精漿聯(lián)檢試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種精漿聯(lián)檢試劑盒，可將精漿內(nèi)含有的九大指標(biāo)pH值、白細(xì)胞酯酶、卵磷脂小體、檸檬酸、鋅、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、果糖和中性α-葡萄糖苷酶聯(lián)合進(jìn)行快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、實(shí)用的一次性檢測(cè)，對(duì)前列腺、附睪、精囊腺等腺體功能進(jìn)行綜合性評(píng)價(jià)，對(duì)引起前列腺炎、生殖系統(tǒng)炎癥、性功能障礙以及不孕不育相關(guān)疾病的臨床診斷和治療提供了詳細(xì)的相關(guān)信息，填補(bǔ)了市場(chǎng)空缺，易于在臨床上推廣。
【專利說(shuō)明】精漿聯(lián)檢試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)測(cè)定【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是涉及一種體外診斷用精漿聯(lián)檢試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]精漿是男性附屬性腺分泌物的混合液，有輸送精子、提供精子營(yíng)養(yǎng)、激發(fā)精子活力等作用。對(duì)精漿進(jìn)行分析可以直接、客觀地評(píng)估男性的生育能力、查找男性不育原因，為人工受精提供精子的質(zhì)量依據(jù)，同時(shí)還可以檢測(cè)生殖系統(tǒng)的炎癥及腫瘤，而且對(duì)前列腺、附睪和精囊腺的功能進(jìn)行客觀評(píng)價(jià)，為相關(guān)疾病的診斷、治療和預(yù)后監(jiān)測(cè)提供幫助。
[0003]精液中白細(xì)胞的含量是診斷生殖系統(tǒng)炎性反應(yīng)和不育的重要指標(biāo)，臨床上通常以白細(xì)胞的多少來(lái)診斷生殖系統(tǒng)感染或炎性反應(yīng)，但目前認(rèn)為這種診斷方法是不可靠的。在精液檢查時(shí)，常見(jiàn)到一些圓形細(xì)胞，未經(jīng)染色很難分類鑒別，若把這些圓細(xì)胞誤認(rèn)為是白細(xì)胞，就可能導(dǎo)致錯(cuò)誤診斷。雖然正甲苯胺過(guò)氧化物酶可以區(qū)別白細(xì)胞和其他的圓形細(xì)胞，但是操作費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，不利于臨床快速、多標(biāo)本量的檢測(cè)。
[0004]精液中的卵磷脂小體來(lái)源于前列腺液，既可作診斷慢性前列腺炎的參考指標(biāo)，又可作為判斷性功能狀態(tài)的客觀指標(biāo)。目前，臨床主要通過(guò)鏡檢的方式檢測(cè)精液中的卵磷脂小體，由于經(jīng)驗(yàn)和儀器的誤差，會(huì)造成結(jié)果的客觀性降低。
[0005]精漿中的檸檬酸、鋅和酸性磷酸酶主要來(lái)源于前列腺，是WHO公認(rèn)的反映前列腺分泌功能的指標(biāo)?；加星傲邢傺讜r(shí)，這三個(gè)指標(biāo)會(huì)下降。目前，檢測(cè)這三個(gè)指標(biāo)采用的是手工生化反應(yīng)或者酶法，使用分光光度計(jì)或者生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)。但所用試劑價(jià)格高，操作繁瑣，且穩(wěn)定性較差、批間差較大，不能很好地滿足現(xiàn)有臨床的需求。
[0006]彈性蛋白酶可作為靜止型生殖道感染的診斷及愈后監(jiān)測(cè)指標(biāo)，其可靠性得到了世界衛(wèi)生組織的認(rèn)可。目前，彈性蛋白酶的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法有:免疫細(xì)胞化學(xué)法、ELISA方法。但現(xiàn)有檢測(cè)方法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、操作繁瑣，且需要特殊儀器，無(wú)法滿足臨床快速、簡(jiǎn)便的需求。
