專利名稱：：喜臨門杜鵑品種的組織培養(yǎng)快繁方法及其專用培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及植物的組織培養(yǎng)及繁殖
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及"喜臨門"杜鵑品種的組織培養(yǎng)和快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
："喜臨門杜鵑"是該杜鵑品種的品種名稱。"喜臨門杜鵑"品種屬杜鵑花科，杜鵑花屬的常綠小灌木，由錦繡杜鵑(R.pulchrumsweet)芽變培育而成。該品種于2007年9月7日獲得中國植物新品種權(quán)，其品種權(quán)號20070023，品種名稱喜臨門杜鵑，品種權(quán)人云南綠大地生物科技股份有限公司，該公司也是本專利申請的申請人。"喜臨門杜鵑"品種因其具有外植體均帶有糙伏毛等生物特征，造成對其組織培養(yǎng)時(shí)進(jìn)瓶建立無菌體系難度大，無菌體系建立后，分生苗的誘導(dǎo)時(shí)間長、增殖率低；分化的幼苗細(xì)弱、生根難度較大、移栽過渡成活率低等問題，用現(xiàn)有技術(shù)的常用組織培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法對其進(jìn)行組培快繁不能解決上述技術(shù)難點(diǎn)，因而本申請人專門研究出適宜"喜臨門"杜鵑新品種的組織培養(yǎng)專用培養(yǎng)基及其組培快繁方法。"喜臨門杜鵑"高60-80cm，幼枝粗壯、分枝多，葉革質(zhì)、葉色深綠，傘形花序頂生，有花l-3朵，花冠紅色、闊漏斗狀、花瓣厚實(shí)、花期1-4月。"喜臨門"杜鵑生長勢強(qiáng)、抗性好，花色獨(dú)特、是市場前景十分看好的盆栽及露地園林花卉。由于其種源來自于芽變枝條，進(jìn)行扦插缺乏采穗材料，且扦插繁殖受季節(jié)及生根成活率的影響，擴(kuò)繁速度緩慢，難以進(jìn)行規(guī)?；a(chǎn)和滿足大面積推廣應(yīng)用的需求；靠種子繁殖的后代分離嚴(yán)重，不能再現(xiàn)"喜臨門"杜鵑的品種特性，因此，對這類優(yōu)良品種研究出組培專用培養(yǎng)基及其組培快繁方法具目前關(guān)于"喜臨門杜鵑"品種的組培研究還未見報(bào)道。針對該品種特性，通過有針對性的反復(fù)試驗(yàn)和研究解決了上述技術(shù)瓶頸，現(xiàn)針對其中的技術(shù)訣竅，申請本發(fā)明專利。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服了現(xiàn)有技術(shù)中對"喜臨門杜鵑"品種在組織培養(yǎng)快繁中進(jìn)瓶建立無菌體系難度大，無菌體系建立后，分生苗的誘導(dǎo)時(shí)間長、增殖率低；分化的幼苗細(xì)弱、生根難度較大、移栽過渡成活率低等技術(shù)問題，提供一種既能解決上述技術(shù)難點(diǎn)，又能降低生產(chǎn)成本，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；瘍?yōu)質(zhì)組培苗生產(chǎn)的適宜"喜臨門杜鵑"品種的組織培養(yǎng)快繁方法及其專用培養(yǎng)基。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明有以下技術(shù)方案一、喜臨門杜鵑品種的專用培養(yǎng)基，由不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，不定芽的增殖培養(yǎng)基，叢生苗的繼代及壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基組成-其中，所述的不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/4MS，ZT3mg/L，NM0.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6;所述的不定芽的增殖培養(yǎng)基的配方為1/4MS，ZTlmg/L，NAA0.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6;所述的叢生苗的繼代及壯苗培養(yǎng)基的配方為1/4MS，ZT0.5mg/L，NAAO.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6;所述的生根培養(yǎng)基的配方為1/4MS，IBA2mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6。