專利名稱：一種白芷提取物及質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種白芷提取物及質(zhì)量檢測(cè)方法，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
白芷始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，為常用的解表、止痛藥。白芷為白芷商品藥材的 主流品種，約占全國(guó)商品白芷產(chǎn)量的70%。目前報(bào)道利用白芷的文獻(xiàn)較多，如申請(qǐng)?zhí)?200710111315. 3，發(fā)明名稱白芷總香豆素提取物及其制備方法，該發(fā)明公開(kāi)了一種從中藥 白芷中提取得到的總香豆素提取物及其制備方法。該提取物包括的選擇性基本成分為歐前 胡素、異歐前胡素、5-羥基-8-甲氧基補(bǔ)骨脂內(nèi)酯、佛手柑內(nèi)酯，或其任何一種或數(shù)種的組 合。該提取物還包括白芷素、水合氧化前胡素、異氧化前胡素、5-甲氧基-8-羥基補(bǔ)骨脂內(nèi) 酯、花椒毒酚等成分中的任何一種或數(shù)種的組合。該提取物可由溶劑提取法、溶劑萃取法、 大孔吸附樹(shù)脂法、鉛鹽沉淀法、柱色譜法、液-液逆流分配色譜法等任意一種方法，或這些 方法的任意組合制備獲得。所制得的白芷總香豆素提取物中各種香豆素類成分百分含量的 總和為5 100% (w/w)，其中歐前胡素、異歐前胡素、佛手柑內(nèi)酯三種成分的含量占全部總 香豆素含量的5 100% (w/w)。白芷的產(chǎn)地加工方法對(duì)白芷質(zhì)量影響較大，目前主要采用硫磺煙熏法，但是，大量 實(shí)驗(yàn)證實(shí)熏硫后其香豆素及揮發(fā)油類成分大大降低，白芷的藥效不穩(wěn)定，因此控制白芷藥 材質(zhì)量至關(guān)緊要。關(guān)于白芷質(zhì)量控制方法的報(bào)道有《中國(guó)藥典》2000年版對(duì)白芷藥材的 質(zhì)量控制只限于原植物品種、藥材性狀和簡(jiǎn)單的理化鑒別，缺乏一套行之有效的內(nèi)在質(zhì)量 控制方法和量化指標(biāo)。高穎，等，白芷中歐前胡素含量測(cè)定方法的比較，成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué) 報(bào)，2006年12月第四卷第4期，公開(kāi)了另一種歐前胡素含量測(cè)定方法，其中，以甲醇水 (70 30)為流動(dòng)相、流速lml/min、柱溫25°C、檢測(cè)波長(zhǎng)300nm，理論板數(shù)按歐前胡素峰計(jì) 算不低于3000。該方法可同時(shí)測(cè)定三種主要香豆素類成分的含量。鐘世紅，等，白芷HPLC 指紋圖譜研究，世界科學(xué)技術(shù)一中醫(yī)藥現(xiàn)代化標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范，2005，第七卷第六期。對(duì)樣品進(jìn) 行HPLC測(cè)定，采用主成分分析、聚類分析及相似度評(píng)價(jià)等多種方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，并對(duì)白芷規(guī) 范化種植中不同試驗(yàn)項(xiàng)目樣品進(jìn)行了指紋圖譜的比較。結(jié)果熏硫和未熏硫樣品的指紋圖 譜存在較大差異，分別建立了熏硫和未熏硫白芷藥材的指紋圖譜。目前報(bào)道的上述定量或 定性的方法還不能有效的控制白芷的質(zhì)量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了 一種白芷提取物，本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了白 芷藥材及白芷提取物的質(zhì)量檢測(cè)方法。本發(fā)明提供了一種白芷提取物，它含有氧化前胡素9. 50-14. 24mg/go它還含有歐 前胡素 5. 52-8. 28mg/go本發(fā)明白芷提取物是白芷藥材的水或有機(jī)溶劑提取物。它是由下述方法制備而 成取白芷藥材粗粉，加50-95%乙醇提??；提取液經(jīng)60-70°C減壓濃縮干燥，即得白芷提取物。其中，所述的乙醇提取方法是滲漉法或超聲提取法。所述的白芷提取物的HPLC指紋圖譜如圖2所示，色譜條件為色譜柱 DiamonsiItmC18 HPLC色譜柱Q50X4. 