[0007]精漿果糖是男性副性腺精囊所分泌的特征性物質(zhì)，果糖含量還能間接反映睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮的功能。目前，檢測(cè)果糖的方法主要有生化顯色法和酶法，采用手工和半自動(dòng)操作，加樣程序多，操作繁瑣，給臨床應(yīng)用帶來(lái)極大的不便。
[0008]中性α -葡萄糖苷酶是附睪分泌功能的標(biāo)志酶和特異性酶。精漿中性α -葡萄糖苷酶結(jié)合其他指標(biāo)如精漿果糖、精子染色等的檢測(cè)，還可實(shí)現(xiàn)梗阻性無(wú)精子癥患者的梗阻部位定位，分泌型或排泄型無(wú)精子癥的鑒別、附睪水平上局部梗阻的判斷等。目前，精漿中性α -葡萄糖苷酶檢測(cè)的方法為化學(xué)比色法，該法多為手工或半自動(dòng)操作，加樣程序多，操作步驟復(fù)雜，試劑和樣品混勻一定時(shí)間后，通過(guò)分光光度計(jì)逐一進(jìn)行比色測(cè)定，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線回算出結(jié)果，耗時(shí)耗力，且人為誤差也比較大。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0009]本發(fā)明的目的在于提供一種快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、實(shí)用的精漿聯(lián)檢試劑盒，該試劑盒可對(duì)多種腺體功能進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，為相關(guān)疾病的診斷和治療提供準(zhǔn)確信息。
[0010]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術(shù)方案:
本發(fā)明所述的精漿聯(lián)檢試劑盒，它包括至少五種檢測(cè)試劑，所述五種檢測(cè)試劑為白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑、卵磷脂小體檢測(cè)試劑、酸性磷酸酶檢測(cè)試劑、果糖檢測(cè)試劑和中性α -葡萄糖苷酶檢測(cè)試劑，其中
白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑由Tris-HCl緩沖液，糖和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液配制而成；所述Tris-HCl緩沖液的濃度為0.0r2mol/L, pH 7.(Tl0.0,所述糖為蔗糖、葡萄糖、海藻糖或乳糖，濃度為3(T60g/L，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液的濃度為0.ΟΟm?mol/L ；
卵磷脂小體檢測(cè)試劑由硼酸鹽緩沖液、鋅試劑溶液和氯化鋅溶液配制而成；所述硼酸鹽緩沖液的pH為疒10，其中氯化鉀:0.1~100g/L，硼酸:0.l~100g/L，氫氧化鈉:0.01~IOg/L ;所述鋅試劑溶液中含有0.ri00g/L的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；所述氯化鋅溶液中氯化鋅含量為0.ri00g/L ；
酸性磷酸酶檢測(cè)試劑中包括0.r75g/L的檸檬酸，0.r90g/L的磷酸苯二鈉，0.1~65g/L的4-氨基安替比林，0.1~88g/L的氫氧化鈉；
果糖檢測(cè)試劑由鹽酸或硫酸10飛0%，間苯二酚濃度為0.1~2.0g/L配制的底物溶液組成；或由濃度為250-300μπιΟ1/1的碘硝基四唑紫、氯化硝基四氮唑藍(lán)或噻唑藍(lán)配制的底物溶液組成；
中性α-葡萄糖苷酶檢測(cè)試劑由緩沖液、對(duì)硝基苯酚吡喃葡萄糖苷溶液配制而成:其中緩沖液中磷酸氫二鉀12.1~46.4g/L,磷酸二氫鉀21.4~43.6g/L，SDS 5.0~22.5g/L，pH
6.(T9.0，對(duì)硝基苯酚吡喃葡萄糖苷溶液的濃度為0.00rimol/L ；
