專利名稱：一種篩選團(tuán)頭魴群體雜交優(yōu)勢組合的方法
一種篩選團(tuán)頭魴群體雜交優(yōu)勢組合的方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于魚類選育領(lǐng)域，具體涉及一種篩選團(tuán)頭魴具有雜交優(yōu)勢的群體組合的方法，適合于梁子湖、淤泥湖和鄱陽湖三大團(tuán)頭魴野生群體選育研究。技術(shù)背景
魚類是人類重要的食物來源，我國是世界上水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量最高的國家，除了滿足國內(nèi)市場需求外，出口創(chuàng)匯也是主要目的之一。不過，近年來隨著養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，自然資源遭到嚴(yán)重破壞，人工近親繁殖加劇，多種魚類的種質(zhì)資源不斷下降，生長速度不斷減緩，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。
團(tuán)頭魴(Megalobramaamblyc印halaYih)，隸屬于鯉形目，鯉科，魴屬，俗稱武昌魚。 原產(chǎn)于長江中游的通江湖泊，因其具有食性廣、養(yǎng)殖成本低、生長快、成活率高，且具有味美、含肉率高、體形好、規(guī)格適中等優(yōu)點(diǎn)，在20世紀(jì)六十年代就被作為優(yōu)良的草食性魚種在中國普遍推廣，現(xiàn)已成為中國主要淡水水產(chǎn)養(yǎng)殖對象之一。近幾十年來，其野生資源遭到嚴(yán)重破壞，人工近親繁殖加劇，導(dǎo)致全國各地團(tuán)頭魴養(yǎng)殖群體先后出現(xiàn)了生長速度減慢、性成熟提早、體形變長變薄等較為嚴(yán)重的退化現(xiàn)象。
開展地理遠(yuǎn)緣雜交，如國內(nèi)品種與國外品種、南方品種與北方品種之間的雜交，不僅后代變異幅度大，類型多，常常出現(xiàn)一些超親性狀和超親類型，且其后代性狀也比遠(yuǎn)緣雜交后代容易穩(wěn)定(樓允東，1998)。利用多個(gè)不同地理種群進(jìn)行種間雜交選育，根據(jù)子代的表型來選擇具有重要性狀雜交優(yōu)勢的組合，該方法充分利用雜交優(yōu)勢，是培育優(yōu)良品種 (品系)的一條重要途徑。
微衛(wèi)星分子標(biāo)記具有多態(tài)性高、穩(wěn)定性強(qiáng)、特異性高、共顯性遺傳等優(yōu)點(diǎn)，是水產(chǎn)動(dòng)物選育中保持家系信息、確認(rèn)親緣關(guān)系的重要工具。如果已知父母的基因型，微衛(wèi)星標(biāo)記能在沒有外部物理標(biāo)記及不需要分開養(yǎng)殖的情況下區(qū)分出混養(yǎng)群體中個(gè)體所屬的家系。 Wang等Q009)應(yīng)用7對微衛(wèi)星標(biāo)記對560個(gè)黃金鱸混養(yǎng)子代進(jìn)行親子鑒定，有98. 37%的后代能準(zhǔn)確找到父母本；Vand印utte等Q004)應(yīng)用8個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對550個(gè)鯉魚后代進(jìn)行親子鑒定，95. 3%后代能準(zhǔn)確找到父母本。這證實(shí)了微衛(wèi)星在水產(chǎn)動(dòng)物鑒定家系研究中的應(yīng)用價(jià)值。
本發(fā)明充分利用雜交優(yōu)勢理論，采用微衛(wèi)星標(biāo)記的親子鑒定技術(shù)，來選擇具有雜交優(yōu)勢的群體組合。該方法在團(tuán)頭魴選育中首次應(yīng)用，具有子代雜交優(yōu)勢明顯，子代譜系明確、排除環(huán)境因素干擾、提高選育效率等優(yōu)點(diǎn)。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在于提供了一種篩選團(tuán)頭魴具有雜交優(yōu)勢的群體組合的方法，同時(shí)本發(fā)明將不同組合繁育子代飼養(yǎng)在同一池塘中，采用微衛(wèi)星標(biāo)記鑒定子代的親本來源， 消除了不同組合繁育子代分開飼養(yǎng)而帶來的環(huán)境因素的影響，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能夠?yàn)榇笠?guī)模生產(chǎn)生長迅速的團(tuán)頭魴魚苗奠定科學(xué)基礎(chǔ)。4
