專利名稱：一種藥用肉穗草叢芽快速成苗方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及一種藥用肉穗草叢芽快速成苗方法。
背景技術：
肉穗草(Sarcopyramis bodinieri Levi. Et Van)為野牡丹科植物，生于海拔1000-2450m的山谷密林下、陰濕的地方或石縫間?！吨腥A本草》記載肉穗草清熱利濕；消腫解毒。主熱毒血?。皇顫裥篂a；肺熱咳嗽；目赤腫痛；吐血；疔瘡腫毒；外傷紅腫；毒蛇咬傷。民間用于治療急性肝炎(甲肝、乙肝急性期)療效最佳，對慢性肝炎及乙肝病毒攜帶者亦有效。在福建閩南一帶銷量較大，目前野生資源日趨枯竭。肉穗草自然繁殖系數(shù)低，人工栽培采用分株或扦插繁殖成活率不高。采用植物組織培養(yǎng)技術，以野生肉穗草末端莖段為外 植體，在無菌條件下將含有一個莖節(jié)的莖段接種于培養(yǎng)基上生長，再經(jīng)多次轉接培養(yǎng)，可以培育成大量的肉穗草種苗。本發(fā)明是肉穗草種苗快速繁殖的重要方法之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所述的一種藥用肉穗草叢芽快速成苗方法，為人工栽培肉穗草提供種苗，發(fā)展肉穗草生產(chǎn)，即能保護我國藥用野生資源肉穗草，又能滿足市場的需求。本發(fā)明采用植物組織培養(yǎng)技術，以野生肉穗草末端莖段為外植體，在無菌條件下將含有一個莖節(jié)的莖段接種于培養(yǎng)基上生長，再經(jīng)多次轉接培養(yǎng)，可以培育成大量的肉穗草種苗。本發(fā)明是肉穗草種苗快速繁殖的重要方法之一。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的具體的技術方案為
一種藥用肉穗草叢芽快速成苗方法，其特征在于所述的快速成苗方法包括以下步驟
(I)取材消毒；(2)培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)種苗移植栽種；所述培養(yǎng)基包括不同生育階段的三種培養(yǎng)基，這三種培養(yǎng)基配方分別為
①叢芽誘導培養(yǎng)基MS+ 0. 5mg/L BA + 0. 2mg/L NAA，白糖30 g/L，瓊脂0. 7%，pH5. 6 ；
②叢芽增殖培養(yǎng)基MS+ 2. Omg/L BA + 0. 2mg/L NAA，白糖20 g/L，瓊脂0. 6%，pH5. 6 ；
③壯苗生根培養(yǎng)基1/2MS+ 0. lmg/L NAA + 0. lmg/L IBA,活性碳0. 2%，白糖15g/L，瓊脂 0. 5%，pH5.6。所述的取材消毒具體步驟為從野生肉穗草植株切下帶頂芽的嫩莖段或帶節(jié)的嫩莖段，用自來水沖洗干凈；在無菌條件下操作，將切下的嫩莖段先用75%的酒精消毒10s，再用0. 1%的升萊溶液浸泡8 12min,最后用無菌水沖洗5 6次；浙干水分,放入無菌的培養(yǎng)皿中備用；
所述的培養(yǎng)基培養(yǎng)具體步驟為將消毒后備用的嫩莖段在無菌條件下切成長
0.5-1. 5cm、含一個莖節(jié)的莖段，接種于叢芽誘導培養(yǎng)基上，接種完畢，置培養(yǎng)室內(nèi)進行培養(yǎng)；當莖段產(chǎn)生叢芽后，將有產(chǎn)生叢芽的莖段轉入?yún)惭吭鲋撑囵B(yǎng)基進行培養(yǎng)，擴大叢芽數(shù)量。當叢芽高度達到I. 5 2. 5cm時，將叢芽分成I 2個，轉到壯苗生根培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，即生長成帶有根的肉穗草種苗。所述培養(yǎng)基培養(yǎng)的具體條件為
1)叢芽誘導培養(yǎng)基采用叢芽誘導培養(yǎng)基，接種后置光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，設定溫度25°C，濕度 60% 65%，光照 1000 1200 lx, 12h/d ；
2)叢芽增殖培養(yǎng)基采用叢芽增殖培養(yǎng)基，接種后置光照培養(yǎng)箱內(nèi)或培養(yǎng)架上培養(yǎng)，設定溫度25 26°C，濕度65% 70%，光照強度1200 15001x，光照12h/d ；
