一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實用新型涉及一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，特別涉及一種人絨毛膜促性腺激素（HCG）和細菌性陰道炎（BV）聯(lián)檢試劑盒，屬于檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。其包括HCG免疫層析檢測試紙條，以及pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙中一種或多種，較佳地，免疫層析檢測試紙條的結(jié)合墊和層析膜上分別包被相應(yīng)的免疫標記抗體和檢測抗體，免疫層析檢測試紙條與pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙中一種或多種并列設(shè)置或置于底板的上下表面，本實用新型可以通過自我取樣，同時檢測HCG和細菌性陰道炎，其聯(lián)檢結(jié)果為優(yōu)生優(yōu)育提供有力證據(jù)，簡單方便，適合大規(guī)模推廣應(yīng)用。
【專利說明】一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，特別涉及一種人絨毛膜促性腺激素(HCG)和細菌性陰道炎(BV)聯(lián)檢試劑盒，屬于檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]人絨毛膜促性腺激素(HCG)，是由胎盆合體滋養(yǎng)細胞分泌的一種具有促進性腺發(fā)育的糖蛋白激素，存在于孕婦的血液、尿液、初乳、羊水和胎兒體內(nèi)，在妊娠早期HCG分泌量增高極快，至妊娠8-10周時血清濃度達到高峰，在妊娠初期，規(guī)則HCG在血清中比例最高，其含量在血、尿中基本平行，HCG相關(guān)分子的測定在臨床上有廣泛應(yīng)用，包括:用于早期妊娠的診斷；提示異常妊娠的出現(xiàn)(如先兆流產(chǎn)、唐氏綜合征等)；診斷和監(jiān)測妊娠滋養(yǎng)層疾病(葡萄胎、絨癌等)等。
[0003]細菌性陰道炎(BV)是指一類在細菌學(xué)上表現(xiàn)為生殖道正常菌群(產(chǎn)H2O2的乳酸桿菌)數(shù)量減少，代之以一組厭氧群(類桿菌屬族、加德納菌、莫比倫氏菌屬、人型支原體屬和消化鏈球菌屬等)數(shù)量增加所致的臨床癥侯群。BV對母親和胎兒及嬰兒的健康可引起嚴重后果，如:宮腔感染，盆腔感染及絨毛羊膜感染，產(chǎn)后感染，先兆流產(chǎn)，早產(chǎn)，胎膜早破，低體重兒等，因而對其的準確診斷具有非常重要的意義。臨床的標準是Amsel金標準:①陰道分泌物呈乳液狀；②pH>4.5;③胺試驗陽性；④陰道分泌物中檢出線索細胞(>20%)。如果④陰性，但涂片革蘭氏染色可見大量革蘭氏陰性球桿菌，無或偶見乳酸菌亦可判為BV陽性。上述方法均對檢驗人員有經(jīng)驗要求，診斷標準不易掌握，需要顯微鏡涂片，費時費力，不便于門診臨床快速檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本實用新型的目的在于克服上述不足之處，提供一種人絨毛膜促性腺激素(HCG)和細菌性陰道炎(BV)聯(lián)檢試劑盒，通過自我取樣，可以快速檢測細菌性陰道炎，同時可以準確判別是否有早期妊娠。
[0005]按照本實用新型提供的技術(shù)方案，一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板，在第一底板的一面上設(shè)置有層析膜，層析膜的前端設(shè)置不透明保護膜，不透明保護膜的前端設(shè)置箭頭；箭頭的前端設(shè)置結(jié)合墊；層析膜上還依次設(shè)置有檢測線和質(zhì)控線，層析膜后端設(shè)置有吸水墊。
[0006]還包括感染指標檢測區(qū)。
[0007]所述感染指標檢測區(qū)附著于第二底板上或復(fù)合于第一底板的任意一個表面上。
[0008]在第一底板的一面上設(shè)置有層析膜，層析膜的前端設(shè)置結(jié)合墊，結(jié)合墊的前方還設(shè)置樣品墊；層析膜上還依次設(shè)置有檢測線和質(zhì)控線，層析膜后端設(shè)置有吸水墊；第一底板的下表面上還設(shè)置有感染指標檢測區(qū)。
[0009]所述感染指標檢測區(qū)設(shè)置有pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙中的一種或幾種。[0010]所述附著pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙的第一底板或第二底板的材料為PET、PVC、PE、PP或PS中的一種，長為10_300mm，寬 2-30mm,厚度為 0.1-1.5mm。
