專利名稱：：檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種免疫透射比濁的檢測(cè)方法，尤其是涉及一種檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
：脂聯(lián)素(adiponectin)亦稱Acrp30、GBP28或AdipoQ，是由脂肪細(xì)胞分泌一種激素蛋白，能在人體血漿中穩(wěn)定存在，濃度范圍約為3.017.Omg/L，約占血漿蛋白的0.01%([1]AritaY,KiharaS,OuchiN,etal.Paradoxicaldecreaseofanadipose-specificprotein,adiponectin,inobesity[J].BiochemBiophysResCommun,1999,257(1)=79-83)0隨著對(duì)脂聯(lián)素研究的不斷深入，已發(fā)現(xiàn)，脂聯(lián)素在肥胖癥患者和II型糖尿病患者血清中的濃度明顯低于非肥胖者，其濃度的降低導(dǎo)致了胰島素抵抗和高胰島素血癥，而脂聯(lián)素有防止動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的作用，因此，脂聯(lián)素與肥胖癥患者II型糖尿病及冠心病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，即脂聯(lián)素的明顯降低預(yù)示著II型糖尿病及冠心病的發(fā)生明顯增加([2]ZhangMH,SpiesC,AliS,etal.Adiponectinandinducibleischemiainpatientswithstablecoronaryheartdisease-AaXafromtheHeartandSoulstudy[J].Atherosclerosis,2009,205(1):233_238;[3]KawanoJ,AroraR.Theroleofadiponectininobesity,diabetes,andcardiovasculardisease[J].JCardiometabSyndr.2009,4(1):44-49)。測(cè)定血中脂聯(lián)素水平，對(duì)這些疾病的診斷和預(yù)后有重要意義。目前，脂聯(lián)素的臨床診斷技術(shù)主要包括放射免疫法(RIA)([4]SchulzeMB,ShaiI,RimmEB,etal.Adiponectinandfuturecoronaryheartdiseaseeventsamongmenwithtype2diabetes[J]·Diabetes，2005，54(2):534_539)、酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)([5]UrbonavicieneG,FrystykJ,FlyvbjergA,etal.Associationofserumadiponectinwithriskforcardiovasculareventsinpatientswithperipheralarterialdisease[J].Atherosclerosis,2010,210(2)619-624)等方法，它們的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度較高，缺點(diǎn)是操作繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，易受人為操作和外界因素干擾，自動(dòng)化程度低，而且放射性標(biāo)記物會(huì)對(duì)操作者產(chǎn)生危害，對(duì)環(huán)境造成污染。這些缺點(diǎn)限制了現(xiàn)有的脂聯(lián)素檢測(cè)方法的推廣應(yīng)用，使其無(wú)法廣泛地應(yīng)用于臨床診斷與科研工作。顆粒±曾強(qiáng)免疫透射比池法(particle-enhancedturbidimetricimmunoassay,PETIA)是近年來(lái)出現(xiàn)的一種較為穩(wěn)定、準(zhǔn)確的體液蛋白均相免疫比濁檢測(cè)方法，其基本原理是一定粒徑膠乳顆粒的表面交聯(lián)單克隆或多克隆抗體，當(dāng)交聯(lián)有抗體的微球與抗原結(jié)合后，在短時(shí)間內(nèi)會(huì)迅速聚集在一起，改變了反應(yīng)液的吸光度。而且，這種改變與被測(cè)抗原的濃度有較強(qiáng)的相關(guān)性，在一定范圍內(nèi)可以反映被測(cè)抗原的濃度。此技術(shù)通過(guò)顆粒增強(qiáng)的方式，放大了抗原抗體反應(yīng)，彌補(bǔ)了普通透射比濁法靈敏度不高的不足，同時(shí)又繼承了透射比濁法穩(wěn)定性好、方便快速的優(yōu)點(diǎn)，克服ELISA和RIA方法的缺點(diǎn)，已越來(lái)越廣泛應(yīng)用于臨床上各種微量蛋白的定量檢測(cè)。目前，膠乳增強(qiáng)免疫透射比濁法已廣泛用于胱抑素C([6]Al-TurkmaniMR，LawT，KelloggMD.Performanceevaluationofaparticle-enhancedturbidimetriccystatinCassayontheHitachi917analyzer[J].ClinChimActa.2008,398(1-2):75_77)、脂蛋白(a)、C反應(yīng)蛋白、超敏C反應(yīng)蛋白、抗鏈球菌溶血素O的檢測(cè)，取得良好的社會(huì)效益，但國(guó)內(nèi)外至今尚未見(jiàn)有此類脂聯(lián)素檢測(cè)試劑盒問(wèn)世
