一種氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法，其特征在于包括如下步驟：(1)取待測(cè)品置于容量瓶中，加入乙腈定容到10-25ml，渦旋混合1-5min,超聲提取10-15min，過(guò)0.22μm濾膜，進(jìn)樣對(duì)樣品中甲磺酸甲酯進(jìn)行測(cè)定；(2)檢測(cè)條件：采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀GC-MS/MS作為檢測(cè)儀器對(duì)甲磺酸甲酯進(jìn)行測(cè)定。在步驟(1)中，取待測(cè)品為0.05-0.50g，精確到0.1mg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容到10-25ml，渦旋混合1-5min，超聲提取10-15min。本發(fā)明通過(guò)使用GC-MS/MS能夠簡(jiǎn)單、快捷高效的對(duì)藥品原料、化學(xué)試劑以及食品MMS進(jìn)行定性和定量的檢測(cè)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及甲磺酸甲酯MMS的檢測(cè)方法，具體涉及一種氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè) 甲磺酸甲酯的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 進(jìn)入21世紀(jì)以來(lái)，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，人類(lèi)社會(huì)的生活也變 得越來(lái)越便利；與此同時(shí)人們?cè)谏钪杏龅降奶魬?zhàn)和存在的隱患也越來(lái)越多?？焖俚纳?節(jié)奏使得人們更容易受到病魔的侵害；藥物治療是一種快速方便的治療方式，也是目前最 為常見(jiàn)的治療方式。因此，醫(yī)藥行業(yè)是整個(gè)社會(huì)最為重要領(lǐng)域之一；但受限于技術(shù)能力和原 料質(zhì)量等方面的原因，藥物試劑中很可能會(huì)含有有害物質(zhì)，這也是醫(yī)藥行業(yè)面臨的挑戰(zhàn)。因 而藥物試劑的檢測(cè)分析，對(duì)于藥物的安全性和商業(yè)價(jià)值具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。
[0003] 儀器檢測(cè)作為現(xiàn)代化學(xué)、藥物以及食品檢測(cè)分析主要手段，能夠通過(guò)測(cè)量物質(zhì)的 一些物理和物理化學(xué)性質(zhì)、參數(shù)及其變化來(lái)確定物質(zhì)的組成、成分含量及化學(xué)結(jié)構(gòu)。儀器檢 測(cè)分析具有試樣用量少，分析速度快，易于操作；檢測(cè)靈敏度高，重現(xiàn)性好，誤差??；復(fù)雜基 質(zhì)易于分離等優(yōu)點(diǎn)。隨著儀器分析學(xué)科和科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，檢測(cè)分析所使用儀器的種類(lèi)也 越來(lái)越多，其中使用最為廣泛質(zhì)譜檢測(cè)器。質(zhì)譜是使試樣中各組分在離子源中發(fā)生電離，生 成不同荷質(zhì)比的帶正電荷的離子，經(jīng)加速電場(chǎng)的作用，形成離子束，進(jìn)入質(zhì)量分析器。質(zhì)譜 一般與色譜聯(lián)用，即色譜-質(zhì)譜聯(lián)用；根據(jù)色譜流動(dòng)相的不同，色譜_質(zhì)譜聯(lián)用又可以分為 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用LC-MS和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用GC-MS ;其中氣相色譜具有分離選擇性 好、柱效高、速度快等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明中所使用的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀GC-MS/MS，是使 用串聯(lián)質(zhì)譜儀作為MMS的檢測(cè)器，它是由三級(jí)質(zhì)譜串聯(lián)而成，能夠有效的對(duì)目標(biāo)離子進(jìn)行 分離/修飾，從而進(jìn)一步的提高信噪比，降低檢出限。由于GC-MS/MS的分離選擇性能更好， 現(xiàn)已廣泛的應(yīng)用于藥物、化學(xué)、化工以及食品科學(xué)等領(lǐng)域。
[0004] 甲磺酸甲酯麗S是一種基因毒害物質(zhì)，引起DNA損傷的烷化劑。它能使嘌呤堿基 環(huán)上的氮原子和氧原子發(fā)生甲基化，導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂點(diǎn)突變，有潛在損傷端粒DNA結(jié)構(gòu)和 致細(xì)胞凋亡作用。劉永萍等以卵巢癌細(xì)胞CA0V3為靶細(xì)胞，用MMS對(duì)其進(jìn)行毒性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果 表明MMS對(duì)腫瘤細(xì)胞有凋亡誘導(dǎo)作用；鄭履康等以小鼠精細(xì)胞為靶細(xì)胞，用MMS分別在小鼠 體內(nèi)和體外進(jìn)行基因毒性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明麗S體內(nèi)及體外處理小鼠精子后，精子染色體畸 變率明顯升高，當(dāng)MMS體內(nèi)處理濃度達(dá)到100mg/kg時(shí)，精子染色體畸變率高達(dá)94. 4 %，精子 染色體雖然受到嚴(yán)重?fù)p傷，有的達(dá)粉碎程度。通過(guò)以上兩個(gè)案例的分析我們可以知道，甲磺 酸甲酯對(duì)生物體內(nèi)基因具有很大的毒害性。