一、喜臨門杜鵑品種的組織培養(yǎng)快繁方法，按以下步驟進(jìn)行(1)外植體的選擇用透明塑料袋對剛開過花的喜臨門杜鵑品種的枝條進(jìn)行套袋，采取3-5cm新抽嫩枝作為外植體；(2)外植體的滅菌將上述外植體先用75%的酒精處理10-30min，再0.1%HgCl2浸泡莖尖5min，浸泡莖段8-10min，再用無菌水沖洗外植體4-5次；(3)不定芽的誘導(dǎo)在無菌工作條件下，將消毒滅菌后的莖尖段和莖段，接種于上述專用培養(yǎng)基中的不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1500—20001x，培養(yǎng)溫度24士2。C;(4)不定芽的增殖將誘導(dǎo)出的不定芽接種于上述專用培養(yǎng)基中的不定芽的增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同上；(5)叢生苗的繼代及壯苗，將增殖獲得的叢生苗接種于上述專用培養(yǎng)基中的叢生苗的繼代及壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代繁殖，培養(yǎng)條件同上；(6)壯苗生根及繼續(xù)擴(kuò)繁將上述繼代增殖中高為2.5cm以上的健壯苗切成單株接種于上述專用培養(yǎng)基中的生根培養(yǎng)基中，將其余組織切割成2-4團(tuán)接種于上述專用培養(yǎng)基中的不定芽的增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同上；(7)移栽過渡將步驟(6)中根長l-2cm的組培瓶苗移到溫室中，常溫、自然光下逐漸開瓶煉苗2-3天后出瓶移栽；取出植株健壯、根系發(fā)達(dá)的小苗，洗去沾在根部的培養(yǎng)基，栽植到下述過渡育苗基質(zhì)中，過渡育苗基質(zhì)為泥炭土珍珠巖=2:1，用0.1%的多菌靈溶液作為定根水澆透，覆蓋塑料薄膜，并蓋上遮陰網(wǎng)。一周內(nèi)保持濕度在90%以上和20-25t:的溫度；1周后逐漸打開薄膜，增加光照和通風(fēng)透氣；2周后，進(jìn)行常規(guī)管理。上述喜臨門杜鵑品種的組織培養(yǎng)快繁方法步驟(1)外植體的選擇中所述的用透明塑料袋對剛開過花的喜臨門杜鵑品種的枝條進(jìn)行套袋是在1月進(jìn)行套袋，在同一年的3月剪取3-5cm新抽嫩枝作為外植體。上述喜臨門杜鵑品種的組織培養(yǎng)快繁方法所述的步驟(2)外植體的滅菌是將上述外植體先用75%的酒精處理30s,再用0.1。/。HgCl2浸泡莖尖5min，浸泡莖段8min，再用無菌水沖洗外植體4-5次。在上述喜臨門杜鵑品種的組織培養(yǎng)快繁方法中將步驟(4)不定芽的增殖中獲得的叢生幼苗切割為3-5苗的小叢苗團(tuán)，再接種于上述不定芽的增殖培養(yǎng)基中繼代繁殖，每瓶放置9-ll團(tuán)；完成培養(yǎng)周期后，每團(tuán)苗可增長3-5倍，且叢苗的高度也會(huì)增長；如此通過反復(fù)繼代繁殖，可獲得大量的叢生苗。在研究喜臨門杜鵑品種的組織培養(yǎng)專用培養(yǎng)基的配方以及組培與快繁方法的過程中，主要解決了下列技術(shù)難題(1)通過優(yōu)選開花多、花朵大、花色艷的喜臨門杜鵑品種枝條，預(yù)先用透明塑料袋對其套袋，保持進(jìn)瓶外植體的潔凈，解決了由于該品種枝條帶有糙伏毛，建立無菌體系難度大的問題，且優(yōu)中選優(yōu)，起到復(fù)壯保持本品種優(yōu)良性狀的效果。本發(fā)明不用錫箔紙或普通紙?zhí)状?，是因?yàn)橛缅a箔紙或普通紙?zhí)状自斐芍l黃化，而用透明塑料袋套袋的光透性好，既有利于枝條健壯又保持了進(jìn)瓶外植體的潔凈。(2)通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)恰當(dāng)?shù)腪T濃度(3mg/L)，可提高外植體分化叢生苗的誘導(dǎo)率；而低濃度的ZT(0.5-lmg/L)，有利于叢生苗的增殖和壯苗，且無變異苗產(chǎn)生。(3)ZT的售價(jià)十分昂貴，尋找出最適宜的ZT濃度后，不僅顯著提高了分化苗的增長率，并降低了生產(chǎn)成本。(4)篩選出最適宜分生壯苗生根的激素及其濃度是2mg/LIBA。(5)本發(fā)明將基本培養(yǎng)基MS改良為1/4MS，調(diào)整ra為5.4-5.6，特別適宜"喜臨門杜鵑"品種的良好的生長效果從而獲得優(yōu)質(zhì)組培苗，并且進(jìn)一步降低了生產(chǎn)成本。