基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法，包括S1/S2-Fe3O4復(fù)合物的制備，超級三明治DNAzyme結(jié)構(gòu)的形成，本發(fā)明還提供一種基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)傳感器檢測癌細(xì)胞的方法；本發(fā)明的有益效果是，超級三明治DNAzyme結(jié)構(gòu)，利用其催化性能成功的實(shí)現(xiàn)對癌細(xì)胞的檢測，并獲得滿意的結(jié)果，因此本發(fā)明的電化學(xué)細(xì)胞傳感器可以應(yīng)用于癌癥的前期診斷方面。
【專利說明】基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及電化學(xué)傳感器及其應(yīng)用，尤其涉及基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]早期準(zhǔn)確地檢測癌癥細(xì)胞對于臨床診斷以及檢測癌癥相關(guān)過程的監(jiān)測具有非常重要的作用。當(dāng)前有許多檢測方法，如流式細(xì)胞術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)、免疫組織化學(xué)、熒光檢測以及場效應(yīng)晶體管等，然而這些方法存在花費(fèi)高、耗時(shí)長或者需要復(fù)雜的儀器等缺點(diǎn)。電化學(xué)方法，由于其響應(yīng)快、成本低以及易于操作等優(yōu)點(diǎn)，吸引了廣大科學(xué)家，是一種癌癥監(jiān)測的理想方法。然而，目前的電化學(xué)細(xì)胞傳感器很少，這是由于細(xì)胞膜的不導(dǎo)電性極大限制了氧化還原物質(zhì)與目標(biāo)細(xì)胞之間的相互作用。為了解決這一難題，媒介轉(zhuǎn)換法或許是細(xì)胞檢測的理想方法。眾所周知，適配體與目標(biāo)物之間的結(jié)合力比互補(bǔ)鏈之間結(jié)合力大的多，因此靶細(xì)胞的加入能夠取代互補(bǔ)鏈，這樣就將適體-細(xì)胞之間的作用轉(zhuǎn)化為基于DNA的信號放大策略。
[0003]G-四聯(lián)體DNAzyme,由hemin及富G堿基的DNA序列組成,是一種有效放大檢測分析物的催化工具。由于其相比于HRP的顯著優(yōu)勢，目前被廣泛地用于各類生化反應(yīng)中。目前，基于G-四聯(lián)體DNAzyme發(fā)展了一種雙功能的電化學(xué)傳感器。然而,這種放大模式在催化性能方面存在缺陷，因?yàn)槊恳粋€(gè)目標(biāo)DNA只能形成一個(gè)G-四聯(lián)體DNAzyme。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供一種基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法，制備的電化學(xué)細(xì)胞傳感器能夠有效放大檢測分析物，每一個(gè)靶DNA能夠捕獲包含若干超級三明治DNAzyme結(jié)構(gòu)DNA納米線，因此能夠獲得比傳統(tǒng)三明治結(jié)構(gòu)更大的電化學(xué)信號。
[0005]本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0006]一種基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法，包括如下步驟:
[0007]I)制備 Sl/S2_Fe304 復(fù)合物:
[0008]首先將10?200 μ L10mg/mL的羧基化磁珠用100?800 μ LlOmM的咪唑-鹽酸溶液清洗三次，加入0.1?LOmMl-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺/0.1?1.0mMN-羥基琥珀酰亞胺于37°C孵化30分鐘激活磁珠表面的羧基，隨后用IOOmM pH8.0的PBS緩沖液清洗；之后，加入10?ΙΟΟμ L0.1?5.ΟμΜ Κ562適配體SI，37°C，反應(yīng)16?24小時(shí)，并輕微的震動，將形成的Sl-Fe3O4復(fù)合物用磁鐵分離，并用PBS緩沖液清洗；最后，加入10?ΙΟΟμ L0.1?5.ΟμΜ的互補(bǔ)探針S2，37°C反應(yīng)I?3小時(shí)，形成Sl/S2_Fe304復(fù)合物，并將復(fù)合物于4°C下保存以待后續(xù)使用；
