專利名稱：一種奧硝唑的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物制劑的質(zhì)量控制方法，具體涉及一種奧硝唑注射液的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
奧硝唑是第三代硝基咪唑類衍生物，奧硝唑臨床用途廣泛，可用于治療由脆弱擬桿菌、狄氏擬桿菌、卵園擬桿菌、多形擬桿菌、普通擬桿菌、梭狀芽胞桿菌、真桿菌、消化球菌和消化鏈球菌、幽門螺桿菌、黑色素?cái)M桿菌、梭桿菌、C02噬織維菌、牙齦類桿菌等敏感厭氧菌所引起的多種感染性疾病。奧硝唑結(jié)構(gòu)為1-(3-氯-2-羥丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑，奧硝唑在加熱或強(qiáng)光照射條件下，化學(xué)結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生變化會(huì)生成其它雜質(zhì)，其中2-甲基-5-硝基咪唑?yàn)閵W硝唑注射液中的雜質(zhì)成分之一，而奧硝唑注射液在滅菌的過(guò)程中必須對(duì)其進(jìn)行高溫滅菌，為了嚴(yán)格控制好奧硝唑的質(zhì)量，必須制定奧硝唑的質(zhì)量檢測(cè)方法，但是現(xiàn)有的檢測(cè)方法，分離效果不好，檢測(cè)靈敏度不高，穩(wěn)定性差，尤其是不能同時(shí)檢測(cè)活性成分奧硝唑和雜質(zhì)如2-甲基-5-硝基咪唑的含量。因此為了控制好奧硝唑制劑的臨床安全性，維護(hù)患者的利益，很有必要在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)之上研究設(shè)計(jì)出能同時(shí)檢測(cè)奧硝唑制劑中有效成分奧硝唑和雜質(zhì)2-甲基-5-硝基咪唑的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能同時(shí)檢測(cè)奧硝唑制劑中有效成分奧硝唑和雜質(zhì)2-甲基-5-硝基咪唑的檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法可以客觀、全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)奧硝唑的質(zhì)量，對(duì)控制奧硝唑注射劑的質(zhì)量和保證療效具有重要意義。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所提供的奧硝唑的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟(1)標(biāo)準(zhǔn)品的制備取奧硝唑標(biāo)準(zhǔn)品50毫克，用體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為500 μ g/ml奧硝唑標(biāo)準(zhǔn)品的溶液，另取2-甲基-5-硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品25毫克，用體積比為30 70 0.2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為250μ g/ml的2-甲基-5-硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品溶液，然后將奧硝唑標(biāo)準(zhǔn)品和2-甲基-5-硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品按體積比為1 1混合得到混合標(biāo)準(zhǔn)品，備用；(2)奧硝唑樣品的制備精密取奧硝唑注射液在120°C條件下加熱3小時(shí)至6小時(shí)，放冷，備用；(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取步驟(1)得到的混合標(biāo)準(zhǔn)品注入高效液相色譜儀制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，色譜條件為色譜柱反相Cw柱，流動(dòng)相體積比為30 70 0.2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm，柱溫為30°C(4)樣品中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量測(cè)定精密吸取奧硝唑注射液樣品20 μ 1，注入高效液相色譜儀分析40分鐘，色譜條件為色譜柱反相C18柱，流動(dòng)相體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm，柱溫為30°C，并按步驟(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的奧硝唑的質(zhì)量控制方法，步驟(3)以?shī)W硝唑的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度(μ g/ml)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 6528Χ-42. 71，r = 0. 9997 ；，以2-甲基-5-硝基咪唑的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度(μ g/ml)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y =8319Χ-155. 8，r = 0. 9999。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的奧硝唑的質(zhì)量控制方法，步驟(2)奧硝唑樣品制備過(guò)程中在120°C條件下加熱4小時(shí)。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的奧硝唑的質(zhì)量控制方法，步驟(3)和(4)所述的反相C18柱為安捷倫hrbax Extend反相C18柱。