專利名稱：一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗胚狀體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗胚狀體的方法。
背景技術(shù)：
“胚狀體”也稱“體細(xì)胞胚胎”，簡稱“體胚”，是獲得再生植株和制造人工種子的重 要材料，也是從解剖學(xué)及內(nèi)在生理生化機(jī)制方面研究細(xì)胞分化、器官建成和個體發(fā)育的重 要材料，因此對胚狀體的研究已成為近代植物生物學(xué)界的一個熱門領(lǐng)域。國內(nèi)外對甘蔗胚 狀體的研究也有不少報道。但是，目前使用的基本培養(yǎng)基基本局限于MS和N6兩種，而用于 誘導(dǎo)胚狀體發(fā)生的生長調(diào)節(jié)劑則無一例外地都是人工合成的，具有一定毒性和殘留的苯類 衍生物2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)。而且單用2，4-D時，胚狀體發(fā)生率僅有百分之十幾。 也有人將2，4-D再復(fù)配BA (N6-BA, N6-芐基腺嘌呤)或水解乳蛋白，以求提高胚狀體發(fā)生率， 不過也只能達(dá)到百分之三十至五十。靈發(fā)素(Lingfasu，LFS，代號PGR-08)作為一種新型 的，生物源的植物生長調(diào)節(jié)劑，無毒害，無殘留。在被公認(rèn)為難以組培的傳統(tǒng)中藥材三七胚 狀體的研究中，用LFS成功地誘導(dǎo)莖切段、葉柄和葉片等不同器官都獲得了大量胚狀體(許 鴻源等，中藥材，2004，27 (10) :711-712 ；中國中藥雜志，2007，32(6) =481-483) 但是，尚未 檢索到LFS誘導(dǎo)甘蔗胚狀體的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗胚狀體的方法，它能夠誘 導(dǎo)甘蔗胚狀體。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗胚狀體的方 法，其特征在于，該方法包括如下步驟1、將蔗株梢部用70%酒精消毒外表，將離生長點0.01-4. Ocm幼嫩葉片切成為 0. 3-0. 5cm 方塊，2、將上述方塊接在MS+LFS0. 6 1. Omg/L固體培養(yǎng)基上進(jìn)行全天24小時無光照 的暗培養(yǎng)，8-12天后獲得愈傷組織；3、將上述愈傷組織在不更換培養(yǎng)基條件下每天進(jìn)行每天光照時間10 12小時， 光強(qiáng)2000 2500LX的光、暗交替培養(yǎng)，7_10天后得到形態(tài)各異的胚狀體，4、將上述胚狀體轉(zhuǎn)到MS+LFS0. 6 1. Omg/L新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每20-30天更換 一次新鮮培養(yǎng)基，得到黃色的胚狀體。本發(fā)明的有益效果應(yīng)用本發(fā)明，可誘導(dǎo)產(chǎn)生大量結(jié)構(gòu)松散、顆粒狀、顏色為米黃色的優(yōu)質(zhì)甘蔗胚狀 體。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
表1中實施例1為采用MS+2，4_D 2. Omg · Γ1誘導(dǎo)甘蔗胚狀體的對比例。實施例2為本發(fā)明所述一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗胚狀體的方法，包括如下步驟1.從甘蔗田選擇莖徑較粗大且無明顯病蟲為害癥狀的蔗株梢部，用70%酒精消 毒外表，在超凈工作臺上，去除梢部老葉，將離生長點0.01-4. Ocm幼嫩葉片，切成大小為 0. 3-0. 5cm 方塊；2.將上述方塊接在MS+LFS0. 6 1. Omg/L固體培養(yǎng)基上進(jìn)行暗培養(yǎng)，全天24小時 無光照，8-12天后獲得愈傷組織；3.將上述2的材料在不更換新培養(yǎng)基條件下，每天進(jìn)行光、暗交替培養(yǎng)，每天光照 時間10 12小時，光強(qiáng)2000 2500LX，7-10天后形態(tài)各異的胚狀體形成，發(fā)生率彡85%。 發(fā)生率=發(fā)生胚狀體的幼葉切片數(shù)/接種的幼葉切片數(shù)X 100%。4.將上述3的材料轉(zhuǎn)到MS+LFS0. 6 1. Omg/L新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每20-30天更 換一次新鮮培養(yǎng)基，大面積形成結(jié)構(gòu)松散、顆粒狀、顏色米為黃色的胚狀體。表1兩種不同培養(yǎng)基的實驗結(jié)果 注甘蔗品種為新臺糖22號。從表1中實驗數(shù)據(jù)可以看出，在相同接種切片數(shù)情況下，采用本發(fā)明得到的出胚 狀體切片數(shù)比傳統(tǒng)培養(yǎng)基得到的出胚狀體切片數(shù)多47片，胚狀體發(fā)生率高達(dá)93. 3%。
權(quán)利要求
一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗胚狀體的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟1.1將蔗株梢部用70％酒精消毒外表，將離生長點0.01 4.0cm幼嫩葉片切成為0.3 0.5cm方塊，1.2將上述方塊接在MS+LFS0.6～1.0mg/L固體培養(yǎng)基上進(jìn)行全天24小時無光照的暗培養(yǎng)，8 12天后獲得愈傷組織；1.3將上述愈傷組織在不更換培養(yǎng)基條件下每天進(jìn)行每天光照時間10～12小時，光強(qiáng)2000～2500LX的光、暗交替培養(yǎng)，7 10天后得到形態(tài)各異的胚狀體，1.4將上述胚狀體轉(zhuǎn)到MS+LFS0.6～1.0mg/L新鮮培養(yǎng)基上培養(yǎng)，每20 30天更換一次新鮮培養(yǎng)基，得到黃色的胚狀體。
全文摘要
一種用靈發(fā)素誘導(dǎo)甘蔗胚狀體的方法。以MS為基本培養(yǎng)基，添加靈發(fā)素0.6-1.0mg·L-1配制成改良型固體培養(yǎng)基，以甘蔗幼葉切片作外植體，先在暗箱培養(yǎng)8-12天，然后轉(zhuǎn)入每天光、暗交替的條件下繼續(xù)培養(yǎng)，培養(yǎng)材料陸續(xù)發(fā)生形態(tài)各異的胚狀體，20天后發(fā)生率≥85％。
文檔編號A01H4/00GK101904301SQ20101021615
公開日2010年12月8日 申請日期2010年7月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月2日
發(fā)明者余坤興, 劉麗敏, 劉曉燕, 劉紅堅, 盧曼曼, 唐紅琴, 方鋒學(xué), 李松, 楊榮仲, 淡明, 游建華, 藍(lán)桃菊, 許鴻源, 譚芳, 龔銀花 申請人:廣西壯族自治區(qū)甘蔗研究所