[0009]所述K562 適配體 SI 的序列為:5’ -ATCCAGAGTGACGCAGCAGATCAGTCTATCTTCTCCTGATGGGTTCCTAITTATAGGTGAAGCTGGACACGGTGGCTTAGT-(CH2) 6-NH2-3’，其核苷酸序列如 SEQ IDN0.1 所示；互補(bǔ)探針 S2 的序列為:5’ -TGCGTCACTCTGGATACTAAAAGGGTCTGAGGG-3’，其核苷酸序列如SEQ ID N0.2所示；
[0010]2)基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備
[0011]首先將白血病細(xì)胞K562離心并用IOOmM PBS緩沖液水洗，得K562的細(xì)胞懸浮液，并將Sl/S2-Fe304復(fù)合物加入系列濃度的細(xì)胞懸浮液中，于37V反應(yīng)2?3小時(shí)；加入離心后的K562細(xì)胞時(shí)，適體SI與細(xì)胞強(qiáng)作用力迫使S1/S2雙聯(lián)結(jié)構(gòu)打開，將S2釋放到溶液中，磁性分離后，將修飾捕獲探針S3的金電極浸入到S2溶液中，37°C反應(yīng)I?3h以形成S3/S2雙聯(lián)；隨后,在0.1?5.ΟμΜ S4、S5混合液中孵化2?4小時(shí)，并在0.2mM hemin及0.5mMMB溶液中浸泡2?4小時(shí)，得到基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器；
[0012]所述捕獲探針S3 的序列為:5’ -ATCCAGAGTGACGCATAACACCGGTGG- (CH2) 6-SH_3’，其核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示；信號探針S4的序列為:5’ -TACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3’，其核苷酸序列如 SEQ ID N0.4 所示，其中下劃線部分能夠形成G-四聯(lián)體DNAzyme ;輔助探針S5的序列為:5’ -GCACCTGGGGGAGTAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3’，其核苷酸序列如SEQ ID N0.5所示。
[0013]優(yōu)選地，步驟⑵所述白血病細(xì)胞K562離心速度為lOOOrmp。
[0014]步驟(2)所述細(xì)胞懸浮液的系列濃度為2.3，23，230，2300，23000cells/mL。
[0015]本發(fā)明還提供一種利用上述方法制備的基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器。
[0016]本發(fā)明的有益效果為，超級三明治DNAzyme結(jié)構(gòu)，利用其催化性能成功的實(shí)現(xiàn)對癌細(xì)胞的檢測，并獲得滿意的結(jié)果，因此本發(fā)明的電化學(xué)細(xì)胞傳感器可以應(yīng)用于癌癥的前期診斷方面。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1為電化學(xué)超級三明治DNAzyme檢測癌細(xì)胞的原理示意圖；
[0018]圖2為修飾電極對ImM H2O2的DPV響應(yīng)圖，其中，(a)為S2/S3修飾電極，(b)為S3修飾電極探針，并進(jìn)一步與S4、S5及hemin、MB混合溶液反應(yīng)；
[0019]圖3為修飾電極與癌細(xì)胞反應(yīng)后，對ImM H2O2的DPV響應(yīng)圖；
[0020]圖4為細(xì)胞濃度的log值與DPV峰電流之間的關(guān)系圖，其中細(xì)胞濃度分別為2.3，23,230,2300,23000cells/mL。
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。本發(fā)明所用1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺(EDC)、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、三(2-羧乙基)膦(TCEP)、6_巰基-1-己醇(MCH)和hemin都購自Sigma Aldrich,羧基化磁珠(Fe3O4, 20nM)購自杭州納晶科技有限公司，DNA寡核苷酸由上海生工合成并純化。