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述的奧硝唑的質(zhì)量控制方法，步驟C3)和(4)所述的高效液相色譜儀為安捷倫1260分析儀或島津高效液相色譜儀。奧硝唑結(jié)構(gòu)為1-(3-氯-2-羥丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑，奧硝唑在加熱或強(qiáng)光照射條件下，化學(xué)結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生變化會(huì)生成其它雜質(zhì)，其中2-甲基-5-硝基咪唑?yàn)閵W硝唑注射液中的雜質(zhì)成分之一，為了嚴(yán)格控制好奧硝唑的質(zhì)量，能高效的同時(shí)檢測(cè)奧硝唑注射液中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量，本發(fā)明經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)對(duì)流動(dòng)相組成、流動(dòng)相的洗脫程序、流速、檢測(cè)波長(zhǎng)及色譜柱進(jìn)行篩選。1、本發(fā)明針對(duì)以上2個(gè)成分，通過(guò)全波長(zhǎng)掃描和3D等高線觀察，確定蒽奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑在310nm處均有較大的吸收，因此本發(fā)明采用310nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，可以準(zhǔn)確靈敏的檢測(cè)到奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物。2、由于以上1-(3-氯-2-羥丙基)-2-甲基_5_硝基咪唑和2_甲基_5_硝基咪唑化合物的極性存在較大的相似，因此在色譜柱上同時(shí)分離比較困難，本發(fā)明首先對(duì)流動(dòng)相的組成進(jìn)行了大量篩選，確定采用體積比為30 70 0.2的甲醇-水-冰醋酸作為流動(dòng)相組成，由于二個(gè)化合物容易電離成離子狀態(tài)，導(dǎo)致分離和洗脫效果差，因此本發(fā)明在流動(dòng)相中添加一定量的冰醋酸調(diào)節(jié)PH值，但是流動(dòng)相的酸性太強(qiáng)，又會(huì)導(dǎo)致化合物溶解性差，甚至?xí)恋矶氯V柱，因此調(diào)整流動(dòng)相到合適的PH值非常重要，本發(fā)明通過(guò)不同冰醋酸加入量的篩選，確定最佳的流動(dòng)相，從而可以保證在色譜柱上達(dá)到很好的分離效果，不會(huì)出現(xiàn)峰重疊或拖尾現(xiàn)象，而且能保證極性相似的二個(gè)化合物在色譜柱上有很好的分離度。3、同時(shí)本發(fā)明還對(duì)流動(dòng)相的流動(dòng)速度進(jìn)行了考察，如流速過(guò)快，分離度不夠理想，因此本發(fā)明分別考察了 lmL/min、0. 8mL/min、0. 6mL/min、0. 5mL/min、0. 4mL/min 不同流速，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相的流速為lmL/min時(shí)，1-(3-氯-2-羥丙基)-2-甲基-5-硝基咪唑和2-甲基-5-硝基咪唑的峰形最好、分離度最好，理論塔板數(shù)最高，因此本發(fā)明采用流動(dòng)相的流速為lmL/min。4、同時(shí)本發(fā)明對(duì)色譜柱的柱溫進(jìn)行了篩選，考察了色譜柱在20 V、25 °C、28 V、30°C和35°C條件下化合物的分離效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，色譜柱在30°C條件下分離效果最好，分離重復(fù)性和穩(wěn)定性最好。因此本發(fā)明采用色譜柱的柱溫為30°C。5、同時(shí)本發(fā)明對(duì)色譜柱也進(jìn)行了篩選，分別考察了安捷倫(Agilent)反相C18、反相C8柱，Waters反相C18、反相C8柱，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，以安捷倫(Agilent)反相C18柱的分離效果最好。因此，本發(fā)明以安捷倫(Agilent)反相C18柱作為分析柱。有益效果本發(fā)明提供的奧硝唑的質(zhì)量控制方法和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明根據(jù)奧硝唑注射劑中活性成分和雜質(zhì)成分的結(jié)構(gòu)性質(zhì)特點(diǎn)，通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)篩選出最佳的流動(dòng)相組成，洗脫程序、流速，檢測(cè)波長(zhǎng)、色譜柱等分析條件，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明，本發(fā)明提供的奧硝唑的質(zhì)量控制方法可以在線同時(shí)檢測(cè)活性成分和雜質(zhì)，因此具有很高的分析效率，可以克服現(xiàn)有檢測(cè)方法中準(zhǔn)確度低、穩(wěn)定性差，不能同時(shí)檢測(cè)二個(gè)成分等諸多缺點(diǎn)，且本發(fā)明提供的質(zhì)量檢測(cè)方法穩(wěn)定性好、對(duì)各分析成分的分離度好，可以靈敏準(zhǔn)確的定性、定量檢測(cè)分析各化合物。因此，本發(fā)明提供的奧硝唑的質(zhì)量控制方法可以可以客觀、全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)奧硝唑注射劑的質(zhì)量，對(duì)控制奧硝唑注射劑的質(zhì)量和保證臨床療效具有重要意義。


