專利名稱：銀杏葉及其提取物的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種中藥材的質(zhì)量控制方法，具體涉及銀杏葉及其提取物的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
銀杏葉為銀杏科植物銀杏Ginkgo biloba L.的干燥葉，秋季葉尚綠時采收。性味:甘、苦、澀、平。具有活血化瘀，通絡止痛、斂肺平喘，化濁降脂的功效。目前2010版《中國藥典》銀杏葉質(zhì)量標準中規(guī)定:總黃酮醇苷是通過HPLC-UV法測定酸水解后槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量來控制的，該方法不僅前處理繁瑣，耗時長，而且不能充分反映黃酮類活性成分；現(xiàn)有技術(shù)銀杏葉中的萜內(nèi)酯成分是以HPLC-ELSD法測定，該方法供試品溶液制備需經(jīng)酸性氧化鋁柱前處理，同樣處理復雜；且沒有銀杏酚酸類成分的質(zhì)量控制方法也未能全面檢測銀杏葉的活性成分。因此，為了充分控制好銀杏葉藥材及其提取物及其制劑的臨床安全性，維護患者的利益，很有必要在現(xiàn)有技術(shù)的基礎之上研究設計出能準確全面檢測銀杏葉及其制劑有效成分的檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的:本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，經(jīng)過大量實驗篩選，采用超高效液相色譜檢測，該檢測方法可以同時檢測銀杏葉中的黃酮、萜內(nèi)酯和酚酸3類成分，共24種活性化合物。該方法檢測靈敏度高，穩(wěn)定性好，可以客觀、全面、準確地評價銀杏葉藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量，對控制質(zhì)量和保證療效具有重要意義。技術(shù)方案:為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為:一種銀杏葉的質(zhì) 量控制方法，其包括以下步驟:(I)樣品溶液的制備精密稱取銀杏葉或銀杏葉提取物，加入甲醇，超聲或加熱回流提取，過濾，取續(xù)濾液過0.22 μ m濾膜，得樣品溶液；(2)對照品溶液的制備分別精密稱定表沒食子酸兒茶素、兒茶素、表兒茶素、蘆丁、異槲皮苷、白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯C、槲皮素3-0-α -L-葡萄糖基-β -D-1，2_鼠李糖苷、槲皮苷、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯Α、木犀草素、槲皮素、療菜素、山柰酹、異鼠李素、穗花杉雙黃酮、去甲銀杏雙黃酮、芫花素、銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮、金松雙黃酮、白果新酸、白果酸24種對照品置于量瓶中，用濃度為709Γ80%甲醇溶解稀釋，制得各單一對照品儲備液；然后分別量取不同體積單一對照品溶液，混合稀釋制成系列濃度混合對照品溶液，于4°C保存，備用；(3)液相色譜圖的獲取將步驟(I)制備得到的樣品溶液和步驟(2)制備得到的混合對照品溶液，分別進行超高效液相色譜檢測，獲得樣品和對照品的色譜圖，進行定性定量分析；所用超高效液相色譜參數(shù)設置如下:
儀器:WatersACQUITY UPLC 系統(tǒng)；固定相:WatersACQUITY BEH C18 色譜柱；流動相:0.1°/Γ2%濃度的甲酸水溶液和乙腈；梯度洗脫；流速:0.4 0.5mL/min ;進樣量:lyL;檢測器:Xevo TQ檢測器；離子化模式:ESr/ESI+ ;檢測方式:多反應檢測；毛細管電壓:3.0kV ;離子源溫度:150°C ;脫溶劑氣溫度:5500C ;脫溶劑氣流量:1000L;錐孔氣流量:50L.h-1 ;碰撞氣流量:0.15mL.mirf1。作為優(yōu)選方案，以上所述的銀杏葉的質(zhì)量控制方法，步驟(3)所述的梯度洗脫程序如表I所示:表I梯度洗脫 程序表
權(quán)利要求
1.一種銀杏葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)樣品溶液的制備 精密稱取銀杏葉或銀杏葉提取物，加入甲醇，超聲或加熱回流提取，過濾，取續(xù)濾液過0.22 μ m濾膜，得樣品溶液； (2)對照品溶液的制備分別精密稱定表沒食子酸兒茶素、兒茶素、表兒茶素、蘆丁、異槲皮苷、白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯C、槲皮素3-0-a-L-葡萄糖基-β-D-l，2-鼠李糖苷、槲皮苷、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯Α、木犀草素、槲皮素、芹菜素、山柰酚、異鼠李素、穗花杉雙黃酮、去甲銀杏雙黃酮、芫花素、銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮、金松雙黃酮、白果新酸、白果酸24種對照品置于量瓶中，用濃度為709Γ80%甲醇溶解稀釋，制得各單一對照品儲備液；然后分別量取不同體積單一對照品溶液，混合稀釋制成系列濃度混合對照品溶液，于4°C保存，備用； (3)液相色譜圖的獲取 將步驟(1)制備得到的樣品溶液和步驟(2)制備得到的混合對照品溶液，分別進行超高效液相色譜檢測，獲得樣品和對照品的色譜圖，進行定性定量分析； 所用超高效液相色譜參數(shù)設置如下: 儀器:Waters ACQUITY UPLC 系統(tǒng)； 固定相:Waters ACQUITY BEH C18 色譜柱； 流動相:0.1°/Γ2%濃度的甲酸水溶液和乙腈；梯度洗脫；流速:0.4 0.5 mL/min ;進樣量:1 μ L ； 檢測器:Xevo TQ檢測器； 離子化模式:ESI—/ESI+;檢測方式:多反應檢測；毛細管電壓:3.0 kV;離子源溫度:150。。;脫溶劑氣溫度:5500C ;脫溶劑氣流量:1000 L.h-1 ;錐孔氣流量:50 L.h-1 ;碰撞氣流量:0.15 mL.mirf1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于， 步驟(3)所述的梯度洗脫程序如表I所示: 表1梯度洗脫程序表
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于， 步驟(1)樣品溶液的制備方法為:精密稱取銀杏葉或銀杏葉提取物，加入6-10倍濃度為70-80%的甲醇，超聲或加熱回流提取2 3次，每次1-2小時，合并提取液，過濾，取續(xù)濾液過0.22 μπι濾膜，得樣品溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀杏葉的質(zhì)量控制方法，其特征在于，步驟(1)所述的銀杏葉提取物為銀杏葉的水提取物或者乙醇提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種銀杏葉及其提取物的質(zhì)量控制方法，本發(fā)明通過大量實驗篩選，采用超高效液相色譜檢測，該檢測方法可以同時檢測銀杏葉及其提取物中的黃酮、萜內(nèi)酯和酚酸3類成分，共24種活性化合物。實驗結(jié)果表明，該方法檢測靈敏度高，穩(wěn)定性好，可以客觀、全面、準確地評價銀杏葉藥材及其提取物與制劑的質(zhì)量，對控制質(zhì)量和保證臨床療效具有重要意義。
文檔編號G01N30/02GK103175912SQ20131004671
公開日2013年6月26日 申請日期2013年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月6日
發(fā)明者段金廒, 錢大瑋, 尚爾鑫, 唐于平, 宿樹蘭 申請人:南京中醫(yī)藥大學