專利名稱：南天竹火焰的組培方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種植株的組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及南天竹‘火焰’的組織培養(yǎng)方法。
背景技術：
南天竹火焰為常綠小灌木，喜溫暖多濕及通風良好的半陰環(huán)境。耐寒，耐旱，能耐微堿性土壤，適宜含腐殖質(zhì)的沙壤土生長。南天竹火焰株型緊湊，葉較普通南天竹較寬，強光下葉鮮紅色，尤其是隆冬季節(jié)，葉色十分鮮艷。園林中多叢植或孤植于花境、庭院，又可做疏林地被植物，是良好的花鏡與庭院材料，市場需求量大。但是，該植物為國外引進的品種引種，組培報道尚未見，因此數(shù)量較少，其扦插、分株較慢，扦插成活率低，導致種苗供應受限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術存在的缺陷而提供一種移栽成活率可高達95%、保持母體現(xiàn)狀的南天竹‘火焰’的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術方案來實現(xiàn)南天竹火焰的組培方法，其特征在于，該方法通過對摘取的南天竹火焰新萌發(fā)的小芽進行無菌處理后，再依次接種于小芽誘導培養(yǎng)基、不定芽增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)并置于溫室中煉苗后，即可移栽室外，得到南天竹‘火焰’植株。該方法具體包括以下步驟(1)無菌材料的獲得摘取南天竹火焰新萌發(fā)的小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用75wt%的乙醇浸泡20-40s及l(fā)wt%。升汞溶液浸泡10-20min后，利用無菌水沖洗5_6次并吸干表面水分，取小芽基部并切成Icm接種于pH值為5. 5-6. 0的小芽誘導培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為 24-260C，光照為70-90 μ mol/ms，進行芽誘導培養(yǎng)；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養(yǎng)基上4周后，小芽開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)1個月，切下帶芽愈傷組織接種于PH值為5. 5-6. 0的不定芽增殖培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為M_26°C，光照為70-90ymol/mS，進行增殖培養(yǎng)；C3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基中誘導出叢生芽后，將叢生芽分成小叢或單芽并接種于pH 值為5. 5-6. 0的壯苗培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為24- °C，光照為70-90μ mol/ms，進行壯苗培養(yǎng)，不定芽迅速伸長，30天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養(yǎng)取高度為2-3cm的小植株，將其接種于pH值為5. 5-6. 0的生根培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為24- °C，光照為70-90 μ mol/ms，進行生根培養(yǎng)，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ；(5)煉苗與移栽繼續(xù)生根培養(yǎng)30-50天，根系長至l_2cm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，即可獲得產(chǎn)品植株。所述的小芽誘導培養(yǎng)基的基本成分包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為 MS+6-BA 1. 0 5. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+IBAl. 0 5. Omg/L。所述小芽誘導培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+IBA5. 0mg/L。所述的不定芽增殖培養(yǎng)基的基本成分包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為 1/2MS+6-BA1. 3. Omg/L+NAAO. 1 0. 3mg/L+IBA0. 1 0. 5mg/L。所述不定芽增殖培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選1/2MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+IBA 0. 3mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基的基本成分包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為 MS+6-BA0. 5 2. 0mg/L+NAA0. 1 0. 2mg/L+IBA0. 3 0. 5mg/L。所述壯苗培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L+IBA0. 3mg/L0所述的生根培養(yǎng)基的基本成分包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為1/2MS+NAA 0. 1 1. 0mg/L+IBA3. 0 8. 0mg/L。所述生根培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選1/2MS+NAA0. 5mg/L+IBA5. Omg/L。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的移栽成活率可高達95 %，大大提高繁殖速度和苗木的整齊度，更好地保持原有的母本性狀。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細說明。實施例1南天竹‘火焰’的組織培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得摘取南天竹火焰新萌發(fā)的小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用75wt%的乙醇浸泡20s及l(fā)wt%。