或由緩沖液、底物溶液配制而成:其中緩沖液中磷酸氫二鉀12.1~46.4g/L,磷酸二氫鉀21.1~43.6g/L，pH 6.(T9.0，底物溶液的濃度為0.f lg/L，底物為X-a -D吡喃葡萄糖。
[0011]為給臨床提供足夠多的、更加詳細(xì)的指標(biāo)，它還包括pH值檢測(cè)試劑、檸檬酸檢測(cè)試劑、鋅檢測(cè)試劑、彈性蛋白酶檢測(cè)試劑；其中
PH值檢測(cè)試劑由0.5^100g/L的溴百里酚藍(lán)鈉鹽和純化水配制而成；
檸檬酸檢測(cè)試劑由硫酸鐵銨溶液和磺基水楊酸溶液按1:15的比例配制而成，其中硫酸鐵銨溶液的濃度為0.00f lmol/L，磺基水楊酸溶液的濃度為0.00f lmol/L ；
鋅檢測(cè)試劑由硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按10:1的比例配制而成，其中硼酸鹽緩沖液的PH值為7.0-10.0，包括以下組分:氯化鉀0.1~100g/L，硼酸0.f 100g/L，氫氧化鈉0.0fl0g/L;所述鋅試劑溶液中含有0.ri00g/L的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；
彈性蛋白酶檢測(cè)試劑由pH 6.(T9.0,0.m?.0M的磷酸鹽或者Tris-HCl緩沖液與濃度0.r5mg/L的地衣紅彈性蛋白或剛果紅彈性蛋白配制而成
本發(fā)明試劑盒中還包括酸性磷酸酶顯色液或/和果糖脫氫酶溶液或/和中性α-葡萄糖苷酶顯色液或/和彈性蛋白酶顯色液；其中
酸性磷酸酶顯色液中包括鐵氰化鉀0.f 100g/L、碳酸氫鈉0.ri00g/L和氫氧化鈉
0.0TlOg/L ；果糖脫氫酶溶液由PH4.5^5.0、200^300 μ mol/L磷酸鉀或磷酸鈉緩沖液和濃度為
2.0-6.0U/ml的果糖脫氫酶組成；
中性α -葡萄糖苷酶顯色液為0.1~2.0mol/L的氯化鐵溶液；
彈性蛋白酶顯色液中含有50-80%的酸液，所述酸液為鹽酸、乙酸、硝酸或硫酸。
[0012]所述檢測(cè)試劑可以固化在棉漿紙、濾紙、玻璃纖維或塑料的固相載體上，也可以直接配制成液體使用。 [0013]為方便運(yùn)輸和在臨床上使用，本試劑盒還包括開設(shè)有多個(gè)反應(yīng)孔的檢測(cè)卡體，所述檢測(cè)試劑固化在棉漿紙、濾紙、玻璃纖維或塑料的固相載體上后制作成試劑墊分別置于所述反應(yīng)孔內(nèi)。
[0014]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于一次性檢測(cè)指標(biāo)多且檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，顯示結(jié)果直觀，將原來(lái)需要分別進(jìn)行檢測(cè)的一些指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，為臨床提供了一種快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、實(shí)用的聯(lián)檢試劑盒。本發(fā)明試劑盒中增加了卵磷脂小體的指標(biāo)檢測(cè)，更好的為診斷前列腺炎提供了依據(jù)，對(duì)原來(lái)檢測(cè)某些指標(biāo)所用的試劑及方法均進(jìn)行了改進(jìn)，不僅操作更加方便，反應(yīng)時(shí)間大大縮短，且判讀結(jié)果更容易。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面通過(guò)具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明試劑盒的制備方法和使用方法。
[0016]實(shí)施例1:
本發(fā)明所述的精漿聯(lián)檢試劑盒，包括標(biāo)本稀釋液，顯色液以及設(shè)置有九個(gè)反應(yīng)孔的檢測(cè)卡體，在九個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)分別設(shè)置有用于檢測(cè)PH值、白細(xì)胞酯酶、卵磷脂小體、檸檬酸、鋅、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、果糖和中性α-葡萄糖苷酶的固體試劑，該固體試劑是含有檢測(cè)試劑的由棉漿紙、濾紙、玻璃纖維或塑料等固相載體制作的試劑墊，九個(gè)反應(yīng)孔中試劑墊的具體制作方法如下:
