專利名稱：萱藻絲狀體采苗方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種萱藻采苗方法，尤其是一種培養(yǎng)萱藻絲狀體，以絲狀體細胞直接 萌發(fā)成萱藻幼苗，降低育苗成本、大幅度提高育苗成功率的萱藻絲狀體采苗方法。
背景技術：
萱藻[Scytosiphonlomentaria (Lyngbye) Link]屬于褐藻門、萱藻目，是廣泛分 布在我國北起遼寧南至廣東沿海的一年生廣溫性褐藻。萱藻由宏觀的二倍孢子體世代和 微觀的單倍配子體世代相互交替所組成，萱藻幼苗每年冬季開始在自然海區(qū)出現(xiàn)，經(jīng)過冬 季和春季生長成為大型藻體且發(fā)育成熟(一般藻體長度為20 70cm，最大藻體長度可達 90cm)，在葉片表面形成配子囊，在春夏季配子囊成熟放出配子后，藻體死亡流失。放出的配 子在水中結(jié)合為合子，合子萌發(fā)形成盤狀孢子體，盤狀孢子體經(jīng)6個月左右生長后，在大連 沿海水溫降至17°C左右的10月中下旬形成單室孢子囊，在水溫15°C左右的11月上旬孢子 囊成熟并放出游孢子，游孢子附著后萌發(fā)為萱藻幼苗......依此循環(huán)。萱藻味道鮮美，營養(yǎng)豐富，其中蛋白質(zhì)、礦物質(zhì)、鐵和維生素含量較高，是深受消費 者歡迎的健康食品。近年來，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)萱藻內(nèi)多糖含量豐富，從萱藻中攝取或提取多糖已 經(jīng)引起關注，顯示出良好的產(chǎn)業(yè)化應用前景。隨著市場需求量迅速增大，僅依靠采集自然資 源已無法滿足市場的需要。目前，萱藻人工育苗研究中均采用配子采苗方式，即將種藻放出的配子結(jié)合形成 的合子采集在玻璃板或聚氯乙烯板上，合子萌發(fā)形成的盤狀孢子體需經(jīng)過6個月室內(nèi)培 養(yǎng)，當盤狀孢子體直徑達到2mm左右時，經(jīng)減數(shù)分裂才能形成單室孢子囊，單室孢子囊成熟 后，采用陰干刺激的方法促進孢子放出并采集在維尼綸繩上，孢子附著后萌發(fā)形成萱藻幼 苗。此方法的最大缺點是每次采苗均需采集合子并對盤狀孢子體進行長時間的培養(yǎng)，由于 雜藻的大量繁衍和高水溫期的影響，盤狀孢子體死亡率高，孢子囊成熟率低，難以獲得大量 孢子，萱藻苗產(chǎn)率極低。為此，迄今為止，國內(nèi)外尚無萱藻人工育苗和栽培方面成功的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是為了解決現(xiàn)有技術所存在的上述技術問題，提供一種可以絲狀體細胞直 接萌發(fā)成萱藻幼苗，降低育苗成本、大幅度提高育苗成功率的萱藻絲狀體采苗方法。本發(fā)明的技術解決方案是一種萱藻絲狀體采苗方法，其特征在于按如下步驟進 行a.取單株表面形成配子囊的成熟種藻，用海水洗凈且陰干刺激2 3小時，放入添 加有消毒海水的燒杯內(nèi)，當有配子放散在水中且呈煙霧狀后撈出種藻；將配子水移至添加 有培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)至有圓形的配子附著；再將培養(yǎng)皿移到溫度20°C、照度2000LX條 件下培養(yǎng)，培養(yǎng)液每10天全量交換1次，培養(yǎng)至形成絲狀體藻團；b.將絲狀體藻團從盤狀體上剝下后切碎，置于培養(yǎng)皿內(nèi)添加培養(yǎng)液增殖培養(yǎng)一個 月，再將培養(yǎng)皿內(nèi)的絲狀體刷下連同培養(yǎng)液移至燒瓶中，添加培養(yǎng)液后進行增殖和保存培養(yǎng)；所述培養(yǎng)條件為溫度20°C、照度2000Lx，培養(yǎng)液每10天全量交換1次；c.