6mm，5 μ m)；流動(dòng)相甲醇-四氫呋喃-水 (56 9 35)；流速1. Oml/min ；柱溫:30°C ；進(jìn)樣量:10μ 1 ；檢測(cè)波長(zhǎng):305nm ；理論板數(shù) 以氧化前胡素、歐前胡素計(jì)應(yīng)不低于4000。本發(fā)明所述的白芷或白芷提取物，是指未經(jīng)熏硫的白芷，其中，白芷為傘形科當(dāng)歸 屬植物白 ￡ Angelica dahurica (Fisch. Ex Hoffm.)或杭白 Angelica dahurica (Fisch. Ex Hoffm. )Benth. et Hook. f. var. formosana(Boiss. )Shan et Yuan 的根。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它是以含有所述的白芷提取物為活性成分，加 上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。其中，所述的藥劑是膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、口服液、軟膠囊劑或滴丸劑。本發(fā)明提供了一種檢測(cè)白芷藥材、白芷提取物或含有白芷提取物的藥物組合物的 質(zhì)量的方法，其特征在于它同時(shí)以氧化前胡素、歐前胡素為指標(biāo)成分進(jìn)行質(zhì)量控制，它包 括如下步驟a、通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為305nm ；b、取氧化前胡素、歐前胡素對(duì)照品，加甲醇制成對(duì)照品溶液；C、供試品溶液制備取白芷藥材、提取物或制劑，加甲醇，功率300W，頻率50kHz的 超聲提取0. 5-1. 5小時(shí)，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；d、分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。其中，a步驟所述的色譜條件為色譜柱=Diamonsir C18HPLC色譜柱 O50X4.6mm，5ym)；流動(dòng)相甲醇-四氫呋喃-水(56 9 35)；流速1. Oml/min ；柱 溫30°C ；進(jìn)樣量10μ 1 ；檢測(cè)波長(zhǎng)305nm ；理論板數(shù)以氧化前胡素、歐前胡素計(jì)應(yīng)不低于 4000。所述的白芷藥材中含有氧化前胡素0. 12-0. 23% w/w、歐前胡素0. 11-0. 22% Wi本發(fā)明通過(guò)同時(shí)檢測(cè)氧化前胡素、歐前胡素的含量，可有效的控制了白芷藥材及 提取物的質(zhì)量，本發(fā)明白芷藥材的質(zhì)量控制方法可用于監(jiān)測(cè)藥材的質(zhì)量，用于檢測(cè)、分辨熏 硫和未熏硫白芷，能夠有效地監(jiān)控白芷藥品的質(zhì)量，本發(fā)明藥物的藥效明確，可控性更強(qiáng)。


圖1本發(fā)明白芷提取工藝流程2供試品溶液色譜圖(流動(dòng)相為甲醇水65 35)圖3對(duì)照品色譜圖(6. OOmin為氧化前胡素、8. 42min為歐前胡素)圖4供試品溶液色譜圖(原料藥未熏硫，批號(hào)091001)圖5供試品色譜圖(原料藥熏硫，批號(hào)091011)圖6氧化前胡素標(biāo)準(zhǔn)曲線7歐前胡素標(biāo)準(zhǔn)曲線8氧化前胡素對(duì)照品色譜9氧化前胡素對(duì)照品吸收曲線圖10歐前胡素對(duì)照品吸收曲線
圖11供試品溶液色譜圖(流動(dòng)相為甲醇-水70 30)圖12供試品溶液色譜圖(未熏硫白芷)圖13供試品溶液色譜圖(熏硫白芷)圖14歐前胡素對(duì)照品色譜15供試品溶液60min色譜圖
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1白芷提取物的制備方法白芷藥材打成粗粉，50%乙醇溶液浸泡24h后以2. 5ml/min -kg的速度滲漉，收集 6倍量的藥液，在60 70°C的溫度下進(jìn)行減壓濃縮成型，干燥，得本發(fā)明白芷提取物。實(shí)施例2本發(fā)明白芷提取物的制備白芷藥材粗粉加12倍量的70%乙醇，功率80W，55°C溫度下超聲提取50min，提取 3次，濃縮方法同實(shí)施例1，干燥即得本發(fā)明白芷提取物。實(shí)施例3本發(fā)明白芷提取物的制備取白芷藥材，按實(shí)施例1方法進(jìn)行提取、濃縮，所得的藥液，進(jìn)行噴霧干燥。