專利名稱：一種美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方法
技術領域：
本發(fā)明涉及苗木的培養(yǎng)技術，尤其是一種楊樹的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明也適合于
湘林系列的其他品種繁殖。
背景技術：
湘林101是我國選育的美洲黑楊雜交新品種，干直，喜水，喜高溫，生長期長、生長 量大、木材重、為優(yōu)質速生南方型楊樹新品種，適合洞庭湖區(qū)栽植，廣泛用作行道樹、防護林 及速生用材樹種。其材質松軟、纖維長、白度高，可解決造紙生產(chǎn)原料供應問題。多年來一 直以扦插繁殖為主，繁殖率低，遠不能滿足社會的需求。由于存在年齡效應，扦插幾代后生 長容易出現(xiàn)退化，只有通過脫毒和雜交才能達到原來的效果。采用組織培養(yǎng)方法培養(yǎng)出的 再生植株，不僅解決了脫毒復壯的問題，而且能在短時間內(nèi)提供大量優(yōu)良苗木。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種對美洲黑楊湘林101離體培養(yǎng)且繁殖率高的組織培養(yǎng) 技術。 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是一種美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方 法，其特征在于包括如下步驟 ①外植體消毒處理取美洲黑楊湘林101葉片、葉柄、莖段，消毒后切除傷口，平放 在MS培養(yǎng)基上，每瓶接種一個外植體，置于培養(yǎng)架上進行光照培養(yǎng)； ②外植體選擇將葉片、葉柄、莖段接種到相同培養(yǎng)基上，分析各外植體的愈傷組
織誘導率、愈傷組織不定芽分化率，選擇最佳外植體； ③外植體誘導分化叢生芽把葉柄接入不同分化培養(yǎng)基中； 增殖培養(yǎng)把約2. 5cm的健壯組培苗接入增殖培養(yǎng)基中； ⑤生根培養(yǎng)把增殖培養(yǎng)所得2-3. 5cm以上的再生植株切下接入生根培養(yǎng)基中培 養(yǎng)； ⑥煉苗移栽。 所述培養(yǎng)的培養(yǎng)條件是培養(yǎng)基加入蔗糖3%和瓊脂0. 6%， pH6. O，培養(yǎng)室溫度為
25±2"，光照強度5000 60001x，光照時間16小時/天。 本發(fā)明對美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)，具有繁殖率高的優(yōu)點。
具體實施例方式
l材料與方法 1. l試驗材料 美洲黑楊湘林IOI 1.2試驗方法 1.2. l外植體消毒處理
3
水培新萌枝條，剪取葉片、葉柄、莖段，流水沖洗30分鐘，無菌水反復沖洗10分鐘， 濾紙吸干水分待用。0. 1%升汞分別消毒不同時間，無菌水沖洗5次，消毒后切除傷口，平放 在培養(yǎng)基上，每瓶接種一個外植體，置于培養(yǎng)架上光照培養(yǎng)。
1.2. 2外植體選擇 將葉片、葉柄、莖段按照最佳消毒方式處理后，接種到培養(yǎng)基上，30天后統(tǒng)計 各外植體的愈傷組織誘導率、愈傷組織不定芽分化率，選擇最佳外植體。所用培養(yǎng)基為 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L。
1. 2. 3芽誘導分化叢生芽培養(yǎng) 選取最佳外植體，接入芽誘導分化培養(yǎng)基中。芽誘導分化培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)
基，添加不同濃度的生長調節(jié)劑。 1. 2. 4增殖培養(yǎng) 切取2. 5cm左右的健壯苗，接入到添加不同生長調節(jié)劑的增殖培養(yǎng)基中進行增殖培養(yǎng)。 1. 2. 5生根培養(yǎng) 切取2-3. 5cm的健壯苗，接入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)以1/2MS為基本培養(yǎng)基，添 加不同濃度的生長調節(jié)劑，以1/2MS基本培養(yǎng)基為對照，培養(yǎng)15天后統(tǒng)計生根情況。
1. 2. 6培養(yǎng)條件 培養(yǎng)條件為培養(yǎng)基中加入蔗糖3%、瓊脂0. 6%，pH6. O，培養(yǎng)室溫度為25士2。C，光 照5000 60001x，光照時間16小時/天。
1. 2. 7煉苗移栽 組培苗根長約2cm， 3 5條根后，移到大棚閉瓶煉苗兩周，再移栽到各種混合基質 中。 2結果與分析
2. 1外植體消毒處理 滅菌材料接種到培養(yǎng)基上，一個月后統(tǒng)計所得，葉片0. 1%升汞最佳消毒時間4分 鐘，葉柄5-6分鐘，莖段10分鐘。
2. 2外植體的選擇 消毒處理后，各外植體接種到培養(yǎng)基上，40天后大部分葉片和莖段只分化出少量 愈傷組織和叢生芽，經(jīng)統(tǒng)計分析葉柄分化效果最好，兩頭傷口處75%以上能分化出大量叢生芽。 2. 3外植體誘導分化叢生芽 把消毒后的葉柄接種到誘導分化培養(yǎng)基上，12天后葉柄兩頭開始膨大，切口 處形成綠色的愈傷組織，30左右愈傷組織上開始分化出大量的不定芽，經(jīng)統(tǒng)計分析 MS+6-BA0. 6 lmg/L+TDZO. 002 0. 005mg/L+NAA0. lmg/L分化效果最好，誘導率達91 %以 上。 2. 4增殖培養(yǎng) 把健壯苗切下，轉接到增殖培養(yǎng)基上，大部分基部傷口處分化出小量愈傷組織及 叢生芽團，或是部分腋芽萌動，經(jīng)20天培養(yǎng)，部分腋芽可長約2cm，基部新分化芽長1. 5 2. 5cm。增殖系數(shù)為4. 9 6. 1 。經(jīng)統(tǒng)計分析，增殖最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0. 2-0. 3mg/L+NAAO. lmg/L。 2. 5生根培養(yǎng) 當芽長至2-3. 5cm高時，接入不同濃度的NAA生根培養(yǎng)基中，以不加任何生長調節(jié) 劑的1/2MS培養(yǎng)基作對照，10天左右，幼苗基部長出白色絨毛狀細根，且粗壯，經(jīng)統(tǒng)計分析， 1/2MS+NAA0. 02 0. 05mg/L適合湘林101生根，生根率達98% 。
