專利名稱：試管藕誘導(dǎo)技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及屬于農(nóng)業(yè)生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是一種試管藕誘導(dǎo)技術(shù)。
背景技術(shù)：
我國(guó)是蓮藕的起源中心之一。蓮藕在我國(guó)分布及栽培極為廣泛，是我國(guó)栽培面積 最大的水生蔬菜，黃河流域及其以南地區(qū)種植十分普遍。隨著農(nóng)村產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，藕種需 求量急劇增加，但由于蓮藕是以無性繁殖為主的作物，繁殖系數(shù)較低(1 10)，優(yōu)新藕種繁 殖速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)需求，而且常規(guī)藕種存在用種量大、運(yùn)輸費(fèi)用高、損耗較大、易帶 病等問題，使得蓮藕產(chǎn)業(yè)發(fā)展受到一定的限制。因此，進(jìn)行試管藕的生產(chǎn)是解決上述問題的 有效途徑之一?，F(xiàn)階段蓮藕的組織培養(yǎng)研究工作主要由國(guó)內(nèi)研究人員進(jìn)行，而國(guó)外對(duì)其研 究較少。從20世紀(jì)80年代起，我國(guó)中科院武漢植物所、江蘇農(nóng)學(xué)院、廣西大學(xué)等科研單位 和高等院校先后開展了一些研究工作，但只得到蓮藕試管苗，移栽成活率低，栽培技術(shù)要求 高，不能直接應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。試管藕誘導(dǎo)新技術(shù)的發(fā)明及其應(yīng)用，解決了常規(guī)藕種和蓮藕 試管苗存在的種種問題，具有顯著的優(yōu)勢(shì)和社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益，表現(xiàn)在第一，試管藕通過蓮藕 莖尖組培快繁而來，繁殖速度快，可工廠化生產(chǎn)，解決了常規(guī)種藕繁殖系數(shù)低的問題，可以 大大加快優(yōu)新品種的繁殖和推廣；第二，試管藕藕體積小，解決了常規(guī)藕種用種量大、運(yùn)輸 費(fèi)用高的問題；第三，試管藕不帶病，解決了常規(guī)藕種易帶病的問題；第四，與蓮藕試管苗 相比，試管藕移栽成活率高，為蓮藕的組培技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)際提供了更為有效的方法；第 五，通過試管藕可以直接誘導(dǎo)微型藕，易于栽培種植等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明克服了蓮藕常規(guī)生產(chǎn)上藕種繁殖困難的技術(shù)難題，在深入研究蓮藕的莖尖 培養(yǎng)和脫毒快繁的基礎(chǔ)上，提供了一種試管藕誘導(dǎo)技術(shù)，該方法為蓮藕的組織培養(yǎng)技術(shù)應(yīng) 用于生產(chǎn)實(shí)際提供了更為有效的方法。本發(fā)明包括如下步驟1.莖尖啟動(dòng)選取無病蓮藕的頂芽或側(cè)芽為外植體，外植體經(jīng)清洗消毒后，用解 剖刀剝?nèi)ネ鈱尤~鞘，切取莖尖接種于蓮藕莖尖啟動(dòng)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為M ^°C，光照強(qiáng)度為2000 25001x，每天光照10h，直至生長(zhǎng)成單芽或叢芽。其中莖尖啟動(dòng)培 養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA0. 5 4. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0%蔗糖 + 瓊脂 0. 5 0. 6%。2.繼代增殖將單芽或叢芽轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，溫度為 M ^°C，光照強(qiáng)度2000 25001X，每天光照IOh至產(chǎn)生新的叢芽。其中繼代培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA0. 5 2. 0mg/L+NAA0. 1 1. Omg/L+3. 0%蔗糖 + 瓊脂 0. 5 0. 6%。3.生根將叢芽分割成單芽，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)溫度為M ^TC,光照強(qiáng)度為2000 25001x，每天光照10h，至生根形成試管苗。其中生根培養(yǎng)基是 1/2MS+6-BA0. 5 1. 0mg/L+IBA0. 1 1. 5mg/L+AC0. 5 1. Og/L+5. 0% 蔗糖 + 瓊脂 0. 5 0. 6%。