圖1為奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑混合標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜檢測(cè)分析圖。圖2為奧硝唑注射劑樣品的高效液相色譜檢測(cè)分析圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。實(shí)施列奧硝唑的質(zhì)量控制方法，包括以下步驟(1)標(biāo)準(zhǔn)品的制備取奧硝唑標(biāo)準(zhǔn)品50毫克，用體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為500 μ g/ml奧硝唑標(biāo)準(zhǔn)品的溶液，另取2-甲基-5-硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品25毫克，用體積比為30 70 0.2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為250μ g/ml的2-甲基-5-硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品溶液，然后將奧硝唑標(biāo)準(zhǔn)品和2-甲基-5-硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品按體積比為1 1混合得到混合標(biāo)準(zhǔn)品，備用；(2)奧硝唑樣品的制備精密取揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)南京海陵藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的奧硝唑注射液 5 批(1110191、1110151、1109072、1109211、1117311)在 120°C條件下加熱 3 小時(shí)，放冷，備用；(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取步驟(1)得到的混合標(biāo)準(zhǔn)品，用0.45 μ m微孔濾膜過(guò)濾后注入高效液相色譜儀制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，色譜條件為色譜柱反相Cw柱，流動(dòng)相體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm，柱溫為30°C(4)樣品中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量測(cè)定精密吸取步驟(2)奧硝唑注射液樣品20 μ 1，注入高效液相色譜儀分析40分鐘，色譜條件為色譜柱反相C18柱，流動(dòng)相體積比為30 70 0.2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm，柱溫為30°C，并按步驟(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1和表2所示。以上所述的奧硝唑的質(zhì)量控制方法，步驟(3)以步驟(3)以?shī)W硝唑的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度(μ g/ml)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為=Y = 6528X-42. 71，r = 0. 9997 ；以2-甲基-5-硝基咪唑的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度(μ g/ml)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為:Y = 8319Χ-155. 8, r = 0. 9999。通過(guò)以上分析，有效成分奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物在本發(fā)明提供的分析條件下，能夠很好的達(dá)到分離，分離度均達(dá)到1.5以上，各化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性關(guān)系良好，r值均達(dá)到0.999以上。因此本發(fā)明提供的分析方法，準(zhǔn)確可靠，可以靈敏準(zhǔn)確的定性、定量檢測(cè)奧硝唑注射液，為奧硝唑注射液的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。表1奧硝唑注射劑中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物的檢測(cè)結(jié)果
化合物保留時(shí)間(min)混合標(biāo)液批號(hào) 1110191批號(hào) 1110151批號(hào) 1109072批號(hào) 1109211批號(hào) 1117311奧硝唑7.4937.4937.4977.4927.4937.4932_甲基_5-石肖基咪唑3.6833.6843.6933.6973.6913.689表2奧硝唑注射劑中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑化合物的檢測(cè)結(jié)果
化合物峰面積混合標(biāo)液批號(hào) 1110191批號(hào) 1110151批號(hào) 1109072批號(hào) 1109211批號(hào) 1117311奧硝唑17635813 8861857786185738618575861857586185752_甲基_5-石肖基咪唑29045892071122932217612291421263由表1和表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的奧硝唑注射劑的檢測(cè)方法，可以同時(shí)檢測(cè)到5批奧硝唑注射劑中奧硝唑化合物和2-甲基-5-硝基咪唑類化合物，且具有較好的分離度，從保留時(shí)間看出，各化合物和對(duì)照品具有很好的匹配度；并且從本發(fā)明表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明處理過(guò)的奧硝唑樣品中，雜質(zhì)2-甲基-5-硝基咪唑的百分含量均低于0.2%，也表明本發(fā)明樣品的質(zhì)量可靠性。