為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)措施。
一種篩選團(tuán)頭魴群體雜交優(yōu)勢組合的方法，其步驟是
a.收集團(tuán)頭魴原產(chǎn)區(qū)群體的野生親本并進(jìn)行配組繁育；
本步驟a中收集的親本是梁子湖、鄱陽湖和淤泥湖的野生群體，每一個(gè)群體采集量不少于100尾，雌雄比例約為1 1。挑選身體健康、性腺發(fā)育良好、 體型優(yōu)美作為親本，進(jìn)行群體內(nèi)自交和群體間雜交，即梁子湖？χ梁子湖(？，梁子湖 ？1X鄱陽湖(？，梁子湖？1X淤泥湖(？，鄱陽湖？1X鄱陽湖(？，鄱陽湖？1X梁子湖(？，鄱陽湖？X淤泥湖(？，淤泥湖？χ梁子湖(？，淤泥湖？χ淤泥湖(？和淤泥湖？χ鄱陽湖(？九個(gè)組合。人工授精時(shí)，將每一個(gè)組合中4-5條雌魚和4-5條雄魚混合受精。
b.子代在同一池塘混合飼養(yǎng)18個(gè)月后測量生長相關(guān)性狀；
本步驟b中每一組合的子代放入同一池塘中混合飼養(yǎng)。經(jīng)過約18個(gè)月的飼養(yǎng)后， 隨機(jī)打網(wǎng)，子代總個(gè)數(shù)超過700條。然后測量生長性狀，包括體長、體高和體重。
c.基于微衛(wèi)星標(biāo)記鑒定子代的親本來源；
本步驟c中，采用9個(gè)高度多態(tài)的微衛(wèi)星分子標(biāo)記鑒定子代的親本來源，微衛(wèi)星標(biāo)記具體信息如下
權(quán)利要求
1. 一種篩選團(tuán)頭魴群體雜交優(yōu)勢組合的方法，其步驟是a.收集團(tuán)頭魴原產(chǎn)區(qū)野生群體，并作為親本進(jìn)行配組繁育；本步驟中收集的親本是團(tuán)頭魴三大主要原產(chǎn)區(qū)梁子湖、鄱陽湖和淤泥湖的野生群體， 每一個(gè)群體采集量不少于100尾，雌雄比例約為1 1。在繁殖時(shí)，進(jìn)行群體內(nèi)自交和群體間雜交，并采用人工授精的方法，每一個(gè)組合中4-5條雌魚和4-5條雄魚混合受精；b.子代在同一池塘中混合飼養(yǎng)，18個(gè)月后，測量其生長相關(guān)性狀；本步驟中將不同繁育組合的子代放入同一池塘中飼養(yǎng)，18個(gè)月后，隨機(jī)打網(wǎng)，子代總個(gè)數(shù)超過700，然后測量其生長性狀，具體包括體長、體高和體重；c.基于微衛(wèi)星標(biāo)記鑒定子代的親本來源；本步驟中，采用9個(gè)高度多態(tài)的微衛(wèi)星分子標(biāo)記鑒定子代的親本來源，微衛(wèi)星標(biāo)記具體信息如下位點(diǎn)引物序列(5’—3')Ta(°C)重復(fù)單元片段大小(bp)熒光標(biāo)記TTF-IF:TGGAGATGAAAGCTGAAGGAA R:ATGCACGAACTGCCACATAA62(CA)21250-280FAMTTF-2F:AAACAGCTGCTACCCTTGGA R:TTTCGCCAGAAGAGC AAATCA62(CA)5(CT)21190-220FAMTTF-4F:GACTGGAGTCGTCAGGCTTC R:TGCCCCACATTGTTAGACTG62(CA) 14170-200HEXSSR-12F: TCGTGCGAAGTAAACAAG R: CAGGCAATAATAACAAAACC54(TCTT)13205-259NEDSSR-46F:AGTATAAGTTGAGTGGGTG R: TAAAGGGAAATTCTGGT50.5(ATCT)25282-380HEXSSR-90F:CTTACAGACTCCGACAGG R:ATCCACGACTTCCAGAAC55(AT) 12190-220NEDSSR-116F:CTATTTACAGTTTCATGCTTTCCTC R:ATCCCGTCCGCCGCTTACT62(AC)13157-271NEDSSR-166F:GGTACTGTTTGTGCTGGGC R:CTGCTCACTCAACTTATTGTAGGTC60(GT)16117-151FAMSSR-851F:ATTGGTCCAGTCTGTTGT R:TGTATCTTGCACGCTCTA54.5(AAGA)14277-307HEX本步驟中親子鑒定技術(shù)的PCR反應(yīng)體系為IOyL :ddH20 7. 