專利名稱：潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種食品加工過程中潤滑油(脂)中有毒物的檢測技術(shù)，尤其是一種潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法。
背景技術(shù)：
苯并(a)芘(1^皿0[3] 71^1^，8沖)是一種最具代表性的多環(huán)芳烴化合物，被認(rèn)為是世界三大強(qiáng)致癌物之一，是國家食品安全工作的重點(diǎn)監(jiān)測和控制對象。一般認(rèn)為，食品中的BaP主要來源于食品自身的烹調(diào)過程、加工和包裝環(huán)節(jié)污染以及食品環(huán)境污染。其中，對食品熏烤、烘烤過程中BaP的產(chǎn)生機(jī)理，以及由煤炭、汽油、煙草等物質(zhì)燃燒引起的BaP大氣污染等的研究報(bào)道較多，而對加工過程中食品接觸材料污染，和由于加工機(jī)械潤滑油(脂) 泄漏導(dǎo)致的食品BaP污染雖有提及卻鮮有報(bào)道。對現(xiàn)代生產(chǎn)線來說，潤滑油(脂)是保持設(shè)備正常運(yùn)轉(zhuǎn)必不可少的物質(zhì)。隨著現(xiàn)代食品工業(yè)的發(fā)展，食品的加工日漸機(jī)械化和規(guī)?；瑵櫥?脂)的使用也日益廣泛，相應(yīng)地，食品受到潤滑油(脂)污染的機(jī)率也日趨升高。因此，國家規(guī)定在可能與食品直接接觸的設(shè)備中禁止使用工業(yè)級潤滑油。然而，目前采用工業(yè)級潤滑油(脂)來替代食品級潤滑油 (脂)的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生。工業(yè)級潤滑油(脂)中75%-90%為基礎(chǔ)礦物油，這些基礎(chǔ)油宜采用溶劑精制和活性炭吸附等工藝去除多環(huán)芳烴等非理想組分，但是由于工藝問題，這些物質(zhì)并不能完全去除。一旦機(jī)械裝置密封不好，潤滑油(脂)發(fā)生泄漏進(jìn)入食品便會導(dǎo)致食品的BaP 污染。因此，開發(fā)潤滑油(脂)中BaP的檢測方法，研究工業(yè)級和食品級潤滑油(脂)中BaP含量差異，提升社會對工業(yè)級潤滑油(脂)使用限制必要性的認(rèn)識具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。目前，針對食品中BaP的檢測方法報(bào)道很多，包括高效液相色譜-質(zhì)譜法，高效液相色譜-熒光檢測，氣相色譜-質(zhì)譜法，高效液相色譜-紫外檢測和高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜等。相對而言，潤滑油(脂)中BaP的檢測方法鮮有報(bào)道。因?yàn)闈櫥?脂)基質(zhì)復(fù)雜， 不僅含有基礎(chǔ)油還含有稠化劑和添加劑，所以直接使用上述食品中BaP的檢測方法，基質(zhì)干擾很大，無法實(shí)現(xiàn)有效檢測。因此，針對潤滑油(脂)特性，專門開發(fā)適用于潤滑油(脂) 中BaP檢測的方法非常關(guān)鍵。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種適用性強(qiáng)的潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是其將潤滑油或潤滑脂萃取、離心、采用凝膠滲透色譜凈化后，收集目標(biāo)洗脫液濃縮至干；然后定容得到樣品溶液；最后將樣品溶液采用反相高效液相色譜-熒光法檢測，外標(biāo)法定量。本發(fā)明方法采用下述檢測步驟
(1)潤滑油或潤滑脂用環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑浸泡、超聲萃??；
(2)上述步驟得到的萃取液離心處理后，取上層清液采用凝膠滲透色譜凈化，收集目標(biāo)洗脫液濃縮至干，再用甲醇或乙腈定容，得到樣品溶液；