[0011]所述pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙的基礎(chǔ)材料為纖維素濾紙，玻璃纖維濾紙，層析紙，聚酯膜或尼龍膜；所述試紙的形狀為正方形，長方形，圓形，橢圓形，三角形，菱形或梯形；大小為長1-30 mm;寬1-30 mm ;厚度
0.01-5 mm ;多種試紙之間的間距為1-30 mm。
[0012]所述結(jié)合墊(I)上包被有抗人絨毛膜促性腺激素HCG金標記抗體。
[0013]所述層析膜(6)上包被有抗人絨毛膜促性腺激素HCG檢測抗體。
[0014]本實用新型的有益效果:本實用新型可以通過自我取樣，可以快速檢測細菌性陰道炎，同時可以準確判別是否有早期妊娠，簡單方便，適合大規(guī)模推廣應(yīng)用。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0015]圖1是實施例1第一底板10結(jié)構(gòu)示意圖。
[0016]圖2是實施例1第二底板11結(jié)構(gòu)示意圖。
[0017]圖3是實施例2結(jié)構(gòu)示意圖。
[0018]圖4是實施例3結(jié)構(gòu)示意圖。
[0019]圖5是實施例4結(jié)構(gòu)示意圖。
[0020]圖6是實施例1感染指標檢測區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖。
[0021]圖7是實施例2感染指標檢測區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖。
[0022]圖8是實施例3感染指標檢測區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖。
[0023]圖9是實施例4感染指標檢測區(qū)結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實施方式】
[0024]實施例1
[0025]如圖1、2、5所示，一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板10，在第一底板10的一面上設(shè)置有層析膜6，層析膜6的前端設(shè)置不透明保護膜3，不透明保護膜3的前端設(shè)置箭頭2 ;箭頭2的前端設(shè)置結(jié)合墊I ;層析膜6上還依次設(shè)置有檢測線4和質(zhì)控線5，層析膜6后端設(shè)置有吸水墊7。
[0026]還包括感染指標檢測區(qū)8。所述感染指標檢測區(qū)8附著于第一底板10的上表面。
[0027]所述感染指標檢測區(qū)8設(shè)置有所述pH試紙。所述的HCG免疫層析檢測試紙條，以及泌尿系統(tǒng)感染指標檢測區(qū)，包括所述PH試紙，以水平覆蓋方式或內(nèi)置嵌入方式置于底板10的上表面。
[0028]實施例2
[0029]如圖3、7所示，一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板10，在第一底板10的一面上設(shè)置有層析膜6，層析膜6的前端設(shè)置不透明保護膜3，不透明保護膜3的前端設(shè)置箭頭2 ;箭頭2的前端設(shè)置結(jié)合墊I ;層析膜6上還依次設(shè)置有檢測線4和質(zhì)控線5，層析膜6后端設(shè)置有吸水墊7。
[0030]還包括感染指標檢測區(qū)8。所述感染指標檢測區(qū)8附著于第二底板11上。[0031]所述感染指標檢測區(qū)8設(shè)置有唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，。以水平覆蓋方式或內(nèi)置嵌入方式置于底板的上表面，且與HCG免疫層析檢測試紙條并列設(shè)置于卡槽上。
[0032]實施例3
[0033]如圖4、8所示，一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板10，在第一底板10的一面上設(shè)置有層析膜6，層析膜6的前端設(shè)置結(jié)合墊1，結(jié)合墊I的前方還設(shè)置樣品墊9 ;層析膜6上還依次設(shè)置有檢測線4和質(zhì)控線5，層析膜6后端設(shè)置有吸水墊7 ;第一底板10的下表面上還設(shè)置有感染指標檢測區(qū)8。
[0034]所述感染指標檢測區(qū)8附著于第一底板10的下表面上。
[0035]所述感染指標檢測區(qū)8設(shè)置有唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙，以水平覆蓋方式或內(nèi)置嵌入方式置于底板的表面，且與HCG免疫層析檢測試紙分別置于底板的上下表面。
[0036]實施例4
[0037]如圖5、9所示，一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板10，在第一底板10的一面上設(shè)置有層析膜6，層析膜6的前端設(shè)置不透明保護膜3，不透明保護膜3的前端設(shè)置箭頭2 ;箭頭2的前端設(shè)置結(jié)合墊I ;層析膜6上還依次設(shè)置有檢測線4和質(zhì)控線5，層析膜6后端設(shè)置有吸水墊7。所述感染指標檢測區(qū)8附著于第二底板11上。