取形成節(jié)狀細胞團的絲狀體，添加培養(yǎng)液后在組織搗碎機中將絲狀體切成長 度為118 122 μ m的藻段，所述絲狀體與培養(yǎng)液的比例為lmg/30ml ；再將絲狀體藻段與 培養(yǎng)液的混合物灑在附著基上，將附著基移到培養(yǎng)裝置內(nèi)添加培養(yǎng)液后在溫度10°C、照度 2000Lx條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)液每3天全量交換1次，培養(yǎng)至幼苗長度達到5mm。本發(fā)明利用萱藻配子異宗結(jié)合的特點，從單株成熟藻體獲得的配子孤雌(雄)生 殖形成的盤狀體上獲得絲狀體?？蓪⒃鲋撑囵B(yǎng)的絲狀體長期保存，每年可根據(jù)生產(chǎn)需要確 定采苗時間和采苗數(shù)量，省略了現(xiàn)有技術的合子采集、盤狀孢子體生長、孢子囊成熟等培養(yǎng) 階段，室內(nèi)培育時間可節(jié)省5個月以上，從根本上解決了萱藻采集合子受種藻繁殖季節(jié)限 制、室內(nèi)培育時間長、育苗成功率低等弊端，降低了育苗成本，大幅度提高了育苗的成功率， 為萱藻生產(chǎn)提供大量苗種，使萱藻栽培業(yè)達到產(chǎn)業(yè)化水平。另外，本發(fā)明的絲狀體是從配子 孤雌(雄)生殖形成的盤狀體上獲得的，與其來源的藻體具有相同的遺傳性狀，可直接采集 優(yōu)良經(jīng)濟性狀藻體為種藻，培育出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的萱藻幼苗，進而獲得較高的經(jīng)濟效益。
具體實施例方式a.在萱藻的繁殖期內(nèi)，取單株表面形成配子囊的成熟種藻，用海水洗凈且陰干刺 激2 3小時，放入添加有消毒海水的燒杯內(nèi)，當觀察到有大量配子放散在水中呈煙霧狀后 撈出種藻；用吸管取少量配子水移至添加有培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，2小時后，可見培養(yǎng)皿 底面有圓形的配子附著；再將培養(yǎng)皿移到溫度20°C、照度2000Lx條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)液每10 天全量交換1次；培養(yǎng)3天后，圓形配子拉長，分裂成2 3個細胞的盤狀體，一周后，經(jīng)向周邊多次 細胞分裂形成十余個細胞的盤狀體。培養(yǎng)1個月后生長成為直徑40 50 μ m的盤狀體， 培養(yǎng)2個月后，盤狀體的直徑已經(jīng)達到100 μ m以上，可見部分盤狀體中央或周邊表面產(chǎn)生 1個或多個突起，突起逐漸延長并延伸配子體表面，經(jīng)生長后形成含有1個盤狀色素體的單 條絲狀體；再培養(yǎng)一周后，絲狀體長度超過100 μ m，可見有分枝生出成為分枝絲狀體，繼續(xù) 培養(yǎng)1個月后，絲狀體長度達到0. 5mm左右，成為肉眼可見的絲狀體藻團。b.用消毒鑷子將絲狀體藻團從盤狀體上剝下，移到載玻片上用雙面刀片切碎，用 培養(yǎng)液將切碎的絲狀體沖到培養(yǎng)皿內(nèi)增殖培養(yǎng)一個月，絲狀體已長滿培養(yǎng)皿底面，再用消 毒刷子將培養(yǎng)皿內(nèi)的絲狀體刷下連同培養(yǎng)液移至燒瓶中，添加培養(yǎng)液后進行增殖和保存培 養(yǎng)；所述培養(yǎng)條件為溫度20°C、照度2000Lx，培養(yǎng)液每10天全量交換1次；絲狀體在燒瓶內(nèi)生長1個月后可見燒瓶內(nèi)形成大量淺褐色藻團；培養(yǎng)2個月后，生 長速度減慢，絲狀體細胞逐漸變粗，細胞內(nèi)盤狀色素體增大，藻團顏色由淺褐色變?yōu)楹稚?在細胞間隔壁處環(huán)生多個圓形小細胞，經(jīng)生長后形成節(jié)狀細胞團；培養(yǎng)3個月后，絲狀體幾 乎所有的細胞均形成節(jié)狀細胞團。c.取形成節(jié)狀細胞團的絲狀體10mg，添加300m培養(yǎng)液后在組織搗碎機中切碎2 分鐘，將絲狀體切成長度為118 122μπι的藻段，顯微鏡下可見大量節(jié)狀細胞團的圓形細 胞被打落散在培養(yǎng)液中；再將絲狀體藻段與培養(yǎng)液的混合物灑在聚氯乙烯板和維尼綸苗繩 附著基上，將附著基移到培養(yǎng)裝置內(nèi)再添加培養(yǎng)液后在溫度10°C、照度2000LX條件下培 養(yǎng)，培養(yǎng)液每3天全量交換1次；
