專利名稱：家蠅對(duì)ddvp抗藥性快速檢測(cè)的試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種快速檢測(cè)家蠅對(duì)有機(jī)磷殺蟲劑DDVP抗藥性的試劑盒。
背景技術(shù)：
目前，敵敵畏DDVP、殺螟硫磷、辛硫磷等有機(jī)磷殺蟲劑及各種復(fù)配劑被廣泛應(yīng)用于防治林業(yè)和農(nóng)業(yè)害蟲中；城市中園林綠地的害蟲防治及衛(wèi)生害蟲防治的空間噴灑也是有機(jī)磷類殺蟲劑使用較多。家蠅是城市主要衛(wèi)生害蟲，在DDVP等有機(jī)磷殺蟲劑長(zhǎng)期的選擇壓力下，大部分地區(qū)的家蠅對(duì)其產(chǎn)生了抗藥性，所以雖然用藥劑量逐漸加大，但防治效果普遍降低且對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重。了解某地區(qū)家蠅的抗藥性情況可以規(guī)范殺蟲劑的使用，對(duì)抗藥性的治理和防治效率的提高有重要的指導(dǎo)作用和理論意義。對(duì)于家蠅抗藥性的檢測(cè)，有生物測(cè)定方法、生物化學(xué)方法、免疫學(xué)方法、分子生物學(xué)方法等多種方法，然而受技術(shù)水平和實(shí)驗(yàn)儀器等限制，我國(guó)長(zhǎng)期以來使用最多的還是傳統(tǒng)的點(diǎn)滴法、藥膜法等生物測(cè)定方法，具有較大的局限性。目前不論哪種測(cè)定方法，都需要花費(fèi)較長(zhǎng)時(shí)間，而且基本無法在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行快速檢測(cè)，對(duì)殺蟲劑使用的指導(dǎo)作用不夠及時(shí)。

實(shí)用新型內(nèi)容針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種可在現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行快速檢測(cè)的家蠅對(duì)DDVP抗藥性快速檢測(cè)的試劑盒。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型一種家蠅對(duì)DDVP抗藥性快速檢測(cè)的試劑盒，包括盒體和取液器，其中盒體中設(shè)置有含O. 1%曲通-100的25mmol/L磷酸緩沖液的PB緩沖液試劑瓶、含乙酰膽堿ATCh的底物試劑瓶、含二硫雙對(duì)硝基苯甲酸的PB溶液顯色劑試劑瓶、含
O.04mg/mL的DDVP丙酮溶液的抑制劑試劑瓶、含O. 05mg/mL乙酰膽堿脂酶AChE的陽性對(duì)照試劑瓶、含丙酮溶液的陰性對(duì)照試劑瓶。本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，能夠在檢測(cè)現(xiàn)場(chǎng)，快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)家蠅對(duì)DDVP抗藥性，其具有使用方便、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。

圖I為本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
下面，參考附圖，對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行更全面的說明，附圖中示出了本實(shí)用新型的示例性實(shí)施例。然而，本實(shí)用新型可以體現(xiàn)為多種不同形式，并不應(yīng)理解為局限于這里敘述的示例性實(shí)施例。而是，提供這些實(shí)施例，從而使本實(shí)用新型全面和完整，并將本實(shí)用新型的范圍完全地傳達(dá)給本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員。為了易于說明，在這里可以使用諸如“上”、“下” “左” “右”等空間相對(duì)術(shù)語，用于說明圖中示出的一個(gè)元件或特征相對(duì)于另一個(gè)元件或特征的關(guān)系。應(yīng)該理解的是，除了圖中示出的方位之外，空間術(shù)語意在于包括裝置在使用或操作中的不同方位。例如，如果圖中的裝置被倒置，被敘述為位于其他元件或特征“下”的元件將定位在其他元件或特征“上”。因此，示例性術(shù)語“下”可以包含上和下方位兩者。裝置可以以其他方式定位(旋轉(zhuǎn)90度或位于其他方位)，這里所用的空間相對(duì)說明可相應(yīng)地解釋。如圖I所示，本實(shí)用新型一種家蠅對(duì)DDVP抗藥性快速檢測(cè)的試劑盒，包括盒體I和取液器2，其中盒體I中設(shè)置有若干個(gè)試劑瓶3，若干個(gè)試劑瓶3包括含O. 1%曲通-100的25mmol/L磷酸緩沖液的PB緩沖液試劑瓶、含乙酰膽堿ATCh的底物試劑瓶、含二硫雙對(duì)硝基苯甲酸的PB溶液顯色劑試劑瓶、含O. 04mg/mL的DDVP丙酮溶液的抑制劑試劑瓶、含