1、檢測(cè)pH值的固體試劑墊:將0.5~100g/L的溴百里酚藍(lán)鈉鹽和20倍的純化水配制的溶液中，取10 μ L置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)即可；
2、檢測(cè)白細(xì)胞酯酶的固體試劑墊:由Tris-HCl緩沖液，糖和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液配制后涂覆于載體上，，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)即可；其中Tris-HCl緩沖液的濃度為0.0f2mol/L，pH 7.(Tl0.0 ;糖為蔗糖、葡萄糖、海藻糖或乳糖，濃度為30~60g/L ；5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液的濃度為0.001~I mol/L ；
先制備Tris-HCl緩沖液,再加入海藻糖(或其他糖類)，最后加入5-溴-4-氯-3- Π引哚乙酸酯溶液，得到液體試劑，取10 μ L液體試劑置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，除濕干燥即可；
3、檢測(cè)卵磷脂小體的固體試劑墊:由硼酸鹽緩沖液、鋅試劑溶液和氯化鋅溶液反應(yīng)后涂覆于載體上，經(jīng)真空冷凍干燥而成；硼酸鹽緩沖液的PH為7~10，其中氯化鉀:0.riOOg/L，硼酸:0.l~100g/L，氫氧化鈉:0.0廣1(^/1;鋅試劑溶液中含有0.ri00g/L的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；氯化鋅溶液中氯化鋅含量為
0.ri00g/L ；
首先將硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按1:1比例進(jìn)行反應(yīng)，得到的產(chǎn)物記為A，取氯化鋅溶液500 μ L，加入20 μ L生理鹽水，得到的溶液記為B，將A和B按1:5的比例進(jìn)行反應(yīng)，得到的產(chǎn)物記為C，取10 μ L的產(chǎn)物C置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，經(jīng)真空冷凍干燥即可；
4、檢測(cè)檸檬酸的固體試劑墊:由硫酸鐵銨溶液(0.00rimol/L)和磺基水楊酸溶液(0.001~lmol/L)按1:15的比例配制后，取10 μ L置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)即可；
5、檢測(cè)鋅的固體試劑墊:由硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按10:1的比例反應(yīng)、稀釋后置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，經(jīng)真空冷凍干燥而成；其中的硼酸鹽緩沖液包括以下組份:氯化鉀0.f 100g/L，硼酸0.f 100g/L，氫氧化鈉0.0ri0g/L, pH值7.(Tl0.0 ;鋅試劑溶液中含有0.ri00g/L的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；
首先制備硼酸鹽緩沖液，將硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按10:1的比例反應(yīng)后，再加入6倍的硼酸鹽緩沖液進(jìn)行稀釋，然后取稀釋后的液體試劑IOyL置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，經(jīng)真空冷凍干燥即可；
6、檢測(cè)酸性磷酸酶的固體試劑墊:將包含有檸檬酸0.r75g/L,磷酸苯二鈉0.1~90δ/L，4-氨基安替比林0.l~65g/L，氫氧化鈉0.r88g/L組分的底物液倍比稀釋2次后得到的稀釋液IOyL置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)即可；