3)壯苗生根培養(yǎng)基采用壯苗生根培養(yǎng)基，接種后置光照培養(yǎng)箱內(nèi)或培養(yǎng)架 上培養(yǎng)，設定溫度25 27°C，濕度65% 70%，光照強度1500 20001x，光照12h/d。所述種苗移植栽種的步驟具體為
i.煉苗打開瓶蓋，煉苗3 5天，保持空間濕度80% 85%，溫度25°C;假植將步驟i煉苗后的種苗取出，洗凈附著在根部的培養(yǎng)基，用0. 1%的多菌靈消毒液浸泡5min，種植到裝有基質(zhì)的苗盆中，放置在陰涼處培養(yǎng)，保持苗盆基質(zhì)濕潤，其中所述的基質(zhì)以重量計為I份菜園土+ I份粗砂+ 2份木屑，混合均勻，經(jīng)過消毒處理；種苗假植后五天澆一次營養(yǎng)液，所述營養(yǎng)液為含0. l%(wt)尿素+0. l%(wt)磷酸二氫鉀+0. l%(wt)過磷酸鈣的水溶液，假植I個月后移大田栽培；
ii.大田栽培大田畦寬80 100cm、畦高10 15 cm，施5 6 kg/100m2的鈣鎂磷肥作基肥；移植株行距5 cm X 5 cm。
具體實施例方式下面舉例說明本發(fā)明，但本發(fā)明的保護范圍不限于此。實施例I
(1)取材消毒野生肉穗草植株切下帶頂芽的嫩莖段或帶節(jié)的嫩莖段，自來水沖洗干凈材料；在無菌條件下操作，先用75%的酒精消毒IOs,再用0. 1%的升萊溶液浸泡IOmin,最后用無菌水沖洗5次。浙干水分，放入無菌的培養(yǎng)皿中備用；
(2)培養(yǎng)基培養(yǎng)
I)配制三種不同生育階段所用的培養(yǎng)基
叢芽誘導培養(yǎng)基MS + 0. 5mg/L BA + 0. 2mg/L NAA,白糖 30 g/L，瓊脂 0. 7%, pH5. 6。叢芽增殖培養(yǎng)基MS+ 2. Omg/L BA + 0. 2mg/L NAA，白糖 20 g/L，瓊脂 0. 6%，pH5. 6。壯苗生根培養(yǎng)基1/2MS+ 0. lmg/L NAA + 0. lmg/L IBA，活性碳0. 2%，白糖 15 g/L，瓊脂 0. 5%, pH5. 6。2)將消毒后備用的材料在無菌條件下切成長0.5-1. 5cm、含一個莖節(jié)的若干莖段，接種于準備好的叢芽誘導培養(yǎng)基上，接種完畢，置培養(yǎng)室內(nèi)培養(yǎng)。設定溫度25°C，濕度控制在60%，光照控制在1200 lx, 12h/d ；
3)當莖段產(chǎn)生叢芽后，將有叢芽的莖段轉入?yún)惭吭鲋撑囵B(yǎng)基進行培養(yǎng)，擴大叢芽數(shù)量。當叢芽高度達到I. 5 2. 5cm時，將叢芽分成I 2個，轉到壯苗生根培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，設定溫度25，濕度65%，光照強度1500x，光照12h/d。(3)移植栽種i.煉苗打開瓶蓋，煉苗4天，保持空間濕度在85%，溫度25°C；
ii.假植將步驟i煉苗后的種苗取出，洗凈附著在根部的培養(yǎng)基，用0.1%的多菌靈消毒液浸泡5min，種植到裝有基質(zhì)的苗盆中，放置在陰涼處培養(yǎng)，保持苗盆基質(zhì)濕潤，其中所述的基質(zhì)以重量計為I份菜園土+ I份粗砂+ 2份木屑，混合均勻，經(jīng)過消毒處理；種苗假植后五天澆一次營養(yǎng)液，所述營養(yǎng)液為含0. l%(wt)尿素+0. l%(wt)磷酸二氫鉀+0. l%(wt)過磷酸鈣的水溶液，假植I個月后移大田栽培； iii.大田栽培大田畦寬80cm、畦高15 cm，施5 kg/100m2的鈣鎂磷肥作基肥；移植株行距5 cm X 5 cm。實施例I中培養(yǎng)基每月叢芽增殖倍數(shù)4 5，成苗每株平均葉片數(shù)5. 8張、平均發(fā)根數(shù)4. 8條、組培苗移栽至基質(zhì)中生長良好，一個月后植株的成活率達100%。
權利要求
1.一種藥用肉穗草叢芽快速成苗方法，其特征在于所述的快速成苗方法包括以下步驟(1)取材消毒；(2)培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)種苗移植栽種；所述培養(yǎng)基包括不同生育階段的三種培養(yǎng)基，這三種培養(yǎng)基配方分別為①叢芽誘導培養(yǎng)基MS+ 0. 5mg/L BA + 0. 2mg/L NAA，白糖30 g/L，瓊脂0.7%，pH5. 6 ；②叢芽增殖培養(yǎng)基MS+ 2. Omg/L BA + 0. 2mg/L NAA，白糖20 g/L，瓊脂0.6%，pH5. 6 ；③壯苗生根培養(yǎng)基1/2MS+ 0.1mg/L NAA + 0. lmg/L IBA,活性碳0. 2%，白糖15g/L，瓊脂 0. 5%, pH5. 6。