[0005] 目前對(duì)磺酸酯類(lèi)基因毒性雜質(zhì)的檢測(cè)方法主要有液相色譜-質(zhì)譜法、液相色 譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、衍生化頂空氣相色譜法、衍生化頂空氣相色譜-質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜 法等，其中液相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法因?yàn)槠漭d樣量大，靈敏度高，專(zhuān)屬性 強(qiáng)，重現(xiàn)性好被廣泛用于難揮發(fā)磺酸酯類(lèi)雜質(zhì)的檢測(cè)，如苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯等。但是 其在應(yīng)用于小分子量易揮發(fā)的磺酸酯類(lèi)雜質(zhì)時(shí)存在基質(zhì)干擾大，檢測(cè)線(xiàn)高等缺陷。衍生化 頂空氣相色譜法和衍生化頂空氣相色譜-質(zhì)譜法是目前使用最廣泛的磺酸酯類(lèi)雜質(zhì)的檢 測(cè)方法。該方法準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，可有效避免樣品中難揮發(fā)物質(zhì)對(duì)檢測(cè)的影響，但是前 處理較復(fù)雜，檢出限較高。氣相色譜法和氣相色譜-質(zhì)譜法，因?yàn)椴僮骱?jiǎn)單，重現(xiàn)性好，但是 該方法，基質(zhì)干擾較強(qiáng)，檢測(cè)線(xiàn)高，很難達(dá)到檢測(cè)要求。
[0006] 目前，缺乏一種檢測(cè)靈敏度高，方法簡(jiǎn)單易于操作的一種氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢 測(cè)甲磺酸甲酯的方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)靈敏度高，方法簡(jiǎn)單易于操作的一種氣相色 譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法。
[0008] 本發(fā)明的技術(shù)方案為：本發(fā)明提供了一種氣相色譜_串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的 方法，包括如下步驟：
[0009] (1)加入乙腈定容到10_25ml，渦旋混合l-5min，超聲提取10-15min，過(guò)0? 22 ii m 濾膜，進(jìn)樣對(duì)樣品中甲磺酸甲酯進(jìn)行測(cè)定；
[0010] (2)檢測(cè)條件：采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀GC-MS/MS作為檢測(cè)儀器對(duì)甲磺酸 甲酯進(jìn)行測(cè)定。
[0011] 進(jìn)一步地，在步驟（1)中，取待測(cè)品為0.05-0. 50g，精確到0. lmg，置于空容量瓶 中，加入乙腈定容到10-25ml，渦旋混合l-5min，超聲提取10-15min。
[0012] 進(jìn)一步地，在步驟（2)中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的數(shù)據(jù)采集方式為多反應(yīng)監(jiān) 測(cè)MRM，選擇質(zhì)荷比M/Z = 79 - 65作為定量離子對(duì)；M/Z = 80 - 65、M/Z = 79 - 48、M/Z =80 - 48、M/Z = 79 - 48作為定性離子對(duì)；溶劑切除時(shí)間3. 5min。
[0013] 更進(jìn)一步地，在步驟（2)中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的色譜柱是以（35% -苯 基）_甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管色譜柱：DB-35MS柱長(zhǎng)30m，柱徑0. 25mm，膜厚 0. 25 u m〇
[0014] 進(jìn)一步地，在步驟（2)中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的進(jìn)樣口溫度為150-300°c， 進(jìn)樣方式為不分流，載氣為氦氣，柱流速為I. 50ml/min。
[0015] 進(jìn)一步地，在步驟（2)中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的升溫程序?yàn)槌跏紲囟?85°C，維持時(shí)間為3. 5min，以20°C /min的速率升溫至200°C。
[0016] 更進(jìn)一步地，在步驟（2)中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的質(zhì)譜條件為EI離子源， 電壓為70eV，離子源溫度為230°C ;傳輸線(xiàn)溫度為220°C。