3天后絲狀體藻段和圓形細胞在附著基上附著牢固，1周后節(jié)狀細胞團細胞、圓形 細胞及部分絲狀體細胞開始萌發(fā)，萌發(fā)時細胞首先拉長，分裂成由3 5個細胞組成的細長 藻體，基部細胞生出盤狀假根，再經(jīng)過多次細胞縱橫分裂形成頂端細胞尖細，上面生有無色 毛的萱藻幼苗；培養(yǎng)10天后，萱藻幼苗長度已經(jīng)達到300 μ m以上，已肉眼可見；培養(yǎng)20天 后，萱藻幼苗長度達到1mm，培養(yǎng)1個月后，萱藻幼苗長度已經(jīng)達到5mm，可下海栽培。所述培養(yǎng)液為向IL加熱至80°C經(jīng)過濾后的自然海水中添加NaN03100mg、 NaH2PO4 · 12H20 20mg 及 PI 溶液 1ml。PI溶液公開于西澤一俊，千原光雄。藻類研究法[M]東京共立出版株式會社， 1979 281 293.試驗例在11月上旬，將生長幼苗的維尼綸繩纏繞在長8m，直徑3cm萱藻栽培苗繩上，再將 栽培苗繩平掛在萱藻栽培浮筏上進行栽培，經(jīng)過4個月海區(qū)栽培，幼苗生長成為平均長度 60cm萱藻成體。
權利要求
一種萱藻絲狀體采苗方法，其特征在于按如下步驟進行a.取單株表面形成配子囊的成熟種藻，用海水洗凈且陰干刺激2～3小時，放入添加有消毒海水的燒杯內(nèi)，當有配子放散在水中且呈煙霧狀后撈出種藻；將配子水移至添加有培養(yǎng)液的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)至有圓形的配子附著；再將培養(yǎng)皿移到溫度20℃、照度2000Lx條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)液每10天全量交換1次，培養(yǎng)至形成絲狀體藻團；b.將絲狀體藻團從盤狀體上剝下后切碎，置于培養(yǎng)皿內(nèi)添加培養(yǎng)液增殖培養(yǎng)一個月，再將培養(yǎng)皿內(nèi)的絲狀體刷下連同培養(yǎng)液移至燒瓶中，添加培養(yǎng)液后進行增殖和保存培養(yǎng)；所述培養(yǎng)條件為溫度20℃、照度2000Lx，培養(yǎng)液每10天全量交換1次；c.取形成節(jié)狀細胞團的絲狀體，添加培養(yǎng)液后在組織搗碎機中將絲狀體切成長度為118～122μm的藻段，所述絲狀體與培養(yǎng)液的比例為1mg/30ml；再將絲狀體藻段與培養(yǎng)液的混合物灑在附著基上，將附著基移到培養(yǎng)裝置內(nèi)添加培養(yǎng)液后在溫度10℃、照度2000Lx條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)液每3天全量交換次，培養(yǎng)至幼苗長度達到5mm。
全文摘要
本發(fā)明公開一種萱藻絲狀體采苗方法，是利用萱藻配子異宗結(jié)合的特點，從單株成熟藻體獲得的配子孤雌(雄)生殖形成的盤狀體上獲得絲狀體，采用絲狀體采苗的方法將絲狀體切碎撒在附著基上，在附著基上的絲狀體細胞就會直接萌發(fā)形成單倍萱藻幼苗?？蓪⒃鲋撑囵B(yǎng)的絲狀體長期保存，每年可根據(jù)生產(chǎn)需要確定采苗時間和采苗數(shù)量，省略了現(xiàn)有技術的合子采集、盤狀孢子體生長、孢子囊成熟等培養(yǎng)階段，室內(nèi)培育時間可節(jié)省5個月以上，從根本上解決了萱藻采集合子受種藻繁殖季節(jié)限制、室內(nèi)培育時間長、育苗成功率低等弊端，降低了育苗成本，大幅度提高了育苗的成功率，為萱藻生產(chǎn)提供大量苗種，使萱藻栽培業(yè)達到產(chǎn)業(yè)化水平。
文檔編號A01G33/00GK101946683SQ201010239480
公開日2011年1月19日 申請日期2010年7月29日 優(yōu)先權日2010年7月29日
發(fā)明者張澤宇, 曹淑青, 李曉麗, 由學策 申請人:大連海洋大學