一種快速靈敏測(cè)定多巴胺的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種快速靈敏測(cè)定多巴胺的方法，首先采用滴涂法將金納米粒子修飾的還原氧化石墨烯（AuNPs-RGO）修飾于玻碳電極表面；基于AuNPs-RGO對(duì)過(guò)硫酸鹽ECL的協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大；然后構(gòu)建ECL傳感界面應(yīng)用于多巴胺的快速、靈敏檢測(cè)。在0.02~40μM濃度區(qū)間內(nèi)，多巴胺濃度的對(duì)數(shù)與ECL強(qiáng)度的對(duì)數(shù)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，檢出限可達(dá)6.7nM。且該方法所需樣品少，檢測(cè)時(shí)間短，且靈敏度較高，可望應(yīng)用于實(shí)際樣品中多巴胺的檢測(cè)分析。
【專利說(shuō)明】一種快速靈敏測(cè)定多巴胺的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]基于電化學(xué)發(fā)光技術(shù)，本發(fā)明涉及一種快速、靈敏檢測(cè)多巴胺的方法，屬于電化學(xué)檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003]多巴胺是大腦神經(jīng)系統(tǒng)釋放的一種神經(jīng)遞質(zhì)，在大腦技能方面起著非常重要的作用，其非正常流失會(huì)引發(fā)帕金森等疾病，因此準(zhǔn)確測(cè)定多巴胺的濃度一直是生物分析中的一項(xiàng)重要任務(wù)。目前已經(jīng)發(fā)展了多種多巴胺的檢測(cè)方法如熒光法、色譜法、電化學(xué)法和毛細(xì)管電泳法等，其中電化學(xué)修飾電極法因具有靈敏度高、速度快、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，在諸多的測(cè)定技術(shù)中脫穎而出。
[0004]電化學(xué)發(fā)光(ECL)，是電化學(xué)與化學(xué)發(fā)光結(jié)合的產(chǎn)物，由于其可控性好、靈敏度高、選擇性好、儀器簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)已成功應(yīng)用于環(huán)境科學(xué)、生命科學(xué)和材料科學(xué)等領(lǐng)域，并引起了人們的高度關(guān)注。
[0005]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]技術(shù)問(wèn)題:本發(fā)明旨在發(fā)明一種集可控性好、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)為一體的電化學(xué)發(fā)光傳感器應(yīng)用于多巴胺的檢測(cè)分析，提供一種制備工藝簡(jiǎn)單且靈敏度較高的定量檢測(cè)多巴胺的方法。
[0007]技術(shù)方案:首先采用滴涂法將一定量的金納米粒子修飾還原氧化石墨烯(AuNPs-RGO)修飾于玻碳電極表面；基于Au NPs-RGO對(duì)過(guò)硫酸鹽電化學(xué)發(fā)光(ECL)的協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大；通過(guò)對(duì)不同濃度的多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行ECL檢測(cè)，建立ECL強(qiáng)度與多巴胺濃度之間的關(guān)系，以達(dá)到對(duì)含多巴胺的樣品進(jìn)行定量檢測(cè)的目的。
[0008]具體的技術(shù)解決方案如下:
(I)玻碳電極表面預(yù)處理:
玻碳電極(GCE，0 =3.0 mm)使用前，首先在金相砂紙上打磨，然后分別用1.0 3Al2O3拋光粉在拋光布上拋光，再用二次水沖洗干凈后分別在0.1 M HC1、0.1 M NaOH和無(wú)水乙醇中超聲清洗一分鐘，最后用二次水超聲清洗一分鐘，室溫下晾干備用。
[0009](2) ECL傳感界面的構(gòu)建:
取1.0 mg Au NPs-RGO超聲分散在DMF中，形成2.0 mgmL'1的懸浮液，然后將6.0 ML該懸浮液滴涂于預(yù)先處理好的玻碳電極表面，于室溫下干燥，即得到Au NPs-RGO修飾玻碳電極(記為 Au NPs-RGO/GCE)ο
[0010](3 ) Au NPs-RGO對(duì)過(guò)硫酸鹽ECL的信號(hào)放大:
在含有0.05 M K2S2O8的0.1 M PBS, ρΗ7.4，緩沖體系中，以Au NPs-RGO/GCE為工作電極，Pt絲為對(duì)電極，飽和KCl溶液填充的Ag/AgCl為參比電極進(jìn)行ECL測(cè)試； (4)對(duì)多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線:
以Au NPs-RGO/GCE為工作電極，向含有0.05 M K2S2O8的0.1 M ρΗ7.4的PBS緩沖體系中加入不同濃度多巴胺，得到相應(yīng)的ECL信號(hào)，多巴胺濃度依次為0.02 //Μ、0.1 /砸、0.5AM、I ΜΜ.5 AM、10 ΜΜ.20 AM和40 AM。以ECL強(qiáng)度的對(duì)數(shù)值和不同多巴胺濃度的對(duì)數(shù)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到最佳線性范圍。
