心腦寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了心腦寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，在現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加薄層色譜法對薤白、小葉黃楊的定性鑒別和高效液相色譜對丹參中丹酚酸B的定量測定。該方法穩(wěn)定可靠，專一性強(qiáng)，提高了對產(chǎn)品質(zhì)量的控制。
【專利說明】心腦寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種中藥，特別涉及一種心腦寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]心腦寧膠囊為一中藥膠囊制劑，由銀杏葉、小葉黃楊、丹參、大果木姜子、薤白構(gòu)成，具有活血化氣，通絡(luò)止痛的作用。用于氣滯血瘀的胸痹，頭痛，眩暈，癥見:胸悶刺痛，心悸不寧，頭暈?zāi)垦５?，以及冠心病、腦動(dòng)脈硬化見上述癥狀者。
[0003]原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅對銀杏葉、丹參、大果木姜子做定性鑒別及對藥品中的總黃酮醇苷含量進(jìn)行測定，其不能很好的代表產(chǎn)品的質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明提供一種心腦寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，目的是解決現(xiàn)有技術(shù)問題，在原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了對薤白、小葉黃楊進(jìn)行定性鑒別和利用高效液相色譜對丹參中丹酚酸B的定量測定，提高了產(chǎn)品質(zhì)量。
[0005]本發(fā)明解決問題采用的技術(shù)方案是:
[0006]心腦寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，利用薄層色譜法對薤白、小葉黃楊進(jìn)行定性鑒別和利用高效液相色譜對丹參中丹酚酸B的定量測定。
[0007]對薤白的定性鑒別包括以下步驟:取本品內(nèi)容物4.5g，加正己烷20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液水浴蒸干，殘?jiān)诱和镮ml使溶解，作為供試品溶液；另取薤白對照藥材4g，同法制成對照藥材溶液；照中國藥典2010年版一部附錄VI B中薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯10: 1.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。
[0008]對小葉黃楊的定性鑒別包括以下步驟:取本品內(nèi)容物6g,加5ml濃氨試液與50ml甲醇，搖勻，加熱回流3小時(shí)；冷卻，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?5ml水加熱溶解，用氨水調(diào)節(jié)PH至9，用三氯甲烷提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)?ml三氯甲烷溶解，轉(zhuǎn)移至100?200目、2g、內(nèi)徑I?1.5cm的中型氧化鋁柱，用IOml甲醇:三氯甲烷6: 4洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?.5ml三氯甲烷溶解，即得供試品溶液。另取小葉黃楊對照藥材1.5g，同法制成對照藥材溶液；再取黃維黃楊星D對照品，加三氯甲烷制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液，對照藥材溶液各10 μ 1，對照品溶液5 μ I,分別點(diǎn)于同一高效娃膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水10: 5: 0.5為展開齊U，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉試液，晾干，在日光下檢視；供試品色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。
[0009]對丹參中丹酚酸B的定量測定包括以下步驟:照中國藥典2010年版附錄VI D高效液相色譜法；[0010]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-1.7%甲酸溶液(20: 10: 70)為流動(dòng)相；檢測波長為286nm;理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000 ；
[0011]對照品溶液的制備:精密稱取丹酚酸B對照品，加水制成每Iml分別含60 μ g的溶液，即得；
[0012]供試品溶液的制備:取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，精密稱取0.3g于25ml量瓶中，加入水10ml，超聲處理(功率150W，頻率20kHz) 15分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過，即得；