[0017] 有益效果：本發(fā)明的檢測(cè)方法具有靈敏度高、簡(jiǎn)單、快速等優(yōu)點(diǎn)。在本發(fā)明中通過(guò) 使用GC-MS/MS能夠簡(jiǎn)單、快捷、高效的對(duì)藥品原料、化學(xué)試劑以及食品麗S進(jìn)行定性和定 量的檢測(cè)；能夠有效的提高甲磺酸甲酯的檢測(cè)靈敏度且檢測(cè)方法簡(jiǎn)單易于操作，有效的避 免了基質(zhì)干擾，使麗S分離效果好，降低了麗S的檢測(cè)限，最低檢出限為6ng/ml ;定量限為 12ng/ml在12ng/ml-300ng/ml表現(xiàn)出良好的線(xiàn)性，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)為0? 999。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0018] 圖1是本發(fā)明的甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流色譜圖；
[0019] 圖2是本發(fā)明的甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的定量離子色譜圖；
[0020] 圖3是本發(fā)明的甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的定性離子色譜圖；
[0021] 圖4是本發(fā)明的甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖；
[0022] 圖5是本發(fā)明的空白溶劑的總離子流色譜圖；
[0023] 圖6是本發(fā)明的空白溶劑的定量離子色譜圖；
[0024] 圖7是本發(fā)明的空白溶劑的定性離子色譜圖；
[0025] 圖8是本發(fā)明的空白溶劑的質(zhì)譜圖；
[0026] 圖9是本發(fā)明的空白樣品提取液的總離子流色譜圖；
[0027] 圖10是本發(fā)明的空白樣品提取液的定量離子色譜圖；
[0028] 圖11是本發(fā)明的空白樣品提取液的定性離子色譜圖；
[0029] 圖12是本發(fā)明的空白樣品提取液的質(zhì)譜圖；
[0030] 圖13是本發(fā)明的樣品加標(biāo)的總離子流色譜圖；
[0031] 圖14是本發(fā)明的樣品加標(biāo)的定量離子色譜圖；
[0032] 圖15是本發(fā)明的樣品加標(biāo)的定性離子色譜圖；
[0033] 圖16是本發(fā)明的樣品加標(biāo)的質(zhì)譜圖；
[0034] 圖17是本發(fā)明的線(xiàn)性實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖；
[0035] 圖18是本發(fā)明的6ng/ml甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流色譜圖；
[0036] 圖19是本發(fā)明的6ng/ml甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的定量離子色譜圖；
[0037] 圖20是本發(fā)明的6ng/ml甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的定性離子色譜圖；
[0038] 圖21是本發(fā)明的6ng/ml甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖。

【具體實(shí)施方式】
[0039] 本發(fā)明結(jié)合附圖和具體實(shí)施例作進(jìn)一步說(shuō)明。應(yīng)該理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明 目的，而不用于限制本發(fā)明范圍。
[0040] 實(shí)施例1
[0041] 本發(fā)明的一種氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法，包括如下步驟：
[0042] (1)加入乙腈定容到10ml，潤(rùn)旋混合Imin,超聲提取IOmin,過(guò)0? 22 ii m濾膜，進(jìn)樣 對(duì)樣品中甲磺酸甲酯進(jìn)行測(cè)定；
[0043] (2)檢測(cè)條件：采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀GC-MS/MS作為檢測(cè)儀器對(duì)甲磺酸 甲酯進(jìn)行測(cè)定。
[0044] 在步驟（1)中，取待測(cè)品為0? 05g，精確到0? lmg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容 至Ij IOml,潤(rùn)旋混合Imin,超聲提取lOmin。
[0045] 在步驟（2)中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的數(shù)據(jù)采集方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM，選 擇質(zhì)荷比 M/Z = 79 - 65 作為定量離子對(duì)；M/Z = 80 - 65、M/Z = 79 - 48、M/Z = 80 - 48、 M/Z = 79 - 48作為定性離子對(duì)；溶劑切除時(shí)間3. 5min。氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的色 譜柱是以（35% -苯基）-甲基聚硅氧烷為固定液的毛細(xì)管色譜柱：DB-35MS柱長(zhǎng)30m，柱徑 0. 25mm，膜厚0. 25iim。氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的進(jìn)樣口溫度為150-300°C，進(jìn)樣方式 為不分流，載氣為氦氣，柱流速為I. 50ml/min。氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的升溫程序?yàn)槌?始溫度85°C，維持時(shí)間為3. 5min，以20°C /min的速率升溫至200°C。氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 聯(lián)用儀的質(zhì)譜條件為EI離子源，電壓為70eV，離子源溫度為230°C ;傳輸線(xiàn)溫度為220°C。