本發(fā)明的有益效果是-(1)提供的適宜"喜臨門杜鵑"品種的離體組培快繁成套方法及其專用培養(yǎng)基，解決了"喜臨門杜鵑"品種進(jìn)瓶建立無菌體系難度大，無菌體系建立后，分生苗的誘導(dǎo)時(shí)間長、增殖率低；分化的幼苗細(xì)弱、生根難度較大、移栽過渡成活率低等技術(shù)問題，最終使該品種的組培快繁的種苗移栽成活率達(dá)90%以上。(2)針對"喜臨門杜鵑"品種的嫩枝分化特點(diǎn)，通過用透明塑料袋套袋獲得相對潔凈的外植體，結(jié)合恰當(dāng)?shù)臏缇夹g(shù)，使進(jìn)瓶成功率達(dá)到65%以上，有效進(jìn)種率可達(dá)到85%-90%，在短期內(nèi)獲得了大量的無菌材料。(3)通過恰當(dāng)?shù)腪T濃度(3mg/L)加速了誘導(dǎo)外植體分化，其芽誘導(dǎo)率達(dá)到100%的好效果，較文獻(xiàn)資料中普遍報(bào)道的效果50-80%有明顯的提高。通過恰當(dāng)?shù)腪T濃度(0.5-1mg/L)還提高了叢生苗的增殖率及壯苗率，以及篩選最佳生根劑等綜合技術(shù)的應(yīng)用，使"喜臨門杜鵑"品種組培苗的繁殖量每年達(dá)到了10萬株以上。實(shí)現(xiàn)了該品種種苗的規(guī)?；a(chǎn)，為扦插苗的生產(chǎn)提供了大量種源。(4)采用1/4MS培養(yǎng)基及低濃度的ZT含量，有效地降低了組培苗的生產(chǎn)成本。具體實(shí)施例方式下面給出采用本發(fā)明專用培養(yǎng)基及其組織培養(yǎng)快繁方法的實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述。下述實(shí)施例中的方法如無特別說明，常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的各種試劑均為常規(guī)試劑且均可在商店購買到，有些也可按常規(guī)方法自行配置。實(shí)施例1、喜臨門杜鵑品種的組織培養(yǎng)快繁方法及其專用培養(yǎng)基試驗(yàn)試驗(yàn)材料取自云南綠大地生物科技股份有限公司溫室內(nèi)的"喜臨門"杜鵑優(yōu)選單株，所用試劑MS培養(yǎng)基由本公司自行配制；ZT(即玉米素)和NAA(萘乙酸)從北京康貝斯科技有限公司購買。喜臨門杜鵑品種的專用培養(yǎng)基由不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，不定芽的增殖培養(yǎng)基，叢生苗的繼代及壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基組成其中，所述的不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/4MS，ZT3mg/L，NAA0.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6;所述的不定芽的增殖培養(yǎng)基的配方為1/4MS，ZTlmg/L，NAA0.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6;所述的叢生苗的繼代及壯苗培養(yǎng)基的配方為1/4MS，ZT0.5mg/L，NAAO.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6;所述的生根培養(yǎng)基的配方為1/4MS，IBA2mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6。采用上述"喜臨門杜鵑"品種的專用培養(yǎng)基，對"喜臨門杜鵑"品種進(jìn)行組織培養(yǎng)快繁，按以下步驟進(jìn)行(1)外植體的選擇在1月份將剛開過花的喜臨門杜鵑枝條用透明塑料袋套袋，在同一年的3月份當(dāng)枝條上發(fā)出的嫩枝長度達(dá)3-5cm時(shí)，剪取這些新抽嫩枝放入玻璃瓶內(nèi)帶回作為外植體。(2)外植體的滅菌將上述外植體先用75%的酒精處理30秒，使酒精的殺菌作用迅速滲透；再用0.1%升汞浸泡莖尖5min，用0.1%升汞浸泡莖段8min，需不停地?fù)u動(dòng)瓶子，使外植體充分與殺菌液接觸；再用無菌水沖洗4-5次，這樣的處理方法，得到了較多數(shù)量的無菌外植體和成活個(gè)體。(3)不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)將經(jīng)過消毒滅菌的外植體，在無菌工作環(huán)境中，接種于上述專用培養(yǎng)基中的不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件為每天光照時(shí)間12小時(shí)，光照強(qiáng)度1500-20001x，培養(yǎng)溫度24+2°C。