[0013]測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定；本品每粒含丹參以丹酹酸B (C36H3tlO16)計(jì),不得少于0.9mg。
[0014]本發(fā)明的有益效果:在原有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了對薤白、小葉黃楊進(jìn)行定性鑒別和利用高效液相色譜對丹參中丹酚酸B的定量測定，提高了產(chǎn)品質(zhì)量。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是心腦寧膠囊中薤白的TLC鑒別色譜一；
[0016]圖2是心腦寧膠囊中薤白的TLC鑒別色譜二 ；
[0017]圖3是心腦寧膠囊中薤白的TLC鑒別色譜三；
[0018]圖4是心腦寧膠囊中薤白的TLC鑒別色譜四；
[0019]圖5是心腦寧膠囊中小葉黃楊的TLC鑒別色譜一；
[0020]圖6是心腦寧膠囊中小葉黃楊的TLC鑒別色譜二 ；
[0021]圖7是心腦寧膠囊中小葉黃楊的TLC鑒別色譜三；
[0022]圖8是心腦寧膠囊中小葉黃楊的TLC鑒別色譜四；
[0023]圖9是心腦寧膠囊中小葉黃楊的TLC鑒別色譜五；
[0024]圖10是心腦寧膠囊中小葉黃楊的TLC鑒別色譜六；
[0025]圖11是心腦寧膠囊中小葉黃楊的TLC鑒別色譜七；
[0026]圖12是丹酚酸B線性圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027]心腦寧膠囊
[0028]處方:銀杏葉400g、小葉黃楊400g、丹參400g大果木姜子400g、薤白400g，制成
1000粒膠囊，每粒產(chǎn)品0.45g。
[0029]針對增加的三個(gè)檢測項(xiàng)目，分別做了如下的測定試驗(yàn):
[0030]薤白鑒別
[0031]方法為:取本品內(nèi)容物4.5g，加正己烷20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液水浴蒸干，殘?jiān)诱和镮ml使溶解，作為供試品溶液。另取薤白對照藥材4g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。故列入正文。[0032]1.1.1 專屬性
[0033]以上述供試品溶液、對照藥材溶液和陰性對照溶液照薄層色譜法(中國藥典2010年版附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10 μ 1、對照藥材溶液10 μ 1，陰性對照溶液ΙΟμΙ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。斑點(diǎn)清晰，分離度符合要求，Rf值適中，陰性樣品無干擾，專屬性好。
[0034]1.1.2 重現(xiàn)性
[0035]同法處理3個(gè)批號的樣品，用上述確定的方法展開，斑點(diǎn)清晰，分離符合要求，Rf值適中，陰性樣品無干擾，重現(xiàn)性好。
[0036]1.1.3 耐用性
[0037]1.1.3.1薄層板比較
[0038]比較了青島海洋化工廠分廠硅膠板商品板、高效板和自制含0.5%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板。斑點(diǎn)清晰，分離符合要求，Rf值適中，陰性無干擾。兩種薄層板均能得到較好的鑒別色譜。
[0039]L L 3.2溫度的比較
[0040]比較了低溫(4°C )和室溫環(huán)境條件下商品板展開效果。斑點(diǎn)清晰，分離符合要求，Rf值適中，陰性無干擾。兩個(gè)條件下均能得到較好的鑒別色譜。
[0041](I)低溫(4°C )條件下檢測該定性方法的耐用性。其中，薄層色譜條件如下所示:
[0042]薄層板:商品硅膠G薄層板
[0043]規(guī)格:100X IOOmm
[0044]活度:三色分開
[0045]點(diǎn)樣:樣品10 μ I，對照藥材10 μ I，陰性10 μ I
[0046]點(diǎn)樣方式:點(diǎn)狀
[0047]展開劑:正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)
[0048]展開劑用量:10ml
[0049]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0050]展距:9cm
[0051]溫度:4°C
[0052]濕度:48%
[0053]薄層板上從左到右點(diǎn)樣順序?yàn)?
[0054]1-心腦寧膠囊(批號20130307) 2_心腦寧膠囊(批號20130316)
[0055]3-薤白對照藥材4-心腦寧膠囊(批號20130325)
[0056]5-心腦寧膠囊陰性樣品(缺薤白)
[0057]薄層色譜結(jié)果見圖1。
[0058](2)室溫條件下檢測該定性方法的耐用性。其中，薄層色譜條件如下所示:
[0059]薄層板:商品硅膠G薄層板
[0060]規(guī)格:100X IOOmm
[0061]活度:三色分開
[0062]點(diǎn)樣:樣品10 μ I，對照藥材10 μ I，陰性10 μ I[0063]點(diǎn)樣方式:點(diǎn)狀
[0064]展開劑:正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)
[0065]展開劑用量:10ml
[0066]展開方式:雙槽展缸(13X 12cm)
[0067]展距:9cm
[0068]溫度:20°C
[0069]濕度:48%
[0070]薄層板上從左到右點(diǎn)樣順序?yàn)?