2. 6煉苗移栽 根長2cm，3 5條根，移栽到樹皮珍珠巖園土= i:i: i，遮陰保濕，培養(yǎng)一
個月左右，成活率90%以上。 下面通過具體實驗對本發(fā)明作進一步說明
實驗1 :規(guī)?；囼?2009年2月，以美洲黑楊湘林101葉柄，采用組織培養(yǎng)方法，培育出組培苗3000 株，外植體誘導率達91.5%，增增殖系數(shù)達5. 9，生根率100 % 。移栽成活率95.6%。
實驗2 :產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)1 2009年3-5月，培育出美洲黑楊湘林101組培苗20000株，增增殖系數(shù)達5. 6，生 根率96. 5%。移栽成活率98. 3%。
實驗3 :產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)2 2009年6-9月，以美洲黑楊湘林75葉柄，采用湘林101的組織培養(yǎng)方法，培育出 組培苗5000株，外植體誘導率達90. 5 % ，增增殖系數(shù)達5. 7，生根率97. 1 % 。移栽成活率
94. 5%。各階段的培養(yǎng)情況與美洲黑楊湘101相當。
實驗4:產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)3 2009年6-9月，用美洲黑楊湘林77葉柄，采用湘林101的組織培養(yǎng)方法，培育出 組培苗5000株，外植體誘導率達91.2%，增增殖系數(shù)達5.3。生根率94.2%。移栽成活率
95. 8%。各階段的培養(yǎng)情況與美洲黑楊湘101相當。
實驗5 :產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)4 2009年6-9月，用美洲黑楊湘林90葉柄，采用湘林101的組織培養(yǎng)方法，培育出 組培苗5000株，外植體誘導率達92. 3%，增增殖系數(shù)達6. 0，生根率961. 3% 。移栽成活率
96. 8%。各階段的培養(yǎng)情況與美洲黑楊湘101相當。
權利要求
一種美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方法，其特征在于包括如下步驟①外植體消毒處理取湘林101的葉片、葉柄、莖段，消毒后切除傷口，平放在MS培養(yǎng)基上，每瓶接種一個外植體，置于培養(yǎng)架上光照培養(yǎng)；②外植體選擇將葉片、葉柄、莖段按照最佳消毒方式處理后，接種到相同的培養(yǎng)基上培養(yǎng)；③外植體誘導分化成叢生芽把葉柄接入不同的分化培養(yǎng)基中；④增殖培養(yǎng)把約2.5cm的健壯苗接于增殖培養(yǎng)基中；⑤生根培養(yǎng)把增殖培養(yǎng)所得2-3.5cm以上的健壯苗切下接入生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)；⑥煉苗移栽。
2. 根據(jù)權利要求1所述的美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述的培養(yǎng)條件是培養(yǎng)基加入蔗糖3%和瓊脂0. 6%，pH6. O，培養(yǎng)室溫度為25士2t:，光照強度5000 60001x，光照時間16小時/天。
3. 根據(jù)權利要求1所述的美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方法，其特征在于對外植體消 毒處理為流水沖洗30分鐘，無菌水反復沖洗10分鐘，
4. 根據(jù)權利要求1所述的美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方法，其特征在于葉片0. 1%升 汞最佳消毒時間4分鐘，葉柄5-6分鐘，莖段10分鐘。
5. 根據(jù)權利要求1所述的美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述誘導培 養(yǎng)基是MS+6-BA0. 6 lmg/L+TDZO. 002 0. 005mg/L+NAA0. lmg/L。
6. 根據(jù)權利要求書1所述的美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述增殖 培養(yǎng)基是MS+6-BA0. 2-0. 3mg/L+NAA0. lmg/L。
7. 根據(jù)權利要求書1所述的美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述生根 培養(yǎng)基是1/2MS+NAA0. 02 0. 05mg/L。
8. 根據(jù)權利要求書1所述的美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述移栽的基質成分為樹皮珍珠巖園土= i : i : i，遮陰保濕培養(yǎng)一個月，逐漸揭膜。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種美洲黑楊湘林101組織培養(yǎng)方法，其特征在于包括如下步驟①外植體消毒處理；②外植體選擇；③外植體誘導分化叢生芽；④增殖培養(yǎng)；⑤生根培養(yǎng)；⑥煉苗移栽。本發(fā)明對美洲黑楊湘林101離體培養(yǎng)，具有繁殖率高的優(yōu)點。
文檔編號A01G31/00GK101695279SQ20091004434
公開日2010年4月21日 申請日期2009年9月11日 優(yōu)先權日2009年9月11日
發(fā)明者劉景 , 唐作鈞, 梁麗容, 盛金明, 肖興翠 申請人:湖南茂源林業(yè)有限責任公司;