專利名稱：茶樹外植體無汞消毒劑及外植體消毒方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及茶樹外植體無汞消毒劑及外植體消毒方法，屬于茶樹組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
茶樹屬山茶科山茶屬多年生常綠木本植物。其葉的加工飲品是世界上三大無酒精飲料之一。由于茶樹基因的高度雜合性，傳統(tǒng)的育種方法在改良茶樹品種方面難度較大，而利用組培進(jìn)行茶樹繁殖不僅可大大提高繁殖系數(shù)，而且能最大限度地保持品種的遺傳穩(wěn)定性，對新品種和良種茶樹快速推廣有重要價值，同時還可以通過水培、無土栽培來工廠化生產(chǎn)茶葉。但是，污染是植物組織培養(yǎng)過程中的難題之一，特別是像茶樹這樣的木本植物，由于含有多種內(nèi)生菌，組織培養(yǎng)時污染尤為嚴(yán)重。目前，組織培養(yǎng)常用的消毒劑有Ca(C10)2(0. 5% -10% ), HgCl2 (0. 1 % _1 % )、 CH3CH2OH(70%-75%)、H202 (3%-10%)、漂白粉(飽和溶液)等。0. 1 % HgCl2 是應(yīng)用最廣泛的一種消毒劑，但其有劇毒，且消毒后難以除去殘余的汞，對外植體有殺傷作用，還會進(jìn)入外植體組織內(nèi)部，在增殖過程中一代傳給一代。CH3CH2OH雖能滲入外植體內(nèi)殺死病菌，但其對植物組織具有相當(dāng)?shù)钠茐男裕?，消毒時間不易太長，但時間過短不易達(dá)到好的消毒效果。目前，茶樹組織培養(yǎng)中的外植體主要采用的表面消毒方法是使用CH3CH20H(70% -75% ) 和升汞(0. l%-0. 2% )組合消毒。但是只要用了升汞，外植體中就可能有殘留，通過組培手段得到的茶葉就可能含有汞，若將其作為飲品就有潛在的危險性，可能會對人的身體健康和生命安全帶來危害。但由于茶樹內(nèi)生菌較多，目前的報道都是采用HgCl2才能較為全面的對茶樹外植體進(jìn)行消毒，因此，研究一種無汞的茶樹組培消毒劑及消毒方法成為本領(lǐng)域目前迫切需要解決的技術(shù)難題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的第一個技術(shù)問題是提供一種茶樹外植體無汞消毒劑，該消毒劑能較為全面的對茶樹外植體進(jìn)行消毒。本發(fā)明茶樹外植體無汞消毒劑包括包裝在空間獨(dú)立的單元中的順序給藥的溶液A 和溶液B，所述的溶液A為70 SOwt %的乙醇溶液，所述的溶液B為次氯酸鈉和吐溫的混合溶液，其含有5 IOwt%的次氯酸鈉和0. 05 0. 15wt%吐溫。進(jìn)一步的，為了提高消毒效果，上述的溶液A優(yōu)選為75wt%的乙醇溶液，上述的溶液B中優(yōu)選含有5wt%的次氯酸鈉和0. Iwt %吐溫。其中，本發(fā)明中的吐溫可以為常用的吐溫，如吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80中至少一種，所述的吐溫優(yōu)選為吐溫-20。本發(fā)明所要解決的第二個技術(shù)問題是提供一種茶樹外植體消毒方法，該方法能較為全面的對茶樹外植體進(jìn)行無汞消毒。本發(fā)明茶樹外植體消毒方法，包括外植體的清洗、外植體的防褐化處理和外植體的消毒步驟，其中，外植體消毒時，先用上述消毒劑中的溶液A浸泡25 35s，再將外植體浸入消毒劑的溶液B中，并用功率100 140W的超聲波震蕩5 12min，然后用滅菌水清洗外植體。進(jìn)一步的，為了提高消毒效果，本發(fā)明茶樹外植體消毒方法，外植體消毒時，優(yōu)選先用上述的消毒劑的溶液A浸泡30s，再將外植體浸入消毒劑的溶液B中，并用功率120W的超聲波震蕩lOmin。