.02 0.06mg/L的NAA、選擇劑及抑菌劑，所述的含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.2mg/L的6-BA、濃度為0.02 0.06mg/L的NAA、濃度為0.4 0.5mg/L的GA3、選擇劑及抑菌劑，所述的含選擇劑和抑菌劑的繼代培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8 1.0mg/L的6-BA、選擇劑及抑菌齊IJ，所述的含選擇劑和抑菌劑生根培`養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.2 0.4mg/L的IBA及選擇劑，其中所述的抑菌劑為濃度為250 300mg/L的頭孢霉素或濃度為250 300mg/L 的 Timentin0
2.根據(jù)權利要求1中所述的一種白樺高效轉基因方法，其特征在于步驟一中生根培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.4mg/L的IBA。
3.根據(jù)權利要求2中所述的一種白樺高效轉基因方法，其特征在于步驟一中用于農(nóng)桿菌侵染的葉片組織為第2或第3片健壯葉片基部的0.3cm處葉片。
4.根據(jù)權利要求3中所述的一種白樺高效轉基因方法，其特征在于步驟三中愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L的6-BA和濃度為0.02mg/L的NAA。
5.根據(jù)權利要求4中所述的一種白樺高效轉基因方法，其特征在于步驟四中含選擇劑和抑菌劑的愈傷誘導培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L的6-BA、濃度為0.02mg/L的NAA、選擇劑和抑菌劑。
6.根據(jù)權利要求5中所述的一種白樺高效轉基因方法，其特征在于步驟四中含選擇劑和抑菌劑的分化培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L的6-BA、濃度為0.02mg/L NAA、濃度為0.5mg/L的GA3、選擇劑和抑菌劑。
7.根據(jù)權利要求6中所述的一種白樺高效轉基因方法，其特征在于步驟四中含選擇劑和抑菌劑的繼代培養(yǎng)基包含WPM培養(yǎng)基、濃度為0.8mg/L的6-BA、選擇劑和抑菌劑。
8.根據(jù)權利要求7中所述的一種白樺高效轉基因方法，其特征在于步驟四中含選擇劑和抑菌劑的生根培養(yǎng)基為包含WPM培養(yǎng)基和濃度為0.4mg/L的IBA、選擇劑和抑菌劑。
9.根據(jù)權利要求8中所述的一種白樺高效轉基因方法，其特征在于步驟四中抑菌劑為濃度為250mg/L的頭 孢霉素或濃度為250mg/L的Timentin。
全文摘要
一種白樺高效轉基因方法，涉及一種植物轉基因的方法。該方法是要解決現(xiàn)有白樺轉基因方法轉化效率低，脫菌過程復雜的問題。該方法按以下步驟進行一、將繼代培養(yǎng)的無根苗兩次生根培養(yǎng)，選取適用于農(nóng)桿菌侵染的健壯葉片；二、農(nóng)桿菌侵染；三、共培養(yǎng)；四、通過愈傷培養(yǎng)、分化培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，最終獲得轉基因植株。該方法通過選擇適宜生理狀態(tài)的外植體，大大增強了葉片抵抗農(nóng)桿菌感染的能力、加速傷口侵染幾率，脫菌次數(shù)由原來的20～25次減少到7～10次，白樺轉基因效率提高了2.32～3倍。該方法可應用于白樺轉基因領域。
文檔編號A01H4/00GK103146749SQ20131010116
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月27日 優(yōu)先權日2013年3月27日
發(fā)明者姜靜, 楊光, 韋睿, 劉桂豐 申請人:東北林業(yè)大學