[0011]有益效果:
1、本發(fā)明基于AuNPs-RGO對(duì)過(guò)硫酸鹽ECL的協(xié)同增強(qiáng)效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大，為ECL傳感器的構(gòu)建提供了平臺(tái)；
2、本發(fā)明所提出的ECL技術(shù)，成功實(shí)現(xiàn)了對(duì)多巴胺的靈敏檢測(cè)，在0.02?40 AM濃度區(qū)間內(nèi)，多巴胺濃度的對(duì)數(shù)與ECL強(qiáng)度的對(duì)數(shù)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，檢出限可達(dá)6.7 ηΜ ;
3、本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了ECL檢測(cè)多巴胺的目的，該方法所需樣品少，檢測(cè)時(shí)間短，且靈敏度較高，適用于實(shí)際樣品中多巴胺的檢測(cè)分析。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0012]圖1 (A)為ECL傳感器對(duì)不同濃度多巴胺的ECL響應(yīng)；(B)為ECL傳感器應(yīng)用于多巴胺檢測(cè)的校正曲線。
[0013]
【具體實(shí)施方式】
[0014]實(shí)施例一:
ECL傳感界面的構(gòu)建
取1.0 mg Au NPs-RGO超聲分散在DMF中，形成2.0 mgmL'1的懸浮液，然后將6.0 ML該懸浮液滴涂于預(yù)先處理好的玻碳電極表面，于室溫下干燥，即得到Au NPs-RGO修飾玻碳電極(記為 Au NPs-RGO/GCE)ο
[0015]對(duì)過(guò)硫酸鹽ECL的信號(hào)放大
在含有0.05 M K2S2O8的0.1 M PBS, ρΗ7.4，緩沖體系中，以Au NPs-RGO/GCE為工作電極，Pt絲為對(duì)電極，飽和KCl溶液填充的Ag/AgCl為參比電極進(jìn)行ECL測(cè)試；
建立多巴胺檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)曲線
以Au NPs-RGO/GCE為工作電極，向含有0.05 M K2S2O8的0.1 M PBS (ρΗ7.4)緩沖體系中加入不同濃度多巴胺，得到相應(yīng)的ECL信號(hào)，多巴胺濃度依次為0.02 //Μ、0.1 /砸、0.5AM、I ΜΜ.5 AM、10 ΜΜ.20 AM和40 AM。以ECL強(qiáng)度的對(duì)數(shù)值和不同多巴胺濃度的對(duì)數(shù)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到最佳線性范圍，如圖1所示。
【權(quán)利要求】
1.一種快速靈敏測(cè)定多巴胺的方法，按照下述步驟進(jìn)行: (1)玻碳電極表面預(yù)處理 玻碳電極GCE，Φ = 3.0 mm使用前，首先在金相砂紙上打磨，然后分別用1.0 3Al2O3拋光粉在拋光布上拋光，再用二次水沖洗干凈后分別在0.1 M HC1、0.1 M NaOH和無(wú)水乙醇中超聲清洗一分鐘，最后用二次水超聲清洗一分鐘，室溫下晾干備用； (2)ECL傳感界面的構(gòu)建 取1.0 mg Au NPs-RGO超聲分散在DMF中，形成2.0 mgmL'1的懸浮液，然后將6.0 ML該懸浮液滴涂于預(yù)先處理好的玻碳電極表面，于室溫下干燥，即得到Au NPs-RGO修飾玻碳電極，記為 Au NPs-RGO/GCE ； (3)Au NPs-RGO對(duì)過(guò)硫酸鹽ECL的信號(hào)放大 在含有0.05 M K2S2O8的0.1 M PBS, ρΗ7.4，緩沖體系中，以Au NPs-RGO/GCE為工作電極，Pt絲為對(duì)電極，飽和KCl溶液填充的Ag/AgCl為參比電極進(jìn)行ECL測(cè)試； (4)對(duì)多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢測(cè)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線 以Au NPs-RGO/GCE為工作電極，向含有0.05 M K2S2O8的0.1 M PBS, ρΗ7.4，緩沖體系中加入不同濃度多巴胺，得到相應(yīng)的ECL信號(hào)，多巴胺濃度依次為0.02 //M、0.1 //Μ、0.5 AM、I AM、5 //MUO //Μ、20 AM和40 AM ;以ECL強(qiáng)度的對(duì)數(shù)值和不同多巴胺濃度的對(duì)數(shù)值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到最佳線性范圍。
【文檔編號(hào)】G01N21/76GK103592292SQ201310517383
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月28日
【發(fā)明者】王坤, 劉倩, 嚴(yán)玉婷, 蔡健榮, 邱白晶, 還娟 申請(qǐng)人:江蘇大學(xué)