且以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的檢測(cè)方法只要進(jìn)一針樣品即可定性和定量檢測(cè)到活性成分和是否有雜質(zhì)成分，相比現(xiàn)有技術(shù)具有方便、快捷、工作效率高的優(yōu)點(diǎn)，且對(duì)控制和全面評(píng)價(jià)奧硝唑注射劑質(zhì)量具有很好的應(yīng)用價(jià)值。另外本發(fā)明提供的奧硝唑的質(zhì)量控制方法穩(wěn)定性和重復(fù)性好，可以客觀、全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)奧硝唑注射劑的質(zhì)量，對(duì)控制奧硝唑注射劑的質(zhì)量和保證臨床療效具有重要意義。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.一種奧硝唑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，包括以下步驟(1)標(biāo)準(zhǔn)品的制備取奧硝唑標(biāo)準(zhǔn)品50毫克，用體積比為3070 0. 2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為50(^g/ml奧硝唑標(biāo)準(zhǔn)品的溶液，另取2-甲基_5_硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品25毫克，用體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸稀釋成濃度為25(^g/ml的2-甲基-5-硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品溶液，然后將奧硝唑標(biāo)準(zhǔn)品和2-甲基-5-硝基咪唑標(biāo)準(zhǔn)品按體積比為1 :1混合得到混合標(biāo)準(zhǔn)品，備用；(2)奧硝唑樣品的制備精密取奧硝唑注射液在120°C條件下加熱3小時(shí)至6小時(shí)，放冷，備用；(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備取步驟(1)得到的混合標(biāo)準(zhǔn)品注入高效液相色譜儀制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，色譜條件為色譜柱反相Cw柱，流動(dòng)相體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm，柱溫為30°C ；(4)樣品中奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量測(cè)定精密吸取步驟(2)奧硝唑注射液樣品20μ 1，注入高效液相色譜儀分析40分鐘，色譜條件為色譜柱反相Q8柱，流動(dòng)相體積比為30 70 0. 2的甲醇-水-冰醋酸，流速為1. Oml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm，柱溫為30°C，并按步驟(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)奧硝唑和2-甲基-5-硝基咪唑的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的奧硝唑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，步驟(3)中以?shī)W硝唑的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度μ g/ml為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y = 6528Χ 一 42. 71，r=0. 9997 ；，以2-甲基-5-硝基咪唑的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度μ g/ml為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y =8319Χ — 155. 8，r=0. 9999。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的奧硝唑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，步驟(2)奧硝唑樣品制備過(guò)程中在120°C條件下加熱4小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的奧硝唑的質(zhì)量控制方法，其特征在于，步驟(3)和⑷所述的反相Cw柱為安捷倫hrbax Extend反相Cw柱。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種奧硝唑的質(zhì)量控制方法，該方法采用高效液相色譜法同時(shí)在線檢測(cè)奧硝唑和雜質(zhì)成分2-甲基-5-硝基咪唑。本發(fā)明通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出最佳的流動(dòng)相組成，洗脫程序、流速，檢測(cè)波長(zhǎng)和色譜柱等分析條件，經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證表明，本發(fā)明提供的奧硝唑的質(zhì)量控制方法，穩(wěn)定性和重復(fù)性好、分析效率高、分離度好，可以靈敏準(zhǔn)確的定性、定量檢測(cè)各化合物，從而可以客觀、全面、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)奧硝唑注射劑的質(zhì)量，對(duì)控制奧硝唑注射劑的質(zhì)量和保證臨床療效具有重要意義。
文檔編號(hào)G01N30/89GK102565271SQ20121000468
公開日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月10日
發(fā)明者王麗楠, 肖鑫, 顧林 申請(qǐng)人:揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)南京海陵藥業(yè)有限公司