外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基兩周后，莖尖頂芽開始生長，側(cè)芽膨大萌動(dòng)，繼續(xù)培養(yǎng)至45天，莖尖誘導(dǎo)出2-3芽(頂部側(cè)芽)，莖段的節(jié)上長出1-2個(gè)側(cè)芽。'(4)不定芽的增殖培養(yǎng):切下上述不定芽，接種于上述專用培養(yǎng)基中的不定芽的增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同上。培養(yǎng)45-60天后，不定芽的基部長出愈傷組織，從愈傷組織分化出許多叢生幼苗；進(jìn)一步將上述獲得的叢生幼苗切割為3-5苗的小叢苗團(tuán)，在上述上述專用培養(yǎng)基中的不定芽的增殖培養(yǎng)基中繼代繁殖，每瓶放置10團(tuán)左右。完成培養(yǎng)周期后，每團(tuán)苗可增長3-5倍，且叢苗的高度也會(huì)增長。如此反復(fù)繼代繁殖，可獲得大量的叢生苗。(5)叢生苗的繼代及壯苗再將叢生苗切割為3-5苗的叢苗團(tuán)，接種于上述專用培養(yǎng)基中的叢生苗的繼代及壯苗培養(yǎng)基中，每瓶放置10團(tuán)左右，培養(yǎng)條件同上。培養(yǎng)45-60天后，叢苗團(tuán)苗的分化量減少為2-3倍，但叢苗的莖增粗、高度增長，多數(shù)達(dá)到2cm以上。(6)壯苗生根及繼續(xù)擴(kuò)繁將上述高為2.5cm以上的健壯苗切成單株，接種于上述專用培養(yǎng)基中的生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同上；生根苗培養(yǎng)30天左右，長出長短不等的白色根系，培養(yǎng)45天后，根有5-7條，根長達(dá)到1.5-3cm，是出瓶過渡移栽的最佳時(shí)間；將其余愈傷組織團(tuán)上的小苗及具有活力的植株下段材料分切為2-4團(tuán)，接種于上述專用培養(yǎng)基中的不定芽的增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件同上；(7)移栽過渡培養(yǎng)將步驟(6)中根長1-2cm的組培生根瓶苗移到溫室內(nèi)，常溫、自然光下煉苗2-3天后開瓶出苗移栽。取出植株健壯、根系發(fā)達(dá)的組培苗、洗除沾在根部的培養(yǎng)基，然后移栽到育苗基質(zhì)中，育苗基質(zhì)為泥炭土:珍珠巖=2:1，用0.1%的多菌靈溶液澆透，用塑料薄膜覆蓋，并蓋上遮陰網(wǎng)；一周內(nèi)保持較高濕度在90%以上，保持適宜溫度在2(TC-25。C，l周后逐漸打開薄膜，增加光照及通風(fēng)透氣；2周后，便可進(jìn)行常規(guī)管理，其組培快繁的種苗移栽成活率達(dá)90%以上。本試驗(yàn)在只有3臺(tái)無菌操作臺(tái)的情況下，達(dá)到了每年生產(chǎn)10萬株以上組培苗。實(shí)現(xiàn)了該品種種苗的規(guī)模化生產(chǎn)，為扦插苗的生產(chǎn)提供了大量種源。實(shí)施例2外植體滅菌方法的實(shí)驗(yàn)由于"喜臨門杜鵑"品種的生物特性決定進(jìn)瓶建立無菌體系難度大，因此本研究進(jìn)行了對"喜臨門杜鵑"品種外植體滅菌方法的實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)使用兩種消毒藥液及不同的殺菌時(shí)間，對"喜臨門杜鵑"品種的套袋萌發(fā)枝條的莖尖和莖段進(jìn)行消毒處理，尋找最佳的消毒處理方式；采用套袋和未套袋新萌發(fā)的幼嫩枝條、進(jìn)行兩種消毒劑的處理時(shí)間比較實(shí)驗(yàn)。從表l看出(1)外植體材料用75%的酒精處理10-30min，再用0.1%HgCl2浸泡尖5min、浸泡莖段8-10min，其有效進(jìn)種率達(dá)到75%-90%;(2)外植體材料的最佳消毒處理方式為75%的酒精處理30秒，再用0.1%HgCl2浸泡尖5min、浸泡莖段8min，其有效進(jìn)種率達(dá)到85%-90%;(3)采用透明塑料袋套袋與未套袋比較，采用透明塑料袋不僅讓新抽嫩枝在潔凈的環(huán)境中生長，而且透光性好新抽嫩枝也生長健壯，以此作為外植體進(jìn)瓶材料，可有效提高進(jìn)瓶成功率達(dá)到65%以上，是未套袋材料的2.6倍以上。而用錫箔紙或普通紙?zhí)状鼘?shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示新抽嫩枝黃化而不能使用，因而放棄。