其中，本發(fā)明茶樹外植體消毒方法，其外植體的清洗和外植體的防褐化處理都可以采用常規(guī)方法，優(yōu)選采用下述方法對茶樹外植體進(jìn)行防褐化處理將洗凈的外植體放入含有20mg/L氨卞和5mg/L抗壞血酸的溶液里浸泡20min。其中，本發(fā)明茶樹外植體消毒方法，所述的外植體可以取自茶樹的任何組織，如 取自茶樹的芽、莖或葉。為了利于組織培養(yǎng)，所述的外植體優(yōu)選取自茶樹的帶腋芽莖段。其中，本發(fā)明茶樹外植體消毒方法適合于常見的茶樹，如適制綠茶茶樹、適制紅茶茶樹或適制烏龍茶茶樹等。本發(fā)明可以對茶樹外植體進(jìn)行無汞消毒，其消毒效果達(dá)到甚至超過了升汞的消毒效果，其成本低，使通過組織培養(yǎng)手段得到的茶葉可成為生態(tài)安全的茶葉。本發(fā)明為茶樹外植體的無汞消毒提供了一種新的選擇，具有廣闊的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明茶樹外植體無汞消毒劑包括包裝在空間獨(dú)立的單元中的順序給藥的溶液A 和溶液B，所述的溶液A為70 SOwt %的乙醇溶液，所述的溶液B為次氯酸鈉和吐溫的混合溶液，其含有5 IOwt%的次氯酸鈉和0. 05 0. 15wt%吐溫。進(jìn)一步的，為了提高消毒效果，上述的溶液A優(yōu)選為75wt%的乙醇溶液，上述的溶液B優(yōu)選含有5wt%的次氯酸鈉和0. Iwt %吐溫。其中，本發(fā)明中的吐溫可以為常用的吐溫，如吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80中至少一種，所述的吐溫優(yōu)選為吐溫-20。本發(fā)明還提供了一種茶樹外植體消毒方法，該方法能較為全面的對茶樹外植體進(jìn)行無汞消毒。本發(fā)明茶樹外植體消毒方法，包括外植體的清洗、外植體的防褐化處理和外植體的消毒步驟，其中，外植體消毒時，先用上述消毒劑中的溶液A浸泡25 35s，再將外植體浸入消毒劑的溶液B中，并用功率100 140W的超聲波震蕩5 12min，然后用滅菌水清洗外植體。進(jìn)一步的，為了提高消毒效果，本發(fā)明茶樹外植體消毒方法，外植體消毒時，優(yōu)選先用上述的消毒劑的溶液A浸泡30s，再將外植體浸入消毒劑的溶液B中，并用功率120W的超聲波震蕩lOmin。其中，本發(fā)明茶樹外植體消毒方法，其外植體的清洗和外植體的防褐化處理都可以采用常規(guī)方法，優(yōu)選采用下述方法對茶樹外植體進(jìn)行防褐化處理將洗凈的外植體放入含有20mg/L氨卞和5mg/L抗壞血酸的溶液里浸泡20min。其中，本發(fā)明茶樹外植體消毒方法，所述的外植體可以取自茶樹的任何組織，如 取自茶樹的芽、莖或葉。為了利于組織培養(yǎng)，所述的外植體優(yōu)選取自茶樹的帶腋芽莖段。
其中，本發(fā)明茶樹外植體消毒方法適合于常見的茶樹，如適制綠茶茶樹、適制紅茶茶樹或適制烏龍茶茶樹等。下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
做進(jìn)一步的描述，并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。實(shí)施例1采用下述方法對茶樹外植體進(jìn)行消毒處理a、外植體準(zhǔn)備剪取3月份適制綠茶(福鼎大白)新鮮的一芽三、四葉新稍，將第二、三、四腋芽剪成1 1. 5cm莖段；b、外植體的清洗用流水沖洗外植體半個小時，沖洗后用含有洗潔精的溶液浸泡lOmin，其間不停地攪拌，再依次用清水、滅菌水清洗多次；C、防止外植體褐化將洗凈的外植體放入含有終濃度為20mg/L氨卞和5mg/L抗壞血酸的溶液里浸泡20min ；d、外植體的消毒將c步驟所得的外植體用70wt%乙醇溶液浸泡35s，再將其用表 1中的消毒方法消毒，然后用滅菌的純水清洗超聲后的外植體5次。將消毒后的外植體接種于相同的培養(yǎng)基(茶樹組織培養(yǎng)的常規(guī)培養(yǎng)基，下同)中， 置于相同的條件下培養(yǎng)。每兩天調(diào)查記錄1次材料污染情況，經(jīng)過1個月的培養(yǎng)后統(tǒng)計接種材料的染菌率和褐化率。結(jié)果如表1所示。表 權(quán)利要求