[0071]1-心腦寧膠囊(批號20130307) 2_心腦寧膠囊(批號20130316)
[0072]3-薤白對照藥材4-心腦寧膠囊(批號20130325)
[0073]5-心腦寧膠囊陰性樣品(缺薤白)
[0074]薄層色譜結(jié)果見圖2。
[0075]1.1.3.3濕度的比較
[0076]比較了低濕度(32% )和高濕度(72% )環(huán)境下商品板展開效果。斑點(diǎn)清晰，分離符合要求，Rf值適中，陰性無干擾。兩個(gè)條件下均能得到較好的鑒別色譜。
[0077](I)低濕(32% )條件下檢測該定性方法的耐用性。其中，薄層色譜條件如下所示:
[0078]薄層板:商品硅膠G薄層板
[0079]規(guī)格:100X IOOmm
[0080]活度:三色分開
[0081 ] 點(diǎn)樣:樣品10 μ I，對照藥材10 μ I，陰性10 μ I
[0082]點(diǎn)樣方式:點(diǎn)狀
[0083]展開劑:正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)
[0084]展開劑用量:10ml
[0085]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0086]展距:9cm
[0087]溫度:20°C
[0088]濕度:32%
[0089]薄層板上從左到右點(diǎn)樣順序?yàn)?
[0090]1-心腦寧膠囊(批號20130307) 2_心腦寧膠囊(批號20130316)
[0091]3-薤白對照藥材4-心腦寧膠囊(批號20130325)
[0092]5-心腦寧膠囊陰性樣品(缺薤白)
[0093]薄層色譜結(jié)果見圖3。
[0094](2)高濕(72% )條件下檢測該定性方法的耐用性。其中，薄層色譜條件如下所示:
[0095]薄層板:商品硅膠G薄層板
[0096]規(guī)格:100X IOOmm
[0097]活度:三色分開
[0098]點(diǎn)樣:樣品10 μ I，對照藥材10 μ I，陰性10 μ I[0099]點(diǎn)樣方式:點(diǎn)狀
[0100]展開劑:正己烷-乙酸乙酯(10: 1.5)
[0101]展開劑用量:10ml
[0102]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0103]展距:9cm
[0104]溫度:20°C
[0105]濕度:72%
[0106]薄層板上從左到右點(diǎn)樣順序?yàn)?
[0107]1-心腦寧膠囊(批號20130307) 2_心腦寧膠囊(批號20130316)
[0108]3-薤白對照藥材4-心腦寧膠囊(批號20130325)
[0109]5-心腦寧膠囊陰性樣品(缺薤白)
[0110]薄層色譜結(jié)果見圖4。
[0111]小葉黃楊鑒別
[0112]方法為:取本品內(nèi)容物6g，加5ml濃氨試液與50ml甲醇，搖勻，加熱回流3小時(shí)。冷卻，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?5ml水加熱溶解，用氨水調(diào)節(jié)pH至9，用三氯甲烷提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)?ml三氯甲烷溶解，轉(zhuǎn)移至中型氧化鋁柱(100?200目，2g，內(nèi)徑I?1.5cm)，用甲醇:三氯甲烷(6: 4) IOml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?.5ml三氯甲烷溶解，即得供試品溶液。另取小葉黃楊對照藥材1.5g，同法制成對照藥材溶液。再取黃維黃楊星D對照品，加三氯甲烷制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液，對照藥材溶液各10 μ 1，對照品溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一高效硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉試液，晾干，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)，陰性樣品無干擾。故列入正文。
[0113]薄層色譜條件如下所示:
[0114]薄層板:高效硅膠G薄層板
[0115]規(guī)格:100X IOOmm
[0116]活度:三色分開
[0117]點(diǎn)樣:樣品10 μ 1，對照藥材10 μ 1，對照品5 μ 1，陰性10 μ I
[0118]點(diǎn)樣方式:條狀
[0119]展開劑:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0120]展開劑用量:10ml
[0121]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0122]展距:9cm
[0123]溫度:20°C
[0124]濕度:48%
[0125]薄層板上從左到右點(diǎn)樣順序?yàn)?