其中所用的酸性磷酸酶顯色液中包括以下組分:鐵氰化鉀0.fl00g/L、碳酸氫鈉
0.1~100g/L、氫氧化鈉 0.01 ~10g/L ；
7、檢測(cè)彈性蛋白酶的固體試劑墊:由緩沖液、底物溶液配制后取10μ L置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)而成；其中緩沖液為0.1~1.0M的磷酸鹽或者Tris-HCl緩沖液，pH 6.(T9.0，底物溶液為地衣紅彈性蛋白或剛果紅彈性蛋白，濃度0.1~5mg/L ；
8、檢測(cè)果糖的固體試劑墊:底物溶液配制后，取10μ L置于直徑5.5mm的載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)即可；其中底物溶液中鹽酸或者硫酸1(T60% (V/V)，間苯二酚濃度為0.1~2.0g/L ；
9、檢測(cè)中性α-葡萄糖苷酶固體試劑墊:由緩沖液、對(duì)硝基苯酚吡喃葡萄糖苷溶液配制后，取10 μ L置于直徑5.5mm的載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)即可；其中緩沖液中的磷酸氫二鉀12.1~46.4g/L，磷酸二氫鉀21.1~43.6g/L，SDS 5.0-22.5g/L，pH6.(T9.0 ;對(duì)硝基苯酚吡喃葡萄糖苷溶液的濃度為0.0Of lmol/L。
[0017]其中所用的中性α -葡萄糖苷酶顯色液為0.1~2.0mol/L的氯化鐵溶液。
[0018]本試劑盒的檢測(cè)方法如下:
1、標(biāo)本預(yù)處理:將精液標(biāo)本1000g離心10分鐘,得到標(biāo)本液；
2、在九個(gè)反應(yīng)孔中分別加入標(biāo)本液25μI ;
3、溫育:37°C,15min；
4、加顯色液:在第6孔(酸性磷酸酶檢測(cè)孔)中加入酸性磷酸酶顯色液25
μ 1，在第9孔(中性α-葡萄糖苷酶檢測(cè)孔)中加入中性α-葡萄糖苷酶顯色液25μ I;
5、記錄結(jié)果:觀察顏色變化，和試劑盒提供的比色卡進(jìn)行比對(duì)，判讀結(jié)果:
第I ?L，pH指標(biāo):陰性顯黃色，弱陽(yáng)性顯綠色，強(qiáng)陽(yáng)性顯藍(lán)色。
[0019]第2孔，白細(xì)胞指標(biāo):陰性顯無(wú)色，弱陽(yáng)性顯綠色，強(qiáng)陽(yáng)性顯藍(lán)色；
第3孔，卵磷脂小體指標(biāo):陰性顯粉紅色，陽(yáng)性顯藍(lán)色；第4孔，檸檬酸指標(biāo):陰性顯米黃色，陽(yáng)性顯橙紅色；
第5孔，鋅指標(biāo):陰性顯藍(lán)色，陽(yáng)性顯桔紅色；
第6孔，酸性磷酸酶指標(biāo):陰性顯紅色，弱陽(yáng)性顯橙紅色，強(qiáng)陽(yáng)性顯黃色；
第7孔，彈性蛋白酶指標(biāo):陰性顯白色，弱陽(yáng)性顯淺紅色，強(qiáng)陽(yáng)性顯深紅色；
第8孔，果糖指標(biāo):陰性顯淡黃色，弱陽(yáng)性顯紅色，強(qiáng)陽(yáng)性顯棕紅色；
第9孔，中性α -葡萄糖苷酶指標(biāo):陰性顯白色，弱陽(yáng)性顯紫色，強(qiáng)陽(yáng)性顯藍(lán)紫色。
[0020]實(shí)施例2:
本發(fā)明所述的精漿聯(lián)檢試劑盒，包括標(biāo)本稀釋液，顯色液以及設(shè)置有九個(gè)反應(yīng)孔的檢測(cè)卡體，在九個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)分別設(shè)置有用于檢測(cè)PH值、白細(xì)胞酯酶、卵磷脂小體、檸檬酸、鋅、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、果糖和中性α-葡萄糖苷酶的固體試劑，該固體試劑是含有檢測(cè)試劑的由棉漿紙、濾紙、玻璃纖維或塑料等固相載體制作的試劑墊，九個(gè)反應(yīng)孔中試劑墊的具體制作方法如下:
1、檢測(cè)pH值的固體試劑墊:將0.5~100g/L的溴百里酚藍(lán)鈉鹽和20倍的純化水配制的溶液中，取10 μ L置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)即可；