O.05mg/mL乙酰膽堿脂酶AChE的陽 性對(duì)照試劑瓶、含丙酮溶液的陰性對(duì)照試劑瓶。其中，I、試劑盒內(nèi)容研磨棒、緩沖液、抑制劑、底物、顯色劑、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照、說明書(圖I)。緩沖液25mmol/L磷酸緩沖液(PB)，pH=7.4，含O. 1%曲通-100。先用去離子水配制出 O. 2mol/L 的 NaH2PO4 和 Na2HPO4 · 12H20,取 19ml 配制好的 NaH2PO4和 81mL Na2HPO4 · 12H20充分混合，將混合液定容至800mL后加入O. 8ml曲通-100，配制出含O. 1%曲通-100的25mmol/L 磷酸緩沖液，pH=7. 4。底物ATCh(乙酰膽堿)2. 892mg。顯色劑稱取二硫雙對(duì)硝基苯甲酸(5，5’ -dithio-bis (2-nitrobenzoicacid), DNTB) 18. 2mg，溶于 IOOmL ρΗ7· 4,25mmol/L 的 PB 中，再加入碳酸氫鈉 7. 5mg，用 PB定容至200mL。抑制劑0. 04mg/mL的DDVP丙酮溶液。陽性對(duì)照0. 05mg/mL乙酰膽堿脂酶AChE PB溶液。陰性對(duì)照丙酮溶液。2、檢測(cè)的靈敏度及動(dòng)態(tài)范圍本實(shí)用新型是定性檢測(cè)家蠅種群是否對(duì)DDVP產(chǎn)生抗藥性，不能定量檢測(cè)對(duì)DDVP的抗性系數(shù)。檢測(cè)范圍以DDVP對(duì)家蠅種群的LD50 (95%置信限)(O. 0470(0. 0287-0. 0769)μ g/只為敏感種群，DDVP的LD50 (95%置信限)彡O. 1228(0. 1190-0. 1266) μ g/只為抗性種群。3、方法的特異性本實(shí)用新型能夠檢測(cè)對(duì)DDVP產(chǎn)生抗藥性的家蠅種群，對(duì)其它種類殺蟲劑,如有機(jī)氯類及擬除蟲菊酯類殺蟲劑產(chǎn)生抗藥性的種群不產(chǎn)生交叉反應(yīng)。4、樣品的檢測(cè)能力本實(shí)用新型只對(duì)家蠅種群DDVP的抗藥性檢測(cè)有實(shí)用性，不應(yīng)用于其它類醫(yī)學(xué)昆蟲及其它類殺蟲劑抗藥性檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)I、待測(cè)樣品制備將8頭家蠅成蟲置于_20°C或_40°C冰箱內(nèi)30分鐘，用鑷子取其頭部放入I. 5mL離心管中，加入2 O O μ L冰冷緩沖液，用研磨棒勻漿，整個(gè)操作在冰上進(jìn)行。勻漿液于40C IOOOOXg離心24分鐘，取上清液為待測(cè)樣品，4°C下保存?zhèn)溆谩0028]2、樣品的檢測(cè)取I只底物管，少許離心使藥聚集到管底，取ImL顯色劑加到底物管中配成顯色液。取3只O. 5mL離心管，I號(hào)管為陽性對(duì)照管，2號(hào)管為檢測(cè)管，3號(hào)管為陰性對(duì)照管。每管加入70 μ L待測(cè)樣品，然后I號(hào)管加入10 μ L陽性對(duì)照，2號(hào)管加入10 μ L抑制劑，3號(hào)管加入10 μ L陰性對(duì)照，靜置2min。向各管中分別加入630 μ L顯色液，均勻混合后放置15min，直至出現(xiàn)顏色反應(yīng)。3、檢測(cè)結(jié)果判定陽性對(duì)照管為黃色，陰性對(duì)照管為無色，說明實(shí)驗(yàn)有效。檢測(cè)管為黃色時(shí)，說明檢測(cè)的家蠅種群對(duì)DDVP存在抗藥性；檢測(cè)管為無色時(shí)，說明檢測(cè)的家蠅種群對(duì)DDVP敏感?！?、抑制劑易揮發(fā)，用完后立刻蓋緊，剩余的回收處理。
權(quán)利要求1.家蠅對(duì)DDVP抗藥性快速檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括盒體和取液器，其中盒體中設(shè)置有含曲通-100的磷酸緩沖液的PB緩沖液試劑瓶、含乙酰膽堿ATCh的底物試劑瓶、含二硫雙對(duì)硝基苯甲酸的PB溶液顯色劑試劑瓶、含DDVP丙酮溶液的抑制劑試劑瓶、含乙酰膽堿脂酶AChE的陽性對(duì)照試劑瓶、含丙酮溶液的陰性對(duì)照試劑瓶。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種家蠅對(duì)DDVP抗藥性快速檢測(cè)的試劑盒，包括盒體和取液器，其中盒體中設(shè)置有含0.1%曲通-100的25mmol/L磷酸緩沖液的PB緩沖液試劑瓶、含乙酰膽堿ATCh的底物試劑瓶、含二硫雙對(duì)硝基苯甲酸的PB溶液顯色劑試劑瓶、含0.04mg/mL的DDVP丙酮溶液的抑制劑試劑瓶、含0.05mg/mL乙酰膽堿脂酶AChE的陽性對(duì)照試劑瓶、含丙酮溶液的陰性對(duì)照試劑瓶。本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，能夠在檢測(cè)現(xiàn)場(chǎng)，快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)家蠅對(duì)DDVP抗藥性，其具有使用方便、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N21/78GK202693477SQ201120509529
公開日2013年1月23日 申請(qǐng)日期2011年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月8日
發(fā)明者曹曉梅, 楊振洲, 張曉龍, 陳拓, 房健慧 申請(qǐng)人:中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院