噴霧干燥的條件為進(jìn)液物料溫度70 80 °C ；浸膏相對(duì)密度1. 08 1. 10 (600C )；進(jìn)液速度60 70ml/min ；進(jìn)風(fēng)溫度138 140°C;出風(fēng)溫度83 85°C。得 白芷提取物。實(shí)施例4本發(fā)明藥物的制備按照實(shí)施例3的方法制備，在進(jìn)行噴霧干燥時(shí)，加入40%干膏重量的糊精，得顆粒 劑。實(shí)施例5本發(fā)明藥物的制備取實(shí)施例1制備得到的白芷提取物，加入藥學(xué)上可接受的輔料，制備得到片劑。實(shí)施例6本發(fā)明藥物的制備取實(shí)施例1減壓濃縮得到的藥液，除雜后，加入藥學(xué)上可接受的輔料，制備得到口 服液。實(shí)施例1-6對(duì)本發(fā)明白芷提取物及藥物的制備方法，不應(yīng)理解為是對(duì)本發(fā)明保護(hù) 范圍的限制，凡基于上述技術(shù)思想，利用本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段所做的修改、替 換、變更均屬于本發(fā)明的范圍。實(shí)施例7本發(fā)明白芷提取物提取工藝參數(shù)篩選試驗(yàn)一、建立了指標(biāo)考察方法白芷中香豆素類成分為其主要活性成分，現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明白芷中所含的呋喃香 豆素具有解熱鎮(zhèn)痛、抗炎、平喘、降壓、抗菌、解痙、光敏、活化交感系激素等多種藥理作用。 此外，歐前胡素為其主要有效成分之一。故確定以總香豆素、歐前胡素為化學(xué)指標(biāo)。為兼顧 成型，以干膏率作為工藝研究的參考指標(biāo)。1.干膏率的測(cè)定分別精密移取各提取液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，殘?jiān)?于烘箱中105°C干燥3小時(shí)，移置干燥器中冷卻30分鐘，精密稱定重量，計(jì)算干膏率(％ )。2.總香豆素含量的測(cè)定
5
以歐前胡素為對(duì)照品，采用分光光度法在300nm處測(cè)定。標(biāo)準(zhǔn)曲線為A = 48. 998C-0. 0012，(R2 = 0. 9999，η = 6)在 5. 15 18. 025 μ g/ml 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；方 法精密度RSD = 0. 16% ；方法穩(wěn)定性樣品供試液在他內(nèi)穩(wěn)定，RSD = 2. 19%。方法回收 率為 98. 25%, RSD = 1. 70%。3.歐前胡素含量的測(cè)定采用高效液相色譜法測(cè)定。色譜條件用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；甲醇水 (70 30)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為300匪。柱溫:30°C，流速為1. Oml/min，進(jìn)樣量=IOyL0標(biāo)準(zhǔn)曲線為=Y = 7Ε+06Χ+21286，R = 0. 9999，在103 927 μ g范圍內(nèi)線性關(guān)系良 好；方法精密度RSD = 2. 12% ；方法穩(wěn)定性樣品供試溶液在120h內(nèi)穩(wěn)定，RSD = 2. 35% ； 方法回收率為98. 68%, RSD = 1. 96%。二、本發(fā)明白芷提取物制備工藝研究1.提取工藝考察預(yù)實(shí)驗(yàn)中對(duì)白芷滲漉法提取工藝進(jìn)行了正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)考察，結(jié)果顯示無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義，分析原因是由于裝筒過(guò)程中如裝筒的松緊度、新鮮藥液的加入量、棉花的厚薄等不確定 因素造成的，最終選擇單因素考察。(1)提取溶媒考察稱取IOOg白芷粗粉兩份，分別用水和95%乙醇進(jìn)行提取，提取液濃縮并定容至一 定體積，按含量測(cè)定方法計(jì)算水提液和醇提液中總香豆素及歐前胡素的含量。表1提取溶 媒的考察結(jié)果