2、檢測(cè)白細(xì)胞酯酶的固體試劑墊:由Tris-HCl緩沖液，糖和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液配制后涂覆于載體上`，，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)即可；其中Tris-HCl緩沖液的濃度為0.0f2mol/L，pH 7.(Tl0.0 ;糖為蔗糖、葡萄糖、海藻糖或乳糖，濃度為30~60g/L ；5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液的濃度為0.001~I mol/L ；
先制備Tris-HCl緩沖液,再加入海藻糖(或其他糖類)，最后加入5-溴-4-氯-3- Π引哚乙酸酯溶液，得到液體試劑，取10 μ L液體試劑置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，除濕干燥即可；
3、檢測(cè)卵磷脂小體的固體試劑墊:由硼酸鹽緩沖液、鋅試劑溶液和氯化鋅溶液反應(yīng)后涂覆于載體上，經(jīng)真空冷凍干燥而成；硼酸鹽緩沖液的PH為廣10，其中氯化鉀:0.rioog/L，硼酸:0.l~100g/L，氫氧化鈉:0.01~10g/L ;鋅試劑溶液中含有0.1~100g/L的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；氯化鋅溶液中氯化鋅含量為
0.ri00g/L ；
首先將硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按1:1比例進(jìn)行反應(yīng)，得到的產(chǎn)物記為A，取氯化鋅溶液500 μ L，加入20 μ L生理鹽水，得到的溶液記為B，將A和B按1:5的比例進(jìn)行反應(yīng)，得到的產(chǎn)物記為C，取10 μ L的產(chǎn)物C置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，經(jīng)真空冷凍干燥即可；
4、檢測(cè)檸檬酸的固體試劑墊:由硫酸鐵銨溶液(0.00rimol/L)和磺基水楊酸溶液(0.00flmol/L)按1:15的比例配制后，取10 μ L置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)即可；
5、檢測(cè)鋅的固體試劑墊:由硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按10:1的比例反應(yīng)、稀釋后置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，經(jīng)真空冷凍干燥而成；其中的硼酸鹽緩沖液包括以下組份:氯化鉀0.f 100g/L，硼酸0.f 100g/L，氫氧化鈉0.0ri0g/L, pH值7.(Tl0.0 ;鋅試劑溶液中含有0.ri00g/L的5- (2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)_3_苯基甲單鈉鹽；
首先制備硼酸鹽緩沖液，將硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按10:1的比例反應(yīng)后，再加入6倍的硼酸鹽緩沖液進(jìn)行稀釋，然后取稀釋后的液體試劑10 μ L置于直徑5.5_的試劑墊載體上，經(jīng)真空冷凍干燥即可；
6、檢測(cè)酸性磷酸酶的固體試劑墊:將包含有檸檬酸0.r75g/L,磷酸苯二鈉0. 90δ/L，4-氨基安替比林0.l~65g/L，氫氧化鈉0.r88g/L組分的底物液倍比稀釋2次后得到的稀釋液IOyL置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)即可；
其中所用的酸性磷酸酶顯色液中包括以下組分:鐵氰化鉀0.fl00g/L、碳酸氫鈉
0.1~100g/L、氫氧化鈉 0.01 ~10g/L ；