1.茶樹外植體無汞消毒劑，其特征在于包括包裝在空間獨(dú)立的單元中的順序給藥的溶液A和溶液B，所述的溶液A為70 80wt%的乙醇溶液，所述的溶液B為次氯酸鈉和吐溫的混合溶液，其含有5 IOwt%的次氯酸鈉和0. 05 0. 15wt%吐溫。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的茶樹外植體無汞消毒劑，其特征在于所述的溶液A為 75wt%的乙醇溶液，所述的溶液B中含有5wt%的次氯酸鈉和0. Iwt%吐溫。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的茶樹外植體無汞消毒劑，其特征在于所述的吐溫為吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80中至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的茶樹外植體無汞消毒劑，其特征在于所述的吐溫為吐溫—20 ο
5.茶樹外植體消毒方法，包括外植體的清洗、外植體的防褐化處理和外植體的消毒步驟，其特征在于外植體消毒時，先用權(quán)利要求1或2中的消毒劑的溶液A浸泡25 35s， 再將外植體浸入消毒劑的溶液B中，并用功率100 140W的超聲波震蕩5 12min，然后用滅菌水清洗外植體。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的茶樹外植體消毒方法，其特征在于外植體消毒時，先用權(quán)利要求1或2中的消毒劑的溶液A浸泡30s，再將外植體浸入消毒劑的溶液B中，并用功率 120W的超聲波震蕩lOmin。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的茶樹外植體消毒方法，其特征在于采用下述方法對茶樹外植體進(jìn)行防褐化處理將洗凈的外植體放入含有20mg/L氨卞和5mg/L抗壞血酸的溶液里浸泡20min。
8.根據(jù)權(quán)利要求5 7任一項(xiàng)所述的茶樹外植體消毒方法，其特征在于所述的外植體取自茶樹的芽、莖或葉。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的茶樹外植體消毒方法，其特征在于所述的外植體取自茶樹的帶腋芽莖段。
10.根據(jù)權(quán)利要求5 9任一項(xiàng)所述的茶樹外植體消毒方法，其特征在于所述的茶樹為適制綠茶茶樹、適制紅茶茶樹或適制烏龍茶茶樹。
全文摘要
本發(fā)明涉及茶樹外植體無汞消毒劑及外植體消毒方法，屬于茶樹組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是提供了一種茶樹外植體無汞消毒劑及外植體消毒方法，其能較為全面的對茶樹外植體進(jìn)行無汞消毒。本發(fā)明茶樹外植體無汞消毒劑，包括包裝在空間獨(dú)立的單元中的順序給藥的溶液A和溶液B，所述的溶液A為70～80wt％的乙醇溶液，所述的溶液B為5～10wt％的次氯酸鈉和0.05～0.15wt％吐溫的混合溶液。
文檔編號A01H4/00GK102326514SQ20111033965
公開日2012年1月25日 申請日期2011年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月1日
發(fā)明者葉德萍, 唐祥凱, 沈興中, 王智, 譚和平 申請人:四川中測科技投資有限公司