[0038]在實施例1-4中，所述HCG免疫標記抗體是抗人HCG膠體金免疫標記抗體,所述HCG檢測抗體是抗人HCG檢測抗體，其中的抗人HCG膠體金免疫標記抗體和抗人HCG檢測抗體結(jié)合人HCG的不同部位；
[0039]所述感染指標檢測區(qū)8設(shè)置有唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙，以水平覆蓋方式或內(nèi)置嵌入方式置于底板的上表面，且與HCG免疫層析檢測試紙置于可拆卸的卡槽上。
[0040]所述pH試紙為將空白濾紙在甲基橙和溴甲酚綠組成的溶液中浸泡后干燥處理，所述甲基橙在溶液中的濃度為10-600 mg/L，所述溴甲酚綠在溶液中的濃度為10-300 mg/L ；
[0041]所述唾液酸酶檢測試紙為將空白濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸鹽，氯化硝基四氮唑藍，海藻糖和PBS緩沖液組成的溶液中浸泡后干燥處理，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酰基神經(jīng)氨酸鹽在溶液中的濃度為5-200 mg/L,所述氯化硝基四氮唑藍在溶液中的濃度為10-500 mg/L，所述海藻糖在在溶液中的濃度為200-10000 mg/L，所述PBS的pH值為6.5，摩爾濃度為0.01-1 M ；
[0042]所述白細胞酯酶檢測試紙為將空白濾紙在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽和蔗糖組成的溶液中浸泡后干燥處理，所述5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽在溶液中的濃度為40-1000mg/L,所述鹿糖在溶液中的濃度為200-10000 mg/L ；
[0043]所述過氧化氫檢測試紙為將空白濾紙在過氧化物酶，表面活性劑和四甲基聯(lián)苯胺(TMB)組成的酶溶液中浸泡后干燥處理，所述過氧化物酶在溶液中的濃度為1.0-3.0X IO5U/L，表面活性劑在溶液中的濃度為0.1-10%, TMB在酶溶液中的濃度為200-1000mg/L ；
[0044]所述胺試紙為將空白濾紙在氫氧化鉀溶液中浸泡后干燥處理的試劑塊A粘貼于在溴甲酚綠和Triton X-1OO溶液中浸泡后干燥處理的試劑塊B，其中A試劑塊中氫氧化鉀濃度為400-10000 mg/L，B試劑塊中溴甲酚綠濃度為100-1000，Triton X-100為0.1-10 %。
[0045]樣本稀釋液為0.9 % NaCl。
[0046]應(yīng)用實施例1
[0047]使用本實用新型人絨毛膜促性腺激素(HCG)和細菌性陰道炎(BV)聯(lián)檢試劑盒的操作步驟如下:
[0048](I)用棉簽從陰道后穹窿取分泌物先直接涂在pH試紙上；
[0049](2)再用棉簽從陰道后穹窿取分泌物，加入300^500 μ L的樣本稀釋液稀釋分泌物；
[0050](3)分別在HCG免疫層析檢測試紙條，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙上滴加適量的稀釋的分泌物。
[0051](4)將試紙條在室溫下靜置10分鐘左右或在37°C恒溫箱中靜置10分鐘左右后目視比色。
[0052]判讀結(jié)果:檢測時如果HCG免疫層析檢測試紙條C區(qū)出現(xiàn)條帶，則T區(qū)出現(xiàn)條帶即表示樣品為陽性，未出現(xiàn)條帶則表示陰性；如果C區(qū)未出現(xiàn)條帶，則表示試紙條失效。pH試紙出現(xiàn)紅色或淺綠表示正常，出現(xiàn)深綠色表示不正常。唾液酸酶檢測試紙不顯色表示正常，出現(xiàn)紫色或褐色表示不正常。白細胞酯酶檢測試紙不顯色表示正常，出現(xiàn)藍色或綠色表示不正常。過氧化氫檢測試紙 出現(xiàn)藍色表示正常，不顯色表示不正常。胺試紙不顯色表示正常，出現(xiàn)綠色表示不正常。
[0053]制備實施例1
[0054]用于HCG檢測的抗體膠體金標記方法為加入400 μ L，3%的碳酸鉀調(diào)節(jié)50 mL膠體金溶液的pH ;在攪拌條件下逐漸加入0.25 mL, 6.6 mg/mL待標記抗HCG抗體于上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min;將12.5 mL封閉液緩慢加入上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min ；8000 g 4°C離心Ih，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25 mL洗滌液溶解，6000 g 4°C離心lh，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用1.2 mL洗滌液溶解，轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，4500 g 4°C離心lh，去上清；所有沉淀用I mL膠體金抗體重懸液重懸，4°C保存。