7、檢測(cè)彈性蛋白酶的固體試劑墊:由緩沖液、底物溶液配制后取10μ L置于直徑5.5mm的試劑墊載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)而成；其中緩沖液為0. 1.0M的磷酸鹽或者Tris-HCl緩沖液，pH 6.(T9.0，底物溶液為地衣紅彈性蛋白或剛果紅彈性蛋白，濃度0.1~5mg/L ；
其中所用的彈性蛋白酶顯色液中包括以下組分:鹽酸、乙酸、硝酸或硫酸溶 液 50~80% (V/V)。
[0021]8、檢測(cè)果糖的固體試劑墊:底物溶液配制后,取10 μ L置于直徑5.5mm的載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度< 30%)即可；其中底物溶液中含有碘硝基四唑紫、氯化硝基四氮唑藍(lán)或噻唑藍(lán)，濃度為250-300 μ mol/L ；
其中檢測(cè)果糖所用的果糖脫氫酶溶液由緩沖液和果糖脫氫酶組成，緩沖液為200^300 μ mol/L的磷酸鉀或磷酸鈉，pH4.5~5.0 ;果糖脫氫酶濃度為:2.0~6.0U/ml。
[0022]9、檢測(cè)中性α -葡萄糖苷酶固體試劑墊:由緩沖液、底物溶液配制后涂覆于載體上，除濕干燥(溫度18~25°C，濕度≤30%)而成；其中緩沖液中磷酸氫二鉀12. 46.4g/L,磷酸二氫鉀21. 43.6g/L，pH 6.(T9.0，底物溶液的濃度為0.f lg/L，底物為X-a -D吡喃葡萄糖。
[0023]本試劑盒的檢測(cè)方法如下:
1、標(biāo)本預(yù)處理:將精液標(biāo)本1000g離心10分鐘,得到標(biāo)本液；
2、在九個(gè)反應(yīng)孔中分別加入標(biāo)本液25μ I ;第8孔(果糖檢測(cè)孔)中加果 糖脫氫酶溶液25 μ I ;
3、溫育:37°C,15min；
4、加顯色液:在第6孔(酸性磷酸酶檢測(cè)孔)中加入酸性磷酸酶顯色液25 μ 1，在第7孔(彈性蛋白酶測(cè)試孔)中加入彈性蛋白酶顯色液25μ I ;
5、記錄結(jié)果:觀察顏色變化，和試劑盒提供的比色卡進(jìn)行比對(duì)，判讀結(jié)果:
第I ?L，pH指標(biāo):陰性顯黃色，弱陽(yáng)性顯綠色，強(qiáng)陽(yáng)性顯藍(lán)色；
第2孔，白細(xì)胞指標(biāo):陰性顯無(wú)色，弱陽(yáng)性顯綠色，強(qiáng)陽(yáng)性顯藍(lán)色；
第3孔，卵磷脂小體指標(biāo):陰性顯粉紅色，陽(yáng)性顯藍(lán)色；
第4孔，檸檬酸指標(biāo):陰性顯米黃色，陽(yáng)性顯橙紅色；
第5孔，鋅指標(biāo):陰性顯藍(lán)色，陽(yáng)性顯桔紅色；
第6孔，酸性磷酸酶指標(biāo):陰性顯紅色，弱陽(yáng)性顯橙紅色，強(qiáng)陽(yáng)性顯黃色；
第7孔，彈性蛋白酶指標(biāo):陰性顯白色，弱陽(yáng)性顯淺藍(lán)色，強(qiáng)陽(yáng)性顯深藍(lán)色；
第8孔，果糖指標(biāo):陰性顯淡黃色，弱陽(yáng)性淺藍(lán)色，強(qiáng)陽(yáng)性顯深藍(lán)色；
第9孔，中性α -葡萄糖苷酶指標(biāo):陰性顯白色，弱陽(yáng)性顯淺綠色，強(qiáng)陽(yáng)性顯藍(lán)深綠色。
【權(quán)利要求】
1.一種精漿聯(lián)檢試劑盒，其特征在于:它包括至少五種檢測(cè)試劑，所述五種檢測(cè)試劑為白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑、卵磷脂小體檢測(cè)試劑、酸性磷酸酶檢測(cè)試劑、果糖檢測(cè)試劑和中性α -葡萄糖苷酶檢測(cè)試劑，其中 白細(xì)胞酯酶檢測(cè)試劑由Tris-HCl緩沖液，糖和5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液配制而成；所述Tris-HCl緩沖液的濃度為0.0r2mol/L, pH 7.(Tl0.0,所述糖為蔗糖、葡萄糖、海藻糖或乳糖，濃度為3(T60g/L，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸酯溶液的濃度為0.