專利名稱：甜櫻桃砧木Colt組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖甜櫻桃砧木Colt的方法。
背景技術(shù)：
甜櫻桃砧木Colt從英國(guó)東茂林試驗(yàn)站引入，由馬扎德與中國(guó)櫻桃雜交育成，為英國(guó)優(yōu)良櫻桃砧木，適合大面積櫻桃園豐產(chǎn)栽培使用，該砧木根系發(fā)達(dá)，適應(yīng)性強(qiáng)，抗旱，固定性好，植株分枝多，呈叢狀生長(zhǎng)，嫁接親和力強(qiáng)，苗木生長(zhǎng)健壯，定植建園園相整齊，植株生長(zhǎng)結(jié)果性狀良好，具有較好的豐產(chǎn)性和穩(wěn)產(chǎn)性，通過與不同櫻桃品種嫁接生長(zhǎng)調(diào)查，各品種均表現(xiàn)出良好的親和力且性狀穩(wěn)定，在栽培管理中抗病害、樹體生長(zhǎng)旺盛、早果豐產(chǎn)、園象整齊等，表現(xiàn)出良好的栽培效果，具有廣闊的發(fā)展市場(chǎng)前景。近幾十年來，隨著國(guó)內(nèi)外生物工程技術(shù)的不斷進(jìn)步和完善，其在果樹花卉產(chǎn)業(yè)方面的應(yīng)用也越來越廣泛，這不僅極大地促進(jìn)果樹花卉產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展，也給各地相關(guān)產(chǎn)業(yè)注入了生機(jī)與活力。特別是利用生物工程技術(shù)方法之一的植物組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)，對(duì)名優(yōu)新優(yōu)果樹花卉苗木的繁殖，顯示了強(qiáng)大的發(fā)展前景，許多名貴、優(yōu)良、稀有和新育成的品種，通常因用常規(guī)方法難以迅速大量繁殖，或者繁殖率極低，不能及時(shí)滿足生產(chǎn)和市場(chǎng)的需求，在一定程度上困擾著果樹花卉產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展和產(chǎn)業(yè)水平的提升。而運(yùn)用生物工程技術(shù)進(jìn)行快速繁殖，具有周年生產(chǎn)、繁殖系數(shù)高、遺傳性狀相對(duì)穩(wěn)定等特點(diǎn)，對(duì)保存無性系種質(zhì)資源，大批量生產(chǎn)無病毒苗木，降低苗木生產(chǎn)成本等具有現(xiàn)實(shí)意義。在現(xiàn)有技術(shù)中，甜櫻桃砧木Colt組培苗擴(kuò)繁系數(shù)低，生根困難，移栽成活率低使其一直無法實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工廠化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種甜櫻桃砧木Colt的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種甜櫻桃砧木Colt組織培養(yǎng)方法，它包括以下步驟:(I)初代培養(yǎng)春萌芽前選取一年生甜櫻桃砧木Colt枝剪成2厘米長(zhǎng)帶芽段，分別用害立平溶液、HgCl2溶液消毒后，剝開該帶芽段越冬芽磷片切取莖尖，接種于初代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，所述初代培養(yǎng)基為1/2MS加入下述的原料及其配方比例:白砂糖25g瓊脂粉5g 6-芐氨基嘌呤0.5 2.0mg吲哚丁酸0.01 0.10mg，培養(yǎng)條件:溫度20 28°C，光照強(qiáng)度2000 2800Lx、光照時(shí)間10 12小時(shí)/天，濕度40 70%; (2)繼代培養(yǎng)將步驟(I)中初代培養(yǎng)的叢生莖尖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該增殖培養(yǎng)基為在I升1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g瓊脂粉5g 6-節(jié)氨基嘌呤1.0 1.5mg卩引哚丁酸0.15
0.20mg，培養(yǎng)條件為:溫度為20 28°C，光照強(qiáng)度2000 2800Lx、光照時(shí)間10 12小時(shí)/天，濕度為40% 70% ；(3)生根培養(yǎng)將 步驟(2)中增殖培養(yǎng)的莖尖接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該生根培養(yǎng)基為在I升1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g瓊脂粉5g吲哚丁酸0.25 0.75mg,培養(yǎng)條件為:溫度20 28°C，濕度40 70 %，光照強(qiáng)度2000 2800Lx，光照時(shí)間10 12小時(shí)/天；(4)煉苗培養(yǎng)和移栽包括如下環(huán)節(jié):閉瓶鍛煉、開瓶鍛煉、移栽到蛭石基質(zhì)、移栽到由細(xì)砂石、田園土、牛糞組成的營(yíng)養(yǎng)土中。優(yōu)選的，所述初代培養(yǎng)基為在I升1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g瓊脂粉5g 6-芐氨基嘌呤1.0mg吲哚丁酸0.1mg ;所述增殖培養(yǎng)基為在I升1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g瓊脂粉5g 6-芐氨基嘌呤