表l不同外植體及消毒時(shí)間的比較實(shí)驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例3分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選實(shí)驗(yàn)該實(shí)驗(yàn)通過不同基本培養(yǎng)基和不同濃度的激素配比，尋找提高"喜臨門杜鵑"外植體成活率、分化率、叢生苗誘導(dǎo)率及壯苗的培養(yǎng)基配方；選擇NAA、IBA兩種生長素，進(jìn)行混配及單獨(dú)使用，篩選最佳生根培養(yǎng)基配方。該實(shí)驗(yàn)選用培養(yǎng)基基本元素簡單、濃度相對較低的Read培養(yǎng)基作為對照，降低MS培養(yǎng)基無機(jī)元素為l/4濃度，作為篩選"喜臨門杜鵑"品種組織培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基。采用ZT3mg/1、NAA0.5mg/1的激素搭配及濃度限定，獲得了使"喜臨門"杜鵑品種的組培芽誘導(dǎo)率為100%的好效果，較文獻(xiàn)資料中普遍報(bào)道的效果50-80%有明顯的提高。從表2還可看出，相同激素配比情況下，基本培養(yǎng)基以1/4MS培養(yǎng)基誘導(dǎo)率高于Read培養(yǎng)基。因此，確定"喜臨門杜鶻"的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為1/4MS+ZT3mg/l+NAA0.5mg/l，起到了加速"喜臨門杜鵑"品種組培進(jìn)度的作用。表2喜臨門杜鵑組培的基本培養(yǎng)基及激素篩選<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例4繼代增殖培養(yǎng)基的篩選實(shí)驗(yàn)ZT(玉米素)價(jià)格昂貴，減少ZT用量，可有效降低生產(chǎn)成本。從表3看出，Bi和B2培養(yǎng)基的增殖效果差異不明顯，均為5倍左右。因此選用B2培養(yǎng)基作為分生苗的增殖和繼代培養(yǎng)基。表3不同濃度的ZT對喜臨門杜鵑芽增殖的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>當(dāng)ZT濃度降低至0.5mg/l時(shí)(B3)，可有效控制叢生苗的分化芽數(shù)，已分化叢苗的莖增粗，苗的節(jié)間伸長，苗的高度增加，因此選用B3培養(yǎng)基作為分生苗的壯苗培養(yǎng)基。同時(shí)根據(jù)增殖數(shù)量的需要，可將B2和B3培養(yǎng)基進(jìn)行交替輪換使用。實(shí)施例5生根培養(yǎng)基的篩選實(shí)驗(yàn)生根苗的適宜根數(shù)量及根的長度及質(zhì)量，是提高過渡移栽成活率的關(guān)鍵。從表4看出"喜臨門杜鵑"組培苗在不同的生根培養(yǎng)基上，生根情況各不相同，其中C4培養(yǎng)基的生根效率最好，生根率達(dá)到93.3%，多數(shù)具有4條根以上，平均根長為1.8cm，因此選用C4(l/4MS+IBA2mg/l)培養(yǎng)基作為喜臨門杜鵑組培苗的最適宜生根培養(yǎng)基。表4NAA和IBA對喜臨門杜驟組培苗的生根效果比較<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>從上述各實(shí)施例可得出，本發(fā)明的專用培養(yǎng)基及其組織培養(yǎng)快繁方法，對"喜臨門杜鵑"品種的組培快繁具有成套性、專用性、特效性和綜合效果，該發(fā)明使進(jìn)瓶成功率達(dá)到65%以上，有效進(jìn)種率可高達(dá)到85%-90%，在短期內(nèi)獲得了大量的無菌材料；芽誘導(dǎo)率達(dá)到100%的好效果，還提高了叢生苗的增殖率及壯苗率，生根劑效果好，組培快繁的種苗移栽成活率達(dá)90%以上，使"喜臨門杜鵑"品種組培苗的繁殖量每年達(dá)到了IO萬株以上。實(shí)現(xiàn)了該品種種苗的規(guī)?；a(chǎn)，為扦插苗的生產(chǎn)提供了大量種源。權(quán)利要求1、一種喜臨門杜鵑品種的專用培養(yǎng)基，由不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，不定芽的增殖培養(yǎng)基，叢生苗的繼代及壯苗培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基組成其中，所述的不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為1/4MS，ZT3mg/L，NAA0.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6；所述的不定芽的增殖培養(yǎng)基的配方為1/4MS，ZT1mg/L，NAA0.