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒及其制備方法。本發(fā)明所述檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，包括盒體、應(yīng)用液瓶和包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶，所述應(yīng)用液瓶和包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶放置于盒體內(nèi)，所述應(yīng)用液瓶中裝應(yīng)用液，所述應(yīng)用液的組成及其按質(zhì)量百分比的含量為表面活性劑0.1%0.5%、防腐劑0.05%1%、高分子加速劑2%8%、氯化鈉0.10%和緩沖劑50200mmol/L；所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶中裝包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液，所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液的組成及其按質(zhì)量百分比的含量為包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體膠乳0.5%5%、表面活性劑0.0.5%、穩(wěn)定劑0.0.5%和緩沖劑10100mmol/L。所述應(yīng)用液中的表面活性劑可選自Tween20或Triton-XlOO等。所述應(yīng)用液中的防腐劑可選自Proclin300或疊氮鈉等。所述應(yīng)用液中的高分子加速劑可選自聚乙二醇6000(PEG6000)或聚乙二醇8000(PEG8000)等。所述應(yīng)用液中的緩沖劑可選自三羥甲基氨基甲烷(Tris)、磷酸鹽或甘氨酸等。所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液中的表面活性劑可選自Tween20或Triton-XlOO等。所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液中的穩(wěn)定劑可選自牛血清白蛋白(BSA)等。所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液中的緩沖劑選自三羥甲基氨基甲烷(Tris)、磷酸鹽或甘氨酸等。所述應(yīng)用液緩沖劑與膠乳懸液緩沖劑最好保持一致。所述檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒的制備方法包括以下步驟1)制備膠乳抗體將兩種小鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體分別與醛基微球交聯(lián)，得兩種膠乳抗體懸液；在步驟1)中，所述將兩種小鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體分別與醛基微球交聯(lián)，可采用以下具體方法在碳酸鹽緩沖液中將醛基微球分別與兩種小鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體混勻，37°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)后，加入碳酸鹽緩沖液配制的NaBH4溶液，4°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)后，再加入碳酸鹽緩沖液配制的甘氨酸溶液，再4°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)后，用清洗貯存液進(jìn)行清洗，所得膠乳抗體沉淀重懸于清洗貯存液中，得膠乳抗體懸液，置于4°C環(huán)境放置；所述兩種小鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體可采用clone:Adn37抗體和clone:Adn26抗體；所述醛基微球可采用上海照康生物科技有限公司提供的醛基微球，所述醛基微球的粒徑可為100300nm，最好為150匪，醛基微球的質(zhì)量百分比為0.5%5%；所述碳酸鹽緩沖液pH可為8.59.6，最好為9.6；質(zhì)量百分比為20IOOmmol/L,最好為50mmol/L。所述37°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)的時(shí)間可為416h，最好為16h所述NaBH4溶液的質(zhì)量百分比為0.050.5g/L，最好為0.lg/L；所述4°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)的時(shí)間可為24h，最好為4h；所述甘氨酸溶液的質(zhì)量百分比可為10lOOmmol/L，最好為50mmol/L；所述再4°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)的時(shí)間可為224h，最好為16h；所述清洗貯存液pH可為7.48.8，最好為8.0，包括緩沖劑、表面活性劑和穩(wěn)定齊U。緩沖劑可以是磷酸鹽，也可以是三羥甲基氨基甲烷(TriS)或甘氨酸，緩沖劑在清洗貯存液中所占的質(zhì)量百分比為10lOOmmol/L，最好為25mmol/L，表面活性劑和穩(wěn)定劑的質(zhì)量百分比分別為0.0.5%和0.05%0.5%，最好為0.2%和0.1%。2)制備包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液分別將步驟1)制備的兩種膠乳抗體懸液混合，得包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液；在步驟2)中，所述兩種膠乳抗體懸液混合最好是兩種膠乳抗體懸液等體積混合。3)制備應(yīng)用液將表面活性劑、防腐劑、高分子加速劑、氯化鈉和緩沖劑一并完全溶解于水中，得應(yīng)用液；在步驟3)中，所述緩沖劑種類與步驟2)中清洗貯存液中緩沖劑保持一致；所述應(yīng)用液PH值可為7.48.0，最好為8.0；所述表面活性劑所占的質(zhì)量百分比可為0.0.5%,最好為0.2%，防腐劑所占的質(zhì)量百分比可為0.05%1%，最好為0.1%，高分子加速劑所占的質(zhì)量百分比可為2%8%，最好為4%;氯化鈉所占的質(zhì)量百分比可為0.10%，最好為1.2%，緩沖劑的質(zhì)量百分比可為50200mmol/L，最好為100mmol/L。4)配制脂聯(lián)素系列標(biāo)準(zhǔn)品選用脂聯(lián)素標(biāo)準(zhǔn)品，使用小牛血清進(jìn)行系列稀釋S6:40μg/ml，S5:20μg/ml，S4:10μg/ml,S3:5μg/ml，S2:1μg/mlSl:0.2μg/mlSO小牛血清，分裝即可。在步驟4)中，所述脂聯(lián)素標(biāo)準(zhǔn)品可選用商品化高純度脂聯(lián)素標(biāo)準(zhǔn)品；所述分裝可采用0.5ml/瓶分裝。