提取溶媒香豆素(mg/g)歐前胡素(mg/g)水2.03160.015895%乙醇7.09621.0614(2)藥材粒度的考察稱取白芷藥材最粗粉、粗粉、中粉各3份，每份100g，以50%的乙醇溶脹1小時(shí)后， 裝筒，浸漬4小時(shí)后，以0. 25ml/min的速度滲漉提取，收集滲漉液600ml取樣，分別測(cè)定香 豆素、歐前胡素、干膏率，結(jié)果見(jiàn)表2 :表2藥材粒度的考察結(jié)果
藥材粒徑總香豆素(mg/g)歐前胡素(mg/g)干膏率(％)最粗粉10.15411.348815.14粗粉11.25601.445315.17中粉9.81171.433015.08結(jié)果表明藥材以粗粉滲漉的效果最好，藥粉過(guò)粗，有效成分不容易浸出，藥材粉 碎得太細(xì)，藥液不易流出，放大實(shí)驗(yàn)中往往發(fā)生堵塞現(xiàn)象。由此確定了以粗粉為最佳粉碎粒度。(3)不同提取方法提取結(jié)果比較取白芷粗粉3份，每份約100g，稱定，一份以50%乙醇溶脹1小時(shí)后浸泡4小時(shí)， 以0. 25ml/min的速度滲漉提取，收集滲漉液至600ml ；—份用50%的乙醇回流提取3次，每次600ml，1小時(shí)；另一份以6倍量50%乙醇室溫超聲提取30min，2次，各收集6倍量藥液。表3提取方法的考察結(jié)果
提取方法總香豆素(mg/g)歐前胡素(mg/g)干膏率(％)滲漉法10.44151.235615.98回流提取法9.95061.061714.20超聲法7.65350.953411.53由表可知滲漉法對(duì)指標(biāo)成分的提取效果優(yōu)于其它提取方法，而且故選擇滲漉法 進(jìn)行提取。綜合以上考察結(jié)果，確定以乙醇滲漉提取的工藝路線。(4)溶媒濃度的考察稱取白芷藥材最粗粉5份，每份100g，分別以不同濃度的乙醇溶脹1小時(shí)后，裝筒， 浸漬4小時(shí)后，以0. 25ml/min的速度滲漉，收集滲漉液至600ml。表4溶媒濃度的考察結(jié)果
乙醇濃度總香豆素(mg/g)歐前胡素(mg/g)_干膏率(％)
50%10.77921.1854 14.77
65%9.48601.0871 11.86
75%8.75321.0493 8.65
85%6.45310.8045 7.74
95%5.96590.8027 6.33結(jié)果表明50^^65^^75%乙醇對(duì)總香豆素的提取效果相當(dāng)，干膏率依次減小，但 是隨著醇濃度的降低，提取的雜質(zhì)就越多。后期通過(guò)對(duì)50%和70%乙醇的比較，結(jié)合成本 考慮，暫定50%乙醇滲漉。(5)滲漉速度的考察稱取白芷藥材最粗粉4份，每份100g，以50%的乙醇溶脹1小時(shí)后，裝筒，浸漬4 小時(shí)后，分別以0. 25ml/min，0. 5ml/min, 1. 0ml/min，2. Oml/min的速度滲漉提取(鑒于中試 放大實(shí)驗(yàn)節(jié)約時(shí)間的考慮)，收集滲漉液600ml。表5滲漉速度的考察結(jié)果
滲漉速度(ml/min)總香豆素(mg/g)歐前胡素(mg/g)干膏率(％)0.2510.45801.087111.86%0.59.47861.061210.49%1.08.67971.00687.92%2.08.44610.98167.06%結(jié)果表明0. 25ml/min的滲漉速度提取效果優(yōu)于其它滲速。故確定IOOg藥材的 滲漉速度為0. 25ml/min,即滲漉速度為2. 5ml/min · kg。(6)浸泡時(shí)間的考察稱取白芷藥材最粗粉4份，每份100g，以50%的乙醇溶脹1小時(shí)后，裝筒，分別浸 泡4h、8h、12h、24h后，以0. 25ml/min的速度滲漉提取，收集滲漉液600ml。表6浸泡時(shí)間的考察結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種白芷提取物，其特征在于它含有氧化前胡素9. 50-14. 24mg/go
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白芷提取物，其特征在于它還含有歐前胡素5.52-8. 28mg/