(3)樣品溶液采用反相高效液相色譜-熒光法檢測，外標(biāo)法定量。本發(fā)明所述步驟(1)中環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑的體積比為50:50 ；步驟(1)中超聲萃取時(shí)間為10 30 min，萃取次數(shù)為1 3次。本發(fā)明所述步驟(2)中的萃取液采用高速冷凍離心機(jī)離心處理，轉(zhuǎn)速為4000 10000 rpm，離心時(shí)間為5 10 min ；步驟(2)中目標(biāo)洗脫液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或者自動氮吹儀進(jìn)行濃縮。本發(fā)明所述潤滑油或潤滑脂稱樣量為0. 5 1. 5 g ；所述環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑的用量為10 25 mL ；所述的甲醇或乙腈體積5. 0 mL ；所述反相高效液相色譜-熒光法檢測時(shí)樣品溶液的進(jìn)樣量為5 20 UL0本發(fā)明所述的凝膠滲透色譜凈化的流動相為環(huán)己烷-乙酸乙酯，體積比為50:50， 流速為4. 7 mL/min,收集時(shí)間為16. 0 21. 0 min。本發(fā)明所述反相高效液相色譜條件為等度洗脫，色譜柱為反相C18柱，流動相為甲醇-水體系或乙腈-水體系。本發(fā)明所述C18色譜柱的規(guī)格為150 mmX4. 6 mm，粒徑5 μ m ；選用Kromasil 100-5 C18 柱、SB-C18 柱、XB-C18 柱、Eclipse Plus C18 柱或者 AE. Lichrom C18-5Mm_100 柱；所述的流動相為體積比為(80 90) (20 10)的甲醇-水體系，或體積比為(80 90): (20 10)的乙腈-水體系。本發(fā)明所述的熒光法檢測條件為激發(fā)波長為366 nm，發(fā)射波長為410 nm。本發(fā)明所述步驟(2)中經(jīng)凝膠滲透色譜凈化處理后，環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑廢液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)提純處理后，重復(fù)使用。本發(fā)明所述的凝膠滲透色譜(gel permeation chromatography, GPC)是一種根據(jù)溶質(zhì)分子大小進(jìn)行分離的色譜技術(shù)，能夠去除樣品中大量的油脂及色素，具有快速、高效、節(jié)省溶劑、易自動化等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于油脂類食品中塑化劑、農(nóng)殘等危害成分的痕量分析。但是到目前為止，還未有采用GPC技術(shù)處理潤滑油(脂)樣品然后進(jìn)行BaP測定的報(bào)道。本發(fā)明采用GPC凈化技術(shù)，對潤滑油(脂)樣品進(jìn)行處理，結(jié)合高效液相色譜-熒光法檢測技術(shù)，從而建立了一種適用性很強(qiáng)的潤滑油(脂)中BaP的測定方法。采用上述技術(shù)方案所產(chǎn)生的有益效果在于
(1)采用GPC技術(shù)處理潤滑油(脂)，去除了絕大部分大分子油脂類雜質(zhì)，極大地降低了樣品基質(zhì)對BaP測定的干擾，檢測方法準(zhǔn)確性高，對潤滑油(脂)的適用性強(qiáng)；
(2)采用GPC技術(shù)結(jié)合高效液相色譜-熒光法檢測，整個(gè)流程自動化程度高、簡便、快速、易于實(shí)現(xiàn)大批量樣品檢測；
(3)GPC凈化處理過程中產(chǎn)生的廢液可以回收處理，重復(fù)使用，降低了檢測成本，減少了環(huán)境污染。


下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。圖1是本發(fā)明GPC凈化處理潤滑油(脂)分離效果圖2是本發(fā)明反相高效液相色譜-熒光檢測苯并(a)芘色譜圖。
具體實(shí)施例方式一、檢測條件Series III液相色譜儀配熒光檢測器(美國LabAlliance公司)， PREPLINC凝膠滲透色譜儀(美國J2公司)配BIO-Beads S-X3填料的凈化柱(300 mm χ 25 mm)，所用試劑均為色譜純，色譜柱的規(guī)格為150 mmX4.6 mm，粒徑5 μ m ；選用Kromasil 100-5 C18 柱、SB-C18 柱、XB-C18 柱、Eclipse Plus C18 柱或者 AE. Lichrom C18-5Mm_100 柱。流動相為甲醇-水體系或乙腈-水體系，熒光檢測器的激發(fā)波長為366 nm，發(fā)射波長為 410 nm。進(jìn)樣量為5 20 μ L，流速為1.2 mL · mirT1。計(jì)算機(jī)系統(tǒng)記錄色譜圖，以峰面積作為信號響應(yīng)值，對苯并(a)芘進(jìn)行定性定量分析。二、檢測方法本潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法采用下述實(shí)施例中的方法檢測。實(shí)施例1 本潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法的具體步驟如下所述。