升汞溶液浸泡IOmin后，利用無菌水沖洗5_6次并吸干表面水分，取小芽基部并切成Icm接種于小芽誘導培養(yǎng)基，該小芽誘導培養(yǎng)基的成分為MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L+IBAl. Omg/L ；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養(yǎng)基上4周后，小芽開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，基部愈傷組織上小芽比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好，繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)1個月，切下帶芽愈傷組織接種于不定芽增殖培養(yǎng)基上，該不定芽增殖培養(yǎng)基的成分為1/2MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L+IBAO. lmg/L ；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基中誘導出叢生芽后，將叢生芽分成小叢或單芽并接種于壯苗培養(yǎng)基中，不定芽迅速伸長，30天后可以長到2cm，該壯苗培養(yǎng)基的成分為MS+6-BA0. 5mg/L+NAAO. lmg/L+IBA 0. 3mg/L ；(4)生根培養(yǎng)取高度為2cm的小植株，將其接種于生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基的成分為 1/2MS+NAA0. lmg/L+IBA3. Omg/L, 10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4cm ；(5)煉苗與移栽繼續(xù)生根培養(yǎng)30天，根系長至Icm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，即可獲得產(chǎn)品植株。上述的所有培養(yǎng)基的成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為 24°C，光照為 70ymol/ms, pH 值為 5. 5。實施例2南天竹‘火焰’的組織培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得摘取南天竹火焰新萌發(fā)的小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用75wt%的乙醇浸泡40s及Iwt%。升汞溶液浸泡20min后，利用無菌水沖洗6次并吸干表面水分，取小芽基部并切成Icm接種于小芽誘導培養(yǎng)基，該小芽誘導培養(yǎng)基的成分為MS+6-BA3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L+IBA3. Omg/L ；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養(yǎng)基上4周后，小芽開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，基部愈傷組織上小芽比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好，繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)1個月，切下帶芽愈傷組織接種于不定芽增殖培養(yǎng)基上，該不定芽增殖培養(yǎng)基的成分為1/2MS+6-BA 3. Omg/ L+NAAO. 3mg/L+IBA0. 5mg/L ；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基中誘導出叢生芽后，將叢生芽分成小叢或單芽并接種于壯苗培養(yǎng)基中，不定芽迅速伸長，30天后可以長到3cm，該壯苗培養(yǎng)基的成分為MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L+IBA0. 5mg/L ；(4)生根培養(yǎng)取高度為3cm的小植株，將其接種于生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基的成分為 1/2MS+NAA1. 0mg/L+IBA8. Omg/L, 10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至6cm ；(5)煉苗與移栽 繼續(xù)生根培養(yǎng)50天，根系長至2cm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，即可獲得產(chǎn)品植株。上述的所有培養(yǎng)基的成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為 26°C，光照為 90ymol/ms, pH 值為 6. O。實施例3
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南天竹‘火焰’的組織培養(yǎng)方法，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得摘取南天竹火焰新萌發(fā)的小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用75wt%的乙醇浸泡30s及Iwt%。升汞溶液浸泡15min后，利用無菌水沖洗5次并吸干表面水分，取小芽基部并切成Icm接種于小芽誘導培養(yǎng)基，該小芽誘導培養(yǎng)基的成分為MS+6-BA5. Omg/ L+NAAO. 5mg/L+IBA5. Omg/L ；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養(yǎng)基上4周后，小芽開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，繼基部愈傷組織上小芽比較多，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長迅速并無玻璃化等不良現(xiàn)象，在該培養(yǎng)中生長發(fā)育良好，繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)1個月，切下帶芽愈傷組織接種于不定芽增殖培養(yǎng)基上，該不定芽增殖培養(yǎng)基的成分為1/2MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L+IBA 0. 3mg/L ；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基中誘導出叢生芽后，將叢生芽分成小叢或單芽并接種于壯苗培養(yǎng)基中，該壯苗培養(yǎng)基的成分為MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L+IBAO. 3mg/L,不定芽迅速伸長，30天后可以長到3cm;(4)生根培養(yǎng)取高度為3cm的小植株，將其接種于生根培養(yǎng)基中，該生根培養(yǎng)基的成分為 1/2MS+NAA0. 5mg/L+IBA5. Omg/L, 10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至6cm ；(5)煉苗與移栽繼續(xù)生根培養(yǎng)40天，根系長至2cm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，即可獲得產(chǎn)品植株。上述的所有培養(yǎng)基的成分還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，該培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為 25°C，光照為 80ymol/ms, pH 值為 5. 8。
