一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其準(zhǔn)確度高，定量測定簡單方便，有效提高了檢測效率，適用于注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的大規(guī)模、批量化生產(chǎn)過程中產(chǎn)品質(zhì)量的快速檢測。其特征在于：采用高效液相色譜法對(duì)待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣進(jìn)行分析檢測，色譜條件為：（1）二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的對(duì)照品溶液和待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的供試品溶液濃度為0.05~1.2mg/ml，進(jìn)樣量為20ul；（2）色譜柱以C2~C18烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；（3）紫外檢測波長為250nm~300nm；（4）流動(dòng)相由含離子對(duì)試劑的無機(jī)鹽溶液與甲醇或乙腈組成。
【專利說明】一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明方法屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的檢測領(lǐng)域，具體涉及一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]二丁酰環(huán)磷腺苷鈣是一種新型的核苷酸類衍生物，為化學(xué)合成的環(huán)磷腺苷的衍生物，屬蛋白激酶激活劑。二丁酰環(huán)磷腺苷鈣對(duì)細(xì)胞的滲透性比環(huán)磷腺苷強(qiáng)，且能對(duì)抗體內(nèi)磷酸二酯酶的降解作用，起效快，作用時(shí)間長，對(duì)改善心肌缺氧、擴(kuò)張冠脈、增強(qiáng)心肌收縮力、增加心排血量等效果顯著。目前，注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣含量測定通常用紙色譜法，但紙色譜法靈敏低、定量測定困難、操作復(fù)雜，給注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的大規(guī)模、批量化檢測造成一定困難。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對(duì)上述問題，本發(fā)明提供了一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其定量測定準(zhǔn)確度高，并且檢測操作簡單方便。
[0004]一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:采用高效液相色譜法對(duì)待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣進(jìn)行分析檢測，色譜條件為:
(1)二丁酰環(huán)磷腺 苷鈣的對(duì)照品溶液和待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的供試品溶液濃度為0.05~1.2mg/ml，進(jìn)樣量為20ul ；
(2)色譜柱以CfC18烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；
(3)紫外檢測波長為250nnT300nm；
(4)流動(dòng)相由含離子對(duì)試劑的無機(jī)鹽溶液與甲醇或乙腈組成，離子對(duì)試劑濃度為0.01^1.5mmol/L、所述無機(jī)鹽濃度為0.01^0.2mol/L,所述離子對(duì)試劑選自四丁基氫氧化銨、四甲基氫氧化銨、四丁基溴化銨、十二烷基三甲基氯化銨，所述無機(jī)鹽選自鉀或鈉的磷酸鹽、碳酸鹽、枸櫞酸鹽、C2-C6羧酸鹽、馬來酸鹽和富馬酸鹽，無機(jī)鹽溶液與甲醇或乙腈的體積比為99:1~20:80。
[0005]其進(jìn)一步特征在于:
待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的供試品溶液的溶劑選自水、甲醇、乙腈、四氫呋喃或流動(dòng)相；
所述無機(jī)鹽溶液含離子對(duì)試劑0.5~1.2mmol/L、無機(jī)鹽0.05^0.15mol/L,所述無機(jī)鹽溶液與甲醇或乙腈的體積比為70:30-50:50 ；
所述無機(jī)鹽選自磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、枸櫞酸鈉、乙酸鈉和馬來酸鈉；
所述紫外檢測波長為268nnT278nm。
[0006]其更進(jìn)一步特征在于:
所述待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的供試品溶液濃度為0.5mg/ml，溶劑選自水；
所述無機(jī)鹽溶液含離子對(duì)試劑lmmol/L、無機(jī)鹽0.lmol/L,所述無機(jī)鹽溶液與甲醇或乙腈的體積比為60:40 ；
所述離子對(duì)試劑優(yōu)選四甲基氫氧化銨，所述無機(jī)鹽優(yōu)選磷酸二氫鉀；
所述紫外檢測波長優(yōu)選273nm ；
所述填充劑優(yōu)選C18烷基硅烷鍵合硅膠。
[0007]與現(xiàn)有技術(shù)相比，一方面，本發(fā)明的檢測方法重復(fù)性好，準(zhǔn)確性高，線性良好，可操作性強(qiáng)；另一方面，本發(fā)明避免了復(fù)雜的檢測操作，大大提高了檢測效率，適用于注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的大規(guī)模、批量化生產(chǎn)過程中的產(chǎn)品質(zhì)量的快速檢測。
[0008]【專利附圖】

【附圖說明】
圖1為二丁酰環(huán)磷腺苷鈣對(duì)照品HPLC色譜圖。
[0009]圖2為注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣HPLC色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例1