(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確稱取IOmg (精確至0. lmg)BaP標(biāo)準(zhǔn)品于IOOmL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，配成0. Img · mL—1的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。其工作曲線，由標(biāo)準(zhǔn)儲備液逐級稀釋成質(zhì)量濃度分別為5. 0,10. 0,50. OUOO. 0,150. 0,200. 0 μg .L—1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述試驗(yàn)條件進(jìn)樣做標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行分析。(2)樣品提取準(zhǔn)確稱取1. Og (精確至0. OOOlg)潤滑脂樣品于25mL容量瓶中，加入IOmL環(huán)己烷-乙酸乙酯(1:1，ν/ν)混合溶液，超聲15min，冷卻至室溫，加入環(huán)己烷-乙酸乙酯(l:l，v/v)混合溶液定容。萃取液轉(zhuǎn)移至離心管中，5°C下以10000 rpm的轉(zhuǎn)速離心 5 min,取上層清液用0. 45 Mm濾膜過濾，濾液轉(zhuǎn)移至GPC上樣瓶中。(3) GPC凈化處理GPC檢測波長為254 nm，流動相為環(huán)己烷-乙酸乙酯(1 1，ν/ ν)，流速為4. 7 mL · mirT1。步驟(2)中得到的濾液5. 0 mL進(jìn)GPC凈化處理；GPC凈化處理潤滑脂分離效果見圖1 ；收集16 21 min流出液(目標(biāo)洗脫液)，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于40°C濃縮至干，加5.0 mL甲醇超聲溶解，溶液用0.45 Mm濾膜過濾后進(jìn)樣測定。(4)液相檢測選取Kromasil 100-5 C18色譜柱，甲醇-水(85 15，ν/ν)作為流動相，熒光檢測器的激發(fā)波長366 nm，發(fā)射波長410 nm，進(jìn)樣量20 yL，流速1.2 mL .mirT1 ； 反相高效液相色譜-熒光檢測苯并(a)芘色譜圖見圖2。(5)采用外標(biāo)法定量，對潤滑脂樣品做3個(gè)平行樣，試驗(yàn)編號為A、B、C，分析結(jié)果見表1，并對一個(gè)樣品重復(fù)測定五次，分析結(jié)果見表2。由表1得，平行樣的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 2. 54% ；由表2得重復(fù)性的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1. 61%。(6)將步驟(1)中的標(biāo)準(zhǔn)樣品加入到已知苯并(a)芘含量的潤滑脂中，按照上述步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對該樣品連續(xù)做10次平行測定，取平均值，計(jì)算加標(biāo)回收率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。 加標(biāo)回收率為81. 22% 94. 42%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1. 36%。
權(quán)利要求
1.一種潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其特征在于其將潤滑油或潤滑脂萃取、 離心、采用凝膠滲透色譜凈化后，收集目標(biāo)洗脫液濃縮至干；然后定容得到樣品溶液；最后將樣品溶液采用反相高效液相色譜-熒光法檢測，外標(biāo)法定量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其特征在于，該方法采用下述檢測步驟(1)潤滑油或潤滑脂用環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑浸泡、超聲萃??；(2)上述步驟得到的萃取液離心處理后，取上層清液采用凝膠滲透色譜凈化，收集目標(biāo)洗脫液濃縮至干，再用甲醇或乙腈定容，得到樣品溶液；(3)樣品溶液采用反相高效液相色譜-熒光法檢測，外標(biāo)法定量。