[0055]用于HCG檢測的抗體膠體金墊的噴點方法如下:用膠體金抗體重懸液將上述制備的膠體金抗體結(jié)合物稀釋4倍；開啟點膜儀的電源，設(shè)定噴點程序，噴點量為8 μ L /cm ;1號管道為噴點通道；將I號管道置于膠體金抗體重懸溶液中，選擇初始化程序，初始化6個循環(huán)；將金標墊按固定位置平放在點膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點，點完后取下，檢查噴點好的金標墊，噴點的膠體金抗體條帶均勻、連續(xù)和貫通整個金標墊的直線為合格噴點品，兩條直線中出現(xiàn)斷點為不合格噴點品；每放一片金標墊，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點一次(一片)；噴點結(jié)束，將噴點的金標墊置于室溫中自然干燥I個小時，膜上應(yīng)看不到噴點痕跡。
[0056]用于HCG檢測的抗體層析膜制備方法如下:取鼠抗人HCG抗體500 ug，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標記T標志。取羊抗鼠IgG抗體25 yL，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標記C標志；開啟點膜儀的電源，設(shè)定噴點程序，噴點量為I μ L/cm, I號管道為檢測帶噴點通道，2號管道為對照帶噴點通道；將I號管道置于檢測帶溶液中，將2號管道置于對照帶溶液中，選擇初始化程序，初始化6個循環(huán)；將層析膜按固定位置平放在點膜儀上，按控制面板上“GO”鍵開始噴點，點完后取下，檢查噴點好的層析膜，檢測帶和對照帶為兩條均勻、連續(xù)和貫通整個層析膜的直線為合格噴點品，兩條直線中出現(xiàn)斷點為不合格噴點品；每放一片層析膜，按一次控制面板上的“GO”鍵為噴點一次(一片);噴點結(jié)束，將噴點的層析膜置于室溫中自然干燥I個小時，膜上應(yīng)看不到噴點痕跡。
[0057]將底板上較寬部分的保護紙除去，沿上面保護紙的下邊緣，將劃好線的層析膜，以C線在上方的方式貼到底板板上；將膠體金墊貼在T線下方，與NC膜少許接觸；將樣品墊貼在膠體金墊下方，與膠體金墊少許接觸；接著除去上方保護紙，將吸水墊貼在NC膜的上方，與NC膜少許接觸；將保護紙及指示帶紙逐一貼在組裝好的試紙條外面，組裝成大卡。接通切割機電源，設(shè)定切膜程序，設(shè)定切割寬度為4 mm ;將大卡合格品平放入切割機平臺軌道中，正面朝上，按操作面板上“G0”鍵，開始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“G0”鍵一次，直至切割完所有大卡合格品。
[0058]pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙的濾紙材料為層析紙和尼龍膜，底板使用的材料為透明PVC片。
[0059]pH試紙制作:將濾紙浸泡在甲基橙濃度為300 mg/L,溴甲酚綠濃度為200 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0060]唾液酸酶檢測試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸鹽濃度為200 mg/L，氯化硝基四氮唑藍濃度為400 mg/L，海藻糖濃度為2000 mg/L, PBS緩沖液的PH值為6.5，摩爾濃度為0.01 M的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0061]白細胞酯酶檢測試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽濃度為300mg/L,鹿糖濃度為2000 mg/L的溶液中,烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0062]過氧化氫檢測試紙制作:將濾紙浸泡在過氧化物酶濃度為2.0 X IO5 U/L，表面活性劑在溶液中的濃度為0.2 %，TMB在酶溶液中的濃度為700 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0063]胺試紙制作:試劑塊A為將濾紙浸泡在氫氧化鉀濃度為10000 mg/L的溶液中，烘干；試劑塊B為將尼龍膜浸泡在溴甲酚綠濃度為500 mg/L, Triton X-100為0.2%的溶液中，烘干。將試劑塊A和B用雙面膠粘合后用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0064]分別將pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙中的一種或多種以水平覆蓋或內(nèi)置嵌入方式粘貼固定于透明的PVC片上，各試紙間距為5 mm,切成邊長為4 mm的試紙條即成。