色譜條件:高效液相色譜儀(島津LC-15)，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(250mm*4.6mm, 5 μ m , Kromsil),流動(dòng)相為含 0.lmol/L 憐酸二氫鉀、lmmol/L 四丁基氫氧化銨的無機(jī)鹽溶液一甲醇(60:40)，檢測波長273nm，柱溫25°C，進(jìn)樣量20 μ L。
[0011]實(shí)驗(yàn)步驟:(1)進(jìn)樣溶液制備:精密稱取二丁酰環(huán)磷腺苷鈣對(duì)照品10.28mg，置20ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液；精密稱取注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣(為自制的無菌凍干粉針，后同)10.0Omg，置20ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。(2)取對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣，照上述的檢測條件進(jìn)行高效液相分析。二丁酰環(huán)磷腺苷鈣對(duì)照品HPLC色譜圖如圖1所示，注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣HPLC色譜圖如圖2所示。
[0012]結(jié)果分析:從圖1和圖2可以看出，二丁酰環(huán)磷腺苷鈣主成分出峰時(shí)間適宜，峰形良好，按峰面積以外標(biāo)法測得待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量為104.5%。另外進(jìn)行的專屬性研究結(jié)果表明，流動(dòng)相、空白溶劑以及空白輔料不干擾二丁酰環(huán)磷腺苷鈣主成分的測定。
[0013]實(shí)施例2
基本上采用與實(shí)施例1相同的方法:高效液相色譜儀，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱，流動(dòng)相為含0.lmol/L磷酸二氫鉀、lmmol/L四丁基氫氧化銨的無機(jī)鹽溶液一甲醇(60:40)，檢測波長273nm，柱溫25°C，進(jìn)樣量20yL。不同的是對(duì)照品溶液以及供試品溶液所用溶劑的選擇，分別采用水、甲醇、乙腈和實(shí)施例1中所述比例的流動(dòng)相溶解二丁酰環(huán)磷腺苷鈣對(duì)照品、注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣，其結(jié)果見表I。
[0014]表I溶劑選擇
【權(quán)利要求】
1.一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:采用高效液相色譜法對(duì)待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣進(jìn)行分析檢測，色譜條件為: (1)二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的對(duì)照品溶液和待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的供試品溶液濃度為0.05~1.2mg/ml，進(jìn)樣量為20ul ； (2)色譜柱以CfC18烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑； (3)紫外檢測波長為250nnT300nm； (4)流動(dòng)相由含離子對(duì)試劑的無機(jī)鹽溶液與甲醇或乙腈組成，所述離子對(duì)試劑濃度為0.01^1.5mmol/L、所述無機(jī)鹽濃度為0.01^0.2mol/L,所述離子對(duì)試劑選自四丁基氫氧化銨、四甲基氫氧化銨、四丁基溴化銨、十二烷基三甲基氯化銨，所述無機(jī)鹽選自鉀或鈉的磷酸鹽、碳酸鹽、枸櫞酸鹽、C2-C6羧酸鹽、馬來酸鹽和富馬酸鹽，所述無機(jī)鹽溶液與甲醇或乙腈的體積比為99:1~20:80。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的供試品溶液的溶劑選自水、甲醇、乙腈、四氫呋喃或流動(dòng)相。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:所述無機(jī)鹽溶液含離子對(duì)試劑0.5"?.2mmol/L、無機(jī)鹽0.05^0.15mol/L,所述無機(jī)鹽溶液與甲醇或乙腈的體積比為70:30-50:50。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:所述無機(jī)鹽選自磷酸二氫鉀、磷酸二氫鈉、枸櫞酸鈉、乙酸鈉和馬來酸鈉。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:所述紫外檢測波長為268nnT278nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一所述的一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:所述待測注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的供試品溶液濃度為0.5mg/ml，溶劑選自水。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:所述無機(jī)鹽溶液含離子對(duì)試劑lmmol/L、無機(jī)鹽0.lmol/L，所述無機(jī)鹽溶液與甲醇或乙腈的體積比為60:40。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:所述離子對(duì)優(yōu)選四甲基氫氧化銨，所述無機(jī)鹽優(yōu)選磷酸二氫鉀。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:所述紫外檢測波長優(yōu)選273nm。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的含量檢測方法，其特征在于:所述填充劑優(yōu)選C18烷基硅烷鍵合硅膠。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103616443SQ201310539569
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月5日
【發(fā)明者】劉騫 申請人:無錫凱夫制藥有限公司