[0022]一種基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法，包括如下步驟:
[0023]I)制備 Sl/S2_Fe304 復(fù)合物:
[0024]首先將100 μ L10mg/mL的羧基修飾的磁珠用400 μ LlOmM的咪唑-鹽酸溶液清洗三次，加入0.5mM EDC/0.5mM NHS于37°C孵化30分鐘激活磁珠表面的羧基，隨后用IOOmMpH8.0的PBS緩沖液清洗；之后，加入50 μ LI μ M Κ562適配體SI，37°C，靜置16小時(shí)，并輕微的震動，將形成的Sl-Fe3O4復(fù)合物用磁鐵分離，并用PBS緩沖液清洗；最后，加入50 μ LI μ M的互補(bǔ)探針S2，37°C反應(yīng)I小時(shí)，形成Sl/S2-Fe304復(fù)合物，并于4°C下保存以待后續(xù)使用；
[0025]所述K562 適配體 SI 的序列為:5’ -ATCCAGAGTGACGCAGCAGATCAGTCTATCTTCTCCTGATGGGTTCCTAITTATAGGTGAAGCTGGACACGGTGGCTTAGT-(CH2) 6-NH2-3’ ；互補(bǔ)探針 S2 的序列為:5’-TGCGTCACTCTGGATACTAAAAGGGTCTGAGGG-3’ ；
[0026]2)基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備
[0027]首先將白血病細(xì)胞K562在IOOOrmp的條件下離心并用IOOmM PBS緩沖液水洗，得K562的細(xì)胞懸浮液，并將Sl/S2-Fe304復(fù)合物加入系列濃度的細(xì)胞懸浮液中，于37V反應(yīng)2小時(shí)，所述系列濃度為2.3，23，230，2300，23000cells/mL ;加入離心后的K562細(xì)胞時(shí)，適體SI與細(xì)胞強(qiáng)作用力迫使S1/S2雙聯(lián)結(jié)構(gòu)打開，將S2釋放到溶液中，磁性分離后，將修飾捕獲探針S3的金電極浸入到S2溶液中，37 °C反應(yīng)Ih以形成S3/S2雙聯(lián)；隨后，在1.ΟμΜ S4、S5混合液中孵化2小時(shí)，并在0.2mM hemin及0.5mM MB溶液中浸泡2小時(shí)，得到基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器；
[0028]所述捕獲探針S3 的序列為:5’-ATCCAGAGTGACGCATAACACCGGTGG-(CH2)6-SH-3，；信號探針 S4 的序列為:5’ -TACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3，，其中下劃線部分能夠形成G-四聯(lián)體DNAzyme ;輔助探針S5的序列為:5’ -GCACCTGGGGGAGTAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3，。
[0029]超級三明治放大策略檢測癌細(xì)胞的原理如圖1所示，首先利用酰胺反應(yīng)將氨基修飾的K562適配體SI連接到羧基化的磁珠上，隨后將S2DNA序列(與細(xì)胞適配體21個(gè)堿基互補(bǔ))通過堿基互補(bǔ)配對原則形成雙聯(lián)，加入目標(biāo)細(xì)胞K562后，由于適配體SI與細(xì)胞間作用力更強(qiáng)，因此將S2序列釋放出來，并且，細(xì)胞濃度與釋放的S2序列濃度成正比，因此，通過檢測S2代替細(xì)胞。隨后，釋放的S2與固定在電極表面的S3雜交，在超級三明治反應(yīng)中，S2的一段可與捕獲探針S3雜交而另一端與信號探針S4雜交；加入輔助DNAS5后，S4、S5會自發(fā)進(jìn)行一系列的雜交連鎖反應(yīng)，因此最終在電極表面形成自組裝DNA納米線；將該修飾電極浸泡在hemin及MB溶液中就會形成超級三明治結(jié)構(gòu),至此超級三明治DNAzyme放大檢測癌細(xì)胞的策略構(gòu)建成功。其中，MB作為電子媒介體，能夠通過靜電作用插入到形成的DNA雙聯(lián)溝槽中，在MB的幫助下,G-四聯(lián)體DNAzyme能夠進(jìn)一步催化還原H2O2,催化性能得到進(jìn)一步提聞。