[0065]制備實施例2
[0066]用于HCG檢測的抗體膠體金標記方法為加入400 μ L，3%的碳酸鉀調(diào)節(jié)50 mL膠體金溶液的pH ;在攪拌條件下逐漸加入0.25 mL ,6.6 mg/mL待標記抗HCG抗體于上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min;將12.5 mL封閉液緩慢加入上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min ；8000 g 4°C離心Ih，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25 mL洗滌液溶解，6000 g 4°C離心lh，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用1.2 mL洗滌液溶解，轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，4500 g 4°C離心lh，去上清；所有沉淀用I mL膠體金抗體重懸液重懸，4°C保存。
[0067]用于HCG檢測的抗體膠體金墊的噴點方法如下:用膠體金抗體重懸液將上述制備的膠體金抗體結(jié)合物稀釋4倍；開啟點膜儀的電源，設(shè)定噴點程序，噴點量為8 yL/cm;l號管道為噴點通道；將I號管道置于膠體金抗體重懸溶液中，選擇初始化程序，初始化6個循環(huán)；將金標墊按固定位置平放在點膜儀上，按控制面板上“GO”鍵開始噴點，點完后取下，檢查噴點好的金標墊，噴點的膠體金抗體條帶均勻、連續(xù)和貫通整個金標墊的直線為合格噴點品，兩條直線中出現(xiàn)斷點為不合格噴點品；每放一片金標墊，按一次控制面板上的“GO”鍵為噴點一次(一片)；噴點結(jié)束，將噴點的金標墊置于室溫中自然干燥I個小時，膜上應(yīng)看不到噴點痕跡。
[0068]用于HCG檢測的抗體層析膜制備方法如下:取鼠抗人HCG抗體500 ug，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標記T標志。取羊抗鼠IgG抗體25 yL，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標記C標志；開啟點膜儀的電源，設(shè)定噴點程序，噴點量為I μ L/cm, I號管道為檢測帶噴點通道，2號管道為對照帶噴點通道；將I號管道置于檢測帶溶液中，將2號管道置于對照帶溶液中，選擇初始化程序，初始化6個循環(huán)；將層析膜按固定位置平放在點膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點，點完后取下，檢查噴點好的層析膜，檢測帶和對照帶為兩條均勻、連續(xù)和貫通整個層析膜的直線為合格噴點品，兩條直線中出現(xiàn)斷點為不合格噴點品；每放一片層析膜，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點一次(一片);噴點結(jié)束，將噴點的層析膜置于室溫中自然干燥I個小時，膜上應(yīng)看不到噴點痕跡。
[0069]將底板上較寬部分的保護紙除去，沿上面保護紙的下邊緣，將劃好線的層析膜，以C線在上方的方式貼到底板板上；將膠體金墊貼在T線下方，與NC膜少許接觸；將樣品墊貼在膠體金墊下方，與膠體金墊少許接觸；接著除去上方保護紙，將吸水墊貼在NC膜的上方，與NC膜少許接觸；將保護紙及指示帶紙逐一貼在組裝好的試紙條外面，組裝成大卡。接通切割機電源，設(shè)定切膜程序，設(shè)定切割寬度為4 mm ;將大卡合格品平放入切割機平臺軌道中，正面朝上，按操作面板上“G0”鍵，開始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“G0”鍵一次，直至切割完所有大卡合格品。
[0070]pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙的濾紙材料為層析紙和尼龍膜，底板使用的材料為透明PVC片。
[0071]pH試紙制作:將濾紙浸泡在甲基橙濃度為300 mg/L,溴甲酚綠濃度為200 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0072]唾液酸酶檢測試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸鹽濃度為200 mg/L，氯化硝基四氮唑藍濃度為400 mg/L，海藻糖濃度為2000 mg/L, PBS緩沖液的PH值為6.5，摩爾濃度為0.01 M的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0073]白細胞酯酶檢測試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽濃度為300mg/L,鹿糖濃度為2000 mg/L的溶液中,烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0074]過氧化氫檢測試紙制作:將濾紙浸泡在過氧化物酶濃度為2.0 X IO5 U/L，表面活性劑在溶液中的濃度為0.2 %，TMB在酶溶液中的濃度為700 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0075]胺試紙制作:試劑塊A為將濾紙浸泡在氫氧化鉀濃度為10000 mg/L的溶液中，烘干；試劑塊B為將尼龍膜浸泡在溴甲酚綠濃度為500 mg/L, Triton X-100為0.2%的溶液中，烘干。