專利名稱：酒竹的組培快繁技術(shù)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及植物的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)。
背景技術(shù)：
酒竹(Oxytenanthera braunii)是竹亞科銳藥屬竹種，原產(chǎn)非洲東部中高山地區(qū) (Liese, 1992)。稈叢生，高6 10m，直徑4 9cm，地下莖為復(fù)軸型，不具鞭；稈圓筒形，著 枝一側(cè)不具縱溝；節(jié)間長25 45cm，稈每節(jié)分枝5 9枚或更多枚，具次級枝；稈同一節(jié)上 具明顯區(qū)別于其他分枝的主枝1 2枚。酒竹在新竹(筍的高生長)形成過程中，新竹桿 在砍梢后的前幾天就開始在砍梢傷口分泌出酒精含量較高的傷流液，作為重要的生活和經(jīng) 濟竹種，這種自然分泌和發(fā)酵的液體(未有任何人工添加成分)，其口感甜酸可口，分泌時 間可持續(xù)一個月左右(28d)，每棵竹子合計可產(chǎn)酒30kg，按每畝每年50棵竹子用于產(chǎn)酒計 算，畝產(chǎn)酒量可達1500kg/a，這種竹子分泌的天然酒，經(jīng)2-3d的自然發(fā)酵，酒精度可達二十 度，是一種上等飲料，應(yīng)用前景十分廣闊。雖然原產(chǎn)地農(nóng)民把酒竹當(dāng)作一種固定生活收入而進行勞作，但是，由于該竹種分 布在非洲東部山區(qū)，分布地原始、偏僻，交通不便利，且分布面積小，生產(chǎn)、經(jīng)營幾乎都處于 原始狀態(tài)，因此，世界上目前對酒竹研究、開發(fā)和利用尚處于起始階段。同時，由于人們多年 濫挖亂采及其生殖機制和微生境需求的某些限制，酒竹適生的分布地區(qū)和數(shù)量不多，難以 滿足工業(yè)領(lǐng)域的需要。因此，為了保護酒竹種質(zhì)資源，同時滿足對其日益增大的需求量，通 過現(xiàn)代生物技術(shù)，用植物組織培養(yǎng)方法來進行無性繁殖，是大量繁殖酒竹的最可行的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種酒竹的組培快速繁殖方法。方法的步驟如下1)外植體的選取與處理選1-2年生的幼枝，將包裹于竹節(jié)上的葉仔細(xì)剝除，優(yōu)選 完整的、剛要萌發(fā)新芽的竹節(jié)或頂芽作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗 30分鐘后，置于75%酒精中處理30秒，然后在經(jīng)0. 的升汞(Hgcl)消毒8分鐘后用無菌 水沖洗5次，切去外植體變色的部分，接種于培養(yǎng)基中。2)誘導(dǎo)培養(yǎng)選擇0. 5MS+4BA+NAA為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中。3)增殖培養(yǎng)誘導(dǎo)培養(yǎng)7天后，將生長于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于 0. 5MS+4BA+KT 上進行培養(yǎng)；7 天后轉(zhuǎn)入 0. 5MS+2NAA+1. 5IBA 或 0. 5MS+2NAA+3IBA+3BA 中繼 續(xù)培養(yǎng)7天。4)生根培養(yǎng)選擇0. 5MS+IBA為生根培養(yǎng)基；5)移栽將已生根的植株取出，移栽到珍珠巖泥炭土(1 1)混合的基質(zhì)上。本發(fā)明的優(yōu)點(1)酒竹的快繁和生產(chǎn)可以在人為控制條件下進行，不受季節(jié)、氣 候條件與土壤等因素的制約，可排除病蟲害的侵襲和農(nóng)藥殘留量的困擾，嚴(yán)格控制酒竹的質(zhì)量；(2)個體差異小，生產(chǎn)周期短，設(shè)備簡單，占地面積少，能節(jié)省人力、物力等，便于工廠 化生產(chǎn)；(3)利用組織培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的芽變或人工誘變，或進行脫毒，培育新品種，提高 酒竹品質(zhì)；(4)保存酒竹種質(zhì)資源；(5)通過組織培養(yǎng)酒竹快速獲得新生植株，以減少對自 然資源的破壞。該技術(shù)解決了酒竹快速繁殖及其穩(wěn)定生根的重要技術(shù)環(huán)節(jié)，達到了繁殖系 數(shù)高速度快，技術(shù)穩(wěn)定，實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的目的。