[0030]如圖2所示，S3修飾電極在無S2 (a)和有S2 (b)存在下，并且分別與S4、S5混合物以及hemin、MB混合物反應(yīng)，以形成超級三明治DNAzyme結(jié)構(gòu),如曲線a所示,無S2時(shí)即使加入大量S4、S5,電化學(xué)信號仍然很小，為10.2 μ Α,這表明電極表面未形成超級三明治結(jié)構(gòu)；如曲線b所示，修飾電極與S2反應(yīng)2h，并分別與S4、S5以及hemin、MB反應(yīng)若干時(shí)間，會得到一個(gè)明顯增強(qiáng)的電化學(xué)信號，為84.8 μ A，說明超級三明治結(jié)構(gòu)已形成。
[0031]將本發(fā)明用于癌癥細(xì)胞的檢測，如圖3所示，首先，將Sl/S2_Fe304復(fù)合物與癌細(xì)胞反應(yīng)I小時(shí)后磁鐵分離，并將S3修飾電極與一定量的上清液反應(yīng)，隨后，將修飾電極分別與S4、S5以及hemin、MB反應(yīng)若干時(shí)間，最后檢測該修飾電極在ImM H2O2中的電化學(xué)響應(yīng)，力口入K562細(xì)胞上清液后，該修飾電極獲得了較強(qiáng)的電化學(xué)信號，因此該方法可成功地用于癌癥細(xì)胞檢測。[0032]不同濃度細(xì)胞與DPV響應(yīng)之間的關(guān)系，如圖4所示，隨著細(xì)胞濃度增加，DPV峰電流越大，并且細(xì)胞濃度的log值與DPV峰電流呈線性關(guān)系，線性方程為:Ι(μΑ)=-5.57-10.(MLog^/cell.mL—1)，R = 0.9952，線性范圍為 2.3_230000cells/mL，檢測限為 2.3cells/mL。
[0033]實(shí)施例2
[0034]一種基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法，包括如下步驟:
[0035]I)制備 Sl/S2_Fe304 復(fù)合物:
[0036]首先將10 μ L10mg/mL的羧基化磁珠用100 μ LlOmM的咪唑-鹽酸溶液清洗三次，加入0.1mMl-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺/0.1mM N-羥基琥珀酰亞胺于37°C孵化30分鐘激活磁珠表面的羧基，隨后用IOOmM pH8.0的PBS緩沖液清洗；之后，加入10 μ L0.1 μ M Κ562適配體SI，37°C，反應(yīng)20小時(shí)，并輕微的震動，將形成的Sl-Fe3O4復(fù)合物用磁鐵分離，并用PBS緩沖液清洗；最后，加入IOyL0.1 μΜ的互補(bǔ)探針S2，37°C反應(yīng)I小時(shí)，形成Sl/S2-Fe304復(fù)合物，并將復(fù)合物于4°C下保存以待后續(xù)使用；
[0037]所述K562 適配體 SI 的序列為:5’ -ATCCAGAGTGACGCAGCAGATCAGTCTATCTTCTCCTGATGGGTTCCTATTTATAGGT GAAGCTGGACACGGTGGCTTAGT-(CH2)6_ΝΗ2_3’ ；互補(bǔ)探針 S2 的序列為:5’-TGCGTCACTCTGGATACTAAAAGGGTCTGAGGG-3’ ；
[0038]2)基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備
[0039]首先將白血病細(xì)胞Κ562在1000rmp的條件下離心并用IOOmM PBS緩沖液水洗，得Κ562的細(xì)胞懸浮液，并將Sl/S2-Fe304復(fù)合物加入系列濃度的細(xì)胞懸浮液中，于37V反應(yīng)2小時(shí)，所述系列濃度為2.3，23，230，2300，23000cells/mL ;加入離心后的K562細(xì)胞時(shí)，適體SI與細(xì)胞強(qiáng)作用力迫使S1/S2雙聯(lián)結(jié)構(gòu)打開，將S2釋放到溶液中，磁性分離后，將修飾捕獲探針S3的金電極浸入到S2溶液中，37°C反應(yīng)Ih以形成S3/S2雙聯(lián)；隨后，在0.1 μ M S4、S5混合液中孵化2小時(shí)，并在0.2mM hemin及0.5mM MB溶液中浸泡2小時(shí)，得到基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器；