將試劑塊A和B用雙面膠粘合后用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0076]將切割好的pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙中的一種或多種以水平覆蓋或內(nèi)置嵌入的方式置于透明PVC底板上，且與HCG免疫層析檢測試紙條并列設(shè)置于卡槽上。
[0077]制備實施例3
[0078]用于HCG檢測的抗體膠體金標記方法為加入400 μ L，3%的碳酸鉀調(diào)節(jié)50 mL膠體金溶液的pH ;在攪拌條件下逐漸加入0.25 mL ,6.6 mg/mL待標記抗HCG抗體于上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min;將12.5 mL封閉液緩慢加入上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min ；8000 g 4°C離心Ih，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25 mL洗滌液溶解，6000 g 4°C離心lh，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用1.2 mL洗滌液溶解，轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，4500 g 4°C離心lh，去上清；所有沉淀用I mL膠體金抗體重懸液重懸，4°C保存。
[0079]用于HCG檢測的抗體膠體金墊的噴點方法如下:用膠體金抗體重懸液將上述制備的膠體金抗體結(jié)合物稀釋4倍；開啟點膜儀的電源，設(shè)定噴點程序，噴點量為8 μ L/cm ;1號管道為噴點通道；將I號管道置于膠體金抗體重懸溶液中，選擇初始化程序，初始化6個循環(huán)；將金標墊按固定位置平放在點膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點，點完后取下，檢查噴點好的金標墊，噴點的膠體金抗體條帶均勻、連續(xù)和貫通整個金標墊的直線為合格噴點品，兩條直線中出現(xiàn)斷點為不合格噴點品；每放一片金標墊，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點一次(一片)；噴點結(jié)束，將噴點的金標墊置于室溫中自然干燥I個小時，膜上應(yīng)看不到噴點痕跡。
[0080]用于HCG檢測的抗體層析膜制備方法如下:取鼠抗人HCG抗體500 ug，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標記T標志。取羊抗鼠IgG抗體25 yL，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標記C標志；開啟點膜儀的電源，設(shè)定噴點程序，噴點量為I μ L/cm, I號管道為檢測帶噴點通道，2號管道為對照帶噴點通道；將I號管道置于檢測帶溶液中，將2號管道置于對照帶溶液中，選擇初始化程序，初始化6個循環(huán)；將層析膜按固定位置平放在點膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點，點完后取下，檢查噴點好的層析膜，檢測帶和對照帶為兩條均勻、連續(xù)和貫通整個層析膜的直線為合格噴點品，兩條直線中出現(xiàn)斷點為不合格噴點品；每放一片層析膜，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點一次(一片);噴點結(jié)束，將噴點的層析膜置于室溫中自然干燥I個小時，膜上應(yīng)看不到噴點痕跡。
[0081]將底板上較寬部分的保護紙除去，沿上面保護紙的下邊緣，將劃好線的層析膜，以C線在上方的方式貼到底板板上；將膠體金墊貼在T線下方，與NC膜少許接觸；將樣品墊貼在膠體金墊下方，與膠體金墊少許接觸；接著除去上方保護紙，將吸水墊貼在NC膜的上方，與NC膜少許接觸；將保護紙及指示帶紙逐一貼在組裝好的試紙條外面，組裝成大卡。接通切割機電源，設(shè)定切膜程序，設(shè)定切割寬度為4 mm ;將大卡合格品平放入切割機平臺軌道中，正面朝上，按操作面板上“G0”鍵，開始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“G0”鍵一次，直至切割完所有大卡合格品。
