專利名稱：一種明日葉快速繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種明日葉快速繁殖方法，具體涉及ー種以明日葉的葉片為外植體，在培養(yǎng)基上誘導(dǎo)直接產(chǎn)生叢生芽的方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
明日葉(Angelica Keiskei Miq. Koidz),別名明日草、八丈草,原產(chǎn)于日本的八丈島和伊豆諸島。經(jīng)常食用明日葉的當(dāng)?shù)厝?，長壽者很多，而且到了高齡仍很健康，能與年輕人一祥地勞動，所以又叫做長壽菜。近年來，明日葉中的許多成分逐漸地被了解，也因此受到矚目，其中含有非常豐富的各種維生素、礦物質(zhì)和微量元素，并且這些營養(yǎng)成分十分均衡。明日葉中含有的珍貴活性成分查爾酮有抗腫瘤、抗氧化以及清除自由基、抗胃潰瘍、抗菌和抗炎等功效，所以明日葉的高食用價值和藥用價值日益受到人們的重視。 明日葉為多年生草本，株高50-100cm;葉互生，三出復(fù)葉，葉緣具細鋸齒；花白色，傘形花序頂生，發(fā)芽率低，這也就使組織培養(yǎng)技術(shù)在明日葉的繁殖起到很大作用。中國專利(CN1930952)報道了ー種明日葉的組織培養(yǎng)和快速繁殖方法，該方法包括(I)采用明日葉的帶芽莖段作為外植體，經(jīng)消毒后進行接種培養(yǎng)，獲得愈傷組織，誘導(dǎo)出叢生狀芽；(2)通過叢生芽在培養(yǎng)基里的増殖，將其增殖約3倍；(3)將增殖所得的叢生芽切割，移接到生根培養(yǎng)基中促其生根，獲得完整的再生植株；(4)將再生植株移栽到營養(yǎng)土中，得到明日葉的移栽苗。發(fā)明人通過大量實驗發(fā)現(xiàn)，誘導(dǎo)明日葉的葉片直接產(chǎn)生叢生芽的方法減少了誘導(dǎo)愈傷組織環(huán)節(jié)，節(jié)約誘導(dǎo)時間，減少誘導(dǎo)突變率，具有很好的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種簡單、快捷并能減少誘導(dǎo)突變率的誘導(dǎo)明日葉高頻產(chǎn)生叢生芽的方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)的主要不足。本發(fā)明實現(xiàn)過程如下
ー種明日葉快速繁殖方法，其利用明日葉的葉片作為外植體，在離體條件下不經(jīng)愈傷組織階段直接誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生叢生芽，之后再利用叢生芽誘導(dǎo)生根長成完整植株。上述明日葉快速繁殖方法具體包括以下步驟
(1)取材在明日葉成株上取新鮮葉片；
(2)滅菌葉片用HgCl2浸泡滅菌；
(3)接種和誘導(dǎo)將滅菌后的明日葉的葉片切成O.5 I. Ocm的正方形碎片，接種在誘導(dǎo)叢生芽的MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20d產(chǎn)生綠色的芽點，繼續(xù)培養(yǎng)10 15d分化長成叢生芽；
(4)生根待叢生芽長至2 3cm，剪下，插入含有NAAO. 5mg/L的MS生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)。上述步驟(2)中，用流水沖洗葉片3 5min，然后用70%的酒精浸泡30 60s，再用O. 1%的HgCl2浸泡滅菌5 7 min,不?；蝿訙p少外植體上的氣泡，使葉片完全浸在升汞中充分消毒，最后用無菌水沖洗6 8次。上述步驟(3)中，所述誘導(dǎo)叢生芽的MS培養(yǎng)基組成為在MS培養(yǎng)基中加入I mg/L 2，4-D 和 O. 2 mg/L 6-BA。上述步驟(3)和(4)過程中培養(yǎng)條件為光照強度為40 μ mo I · m_2 · s—1，光照時間 16h，溫度為 25°C ±2°C。本發(fā)明的優(yōu)點與積極效果本發(fā)明直接誘導(dǎo)明日葉的葉片產(chǎn)生叢生芽，避免了先產(chǎn)生愈傷組織這ー過程，節(jié)約了誘導(dǎo)時間，減少了誘導(dǎo)突變率，為明日葉藥用價值的開發(fā)提供了原料基礎(chǔ)，具有很好的應(yīng)用前景。


圖I為實體顯微鏡下觀察的芽點圖片(20d)；
圖2為實體顯微鏡下觀察的叢生芽圖片(30d)；
圖3為在不同葉片外植體邊緣直接長出叢生芽的圖片。
具體實施例方式實施例I