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其特征在于所述步驟(1)中環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑的體積比為50:50 ；所述步驟(1)中超聲萃取時(shí)間為 10 30 min，萃取次數(shù)為1 3次。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其特征在于所述步驟(2)中的萃取液采用高速冷凍離心機(jī)離心處理，轉(zhuǎn)速為4000 10000 rpm，離心時(shí)間為 5 10 min ；所述步驟(2)中目標(biāo)洗脫液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀或者自動氮吹儀進(jìn)行濃縮。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其特征在于所述的潤滑油或潤滑脂稱樣量為0. 5 1. 5 g ；所述的環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑的用量為10 25 mL ；所述的甲醇或乙腈體積為5.0 mL ；所述的反相高效液相色譜-熒光法檢測時(shí)樣品溶液的進(jìn)樣量為5 20 UL0
6.根據(jù)權(quán)利要求1一 5所述的任意一種潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其特征在于所述的凝膠滲透色譜凈化的流動相為環(huán)己烷-乙酸乙酯，體積比為50:50，流速為4. 7 mL/min,收集時(shí)間為 16. 0 21. 0 min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1一 5所述的任意一種潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其特征在于所述反相高效液相色譜條件為等度洗脫，色譜柱為反相C18柱，流動相為甲醇-水體系或乙腈-水體系。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其特征在于所述C18 色譜柱的規(guī)格為150 mmX4. 6 _，粒徑5 μ m ；選用Kromasil 100-5 C18柱、SB-C18柱、 XB-C18柱、Eclipse Plus C18柱或者AE. Lichrom C18-5Mm_100柱；所述的流動相體積比為 (80 90): (20 10)的甲醇-水體系，或體積比為(80 90) (20 10)的乙腈-水體系。
9.根據(jù)權(quán)利要求1一 5所述的任意一種潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其特征在于，所述的熒光法檢測條件為激發(fā)波長為366 nm，發(fā)射波長為410 nm。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其特征在于所述步驟(2)中經(jīng)凝膠滲透色譜凈化處理后，環(huán)己烷-乙酸乙酯混合溶劑廢液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)提純處理后，可以重復(fù)使用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種潤滑油(脂)中苯并(a)芘的檢測方法，其將潤滑油或潤滑脂萃取、離心、采用凝膠滲透色譜凈化后，收集目標(biāo)洗脫液濃縮至干；然后定容得到樣品溶液；最后將樣品溶液采用反相高效液相色譜-熒光法檢測，外標(biāo)法定量。本方法采用GPC凈化技術(shù)處理潤滑油(脂)，去除了絕大部分大分子油脂類雜質(zhì)，極大地降低了樣品基質(zhì)對BaP測定的干擾，檢測方法準(zhǔn)確性高，對潤滑油(脂)的適用性強(qiáng)；采用GPC凈化技術(shù)結(jié)合高效液相色譜-熒光法檢測，整個(gè)流程自動化程度高，簡便，快速，易于實(shí)現(xiàn)大批量樣品檢測；GPC凈化處理過程中產(chǎn)生的廢液可以回收處理，重復(fù)使用，降低了檢測成本，減少了環(huán)境污染。
文檔編號G01N30/02GK102539577SQ20121002722
公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月8日
發(fā)明者吉桂珍, 王磊, 程淑君, 連運(yùn)河, 高偉 申請人:晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司