2.如權利要求I所述的一種藥用肉穗草叢芽快速成苗方法，其特征在于 所述的取材消毒具體步驟為從野生肉穗草植株切下帶頂芽的嫩莖段或帶節(jié)的嫩莖段，用自來水沖洗干凈；在無菌條件下操作，將切下的嫩莖段先用75%的酒精消毒10s，再用0.1%的升萊溶液浸泡8 12min,最后用無菌水沖洗5 6次；浙干水分,放入無菌的培養(yǎng)皿中備用； 所述的培養(yǎng)基培養(yǎng)具體步驟為將消毒后備用的嫩莖段在無菌條件下切成長0.5-1. 5cm含一個莖節(jié)的莖段，接種于叢芽誘導培養(yǎng)基上，接種完畢，置培養(yǎng)室內(nèi)進行培養(yǎng)；當莖段產(chǎn)生叢芽后，將產(chǎn)生叢芽的莖段轉入?yún)惭吭鲋撑囵B(yǎng)基，再培養(yǎng)增殖，不斷擴大叢芽數(shù)量；當叢芽高度達到I. 5 2. 5cm時，將叢芽分成I 2個，轉到壯苗生根培養(yǎng)基培養(yǎng)，使之生長成帶根的肉穗草種苗。
3.如權利要求I所述的一種藥用肉穗草叢芽快速成苗方法，其特征在于所述培養(yǎng)基培養(yǎng)的具體條件為 1).叢芽誘導培養(yǎng)基采用叢芽誘導培養(yǎng)基，接種后置光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，設定溫度 25°C，濕度 60% 65%，光照 1000 12001x，12h/d ； 2)JA芽增殖培養(yǎng)基采用叢芽增殖培養(yǎng)基，接種后置光照培養(yǎng)箱內(nèi)或培養(yǎng)架上培養(yǎng)，設定溫度25 26°C，濕度65% 70%，光照強度1200 15001x，光照12h/d ； 3)壯苗生根培養(yǎng)基采用壯苗生根培養(yǎng)基，接種后置光照培養(yǎng)箱內(nèi)或培養(yǎng)架上培養(yǎng)，設定溫度25 27°C，濕度65% 70%，光照強度1500 20001x，光照12h/d。
4.如權利要求I所述的一種藥用肉穗草叢芽快速成苗方法，其特征在于所述種苗移植栽種的步驟具體為 i.煉苗打開瓶蓋，煉苗3 5天，保持空間濕度80% 85%，溫度25°C； ii.'假植將步驟i煉苗后的種苗取出，洗凈附著在根部的培養(yǎng)基，用0. 1%的多菌靈消毒液浸泡5min，種植到裝有基質(zhì)的苗盆中，放置在陰涼處培養(yǎng)，保持苗盆基質(zhì)濕潤，其中所述的基質(zhì)以重量計為I份菜園土+ I份粗砂+ 2份木屑，混合均勻，經(jīng)過消毒處理；種苗假植后五天澆一次營養(yǎng)液，所述營養(yǎng)液為含0. l%(wt)尿素+0. l%(wt)磷酸二氫鉀+0. l%(wt)過磷酸鈣的水溶液，假植I個月后移大田栽培； iii.大田栽培大田畦寬80 100 cm、畦高10 15 cm，施5 6 kg/100m2的鈣鎂磷肥作基肥；移植株行距5 cm X 5 cm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種藥用肉穗草叢芽快速成苗方法，包括(1)取材消毒；(2)培養(yǎng)基培養(yǎng)；(3)種苗移植栽種。該方法是以野生肉穗草末端莖段為外植體，在無菌條件下將含有一個莖節(jié)的莖段接種于培養(yǎng)基上生長，再經(jīng)多次轉接培養(yǎng)，培育成大量的肉穗草種苗。結果表明最適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)環(huán)境下，每月叢芽增殖倍數(shù)4～5，成苗每株平均葉片數(shù)5.8張、平均發(fā)根數(shù)4.8條、組培苗移栽至基質(zhì)中生長良好，一個月后植株成活率達98％以上。本發(fā)明方法操作簡單，便于實際推廣應用。
文檔編號A01H4/00GK102726301SQ20121024661
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月17日 優(yōu)先權日2012年7月17日
發(fā)明者吳技泉, 吳雨英, 張麗, 張緒璋, 湯紹康 申請人:福建農(nóng)林大學