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6；所述的叢生苗的繼代及壯苗培養(yǎng)基的配方為1/4MS，ZT0.5mg/L，NAA0.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6；所述的生根培養(yǎng)基的配方為1/4MS，IBA2mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L，PH為5.4-5.6。2、一種喜臨門杜鵑品種的組織培養(yǎng)快繁方法，按以下步驟進(jìn)行(1)外植體的選擇用透明塑料袋對剛開過花的喜臨門杜鵑品種的枝條進(jìn)行套袋，采取3-5cm新抽嫩枝作為外植體；(2)外植體的滅菌將上述外植體先用75%的酒精處理10-30min，再0.1%HgCl2浸泡莖尖5min，浸泡莖段8-10min，再用無菌水沖洗外植體4-5次；(3)不定芽的誘導(dǎo)在無菌工作條件下，將消毒滅菌后的莖尖段和莖段，接種于權(quán)利要求1所述的不定芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中；(4)不定芽的增殖將誘導(dǎo)出的不定芽接種于權(quán)利要求l所述的不定芽的增殖培養(yǎng)基中；(5)叢生苗的繼代及壯苗，將增殖獲得的叢生苗接種于權(quán)利要求1所述的叢生苗的繼代及壯苗培養(yǎng)基中；(6)壯苗生根及繼續(xù)擴(kuò)繁將上述繼代增殖中高為2.5cm以上的健壯苗切成單株接種于權(quán)利要求1所述的生根培養(yǎng)基中，將其余組織切割成2-4團(tuán)接種于權(quán)利要求1所述的不定芽的增殖培養(yǎng)基中；(7)移栽過渡將步驟(6)中根長l-2cm的組培瓶苗移到溫室中，按常規(guī)方法出瓶移栽及移栽后的常規(guī)管理；上述步驟(3)—(6)的培養(yǎng)條件為光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度1500—20001x，培養(yǎng)溫度24±2°C。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于步驟(1)外植體的選擇中所述的用透明塑料袋對剛開過花的喜臨門杜鵑品種的枝條進(jìn)行套袋是在1月進(jìn)行套袋，在同一年的3月剪取3-5cm新抽嫩枝作為外植體。4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于所述的步驟(2)外植體的滅菌是將所述的外植體先用75%的酒精處理30s，再用0.l%HgCl2浸泡莖尖5min，浸泡莖段8min，再用無菌水沖洗外植體4-5次。5、根據(jù)權(quán)利要求2所述的組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于將步驟(4)不定芽的增殖中獲得的叢生幼苗切割為3-5苗的小叢苗團(tuán)，再接種于權(quán)利要求1所述的不定芽的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代繁殖，每瓶放置9-11團(tuán)。全文摘要本發(fā)明公開了喜臨門杜鵑品種的組織培養(yǎng)快繁方法及其專用培養(yǎng)基，屬植物的組織培養(yǎng)及繁殖
技術(shù)領(lǐng)域：
。其專用培養(yǎng)基有不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基1/4MS，ZT3mg/L，NAA0.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L；不定芽增殖培養(yǎng)基1/4MS，ZT1mg/L，NAA0.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L；叢生苗的繼代及壯苗培養(yǎng)基1/4MS，ZT0.5mg/L，NAA0.5mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L；生根培養(yǎng)基1/4MS，IBA2mg/L，糖30g/L和瓊脂5g/L；pH均為5.4-5.6。該方法組培快繁的種苗移栽成活率達(dá)90％以上，繁殖量可達(dá)10萬株/年以上。文檔編號A01H4/00GK101647392SQ20091009496公開日2010年2月17日申請日期2009年9月14日優(yōu)先權(quán)日2009年9月14日發(fā)明者付慧慧,何學(xué)葵,宣艷輝,朱光潔,童亞麗,磊胡,陳德生申請人:云南綠大地生物科技股份有限公司