[0040]所述捕獲探針S3 的序列為:5’-ATCCAGAGTGACGCATAACACCGGTGG-(CH2)6-SH-3，；信號探針 S4 的序列為:5’ -TACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTG G-3'，其中下劃線部分能夠形成G-四聯(lián)體DNAzyme ;輔助探針S5的序列為:5’ -GCACCTGGGGGAGTAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3，。
[0041]實(shí)施例3:
[0042]一種基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法，包括如下步驟:
[0043]I)制備 Sl/S2_Fe304 復(fù)合物:
[0044]首先將200 μ L10mg/mL的羧基化磁珠用800 μ LlOmM的咪唑-鹽酸溶液清洗三次，加入1.0mMl-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺/1.0mM N-羥基琥珀酰亞胺于37°C孵化30分鐘激活磁珠表面的羧基，隨后用IOOmM pH8.0的PBS緩沖液清洗；之后，加入100 μ L5.0 μ M Κ562適配體SI，37°C，反應(yīng)24小時(shí)，并輕微的震動，將形成的Sl-Fe3O4復(fù)合物用磁鐵分離，并用PBS緩沖液清洗；最后，加入100 μ L5.0 μ M的互補(bǔ)探針S2，37°C反應(yīng)3小時(shí)，形成Sl/S2-Fe304復(fù)合物，并將復(fù)合物于4°C下保存以待后續(xù)使用；
[0045]所述 K562 適配體 SI 的序列為:5’ -ATCCAGAGTGACGCAGCAGATCAGTCTATCTTCTCCTGATGGGTTCCTAITTATAGGTGAAGCTGGACACGGTGGCTTAGT-(CH2) 6-NH2-3’ ；互補(bǔ)探針 S2 的序列為:5’-TGCGTCACTCTGGATACTAAAAGGGTCTGAGGG-3’ ；
[0046]2)基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備
[0047]首先將白血病細(xì)胞K562在IOOOrmp的條件下離心并用IOOmM PBS緩沖液水洗，得K562的細(xì)胞懸浮液，并將Sl/S2-Fe304復(fù)合物加入系列濃度的細(xì)胞懸浮液中，于37V反應(yīng)3小時(shí)，所述系列濃度為2.3，23，230，2300，23000cells/mL ;加入離心后的K562細(xì)胞時(shí)，適體SI與細(xì)胞強(qiáng)作用力迫使S1/S2雙聯(lián)結(jié)構(gòu)打開，將S2釋放到溶液中，磁性分離后，將修飾捕獲探針S3的金電極浸入到S2溶液中，37 °C反應(yīng)3h以形成S3/S2雙聯(lián)；隨后，在5.ΟμΜ S4、S5混合液中孵化4小時(shí)，并在0.2mM hemin及0.5mM MB溶液中浸泡4小時(shí)，得到基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器。
[0048]所述捕獲探針S3 的序列為:5’-ATCCAGAGTGACGCATAACACCGGTGG-(CH2)6-SH-3，；信號探針 S4 的序列為:5’ -TACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3，，其中下劃線部分能夠形成G-四聯(lián)體DNAzyme ;輔助探針S5的序列為:5’ -GCACCTGGGGGAGTAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3，。