以下給出采用所述檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒在生化分析儀上進(jìn)行脂聯(lián)素檢測(cè)的具體條件在生化分析儀上設(shè)定參數(shù)反應(yīng)溫度37°C；分析方法2點(diǎn)終點(diǎn)法；主波長(zhǎng)570nm，副波長(zhǎng)800nm(可不用)；樣品量/應(yīng)用液(Rl)/包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液(R2)5μ1/200μ1/50μ1；反應(yīng)方向上升。本發(fā)明采用抗人脂聯(lián)素單克隆抗體包被醛基微球，通過(guò)顆粒增強(qiáng)的方式，放大了抗原抗體反應(yīng)，彌補(bǔ)了普通透射比濁法靈敏度不高的不足，同時(shí)又繼承了透射比濁法穩(wěn)定性好、方便快速的優(yōu)點(diǎn)，克服ELISA和RIA方法操作復(fù)雜、重復(fù)性不好等的缺點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)人血脂聯(lián)素在生化儀上大批量定量快速檢測(cè)人脂聯(lián)素水平，歸納起來(lái)有以下幾個(gè)方面的突出優(yōu)點(diǎn)(1)操作簡(jiǎn)單；(2)靈敏度較高，可達(dá)0.2yg/ml;(3)不易受人為操作和外界因素干擾，檢測(cè)穩(wěn)定性和重復(fù)性好，能較真實(shí)地反映被測(cè)物質(zhì)的含量；(4)能利用生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)，容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，適于臨床推廣應(yīng)用。圖1為本發(fā)明所述檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒實(shí)施例的結(jié)構(gòu)組成示意圖。具體實(shí)施例方式參見(jiàn)圖1，本發(fā)明所述檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒實(shí)施例包括盒體1、應(yīng)用液瓶2和包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶3，所述應(yīng)用液瓶2和包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶3放置于盒體1內(nèi)，所述應(yīng)用液瓶中裝應(yīng)用液，所述應(yīng)用液的組成及其按質(zhì)量百分比的含量為表面活性劑0.0.5%、防腐劑0.05%1%、高分子加速劑20Z08%、氯化鈉0.10%和緩沖劑50200mmol/L；所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶中裝包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液，所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液的組成及其按質(zhì)量百分比的含量為包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體膠乳0.5%5%、表面活性劑0.0.5%、穩(wěn)定劑0.0.5%和緩沖劑101OOmmol/L。實(shí)施例1制備檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒以4mg醛基微球?yàn)槔?，本?shí)施例的主要步驟包括1.制備膠乳抗體選用高純度、高親和力的兩種小鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體(clone:Adn37,cloneAdn26)。使用20mmol/L碳酸鹽緩沖液(pH9.6)將醛基微球分別與兩種抗體以101的質(zhì)量比混勻，37°C，旋轉(zhuǎn)反應(yīng)16h，此時(shí)總反應(yīng)體積為400μ1；反應(yīng)結(jié)束后，加入上述碳酸鹽緩沖液配制的4mg/mlNaBH4溶液20μ1，4°C，反應(yīng)4h；再加入封閉試劑lmol/L甘氨酸溶液20μ1，4°C，反應(yīng)16h;25mmol/LTBS緩沖液(含Tween200.2%,BSA0.1%，ρΗ7·4)清洗3次；沉淀重懸于4ml25mmol/LTBS緩沖液(含Tween200.2%,BSA0.1%,ρΗ7·4)，膠乳懸液濃度為lmg/ml。2.兩種膠乳抗體混合，制備包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液分別將制備的兩種膠乳抗體懸液等體積混合，此為R2膠乳懸液。3.制備應(yīng)用液pH8.0的50mmol/Ltris緩沖液，內(nèi)含12%的NaCl,4%^PEG6000，0.1%Proclin300。4.脂聯(lián)素系列標(biāo)準(zhǔn)品的配制選用商品化高純度脂聯(lián)素標(biāo)準(zhǔn)品，使用小牛血清進(jìn)行系列稀釋S6:40μg/ml，S5:20μg/ml,S4:10μg/ml，S3:5μg/ml，S2:1μg/ml，Sl:0.2μg/mlSO小牛血清，0.5ml/瓶分裝即可。實(shí)施例2制備檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒以4mg醛基微球?yàn)槔?，本?shí)施例的主要步驟包括1.制備膠乳抗體將醛基微球分別與兩種抗體以201的質(zhì)量比混勻，余同實(shí)施例1。2.兩種膠乳抗體混合，制備包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液同實(shí)施例1。3.制備應(yīng)用液ρΗ7·4的50mmol/Ltris緩沖液，內(nèi)含12%的NaCl,6%^PEG6000，0.1%Proclin300。4.脂聯(lián)素系列標(biāo)準(zhǔn)品的配制同實(shí)施例1。實(shí)施例3制備檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒1.制備膠乳抗體將步驟1制備膠乳抗體中加入4mg/mlNaBH4溶液的量改為10μ1，4°C，反應(yīng)時(shí)間改為2h，余同實(shí)施例1。