具體實現(xiàn)方式酒竹的組培快繁技術(shù)，包括外植體的選取與處理，誘導(dǎo)培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)，生根 培養(yǎng)，移栽等步驟，具體地，選取完整的、剛要萌發(fā)新芽的竹節(jié)或頂芽為培養(yǎng)材料，選擇 0. 5MS+4BA+NAA為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，選擇1/2MS+IBA為生根培養(yǎng)基。誘導(dǎo)培養(yǎng)，在0. 5MS+4BA+NAA的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)7天后有新芽發(fā)出，無愈傷組織，把 新芽接種于不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基(1)0. 5MS+4BA+KT(2)0. 5MS+2NAA+1. 5IBA(3)0. 5MS+2NAA+3I BA+3BA。半個月后結(jié)果如下三種培養(yǎng)基中均有芽冒出；(1)植株葉片普遍偏黃，芽的生長速 度緩慢；(2)、(3)植株健壯，色綠；(2)中葉柄基部膨大，有數(shù)個顆粒狀突起；(3)中葉柄基 部有2-5個小芽，小芽淡黃或綠色。由此可見，誘導(dǎo)培養(yǎng)以(2)、(3)為宜。采用上述措施的本發(fā)明，用于酒竹叢生芽誘導(dǎo)和生長，壯苗生根兩個關(guān)鍵階段的 組織培養(yǎng)，可適用于酒竹的組培快繁。使酒竹這一瀕危植物實現(xiàn)工廠化快速育苗，更有效 地保護和開發(fā)利用成為可能，在使用中將酒竹的芽接種在本發(fā)明上，30-45天大部分可誘導(dǎo) 形成叢生芽，一般誘導(dǎo)率可達75-90 %。在此基礎(chǔ)上繼續(xù)繼代培養(yǎng)，叢生芽可大量增殖，25 天繼代一次的增殖倍數(shù)平均為3. 3。把繼代后的叢生芽轉(zhuǎn)移到本發(fā)明提供的生根培養(yǎng)基中 25-45天可大量發(fā)根，出根率在80%左右，45天可出瓶煉苗。上述技術(shù)中，可優(yōu)選完整的芽為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗 30分鐘后，置于75%酒精中處理30秒，然后在經(jīng)0. 的升汞(HgCl)消毒8分鐘后用無菌 水沖洗，切去外植體變色的部分，接種于培養(yǎng)基中。上述技術(shù)中誘導(dǎo)、增殖和生根步驟的PH值均為5. 8，培養(yǎng)溫度25°C，每天光照16 小時，光照強度2300LX。本發(fā)明的優(yōu)異性體現(xiàn)在提供了酒竹的植物組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)，摸索出了 快速繁殖及其穩(wěn)定生根等重要環(huán)節(jié)的關(guān)鍵性技術(shù)，一個外植體一年就可克隆繁殖出數(shù)萬株 后代，為該植物的商品化生產(chǎn)提供了一套切實可行的生產(chǎn)技術(shù)路線，實現(xiàn)了酒竹的工業(yè)化 生產(chǎn)目的。實施例1選2年生的幼枝，將包裹于竹節(jié)上的葉仔細(xì)剝除，優(yōu)選完整的、剛要萌發(fā)新芽作為 培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗30分鐘后，置于75%酒精中處理30秒，然 后在經(jīng)0. 的升汞(Hgcl)消毒8分鐘后用無菌水沖洗5次，切去外植體變色的部分，接種 于培養(yǎng)基中。選擇0.5MS+4BA+NAA為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中。誘 導(dǎo)培養(yǎng)7天后，將生長于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于0. 5MS+4BA+KT上進行培養(yǎng)；再過7天后轉(zhuǎn)入0. 5MS+2NAA+1. 5IBA中，繼續(xù)培養(yǎng)7天。再轉(zhuǎn)入0. 5MS+IBA培養(yǎng)基 中，進行生根培養(yǎng)，在3-4星期內(nèi)可得到新根。然后，將已生根的植株取出，移栽到珍珠巖 泥炭土(1 1)混合的基質(zhì)上，進行育苗。
權(quán)利要求