[0049]上述雖然結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行了描述，但并非對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該明白，在本發(fā)明的技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本領(lǐng)域技術(shù)人員不需要付出創(chuàng)造性勞動即可做出的各種修改或變形仍在本發(fā)明的保護(hù)范圍以內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)制備Sl/S2-Fe304復(fù)合物: 首先將10?200 μ L10mg/mL的羧基化磁珠用100?800 μ LlOmM的咪唑-鹽酸溶液清洗三次，加入0.1?1.0mMl-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺/0.1?1.0mM N-羥基琥珀酰亞胺于37°C孵化30分鐘激活磁珠表面的羧基，隨后用IOOmM pH8.0的PBS緩沖液清洗；之后，加入10?100μ L0.1?5.ΟμΜ Κ562適配體S1，37°C，反應(yīng)16?24小時(shí)，并輕微的震動，將形成的Sl-Fe3O4復(fù)合物用磁鐵分離，并用PBS緩沖液清洗；最后，加入10?100 μ L0.1?5.0 μ M的互補(bǔ)探針S2，37 V反應(yīng)I?3小時(shí)，形成Sl/S2_Fe304復(fù)合物，并將復(fù)合物于4°C下保存以待后續(xù)使用； 所述 K562 適配體 SI 的序列為:5’ -ATCCAGAGTGACGCAGCAGATCAGTCTATCTTCTCCTGATGGGTTCCTATTTATAGGT GAAGCTGGACACGGTGGCTTAGT-(CH2) 6_ΝΗ2_3’ ；互補(bǔ)探針 S2 的序列為:5’-TGCGTCACTCTGGATACTAAAAGGGTCTGAGGG-3’ ； 2)基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備 首先將白血病細(xì)胞Κ562離心并用IOOmM PBS緩沖液水洗，得Κ562的細(xì)胞懸浮液，并將Sl/S2-Fe304復(fù)合物加入系列濃度的細(xì)胞懸浮液中，于37°C反應(yīng)2?3小時(shí)；加入離心后的K562細(xì)胞時(shí)，適體SI與細(xì)胞強(qiáng)作用力迫使S1/S2雙聯(lián)結(jié)構(gòu)打開，將S2釋放到溶液中，磁性分離后，將修飾捕獲探針S3的金電極浸入到S2溶液中，37°C反應(yīng)I?3h以形成S3/S2雙聯(lián)；隨后，在0.1 — 5.ΟμΜ S4、S5混合液中孵化2?4小時(shí)，并在0.2mM hemin及0.5mM MB溶液中浸泡2?4小時(shí)，以形成超級三明治DNAzyme，得到基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器； 所述捕獲探針 S3 的序列為:5’-ATCCAGAGTGACGCATAACACCGGTGG-(CH2)6-SH-3’ ；信號探針 S4 的序列為:5’ -TACTCCCCCAGGTGCCCCTCAGACCCTTTTAGTGGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGG-3'，其中下劃線部分能夠形成G-四聯(lián)體DNAzyme ;輔助探針S5的序列為:5’ -GCACCTGGGGGAGTAACTAAAAGGGTCTGAGGG-3，。
2.如權(quán)利要求1所述的一種基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述白血病細(xì)胞K562離心速度為lOOOrmp。
3.如權(quán)利要求1所述的一種基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述細(xì)胞懸浮液的系列濃度為2.3，23，230，2300，23000cells/mLo
4.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法制備的一種基于超級三明治DNAzyme的電化學(xué)細(xì)胞傳感器。
【文檔編號】G01N27/26GK103983670SQ201410172964
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2014年4月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月25日
【發(fā)明者】王宗花, 趙凱, 夏建飛, 張菲菲, 遲德玲, 夏霖, 鹿才余, 夏臨華, 李延輝, 夏延致 申請人:青島大學(xué)