[0046] 以下測(cè)試樣品由南京恩泰醫(yī)藥科技有限公司提供。
[0047] 空白試驗(yàn)和專(zhuān)屬性實(shí)驗(yàn)：
[0048] 如圖1至圖4所示，稱(chēng)取10_15mg甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品于IOml容量瓶中，用乙腈定 容至刻度，稀釋1000倍后，取Iml標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)樣分析，甲磺酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖。如圖5 至圖8所示，為乙腈溶劑的色譜圖。取Iml乙腈溶劑進(jìn)樣分析。
[0049] 如圖9至圖12所示，分別稱(chēng)取0. 200g甲苯磺酸依度沙班固體粉末9份于IOml容 量瓶中（精確到Img),加適量乙腈,潤(rùn)旋混合Imin,超聲lOmin。用乙腈定容至刻度，潤(rùn)旋 混勻，取Iml過(guò)濾進(jìn)樣分析。根據(jù)保留時(shí)間，離子豐度比定性，根據(jù)峰面積采用外標(biāo)法定量。 得到的數(shù)據(jù)見(jiàn)下表1，表1為九次平行測(cè)定實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：
[0050] 表 1
[0051]

【權(quán)利要求】
1. 一種氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法，其特征在于包括如下步驟： (1) 取待測(cè)品置于容量瓶中，加入乙腈定容到l〇_25ml，渦旋混合l-5min，超聲提取 10-15min，過(guò)0. 22 y m濾膜，進(jìn)樣對(duì)樣品中甲磺酸甲酯進(jìn)行測(cè)定； (2) 檢測(cè)條件：采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀GC-MS/MS作為檢測(cè)儀器對(duì)甲磺酸甲酯 進(jìn)行測(cè)定。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步驟（1)中，取待測(cè)品為0.05-0. 50g，精確到0. lmg，置于空容量瓶中，加入乙腈定容到 10-25ml，渦旋混合l-5min，超聲提取10-15min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步驟⑵中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的數(shù)據(jù)采集方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)MRM，選擇質(zhì)荷比 M/Z = 79 - 65 作為定量離子對(duì)；M/Z = 80 - 65、M/Z = 79 - 48、M/Z = 80 - 48、M/Z = 79 - 48作為定性離子對(duì)；溶劑切除時(shí)間3. 5min。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步驟（2)中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的色譜柱是以（35% -苯基）-甲基聚硅氧烷為 固定液的毛細(xì)管色譜柱：DB-35MS柱長(zhǎng)30m，柱徑0? 25mm，膜厚0? 25 ii m。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步驟（2)中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的進(jìn)樣口溫度為150-300°C，進(jìn)樣方式為不分流， 載氣為氦氣，柱流速為1.50ml/min。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法，其特征在 于：在步驟（2)中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的升溫程序?yàn)槌跏紲囟?5°C，維持時(shí)間為 3. 5min，以20°C /min的速率升溫至200°C。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)甲磺酸甲酯的方法，其特征在于：在步驟（2)中，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的質(zhì)譜條件為EI離子源，電壓為70eV，離子源溫 度為230°C ;傳輸線(xiàn)溫度為220°C。
【文檔編號(hào)】G01N30/88GK104359998SQ201410567714
【公開(kāi)日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2014年10月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月22日
【發(fā)明者】徐錦忠, 袁博, 倪葉猛, 肖石基, 王祝超 申請(qǐng)人:江蘇中譜檢測(cè)有限公司