1.0mg吲哚丁酸0.2mg ;所述生根培養(yǎng)基為在1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g瓊脂粉5g吲哚丁酸0.5mg。針對(duì)培養(yǎng)基組成及其配比與無菌系建立、擴(kuò)繁繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)等階段培養(yǎng)效果的關(guān)系或影響，發(fā)明人做了實(shí)驗(yàn)研究，為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明，將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和研究結(jié)果分述如下:1、不同基本培養(yǎng)基對(duì)試管苗初代培養(yǎng)的影響。試材選取I年生休眠枝條，剪取枝段(2cm左右長(zhǎng)，帶一個(gè)芽)，洗滌劑水浸泡3小時(shí)后流水沖洗10分鐘,用升汞(HgCL2)消毒8分鐘,無菌水沖洗4次,然后在超凈工作臺(tái)上用眼科鑷子剝?nèi)ネ鈱拥镊[片，按1.0mm-2.0mm大小的莖尖放置于不同培養(yǎng)基上，均附加25g蔗糖，5g瓊脂，在此基礎(chǔ)上添加·不同種類和濃度的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，培養(yǎng)溫度為25±2°C，光照強(qiáng)度為2000-30001x，光照時(shí)間12小時(shí)。由表I顯示，三種不同類型的培養(yǎng)基對(duì)甜櫻桃砧木Colt小莖尖的萌發(fā)存在一定的差異，三種類型的培養(yǎng)基都達(dá)到差異顯著，均可誘導(dǎo)莖尖萌發(fā)，MSU/2MS其誘導(dǎo)率較高，分別為77%和86.3%，接種5天左右開始萌發(fā)，生長(zhǎng)在MS的莖尖表現(xiàn)較好，葉片淺綠，l/2Ms培養(yǎng)基上苗木生長(zhǎng)勢(shì)較強(qiáng)，L基本培養(yǎng)，莖尖萌發(fā)較緩慢。接種一周以后，才開始萌動(dòng)，葉片微黃綠，微卷，生長(zhǎng)勢(shì)一般。表I不同基本培養(yǎng)基對(duì)Colt試管苗初代培養(yǎng)的影響
權(quán)利要求
1.一種甜櫻桃砧木Colt組織培養(yǎng)方法，其特征在于，它包括以下步驟:(1)初代培養(yǎng)春萌芽前選取一年生甜櫻桃砧木Colt枝剪成2厘米長(zhǎng)帶芽段，分別用害立平溶液、HgCl2溶液消毒后，剝開該帶芽段越冬芽磷片切取莖尖，接種于初代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，所述初代培養(yǎng)基為1/2MS加入下述的原料及其配方比例:白砂糖25g瓊脂粉5g 6-芐氨基嘌呤0.5 2.0mg吲哚丁酸0.01 0.10mg，培養(yǎng)條件:溫度20 28°C，光照強(qiáng)度2000 2800Lx、光照時(shí)間10 12小時(shí)/天，濕度40 70% ; (2)繼代培養(yǎng)將步驟(I)中初代培養(yǎng)的叢生莖尖轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該增殖培養(yǎng)基為在I升1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g瓊脂粉5g 6-節(jié)氨基嘌呤1.0 1.5mg Π引哚丁酸0.15 0.20mg,培養(yǎng)條件為:溫度為20 28°C，光照強(qiáng)度2000 2800Lx、光照時(shí)間10 12小時(shí)/天，濕度為40% 70% ；(3)生根培養(yǎng)將步驟(2)中增殖培養(yǎng)的莖尖接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該生根培養(yǎng)基為在I升1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g瓊脂粉5g吲哚丁酸0.25 0.75mg，培養(yǎng)條件為:溫度20 28°C，濕度40 70%，光照強(qiáng)度2000 2800LX，光照時(shí)間10 12小時(shí)/天；(4)煉苗培養(yǎng)和移栽包括如下環(huán)節(jié):閉瓶鍛煉、開瓶鍛煉、移栽到蛭石基質(zhì)、移栽到由細(xì)砂石、田園土、牛糞組成的營(yíng)養(yǎng)土中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甜櫻桃砧木Colt組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述初代培養(yǎng)基為在I升1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g瓊脂粉5g 6-芐氨基嘌呤1.0mg吲哚丁酸0.1mg ;所述增殖培養(yǎng)基為在I升1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g瓊脂粉5g6-芐氨基嘌呤1.0mg吲哚丁酸0.2mg ;所述生根培養(yǎng)基為在1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成:白砂糖25g瓊脂粉5g吲哚丁酸 0.5mg
全文摘要
本發(fā)明公開了一種甜櫻桃砧木Colt組織培養(yǎng)方法，它包括以下步驟(1)初代培養(yǎng)選取一年生甜櫻桃砧木Colt剝開其越冬芽磷片切取莖尖，接種于初代培養(yǎng)基上培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基為1/2MS加入下述的原料及其配方比例白砂糖25g瓊脂粉5g 6-芐氨基嘌呤0.5～2.0mg吲哚丁酸0.01～0.10mg；(2)繼代培養(yǎng)轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基為在1升1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成白砂糖25g瓊脂粉5g 6-芐氨基嘌呤1.0～1.5mg吲哚丁酸0.15～0.20mg；(3)生根培養(yǎng)接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，所述培養(yǎng)基為在1升1/2MS基本培養(yǎng)基中加入下述原料及其配比制成白砂糖25g瓊脂粉5g吲哚丁酸0.25～0.75mg；(4)煉苗培養(yǎng)和移栽。
文檔編號(hào)A01H4/00GK103155869SQ20111045616
公開日2013年6月19日 申請(qǐng)日期2011年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月10日
發(fā)明者趙新紅, 周代琴, 李幗英, 楊映紅, 楊俊霞, 王艷芳, 郭志剛, 楊瑞斌, 王花, 李海青, 馬建芳 申請(qǐng)人:天水市果樹研究所