[0082]pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙的濾紙材料為層析紙和尼龍膜，底板使用的材料為透明PVC片。
[0083]pH試紙制作:將濾紙浸泡在甲基橙濃度為300 mg/L,溴甲酚綠濃度為200 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0084]唾液酸酶檢測試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸鹽濃度為200 mg/L，氯化硝基四氮唑藍濃度為400 mg/L，海藻糖濃度為2000 mg/L, PBS緩沖液的pH值為6.5，摩爾濃度為0.0l M的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0085]白細胞酯酶檢測試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽濃度為300mg/L,鹿糖濃度為2000 mg/L的溶液中,烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0086]過氧化氫檢測試紙制作:將濾紙浸泡在過氧化物酶濃度為2.0 X IO5 U/L，表面活性劑在溶液中的濃度為0.2 %，TMB在酶溶液中的濃度為700 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0087]胺試紙制作:試劑塊A為將濾紙浸泡在氫氧化鉀濃度為10000 mg/L的溶液中，烘干；試劑塊B為將尼龍膜浸泡在溴甲酚綠濃度為500 mg/L, Triton X-1OO為0.2%的溶液中，烘干。將試劑塊A和B用雙面膠粘合后用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0088]將切割好的pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙中的一種或多種以水平覆蓋或內(nèi)置嵌入的方式置于透明PVC底板上，且與HCG免疫層析檢測試紙條分別置于底板的上下表面。
[0089]制備實施例4
[0090]用于HCG檢測的抗體膠體金標記方法為加入400 μ L，3%的碳酸鉀調(diào)節(jié)50 mL膠體金溶液的pH ;在攪拌條件下逐漸加入0.25 mL ,6.6 mg/mL待標記抗HCG抗體于上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min;將12.5 mL封閉液緩慢加入上述膠體金溶液中，混勻，室溫靜置30 min ；8000 g 4°C離心Ih，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用25 mL洗滌液溶解，6000 g 4°C離心lh，去上清，留疏松沉淀；各管沉淀用1.2 mL洗滌液溶解，轉(zhuǎn)入1.5 mL離心管中，4500 g 4°C離心lh，去上清；所有沉淀用I mL膠體金抗體重懸液重懸，4°C保存。
[0091]用于HCG檢測的抗體膠體金墊的噴點方法如下:用膠體金抗體重懸液將上述制備的膠體金抗體結(jié)合物稀釋4倍；開啟點膜儀的電源，設(shè)定噴點程序，噴點量為8 μ L/cm ;1號管道為噴點通道；將I號管道置于膠體金抗體重懸溶液中，選擇初始化程序，初始化6個循環(huán)；將金標墊按固定位置平放在點膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點，點完后取下，檢查噴點好的金標墊，噴點的膠體金抗體條帶均勻、連續(xù)和貫通整個金標墊的直線為合格噴點品，兩條直線中出現(xiàn)斷點為不合格噴點品；每放一片金標墊，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點一次(一片)；噴點結(jié)束，將噴點的金標墊置于室溫中自然干燥I個小時，膜上應(yīng)看不到噴點痕跡。
[0092]用于HCG檢測的抗體層析膜制備方法如下:取鼠抗人HCG抗體500 ug,加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標記T標志。取羊抗鼠IgG抗體25 yL，加到5 mL刻度離心管中，抗體稀釋液至I mL，容器標記C標志；開啟點膜儀的電源，設(shè)定噴點程序，噴點量為I μ L/cm, I號管道為檢測帶噴點通道，2號管道為對照帶噴點通道；將I號管道置于檢測帶溶液中，將2號管道置于對照帶溶液中，選擇初始化程序，初始化6個循環(huán)；將層析膜按固定位置平放在點膜儀上，按控制面板上“G0”鍵開始噴點，點完后取下，檢查噴點好的層析膜，檢測帶和對照帶為兩條均勻、連續(xù)和貫通整個層析膜的直線為合格噴點品，兩條直線中出現(xiàn)斷點為不合格噴點品；每放一片層析膜，按一次控制面板上的“G0”鍵為噴點一次(一片);噴點結(jié)束，將噴點的層析膜置于室溫中自然干燥I個小時，膜上應(yīng)看不到噴點痕跡。