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的白芷提取物，其特征在于它是白芷藥材的水或有機(jī)溶 劑提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的白芷提取物，其特征在于它是由下述方法制備而成取白芷 藥材粗粉，加50-95%乙醇提取；提取液經(jīng)60-70°C減壓濃縮干燥，即得白芷提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的白芷提取物，其特征在于所述的乙醇提取方法是滲漉法或 超聲提取法。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的白芷提取物，其特征在于所述的白芷提取 物的HPLC指紋圖譜如圖2所示，色譜條件為色譜柱Aiamonsil C18 HPLC色譜柱 (250X4. 6mm，5ym)；流動(dòng)相甲醇-四氫呋喃-水(56 9 35)；流速1. Oml/min ；柱 溫30°C ；進(jìn)樣量10μ 1 ；檢測(cè)波長(zhǎng)305nm ；理論板數(shù)以氧化前胡素、歐前胡素計(jì)應(yīng)不低于 4000。
7.—種藥物組合物，它是以含有權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的白芷提取物為活性成分， 加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于所述的藥劑是膠囊劑、片劑、顆粒 劑、丸劑、口服液、軟膠囊劑或滴丸劑。
9.一種檢測(cè)白芷藥材、權(quán)利要求1所述的白芷提取物或含有白芷提取物的藥物組合物 的質(zhì)量的方法，其特征在于它同時(shí)以氧化前胡素、歐前胡素為指標(biāo)成分進(jìn)行質(zhì)量控制，它 包括如下步驟a、通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為305nm；b、取氧化前胡素、歐前胡素對(duì)照品，制備成對(duì)照品溶液；c、供試品溶液制備取白芷藥材、提取物或制劑，加甲醇，功率300W，頻率50kHz的超聲 提取0. 5-1. 5小時(shí)，取出，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；d、分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于a步驟所述的色譜條件為 色譜柱Diamonsil C18 HPLC色譜柱(250X4. 6讓，5 μ m)；流動(dòng)相甲醇-四氫呋喃-水 (56 9 35)；流速1. Oml/min ；柱溫:30°C ；進(jìn)樣量:10μ 1 ；檢測(cè)波長(zhǎng):305nm ；理論板數(shù) 以氧化前胡素、歐前胡素計(jì)應(yīng)不低于4000。
11.根據(jù)權(quán)利要求9或10所述的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述的白芷藥材中氧化 前胡素的含量不得低于0. 12% w/w，歐前胡素的含量不得低于0. w/w。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其特征在于所述的白芷藥材中含有氧化前 胡素 0. 12-0. 23% w/w、歐前胡素 0. 11-0. 22% w/w。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種白芷提取物，它含有氧化前胡素9.50-14.24mg/g。本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，它是以含有該白芷提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的輔料或輔助性成分制備而成的藥劑。本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)白芷藥材、白芷提取物或含有白芷提取物的藥物組合物的質(zhì)量的方法，是以氧化前胡素為指標(biāo)成分進(jìn)行質(zhì)量控制。本發(fā)明通過(guò)控制氧化前胡素、歐前胡素的含量，檢測(cè)白芷藥材及提取物的質(zhì)量，且質(zhì)量檢測(cè)方法可用于監(jiān)測(cè)藥材的質(zhì)量，檢測(cè)、分辨熏硫和未熏硫白芷，能夠有效地監(jiān)控白芷藥品的質(zhì)量，本發(fā)明藥物的藥效明確，可控性更強(qiáng)。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102058641SQ20101062273
公開(kāi)日2011年5月18日 申請(qǐng)日期2010年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月29日
發(fā)明者盧曉琳, 肖丹, 董自亮, 蔣桂華, 鐘世紅, 馬逾英, 高穎 申請(qǐng)人:成都中醫(yī)藥大學(xué)