4 μ L，10XBuffer (含 Mg2+) 1 μ L, dNTP (IOmM) 0. 2 μ L, Taq DNA 聚合酶(5U/ μ L) 0. 1 μ L，熒光標(biāo)記的微衛(wèi)星正向引物(IOM)O. 15 μ L，微衛(wèi)星反向引物(IOM)O. 15 μ L，模板 DNA(100ng/μ L)1 μ L。PCR 反應(yīng)程序?yàn)?5°C預(yù)變性5min ；95°C變性30s，按I1a溫度退火30s，72°C延伸45s，30個(gè)循環(huán)；72°C延伸 IOmin ；PCR反應(yīng)完后，從每個(gè)個(gè)體的每個(gè)位點(diǎn)的PCR產(chǎn)物中吸出0. 5μ L，根據(jù)片段的大小和熒光標(biāo)記的顏色，將用熒光標(biāo)記為NED、FAM、HEX各1個(gè)位點(diǎn)的PCR產(chǎn)物混合在一起，作為上機(jī)檢測的樣品，將混合1. 5 μ L的PCR產(chǎn)物樣品加入到ABI 3730基因分析儀配置的96孔板內(nèi)，每個(gè)孔內(nèi)加入0. 5 μ L的Gene&anTM500R0XTM標(biāo)準(zhǔn)片段，另外在每個(gè)孔內(nèi)加入8. 0 μ L的Hi-Di 甲酰胺，將96孔板放入PCR儀器內(nèi)95°C變性lOmin，變性后置于冰上，然后上樣到 ABI 3730基因分析儀分析，或者用鋁箔紙包好后放入-20°C保存待上機(jī)分析，待基因分析儀電泳結(jié)束后，用軟件GeneMapper 4. O做基因型分析，讀取各個(gè)體在各微衛(wèi)星位點(diǎn)的基因型，統(tǒng)計(jì)親本和子代各微衛(wèi)星位點(diǎn)的基因型，采用CERVUS 3. O軟件分析子代的親本來源； d.基于親子鑒定和生長性狀數(shù)據(jù)分析結(jié)果篩選優(yōu)勢群體組合 結(jié)合親子鑒定數(shù)據(jù)和子代生長相關(guān)數(shù)據(jù)，將每一個(gè)個(gè)體歸類到相應(yīng)的繁殖組合中， 然后應(yīng)用Microsoft Excel軟件對每一組合進(jìn)行平均值、方差的計(jì)算，應(yīng)用IBM SPSS statistics 19軟件進(jìn)行各組體長、體高和體重的顯著性分析，從中發(fā)現(xiàn)了三個(gè)組合的子代體重、體長和體高顯著高于其他組合，這三種組合是團(tuán)頭魴野生群體最具有雜交優(yōu)勢的群體組合。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種篩選團(tuán)頭魴具有雜交優(yōu)勢的群體組合的方法，其步驟是a.收集團(tuán)頭魴原產(chǎn)區(qū)的野生親本并進(jìn)行配組繁育；b.子代在同一池塘中混養(yǎng)，18個(gè)月后測量其生長相關(guān)性狀；c.基于微衛(wèi)星標(biāo)記鑒定子代的親本來源；d.基于親子鑒定和生長性狀數(shù)據(jù)分析具有雜交優(yōu)勢的群體組合，從中發(fā)現(xiàn)三個(gè)組合的子代的體重、體長和體高顯著高于其他組合。將不同來源的野生親本進(jìn)行群體組合繁育，擴(kuò)大了親本的基因庫，集合了更多的基因型，充分利用了雜交優(yōu)勢，子代具有更快的生長速度，使得團(tuán)頭魴選育效果更明顯。
文檔編號A01K61/00GK102487860SQ20111037892
公開日2012年6月13日 申請日期2011年11月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月24日
發(fā)明者曾聰, 王衛(wèi)民, 羅偉, 鄧偉, 高澤霞 申請人:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)