專利名稱：紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物組培生根培養(yǎng)基，特別涉及紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
獼猴桃是一種經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高的木質(zhì)藤本植物，獼猴桃實(shí)肉厚汁多，酸甜適度，營養(yǎng)豐富，以其維生素C特高的營養(yǎng)價(jià)值而成為當(dāng)前水果中之珍品，已經(jīng)成為當(dāng)今世界的新興栽培果樹。獼猴桃家族中的特色品種紅肉獼猴桃，果實(shí)子房鮮紅色，果肉黃綠色，果實(shí)中大，圓柱形，整齊度高，商品性能好，果皮綠褐包無毛，單果重92. 5克，最大150克。含糖量高，總糖13. 45%，總酸0. 49%，可溶性固形物19. 6% 24%，維生素C含量每100克135. 77毫克以上，具有極高的市場前景和開發(fā)利用價(jià)值。
獼猴桃屬雌雄異株，倍性復(fù)雜，雌雄株間花期不遇使種間雜交困難，育種周期長，且有不確定性，給育種工作帶來了難度，系統(tǒng)開展其組織培養(yǎng)研究具有重要的意義。通過嫁接繁殖優(yōu)良苗木的速度有限，而利用種子繁殖的實(shí)生苗性狀不穩(wěn)定，雌株不易獲得。隨著獼猴桃栽培的進(jìn)一步興起和引種工作的進(jìn)行，良種苗需要量急劇增加，而采用常規(guī)繁育方法周期長、成活率低，采用組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖獼猴桃成為重要的良種繁育途徑。組織培養(yǎng)獲得的植株不僅品種性狀穩(wěn)定，而且繁殖速度快，是現(xiàn)在普遍認(rèn)同的良種繁育方法。中華獼猴桃、美味獼猴桃等許多品種都曾用作組織培養(yǎng)研究的材料進(jìn)行品種推廣。組織培養(yǎng)是否成功，在很大程度上取決于對培養(yǎng)基的選擇。目前，植物組織培養(yǎng)普遍使用的培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。其由大量元素(硝酸鉀、硝酸銨、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和氯化鈣)、微量元素(碘化鉀、硼酸、硫酸錳、硫酸鋅、鑰酸鈉、硫酸銅和氯化鈷)、鐵鹽(乙二胺四乙酸二鈉和硫酸亞鐵)、有機(jī)物(肌醇、甘氨酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇和煙酸)、激素(6-芐氨基嘌呤、萘乙酸和吲哚乙酸等)、蔗糖和瓊脂組成大量元素保證植株生長所需的礦質(zhì)營養(yǎng)并加速愈傷組織的生長；微量元素、鐵鹽和有機(jī)物給予植株全面的營養(yǎng)保證，確保植株正常生長；激素的調(diào)控使植株在離體條件下快速健壯生長；蔗糖為植株生長提供必需的碳源并調(diào)節(jié)滲透壓；瓊脂對植株起支持和固定作用。紅肉獼猴桃組培工廠化育苗的技術(shù)問題還沒完全解決，采用MS培養(yǎng)基紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖培養(yǎng)時(shí)，常出現(xiàn)以下問題組培生根苗基部愈傷組織膨大，組培苗生長勢弱、葉片大、莖矮小、節(jié)間伸長生長慢、增殖系數(shù)低等現(xiàn)象等。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于對MS培養(yǎng)基進(jìn)行改進(jìn)，提供一種適合紅肉獼猴桃組培苗的培養(yǎng)基，更進(jìn)一步地，本發(fā)明涉及一種適合紅肉獼猴桃組培苗連續(xù)繼代、快速、高效和/或穩(wěn)定生長的增殖培養(yǎng)基。為達(dá)到此目的，本發(fā)明的紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖養(yǎng)基(ACT)，包括以下組分硝酸鐘 KNO31500-2400mg/L
硝酸銨 NH4NO31250-2050 mg/L
磷酸二氫鉀 KH2PO4300-440 mg/L
磷酸二氫納 NaH2PO4 . 2H20120-220 mg/L
硫酸鎂 MgSO4 . 7H20300-440 mg/L
硝酸釣 Ca (NO3) 2 . 4H20200-400 mg/L
石典化鐘 KI0. 63-1. 0 mg/L
硼酸 H3BO34-10 mg/L
硫酸錳 MnSO4 4H2018-26 mg/L
硫酸鋅 ZnSO4 . 7H206-10mg/L
鉬酸納 Na2MoO4 2H200. 15-0. 35 mg/L
硫酸銅 CuSO4 . 5H2O0. 015-0. 035 mg/L
氯化鈷 CoCl2. 6H200. 015-0. 035 mg/L
乙二胺四乙酸二鈉 Na2-EDTA . 2H2030-50mg/L
硫酸亞鐵 FeSO4 7H2020-40 mg/L