一種酒竹的組培快速繁殖方法，其特征在于方法的步驟如下1)外植體的選取與處理選1 2年生的幼枝，將包裹于竹節(jié)上的葉仔細(xì)剝除，優(yōu)選完整、剛要萌發(fā)新芽的竹節(jié)或頂芽作為培養(yǎng)材料，經(jīng)洗潔精和自來水洗凈，置流水下沖洗30分鐘后，置于75％酒精中處理30秒，然后再經(jīng)0.1％的升汞(Hgcl)消毒8分鐘后用無菌水沖洗5次，切去外植體變色部分，接種于培養(yǎng)基中。2)誘導(dǎo)培養(yǎng)選擇0.5MS+4BA+NAA為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基中。3)增殖培養(yǎng)誘導(dǎo)培養(yǎng)7天后，將生長于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于0.5MS+4BA+KT上進行繼代培養(yǎng)；7天后轉(zhuǎn)入0.5MS+2NAA+1.5IBA或0.5MS+2NAA+3IBA+3BA中繼續(xù)培養(yǎng)7天。4)生根培養(yǎng)選擇0.5MS+IBA為生根培養(yǎng)基；5)移栽將已生根的植株取出，移栽到珍珠巖∶泥炭土(1∶1)混合的基質(zhì)上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酒竹的組培快速繁殖方法，其特征在于所說的選擇 0. 5MS+4BA+NAA為誘導(dǎo)培養(yǎng)基，培養(yǎng)7天后有新芽發(fā)出。將所選取的芽接種于上述培養(yǎng)基 中誘導(dǎo)、增殖、生根步驟培養(yǎng)基的PH值均為5.8，培養(yǎng)溫度251 士 1，每天光照時間16時， 光照強度2300LX。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酒竹的組培快速繁殖方法，其特征在于所說的將生長于 誘導(dǎo)培養(yǎng)基上外植體轉(zhuǎn)接于0. 5MS+4BA+KT上進行培養(yǎng)7天后新芽數(shù)量增加為2_3個一周 后，轉(zhuǎn)入0. 5MS+2NAA+1. 5IBA或0. 5MS+2NAA+3IBA+3BA中繼續(xù)培養(yǎng)7天，新芽數(shù)目進一步增 加，可見外植體上有2-5個新芽出現(xiàn)，隨培養(yǎng)時間增加，芽的數(shù)目增加。將長有數(shù)個芽的外 植體在無菌條件下取出，按芽的個數(shù)用解剖刀分開，分置于上述連續(xù)培養(yǎng)基不同的培養(yǎng)容 器中培養(yǎng)，在10-20天內(nèi)，各培養(yǎng)容器內(nèi)的芽可再生出一至數(shù)個新芽，達到了增殖的目的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酒竹的組培快速繁殖方法，其特征在于所說的選擇 0. 5MS+IBA為生根培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)基中加入0. 5%的活性炭將連續(xù)培養(yǎng)中的植株轉(zhuǎn)入 生根培養(yǎng)基中。轉(zhuǎn)入后在黑暗條件下培養(yǎng)1-2天后轉(zhuǎn)到光下培養(yǎng)10-15天可誘導(dǎo)形成根。 30-45天可形成發(fā)達的根系。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種酒竹的組培快速繁殖方法，其特征在于所說的將已生根 的植株取出，移栽到珍珠巖泥炭土(1 1)混合的基質(zhì)上將已經(jīng)生根的植株置于自然環(huán) 境下4-5天后，打開瓶蓋，置放4-5天后取出，用清水洗凈根部的瓊脂。栽培于珍珠巖泥 炭土(1 1)混合的基質(zhì)中。一個月后可栽培于大田。
全文摘要
本發(fā)明提供一種酒竹的組織培養(yǎng)和快速繁殖技術(shù)。包括外植體的選取與處理，誘導(dǎo)培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，移栽等步驟。本發(fā)明以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，加入了輔助劑活性炭、6-芐基腺嘌呤、6-糠氨基嘌呤、萘乙酸，用于酒竹叢生芽誘導(dǎo)生長，壯苗生根兩個關(guān)鍵階段的組織培養(yǎng)。該技術(shù)解決了酒竹快速繁殖及其穩(wěn)定生根的重要技術(shù)環(huán)節(jié)，達到了繁殖系數(shù)高、技術(shù)穩(wěn)定、可實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的目的。
文檔編號A01H4/00GK101933457SQ20091009996
公開日2011年1月5日 申請日期2009年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月29日
發(fā)明者吳良如, 李偉成, 王樹東, 鐘哲科 申請人:國家林業(yè)局竹子研究開發(fā)中心