ΟΟ1mol/L ； 卵磷脂小體檢測(cè)試劑由硼酸鹽緩沖液、鋅試劑溶液和氯化鋅溶液配制而成；所述硼酸鹽緩沖液的PH為7~10，其中氯化鉀:0.1~100g/L，硼酸:0.l~100g/L，氫氧化鈉:0.01~IOg/L ;所述鋅試劑溶液中含有0.ri00g/L的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽；所述氯化鋅溶液中氯化鋅含量為0.ri00g/L ； 酸性磷酸酶檢測(cè)試劑中包括0.r75g/L的檸檬酸，0.r90g/L的磷酸苯二鈉，.0.1~65g/L的4-氨基安替比林，0.1~88g/L的氫氧化鈉； 果糖檢測(cè)試劑由鹽酸或硫酸10飛0%，間苯二酚濃度為0.1~2.0g/L配制的底物溶液組成；或由濃度為250-300μπιΟ1/1的碘硝基四唑紫、氯化硝基四氮唑藍(lán)或噻唑藍(lán)配制的底物溶液組成； 中性α-葡萄糖苷酶檢測(cè)試劑由緩沖液、對(duì)硝基苯酚吡喃葡萄糖苷溶液配制而成:其中緩沖液中磷酸氫二鉀12. 46.4g/L,磷酸二氫鉀21.4~43.6g/L，SDS 5.0~22.5g/L，pH.6.(T9.0，對(duì)硝基苯酚吡喃葡萄糖苷溶液的濃度為0.00rimol/L ； 或由緩沖液、底物溶液配制而成:其中緩沖液中磷酸氫二鉀12.4~46.4g/L,磷酸二氫鉀21.4~43.6g/L，pH 6.(T9.0，底物溶液的濃度為0.f lg/L，底物為X-a -D吡喃葡萄糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精漿聯(lián)檢試劑盒，其特征在于:它還包括PH值檢測(cè)試劑、檸檬酸檢測(cè)試劑、鋅檢測(cè)試劑、彈性蛋白酶檢測(cè)試劑；其中 PH值檢測(cè)試劑由0.5^100g/L的溴百里酚藍(lán)鈉鹽和純化水配制而成； 檸檬酸檢測(cè)試劑由硫酸鐵銨溶液和磺基水楊酸溶液按1:15的比例配制而成，其中硫酸鐵銨溶液的濃度為0.0Of lmol/L，磺基水楊酸溶液的濃度為0.00f lmol/L ； 鋅檢測(cè)試劑由硼酸鹽緩沖液和鋅試劑溶液按10:1的比例配制而成，其中硼酸鹽緩沖液的PH值為7.0-10.0，包括以下組分:氯化鉀0.f 100g/L，硼酸0.f 100g/L，氫氧化鈉.0.0fl0g/L;所述鋅試劑溶液中含有0.ri00g/L的5-(2-羧基苯基)-1-(2-羥基-5-磺基苯基)-3-苯基甲單鈉鹽； 彈性蛋白酶檢測(cè)試劑由pH 6.(T9.0,0.1~1 .0M的磷酸鹽或者Tris-HCl緩沖液與濃度.0.r5mg/L的地衣紅彈性蛋白或剛果紅彈性蛋白配制而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的精漿聯(lián)檢試劑盒，其特征在于:它包括酸性磷酸酶顯色液或/和果糖脫氫酶溶液或/和中性α-葡萄糖苷酶顯色液或/和彈性蛋白酶顯色液；其中 酸性磷酸酶顯色液中包括鐵氰化鉀0.f 100g/L、碳酸氫鈉0.ri00g/L和氫氧化鈉.0.0TlOg/L ； 果糖脫氫酶溶液由PH4.5飛.0、200^300 μ mo 1/L磷酸鉀或磷酸鈉緩沖液和濃度為.2.0-6.0U/ml的果糖脫氫酶組成；中性α -葡萄糖苷酶顯色液為0.1~2.0mol/L的氯化鐵溶液； 彈性蛋白酶顯色液中含有50-80%的酸液，所述酸液為鹽酸、乙酸、硝酸或硫酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的精漿聯(lián)檢試劑盒，其特征在于:所述檢測(cè)試劑固化在棉漿紙、濾紙、玻璃纖維或塑料的固相載體上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的精漿聯(lián)檢試劑盒，其特征在于:它包括開設(shè)有多個(gè)反應(yīng)孔的檢測(cè)卡體，所述檢測(cè)試劑固化在棉漿紙、濾紙、玻璃纖維或塑料的固相載體上后制作成試劑墊分別置于所述反應(yīng)孔內(nèi)。
【文檔編號(hào)】G01N33/52GK103760331SQ201410047717
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2014年2月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月11日
【發(fā)明者】張中洲, 婁斌, 曹藝甜, 劉功成, 付光宇, 李曉霞, 王勝啟, 陸瑩 申請(qǐng)人:鄭州安圖生物工程股份有限公司