肌醇150-250 mg/L
甘氨酸1-3 mg/L鹽酸疏胺素VB10. 3-0. 7 mg/L
鹽酸吡哆醇VB60. 3-0. 7 mg/L
煙酸 VB5或 VPP0. 3-0. 7 mg/L
6-芐氨基嘌呤6-BA1-2 mg/L
吲咮乙酸 IBA0.1-0. 4 mg/L
庶糖1000G -50000mg/L
卡拉股2000 -8000mg/L本發(fā)明優(yōu)選的培養(yǎng)基包括如下組分硝酸鉀 KNO31900 mg/L
硝酸銨 NH4NO31650 mg/L
磷酸二氫鉀 KH2PO4370 mg/L
磷酸二氫鈉 NaH2PO4 . 2H20170 mg/L
硫酸鎂 MgSO4 . 7H2O370 mg/L
硝酸鑰 Ca (NO3) 2 4H2O300 mg/L
碘化鉀 KI0. 83 mg/L硼酸 H3BO36. 2 mg/L
硫酸錳 MnSO4 . 4H2022. 3 mg/L
硫酸鋅 ZnSO4 . 7H208. 6 mg/L
相酸納 Na2MoO4 . 2H200. 25 mg/L
硫酸銅 CuSO4 5H2O0. 025 mg/L
氯化鈷 CoCl2. 6H200. 025 mg/L
乙二胺四乙酸二鈉 Na2-EDTA . 2H2037. 3 mg/L
硫酸亞鐵 FeSO4 7H2027. 8 mg/L
肌醇200 mg/L
甘氨酸2 mg/L鹽酸疏胺素VB10. 5 mg/L
鹽酸p比口多醇VB60. 5 mg/L
煙酸 VB5 或 VPP0. 5 mg/L
6-辛氣基票吟6-BAI. 5 mg/L
吲哚乙酸IBA0.3 mg/L
蔗糖30000 mg/L
卡拉膠6000 mg/L在本發(fā)明中，除非有特殊說明，當(dāng)所述組分中含有結(jié)晶水時(shí)，所述的質(zhì)量體積濃度是指帶有結(jié)晶水的質(zhì)量體積濃度，所述的組分的中文名稱也是指帶有結(jié)晶水的組分名稱。
本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明的紅肉獼猴桃繼代增殖培養(yǎng)基，在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，通過調(diào)整大量元素的種類和濃度和優(yōu)化激素調(diào)控瓊脂濃度等，為紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖提供了均衡合理的營養(yǎng)需求，保證了其快速、高效、健壯生長，有效的促進(jìn)了節(jié)間伸長，提高了增殖系數(shù)。


為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將結(jié)合附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，其中圖I為以ACT培養(yǎng)基培養(yǎng)的紅肉獼猴桃組培苗照片。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。 本發(fā)明以紅肉獼猴桃優(yōu)良單株離體芽器官誘導(dǎo)培養(yǎng)擴(kuò)繁而來的組培繼代苗為試驗(yàn)材料，在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加了 NaH2PO4 ·2Η20和Ca(NO3)2 ·4Η20，去掉了 CaC12 ·2Η20，調(diào)整了肌醇和鹽酸硫胺素的濃度，并優(yōu)化激素調(diào)控和瓊脂濃度等。I、紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖基本培養(yǎng)基優(yōu)化(I)材料與方法將紅肉獼猴桃優(yōu)良單株離體芽器官誘導(dǎo)培養(yǎng)擴(kuò)繁而來的組培繼代苗轉(zhuǎn)接到不同的培養(yǎng)基配方中進(jìn)行增殖培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)基分別以Β5、MS和ACT為基本培養(yǎng)基，均包含配比為6-ΒΑ1. 0mg/L+NAA0. 3mg/L的激素，培養(yǎng)溫度控制在25±1°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度2000LuX-3000LuX。每個(gè)處理50個(gè)芽，25d后統(tǒng)計(jì)增殖后的苗高、總芽數(shù)、增殖系數(shù)、愈傷及芽苗的生長情況。(2)結(jié)果與分析植物的基本培養(yǎng)基是植物組培營養(yǎng)物質(zhì)供給的基礎(chǔ)。由表3可知，試驗(yàn)中所比較的3種基本培養(yǎng)基對紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖的影響明顯差異，其中以B5和MS為培養(yǎng)基的所有處理，繼代苗生勢弱于ACT的處理。以ACT為培養(yǎng)基的處理，在苗高、總芽數(shù)/株和增殖系數(shù)都優(yōu)于B5和MS處理。綜合考慮，ACT培養(yǎng)基更適紅肉獼猴桃繼代增殖。表3不同激素濃度配比對灰氈毛忍冬‘渝蕾I號’芽苗繼代的影響