[0126]1-心腦寧膠囊(批號20130313) 2_心腦寧膠囊(批號20130120)
[0127]3-心腦寧膠囊(批號20130325) 4_環(huán)維黃楊星D[0128]5-小葉黃楊對照藥材6-心腦寧膠囊陰性樣品(缺小葉黃楊)
[0129]薄層色譜結(jié)果見圖5。
[0130]2.2.1 專屬性
[0131]以上述供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液和陰性對照溶液照薄層色譜法(附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液10 μ 1、對照藥材溶液10 μ 1，對照品溶液5 μ 1，陰性對照溶液ΙΟμΙ，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉試液，晾干，在日光下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。斑點(diǎn)清晰，分離度符合要求，Rf值適中，陰性樣品無干擾，專屬性好。
[0132]薄層色譜條件如下所示:
[0133]薄層板:高效硅膠G薄層板
[0134]規(guī)格:100X IOOmm
[0135]活度:三色分開
[0136]點(diǎn)樣:樣品10 μ 1，對照藥材10 μ 1，對照品5 μ 1，陰性10 μ I
[0137]點(diǎn)樣方式:條狀
[0138]展開劑:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0139]展開劑用量:10ml
[0140]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0141]展距:9cm
[0142]溫度:20°C
[0143]濕度:48%
[0144]薄層板上從左到右點(diǎn)樣順序?yàn)?
[0145]1-心腦寧膠囊(批號20130313) 2_心腦寧膠囊(批號20130120)
[0146]3-心腦寧膠囊(批號20130325) 4_環(huán)維黃楊星D
[0147]5-小葉黃楊對照藥材6-心腦寧膠囊陰性樣品(缺小葉黃楊)
[0148]薄層色譜結(jié)果見圖5，從結(jié)果中可看出，該鑒別小葉黃楊的方法具有良好的專屬性。
[0149]2.1.2 重現(xiàn)性
[0150]同法處理3個(gè)批號的樣品，用上述確定的方法展開，斑點(diǎn)清晰，分離符合要求，Rf值適中，陰性樣品無干擾，重現(xiàn)性好。
[0151 ] 薄層色譜條件如下所示:
[0152]薄層板:高效硅膠G薄層板
[0153]規(guī)格:100X IOOmm
[0154]活度:三色分開
[0155]點(diǎn)樣:樣品10 μ 1，對照藥材10 μ 1，對照品5 μ 1，陰性10 μ I
[0156]點(diǎn)樣方式:條狀
[0157]展開劑:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0158]展開劑用量:10ml[0159]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0160]展距:9cm
[0161]溫度:20°C
[0162]濕度:48%
[0163]薄層板上從左到右點(diǎn)樣順序?yàn)?
[0164]1-心腦寧膠囊(批號20130313) 2_心腦寧膠囊(批號20130120)
[0165]3-心腦寧膠囊(批號20130325) 4_環(huán)維黃楊星D
[0166]5-小葉黃楊對照藥材6-心腦寧膠囊陰性樣品(缺小葉黃楊)薄層色譜結(jié)果見圖5，從結(jié)果中可看出，該鑒別小葉黃楊的方法具有良好的重現(xiàn)性。
[0167]2.2.3 耐用性
[0168]2.2.3.1薄層板比較
[0169]比較了青島海洋化工廠分廠商品硅膠板、高效硅膠G薄層板。發(fā)現(xiàn)商品硅膠板斑點(diǎn)不清晰，分離符合要求，Rf值適中，陰性無干擾。高效硅膠G薄層板斑點(diǎn)清晰，分離符合要求，Rf值適中，陰性無干擾。因此采用高效硅膠G薄層板。
[0170]薄層色譜條件如下所示:
[0171 ] 薄層板:1.商品硅膠G薄層板2.高效商品硅膠G薄層板
[0172]規(guī)格:100X IOOmm
[0173]活度:三色分開
[0174]點(diǎn)樣:樣品10 μ 1，對照藥材10 μ 1，對照品5 μ 1，陰性10 μ I
[0175]點(diǎn)樣方式:條狀
[0176]展開劑:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0177]展開劑用量:10ml
[0178]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0179]展距:9cm
[0180]溫度:20°C
[0181]濕度:48%
[0182]分別在商品硅膠G薄層板和高效商品硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，其每塊薄層板上從左至右的點(diǎn)樣順序如下所示:
[0183]1-心腦寧膠囊(批號20130313) 2_心腦寧膠囊(批號20130120)
[0184]3-心腦寧膠囊(批號20130325) 4_環(huán)維黃楊星D
[0185]5-小葉黃楊對照藥材6-心腦寧膠囊陰性樣品(缺小葉黃楊)
[0186]薄層色譜結(jié)果分別見圖6 (采用商品硅膠G薄層板)、圖7 (采用高效商品硅膠G薄層板)，從結(jié)果中可看出，高效硅膠G薄層板斑點(diǎn)清晰，分離符合要求，Rf值適中，陰性無干擾。因此采用高效硅膠G薄層板。