[0093]將底板上較寬部分的保護紙除去，沿上面保護紙的下邊緣，將劃好線的層析膜，以C線在上方的方式貼到底板板上；將膠體金墊貼在T線下方，與NC膜少許接觸；將樣品墊貼在膠體金墊下方，與膠體金墊少許接觸；接著除去上方保護紙，將吸水墊貼在NC膜的上方，與NC膜少許接觸；將保護紙及指示帶紙逐一貼在組裝好的試紙條外面，組裝成大卡。接通切割機電源，設(shè)定切膜程序，設(shè)定切割寬度為4 mm ;將大卡合格品平放入切割機平臺軌道中，正面朝上，按操作面板上“GO”鍵，開始切割；每放一片大卡合格品，按操作面板上“GO”鍵一次，直至切割完所有大卡合格品。
[0094]pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙的濾紙材料為層析紙和尼龍膜，底板使用的材料為透明PVC片。
[0095]pH試紙制作:將濾紙浸泡在甲基橙濃度為300 mg/L,溴甲酚綠濃度為200 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0096]唾液酸酶檢測試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙?；窠?jīng)氨酸鹽濃度為200 mg/L，氯化硝基四氮唑藍濃度為400 mg/L，海藻糖濃度為2000 mg/L, PBS緩沖液的PH值為6.5，摩爾濃度為0.01 M的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0097]白細胞酯酶檢測試紙制作:將濾紙浸泡在5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽濃度為300mg/L,鹿糖濃度為2000 mg/L的溶液中,烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0098]過氧化氫檢測試紙制作:將濾紙浸泡在過氧化物酶濃度為2.0 X IO5 U/L，表面活性劑在溶液中的濃度為0.2 %，TMB在酶溶液中的濃度為700 mg/L的溶液中，烘干后使用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0099]胺試紙制作:試劑塊A為將濾紙浸泡在氫氧化鉀濃度為10000 mg/L的溶液中，烘干；試劑塊B為將尼龍膜浸泡在溴甲酚綠濃度為500 mg/L, Triton X-1OO為0.2%的溶液中，烘干。將試劑塊A和B用雙面膠粘合后用切割機切成邊長為4 mm的正方形；
[0100]將切割好的pH試紙，唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙中的一種或多種以水平覆蓋或內(nèi)置嵌入的方式置于透明PVC底板上，且與HCG免疫層析檢測試紙條設(shè)置于可拆卸的卡槽上。
【權(quán)利要求】
1.一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板(10)，其特征是:在第一底板(10)的一面上設(shè)置有層析膜(6)，層析膜(6)的前端設(shè)置不透明保護膜(3)，不透明保護膜(3)的前端設(shè)置箭頭(2);箭頭(2)的前端設(shè)置結(jié)合墊(I);層析膜(6)上還依次設(shè)置有檢測線(4)和質(zhì)控線(5)，層析膜(6)后端設(shè)置有吸水墊(7);還包括感染指標檢測區(qū)(8)； 所述感染指標檢測區(qū)(8)附著于第二底板(11)上或復(fù)合于第一底板(10)的任意一個表面上； 所述感染指標檢測區(qū)(8)包括pH試紙、唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙中的一種或幾種。
2.一種人絨毛膜促性腺激素和細菌性陰道炎聯(lián)檢試劑盒，包括第一底板(10)，其特征是:在第一底板(10)的一面上設(shè)置有層析膜(6)，層析膜(6)的前端設(shè)置結(jié)合墊(1)，結(jié)合墊(O的前方還設(shè)置樣品墊(9);層析膜(6)上還依次設(shè)置有檢測線(4)和質(zhì)控線(5)，層析膜(6)后端設(shè)置有吸水墊(7);第一底板(10)的下表面上還設(shè)置有感染指標檢測區(qū)(8)； 所述感染指標檢測區(qū)(8)包括pH試紙、唾液酸酶檢測試紙，白細胞酯酶檢測試紙，過氧化氫檢測試紙和胺試紙中的一種或幾種。
【文檔編號】G01N33/76GK203688564SQ201320690949
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2013年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月4日
【發(fā)明者】陸月, 時振華, 胡越, 韋彥余 申請人:無錫博慧斯生物醫(yī)藥科技有限公司