4.誘導(dǎo)試管藕采用固液混合培養(yǎng)基培養(yǎng)誘導(dǎo)試管藕。生根培養(yǎng)30d后，將液體 培養(yǎng)基1/2MS+6-BA0. 1 1. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0 12. 0%蔗糖倒入培養(yǎng)容器中， 在溫度為M 26°C、光照強(qiáng)度2000 25001x下培養(yǎng)，每天光照10h，誘導(dǎo)形成試管藕。本發(fā)明培養(yǎng)基全稱是MS :Murashige&Skoog(1962)培養(yǎng)基；6-BA :6-節(jié)氨基嘌呤；NAA 萘乙酸；IBA 吲哚丁酸；AC 活性炭。本發(fā)明通過組織培養(yǎng)進(jìn)行試管藕的生產(chǎn)，它具有以下優(yōu)點(diǎn)1.試管藕生長(zhǎng)快，周期短，繁殖系數(shù)高。常規(guī)種藕的繁殖系數(shù)一般為1 10，一年 繁殖一代；而試管藕的繁殖系數(shù)為1 4，一年可繁殖6 8代，極大的提高了蓮藕的繁殖 速度，有利于優(yōu)新蓮藕品種的推廣應(yīng)用。2.試管藕體積小，重量輕，便于運(yùn)輸。傳統(tǒng)生產(chǎn)上每畝需常規(guī)藕種200 300kg， 而試管藕每支重1 3g，每畝用種量0. 5 1. ^g，便于藕種的長(zhǎng)途運(yùn)輸，減少了藕種的損 耗率及運(yùn)輸費(fèi)用。3.試管藕不帶病，質(zhì)量高。通過組培快繁得到的微型藕種不帶病，抗病能力強(qiáng)，同 時(shí)藕種的遺傳背景一致從而保證了藕種的純度。4.試管藕培養(yǎng)條件可控，可周年工廠化生產(chǎn)。蓮藕傳統(tǒng)繁殖是在自然條件下生長(zhǎng) 繁殖，受自然氣候環(huán)境影響很大。試管藕是在人為提供的培養(yǎng)基及小氣候環(huán)境條件下生長(zhǎng) 的，培養(yǎng)基中各種成分、環(huán)境條件的溫度、光照等，完全不受季節(jié)限制，可全年工廠化連續(xù)生 產(chǎn)，及時(shí)為生產(chǎn)提供規(guī)格整齊一致的優(yōu)質(zhì)無病種苗。5.與蓮藕試管苗相比，試管藕的移栽成活率更高，可達(dá)90%以上。6.試管藕可直接誘導(dǎo)微型藕。總之，試管藕誘導(dǎo)技術(shù)的發(fā)明為蓮藕產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供了一種快速、方便、有效的藕 種繁殖方法，大大滿足了蓮藕的市場(chǎng)需求。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1本發(fā)明以藕蓮品種鄂蓮五號(hào)的頂芽為外植體，經(jīng)過莖尖啟動(dòng)、繼代增殖、生根、誘 導(dǎo)形成試管藕。包括如下步驟1.莖尖啟動(dòng)取清洗干凈的無病鄂蓮五號(hào)品種的頂芽，經(jīng)75%酒精浸泡30秒后， 用0. 1 % HgCl2溶液浸泡3 12分鐘，再用無菌水沖洗3次，每次3 5分鐘。完成上述 表面消毒處理程序后，用解剖刀剝?nèi)ネ鈱尤~鞘，切取0. 3 0. 6cm長(zhǎng)的莖尖，接種于蓮藕莖 尖分化培養(yǎng)基1/2MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+3. 0%糖上，在溫度為M ，光照強(qiáng)度 2000 25001x下，每天光照10h，30 45d后產(chǎn)生芽或叢生芽。蓮藕莖尖分化培養(yǎng)基的pH 值為5. 8 6.0。2.繼代增殖將芽或叢芽轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基1/2MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 5mg/ L+3. 0%糖繼代增殖，在溫度為M ，光照強(qiáng)度2000 25001x下，每天光照10h，30 40d產(chǎn)生新的芽或叢芽。繼代培養(yǎng)基pH值為5. 8 6.0。3.生根將叢芽分割成單芽，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基1/2MS+6-BA0. 5mg/L+IBAl. Omg/ L+AC0. 5g/L+5. 0%糖誘導(dǎo)生根，在溫度為M ^°C，光照度2000 25001x下，每天光照10h, 25d生根形成試管苗。生根培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0。4.誘導(dǎo)試管藕生根培養(yǎng)30d后，將液體培養(yǎng)基(l/^MS+6-BAO. 1 1. Omg/ L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0 12. 0%蔗糖)倒入培養(yǎng)容器中，在溫度為M ^°C、光照強(qiáng) 度2000 25001x下培養(yǎng)，每天光照10h，誘導(dǎo)形成試管藕。30d以后誘導(dǎo)形成試管藕。誘 導(dǎo)試管藕培養(yǎng)基pH值為5. 8 6. 0。實(shí)施例2以子蓮品種太空3號(hào)的頂芽為外植體，經(jīng)過莖尖啟動(dòng)、繼代增殖、生根、誘導(dǎo)形成 試管藕。包括如下步驟1.莖尖啟動(dòng)以太空3號(hào)為試驗(yàn)材料，取清洗干凈的無病太空3號(hào)頂芽，經(jīng)75%酒 精浸泡30秒后，用0. 1 % HgCl2溶液浸泡3 12分鐘，再用無菌水沖洗3次，每次3 5分 鐘。完成上述表面消毒處理程序后，用解剖刀剝?nèi)ネ鈱尤~鞘，切取0. 3 0. 6cm長(zhǎng)的莖尖， 接種于蓮藕莖尖分化培養(yǎng)基1/2MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+3. 0 %糖上，在溫度為M ^°C，光照強(qiáng)度2000 25001x下，每天光照10h，30 45d后產(chǎn)生芽或叢生芽。蓮藕莖尖 分化培養(yǎng)基的pH值為5. 8 6. 0。2.繼代增殖將芽或叢芽轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基1/2MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 5mg/ L+3. 