[0187]2.2.3.2溫度的比較
[0188]比較了低溫(4°C )和室溫環(huán)境條件下商品板展開效果。斑點(diǎn)清晰，分離符合要求，Rf值適中，陰性無干擾。兩個(gè)條件下均能得到較好的鑒別色譜。
[0189](I)低溫(4°C )條件下檢測該定性方法的耐用性。其中，薄層色譜條件如下所示:
[0190]薄層板:高效商品硅膠G薄層板[0191]規(guī)格:100X 100mm
[0192]活度:三色分開
[0193]點(diǎn)樣:樣品10 μ 1，對照藥材10 μ 1，對照品5 μ 1，陰性10 μ I
[0194]點(diǎn)樣方式:條狀
[0195]展開劑:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0196]展開劑用量:10ml
[0197]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0198]展距:9cm
[0199]溫度:4°C
[0200]濕度:48%
[0201]薄層板上從左至右的點(diǎn)樣順序如下所示:
[0202]1-心腦寧膠囊(批號20130313) 2_心腦寧膠囊(批號20130120)
[0203]3-心腦寧膠囊(批號20130325) 4_環(huán)維黃楊星D
[0204]5-小葉黃楊對照藥材6-心腦寧膠囊陰性樣品(缺小葉黃楊)
[0205]薄層色譜結(jié)果見圖8，證明該檢測方法在低溫條件下具有良好的耐用性。
[0206](2)室溫條件下檢測該定性方法的耐用性。其中，薄層色譜條件如下所示:
[0207]薄層板:高效商品硅膠G薄層板
[0208]規(guī)格:100X IOOmm
[0209]活度:三色分開
[0210]點(diǎn)樣:樣品10 μ 1，對照藥材10 μ 1，對照品5 μ 1，陰性10 μ I
[0211]點(diǎn)樣方式:條狀
[0212]展開劑:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0213]展開劑用量:10ml
[0214]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0215]展距:9cm
[0216]溫度:20°C
[0217]濕度:48%
[0218]薄層板上從左至右的點(diǎn)樣順序如下所示:
[0219]1-心腦寧膠囊(批號20130313) 2_心腦寧膠囊(批號20130120)
[0220]3-心腦寧膠囊(批號20130325) 4_環(huán)維黃楊星D
[0221]5-小葉黃楊對照藥材6-心腦寧膠囊陰性樣品(缺小葉黃楊)
[0222]薄層色譜結(jié)果見圖9，證明該檢測方法在低溫條件下具有良好的耐用性。
[0223]2.2.3.3濕度的比較
[0224]比較了低濕度(32% )和高濕度(72% )環(huán)境下商品板展開效果。斑點(diǎn)清晰，分離符合要求，Rf值適中，陰性無干擾。兩個(gè)條件下均能得到較好的鑒別色譜。
[0225](I)低濕(32% )條件下檢測該定性方法的耐用性。其中，薄層色譜條件如下所示:
[0226]薄層板:高效商品硅膠G薄層板
[0227]規(guī)格:100X IOOmm[0228]活度:三色分開
[0229]點(diǎn)樣:樣品10 μ 1，對照藥材10 μ 1，對照品5 μ 1，陰性10 μ μ I
[0230]點(diǎn)樣方式:條狀
[0231]展開劑:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0232]展開劑用量:10ml
[0233]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0234]展距:9cm
[0235]溫度:20°C
[0236]濕度:32%
[0237]薄層板上從左至右的點(diǎn)樣順序如下所示:
[0238]1-心腦寧膠囊(批號20130313) 2_心腦寧膠囊(批號20130120)
[0239]3-心腦寧膠囊(批號20130325) 4_環(huán)維黃楊星D
[0240]5-小葉黃楊對照藥材6-心腦寧膠囊陰性樣品(缺小葉黃楊)
[0241]薄層色譜結(jié)果見圖10，證明該檢測方法在低濕條件下具有良好的耐用性。
[0242](2)高濕度(72% )條件下檢測該定性方法的耐用性。其中，薄層色譜條件如下所示:
[0243]薄層板:高效商品硅膠G薄層板
[0244]規(guī)格:100X IOOmm
[0245]活度:三色分開
[0246]點(diǎn)樣:樣品10 μ 1，對照藥材10 μ 1，對照品5 μ 1，陰性10 μ I
[0247]點(diǎn)樣方式:條狀
[0248]展開劑:乙酸乙酯-甲醇-氨水(10: 5: 0.5)
[0249]展開劑用量:10ml
[0250]展開方式:雙槽展缸(13 X 12cm)
[0251]展距:9cm
[0252]溫度:20°C
[0253]濕度:72%
[0254]薄層板上從左至右的點(diǎn)樣順序如下所示:
[0255]1-心腦寧膠囊(批號20130313) 2_心腦寧膠囊(批號20130120)
[0256]3-心腦寧膠囊(批號20130325) 4_環(huán)維黃楊星D
[0257]5-小葉黃楊對照藥材6-心腦寧膠囊陰性樣品(缺小葉黃楊)
[0258]薄層色譜結(jié)果見圖11，證明該檢測方法在高濕條件下具有良好的耐用性。丹參中丹酚酸B的含量測定。
[0259]3.1.1儀器與試劑高效液相色譜儀:美國戴安3000高效液相色譜儀，帶四元泵；VWD可變波長紫外檢測器；在線真空脫氣機(jī)；智能化柱溫箱；色譜柱=Thermo C18150X4.6mm