(I)取材在生長良好的明日葉成株上取較為新鮮的完整葉片作為外植體。(2)消毒用流水沖洗葉片4 min,然后在超凈工作臺上用70%的酒精浸泡25 s,再用O. 1%的HgCl2浸泡滅菌6分鐘，不?；蝿?，目的在于減少外植體上的氣泡，使葉片完全 浸在升汞中，消毒充分，最后用無菌水沖洗7次。(3)接種和誘導(dǎo)將消毒好的明日葉的葉片切成O. 5 I. O厘米的正方形碎片，接種在含有I mg/L 2，4-D和O. 2 mg/L6_BA的MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，20 d產(chǎn)生大量綠色芽點(圖I )，繼續(xù)培養(yǎng)，芽點直接長成叢生芽(圖2)。經(jīng)過數(shù)據(jù)采集統(tǒng)計，明日葉外植體直接出芽率達到了 90%以上(圖3)。叢生芽誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件為光照強度40 μ mol · m_2 · s'光照時間16h，溫度為 25°C ±2°C。(5)生根待不定芽長至2-3cm，將誘導(dǎo)得到的不定芽剪下，插入MS+ NAA lmg/L的誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，溫度為25°C ±2°C、光強為40 μ mol · m 2 · s \光照時間16h條件，生根率為100%。培養(yǎng)2-3周后即可獲得大量組培苗。
權(quán)利要求
1.ー種明日葉快速繁殖方法，其特征在于利用明日葉的葉片作為外植體，在離體條件下不經(jīng)愈傷組織階段直接誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生叢生芽，之后再利用叢生芽誘導(dǎo)生根長成完整植株。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述明日葉快速繁殖方法，其特征在于包括以下步驟 (1)取材在明日葉成株上取新鮮葉片； (2)滅菌葉片用HgCl2浸泡滅菌； (3)接種和誘導(dǎo)將滅菌后的明日葉的葉片切成O.5 I. Ocm的正方形碎片，接種在誘導(dǎo)叢生芽的MS培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20d產(chǎn)生綠色的芽點，繼續(xù)培養(yǎng)10 15d分化長成叢生芽； (4)生根待叢生芽長至2 3cm，剪下，插入含有NAAO. 5mg/L的MS生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述明日葉快速繁殖方法，其特征在于步驟(2)中，用流水沖洗葉片3 5min，然后用70%的酒精浸泡30 60s，再用O. 1%的HgCl2浸泡滅菌5 7 min,不?；蝿訙p少外植體上的氣泡，使葉片完全浸在升汞中充分消毒，最后用無菌水沖洗6 8次。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述明日葉快速繁殖方法，其特征在于步驟(3)中，所述誘導(dǎo)叢生芽的MS培養(yǎng)基組成為在MS培養(yǎng)基中加入I mg/L 2，4-D和O. 2 mg/L 6-BA。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述明日葉快速繁殖的方法，其特征在于步驟(3)和(4)中培養(yǎng)條件為光照強度為40 μ mo I · πΓ2 · s—1，光照時間16h，溫度為25°C ±2°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種以明日葉的葉片為外植體，在培養(yǎng)基上直接誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽的快繁方法。該方法利用明日葉的葉片作為外植體，在離體條件下不經(jīng)愈傷組織階段直接誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生叢生芽，之后再利用叢生芽誘導(dǎo)生根長成完整植株。本發(fā)明避免了先產(chǎn)生愈傷組織這一過程，節(jié)約了誘導(dǎo)時間，減少了誘導(dǎo)突變率，為明日葉藥用價值的開發(fā)提供了原料基礎(chǔ)，具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號A01H4/00GK102668985SQ20121016859
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月28日
發(fā)明者劉夢昕, 曾潔, 李穎, 蘆恒, 黃鳳智, 黃萱 申請人:西北大學(xué)