0%糖繼代增殖，在溫度為M ，光照強(qiáng)度2000 25001x下，每天光照10h，30 40d產(chǎn)生新的芽或叢芽。繼代培養(yǎng)基pH值為5. 8 6.0。3.生根將叢芽分割成單芽，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基1/2MS+6-BA0. 5mg/L+IBAl. Omg/ L+AC0. 5g/L+5. 0%糖誘導(dǎo)生根，在溫度為M ^°C，光照度2000 25001x下，每天光照 10h，25d生根形成試管苗。生根培養(yǎng)基pH值為5. 8 6.0，4.誘導(dǎo)試管藕生根培養(yǎng)30d 后，將液體培養(yǎng)基(1/2MS+6-BA0. 1 1. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0 12. 0%蔗糖)倒 入培養(yǎng)容器中，在溫度為24 ^°C、光照強(qiáng)度2000 25001x下培養(yǎng)，每天光照10h，誘導(dǎo) 形成試管藕。30d以后誘導(dǎo)形成試管藕。誘導(dǎo)試管藕培養(yǎng)基pH值為5. 8 6.0。
權(quán)利要求
1.一種試管藕誘導(dǎo)技術(shù)，它包括如下步驟(1)、莖尖啟動(dòng)選取無病蓮藕的頂芽或側(cè)芽為外植體，剝?nèi)ネ鈱尤~鞘，切取莖尖接 種于蓮藕莖尖啟動(dòng)培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，直至生長(zhǎng)成單芽或叢芽，其中莖尖啟動(dòng)培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA0. 5 4. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0% 蔗糖 + 瓊脂 0. 5 0. 6% ；(2)、繼代增殖將單芽或叢芽轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，直至產(chǎn)生新的 叢芽，其中繼代培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA0. 5 2. 0mg/L+NAA0. 1 1. Omg/L+3. 0%蔗糖+瓊脂 0. 5 0. 6% ；(3)、生根將叢芽分割成單芽，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，直至生根形成試管苗， 其中生根培養(yǎng)基為 1/2MS+6-BA0. 5 1. 0mg/L+IBA0. 1 1. 5mg/L+AC0. 5 1. Og/L+5. 0% 蔗糖+瓊脂0.5 0.6% ；、誘導(dǎo)試管藕生根培養(yǎng)30d后，將液體培養(yǎng)基1/2MS+6-BA0. 1 1. Omg/ L+NAA0. 1 0. 5mg/L+3. 0 12. 0%蔗糖倒入培養(yǎng)容器中，誘導(dǎo)形成試管藕。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試管藕誘導(dǎo)技術(shù)，其特征在于各階段培養(yǎng)基的PH值為 5. 8 6. 0，培養(yǎng)溫度為M ^°C，光照強(qiáng)度為2000 25001x，每天光照時(shí)間為10h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試管藕誘導(dǎo)技術(shù)，其特征在于采用固液混合培養(yǎng)基培養(yǎng)誘 導(dǎo)試管藕。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蓮試管藕誘導(dǎo)技術(shù)，包括以蓮藕的頂芽或側(cè)芽為外植體，經(jīng)過莖尖啟動(dòng)、繼代增殖、生根、最后采用固-液培養(yǎng)基培養(yǎng)誘導(dǎo)形成試管藕。所述的誘導(dǎo)試管藕步驟為切取蓮藕莖尖接種于莖尖啟動(dòng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)成芽或叢芽。將芽或叢芽轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代增殖，并將叢芽分割成單芽，轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根，形成試管苗。生根培養(yǎng)30d后，將液體培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)容器中，誘導(dǎo)形成試管藕。以上過程培養(yǎng)溫度為24～26℃、光照強(qiáng)度為2000～2500lx，每天光照10h。通過蓮藕的莖尖培養(yǎng)和快速繁殖，誘導(dǎo)形成試管藕，加快了蓮藕的繁殖速度，提高了移栽成活率，可工廠化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102067818SQ20101055297
公開日2011年5月25日 申請(qǐng)日期2010年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月19日
發(fā)明者劉義滿, 劉玉平, 葉元英, 彭靜, 朱紅蓮, 李雙梅, 李峰, 李明華, 柯衛(wèi)東, 趙春, 黃新芳, 黃來春 申請(qǐng)人:武漢市蔬菜科學(xué)研究所