[0260]丹酚酸B對照品(供含量測定用):購于中國藥品生物制品檢定所，批號111562-201212
[0261]甲醇為色譜純；水為重蒸餾水；其它試劑為分析純。[0262]3.1.2丹酚酸B對照品溶液的制備:精密稱取丹酚酸B (含量以95.4 %計(jì))對照品5.920mg,置100mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含丹酚酸B56.477 μ g)。
[0263]3.1.3供試品溶液制備方法的選擇
[0264]取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，精密稱取0.3g于25ml量瓶中，加入水10ml，分別超聲處理(功率150W，頻率20kHz) 15分鐘和30分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過，即得。
[0265]表1提取方法的選擇
[0266]
【權(quán)利要求】
1.心腦寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，其特征在于:增加了利用薄層色譜法對薤白、小葉黃楊的定性鑒別和利用高效液相色譜對丹參中丹酚酸B的定量測定。
2.如權(quán)利要求1中所述的心腦寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，其特征在于:對薤白的定性鑒別包括以下步驟:取本品內(nèi)容物4.5g，加正己烷20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液水浴蒸干，殘?jiān)诱和镮ml使溶解，作為供試品溶液；另取薤白對照藥材4g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各IOy 1，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯10: 1.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。
3.如權(quán)利要求1中所述的心腦寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，其特征在于:對小葉黃楊的定性鑒別包括以下步驟:取本品內(nèi)容物6g,加5ml濃氨試液與50ml甲醇,搖勻,加熱回流3小時(shí)；冷卻，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?5ml水加熱溶解，用氨水調(diào)節(jié)pH至9，用三氯甲烷提取3次，每次25ml，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)?ml三氯甲烷溶解，轉(zhuǎn)移至100?200目、2g、內(nèi)徑I?1.5cm的中型氧化鋁柱，用IOml甲醇:三氯甲烷6: 4洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?.5ml三氯甲烷溶解，即得供試品溶液；另取小葉黃楊對照藥材1.5g，同法制成對照藥材溶液；再取黃維黃楊星D對照品，加三氯甲烷制成每Iml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；吸取供試品溶液，對照藥材溶液各10 μ 1，對照品溶液5 μ 1，分別點(diǎn)于同一高效硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-氨水10: 5: 0.5為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉試液，晾干，在日光下檢視；供試品色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)。
4.如權(quán)利要求1中所述的心腦寧膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，其特征在于:對丹參中丹酚酸B的定量測定包括以下步驟: 照高效液相色譜法； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-1.7%甲酸溶液(20: 10: 70)為流動(dòng)相；檢測波長為286nm;理論板數(shù)按丹酚酸B峰計(jì)算應(yīng)不低于2000 ； 對照品溶液的制備:精密稱取丹酚酸B對照品，加水制成每Iml分別含60 μ g的溶液，即得； 供試品溶液的制備:取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，精密稱取0.3g于25ml量瓶中，加入水10ml，超聲處理(功率150W，頻率20kHz) 15分鐘，放冷，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μ m)濾過，即得； 測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定；本品每粒含丹參以丹酚酸B(C36H30016)計(jì)，不得少于0.9mg。
【文檔編號】G01N30/88GK104007216SQ201410205673
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年5月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月16日
【發(fā)明者】簡衛(wèi)光 申請人:貴州安泰藥業(yè)有限公司