權(quán)利要求
1.紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖培養(yǎng)基，其特征在于包含以下濃度的組分硝酸鉀 KNO31500-2400mg/L硝酸銨 NH4NO31250-2050 mg/L磷酸二氫鉀 KH2PO4300-440 mg/L鱗酸二氫鈉 NaH2PO4 · 2H20120-220 mg/L硫酸鎂 MgSO4 . 7H20300-440 mg/L硝酸釣 Ca (NO3) 2 · 4H20200-400 mg/L破化鉀 KIO. 63-1. O mg/L硼酸 H3BO34-10 mg/L疏酸猛 MnSO4 . 4H2O18-26 mg/L硫酸鋅 ZnSO4 · 7H2O6-10mg/L鉬酸納 Na2MoO4 . 2H20O. 15-0. 35 mg/L硫酸銅 CuSO4 . 5H200. 015-0. 035 mg/L氯化鈷 CoCl2. 6H200. 015-0. 035 mg/L乙二胺四乙酸二鈉 Na2-EDTA · 2H2030-50mg/L硫酸亞鐵 FeSO4 · 7H2020-40 mg/L肌醇150-250 mg/L甘氨酸1-3 mg/L鹽酸疏胺素VB10. 3-0. 7 mg/L鹽酸吡哆醇VB6O. 3-0. 7 mg/L煙酸 VB5* VPPO. 3-0. 7 mg/L6-千氣基嗓吟6-BA1-2 mg/L吲咮乙酸 IBAO. 1-0. 4 mg/L蔗糖10000 -50000mg/L卡拉膠2000 -8000mg/L
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的紅肉獼猴桃組培苗增殖培養(yǎng)基，其特征在于所述NaH2PO4 · 2H20 的濃度為 170mg/L，Ca(NO3)2· 4H20 的濃度為 300mg/L，肌醇的濃度為 200mg/L,鹽酸硫胺素的濃度為O. 5mg/L, 6-BA濃度I. 5mg/L, IBA濃度O. 1-0. 3mg/L,優(yōu)選為O. 3mg/L0
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的紅肉獼猴桃組培苗增殖培養(yǎng)基，其特征在于包含以下濃度的組分 硝酸鉀 KNO31900 mg/L 硝酸銨 NH4NO31650 mg/L 鱗酸二氫鉀 KH2PO4370 mg/L 鱗酸二氫鈉 NaH2PO4 . 2H20170 mg/L硫酸鎂 MgSO4 · 7H20370 mg/L 硝酸4弓 Ca (NO3) 2 · 4H20300 mg/L 碘化鉀 KIO. 83 mg/L 硼酸 H3BO36. 2 mg/L疏酸錳 MnSO4 · 4H2022. 3 mg/L硫酸鋅 ZnSO4 · 7H208. 6 mg/L 相酸鈉 Na2MoO4 . 2H200. 25 mg/L 硫酸銅 CuSO4 · 5H2O0. 025 mg/L氯化鈷 CoCl2. 6H200. 025 mg/L 乙二胺四乙酸二鈉Na廠EDTA . 2H2037. 3 mg/L 硫酸亞鐵 FeSO4 · 7H2027. 8 mg/L 肌醇200 mg/L 甘氨酸2 mg/L 鹽酸疏胺素VB10. 5 mg/L鹽酸p比哆醇VB6O. 5 mg/L 煙酸 VB5 或 VPPO. 5 mg/L6-芐氨基嘌呤6-BAI. 5 mg/L吲咮乙酸IBAO. 3 mg/L蔗糖30000 mg/L卡拉膠6000 mg/L
4.一種紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖方法，其特征在于以權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的培養(yǎng)基為培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的增殖方法，其特征在于所述的組培苗以紅肉獼猴桃優(yōu)良單株離體芽器官誘導(dǎo)培養(yǎng)擴(kuò)繁而來的組培繼代苗進(jìn)行增值培養(yǎng)。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖培養(yǎng)基，在MS培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，通過調(diào)整大量元素的種類和濃度和優(yōu)化激素調(diào)控瓊脂濃度等，為紅肉獼猴桃組培苗繼代增殖提供了均衡合理的營養(yǎng)需求，保證了其快速、高效、健壯生長，有效的促進(jìn)了節(jié)間伸長，提高了增殖系數(shù)。
文檔編號A01H4/00GK102823498SQ20121034962
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月20日
發(fā)明者唐建民, 劉奕清, 陳澤雄, 廖林正, 黃科, 黃登艷, 袁海英 申請人:重慶文理學(xué)院