權利要求
1.南天竹火焰的組培方法，其特征在于，該方法通過對摘取的南天竹火焰新萌發(fā)的小芽進行無菌處理后，再依次接種于小芽誘導培養(yǎng)基、不定芽增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)并置于溫室中煉苗后，即可移栽室外，得到南天竹‘火焰’植株。
2.根據(jù)權利要求1所述的南天竹火焰的組培方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟(1)無菌材料的獲得摘取南天竹火焰新萌發(fā)的小芽，用自來水沖洗池后于超凈工作臺上，用75wt%的乙醇浸泡20-40s及l(fā)wt%。升汞溶液浸泡10-20min后，利用無菌水沖洗5_6次并吸干表面水分，取小芽基部并切成Icm接種于pH值為5. 5-6. 0的小芽誘導培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為 24-260C，光照為70-90 μ mol/ms，進行芽誘導培養(yǎng)；(2)芽的分化和增殖小芽接種于小芽誘導培養(yǎng)基上4周后，小芽開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，2周后可見明顯的愈傷組織，繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)1個月，切下帶芽愈傷組織接種于PH值為5. 5-6. 0的不定芽增殖培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為M_26°C，光照為70-90ymol/mS，進行增殖培養(yǎng)；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基中誘導出叢生芽后，將叢生芽分成小叢或單芽并接種于PH值為 5. 5-6.0的壯苗培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為M-26°C，光照為70-90ymol/mS，進行壯苗培養(yǎng)，不定芽迅速伸長，30天后可以長到2-3cm ；(4)生根培養(yǎng)取高度為2-3cm的小植株，將其接種于pH值為5. 5-6. 0的生根培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為24- °C，光照為70-90 μ mol/ms，進行生根培養(yǎng)，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后可以長至4-6cm ；(5)煉苗與移栽繼續(xù)生根培養(yǎng)30-50天，根系長至l_2cm時，選擇根系發(fā)達生長健壯的無菌苗，室內(nèi)開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后，即可移栽室外，給予肥水管理，即可獲得產(chǎn)品植株。
3.根據(jù)權利要求1所述的南天竹火焰的組培方法，其特征在于，所述的小芽誘導培養(yǎng)基的基本成分包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA1. 0 5. 0mg/L+NAA0. 1 0. 5mg/L+IBAl. 0 5. Omg/L。
4.根據(jù)權利要求3所述的南天竹火焰的組培方法，其特征在于，所述小芽誘導培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選 MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+IBA5. 0mg/L。
5.根據(jù)權利要求1所述的南天竹火焰的組培方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培養(yǎng)基的基本成分包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為1/2MS+6-BA1. 0 3. Omg/ L+NAA0. 1 0. 3mg/L+IBA0. 1 0. 5mg/L。
6.根據(jù)權利要求5所述的南天竹火焰的組培方法，其特征在于，所述不定芽增殖培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選 1/2MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L+IBA0. 3mg/L。
7.根據(jù)權利要求1所述的南天竹火焰的組培方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基的基本成分包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為MS+6-BA0. 5 2. 0mg/L+NAA0. 1 0. 2mg/ L+1ΒΑ0. 3 0. 5mg/L。
8.根據(jù)權利要求7所述的南天竹火焰的組培方法，其特征在于，所述壯苗培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L+IBAO. 3mg/L。
9.根據(jù)權利要求1所述的南天竹火焰的組培方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基的基本成分包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L，營養(yǎng)成分為1/2MS+NAA0. 1 1. 0mg/L+IBA3. 0 8. 0mg/Lo
10.根據(jù)權利要求9所述的南天竹火焰的組培方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分優(yōu)選 1/2MS+NAA0. 5mg/L+IBA5. Omg/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及南天竹火焰的組培方法，該方法以南天竹火焰新萌發(fā)的小芽為基礎，步驟包括無菌材料的獲得、芽的分化和增殖、不定芽壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)及煉苗與移栽，最終得到性狀完好的南天竹火焰植株。與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的移栽成活率可高達95％，大大提高繁殖速度和苗木的整齊度，更好地保持原有的母本性狀。
文檔編號A01H4/00GK102273403SQ201010195249
公開日2011年12月14日 申請日期2010年6月8日 優(yōu)先權日2010年6月8日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請人:上海上房園藝有限公司