2.兩種膠乳抗體混合，制備包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液同實(shí)施例1。3.制備應(yīng)用液pH8.0的200mmol/Ltris緩沖液，內(nèi)含5.0%的NaCl,6%的PEG8000，0.1%Proclin300。4.脂聯(lián)素系列標(biāo)準(zhǔn)品的配制同實(shí)施例1。實(shí)施例4制備檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒1.制備膠乳抗體將實(shí)施例1步驟1)制備膠乳抗體中加入封閉試劑lmol/L甘氨酸溶液的量改為10μ1，4°C，反應(yīng)時(shí)間改為4h，25mmol/LTBS緩沖液中Tween20改為0.5%，BSA改為0.5%，pH改為8.0，余同實(shí)施例1。2.兩種膠乳抗體混合，制備包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液同實(shí)施例1。3.制備應(yīng)用液同實(shí)施例1。4.脂聯(lián)素系列標(biāo)準(zhǔn)品的配制同實(shí)施例1。實(shí)施例5生化分析儀上進(jìn)行脂聯(lián)素的檢測(cè)在7060型生化分析儀上設(shè)定參數(shù)反應(yīng)溫度37°C；分析方法2點(diǎn)終點(diǎn)法；主波長(zhǎng)570nm，副波長(zhǎng):800nm；樣品量/R1/R25μ1/250μ1/50μ1；反應(yīng)方向上升。讀點(diǎn)分別在20點(diǎn)及34點(diǎn)。選擇多點(diǎn)定標(biāo)后，儀器自動(dòng)完成定標(biāo)，定標(biāo)OK后，進(jìn)行常規(guī)血清標(biāo)本的脂聯(lián)素檢測(cè)，結(jié)果經(jīng)儀器自動(dòng)換算直接以mg/L為單位報(bào)告數(shù)值。權(quán)利要求檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于包括盒體、應(yīng)用液瓶和包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶，所述應(yīng)用液瓶和包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶放置于盒體內(nèi)，所述應(yīng)用液瓶中裝應(yīng)用液，所述應(yīng)用液的組成及其按質(zhì)量百分比的含量為表面活性劑0.1％～0.5％、防腐劑0.05％～1％、高分子加速劑2％～8％、氯化鈉0.1％～10％和緩沖劑50～200mmol/L；所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶中裝包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液，所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液的組成及其按質(zhì)量百分比的含量為包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體膠乳0.5％～5％、表面活性劑0.1％～0.5％、穩(wěn)定劑0.1％～0.5％和緩沖劑10～100mmol/L。2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于所述應(yīng)用液中的表面活性劑選自Tween20或Triton-XlOO；所述應(yīng)用液中的防腐劑選自Proclin300或疊氮鈉；所述應(yīng)用液中的高分子加速劑選自聚乙二醇6000或聚乙二醇8000；所述應(yīng)用液中的緩沖劑選自三羥甲基氨基甲烷、磷酸鹽或甘氨酸。3.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒，其特征在于所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液中的表面活性劑選自Tween20或Triton-XlOO；所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液中的穩(wěn)定劑選自牛血清白蛋白；所述包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液中的緩沖劑選自三羥甲基氨基甲烷、磷酸鹽或甘氨酸。4.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)制備膠乳抗體懸液將兩種小鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體分別與醛基微球交聯(lián)，得兩種膠乳抗體懸液；2)制備包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液分別將步驟1)制備的兩種膠乳抗體懸液混合，得包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液；3)制備應(yīng)用液將表面活性劑、防腐劑、高分子加速劑、氯化鈉和緩沖劑一并完全溶解于水中，得應(yīng)用液；4)配制脂聯(lián)素系列標(biāo)準(zhǔn)品選用脂聯(lián)素標(biāo)準(zhǔn)品，使用小牛血清進(jìn)行系列稀釋:S6:40yg/ml,S5:20yg/ml,S410μg/ml，S3:5μg/ml,S2:1μg/mlSl:0·2μg/mlSO小牛血清，分裝即可。5.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述將兩種小鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體分別與醛基微球交聯(lián)，采用以下具體方法在碳酸鹽緩沖液中將醛基微球分別與兩種小鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體混勻，37°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)后，加入碳酸鹽緩沖液配制的NaBH4溶液，4°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)后，再加入碳酸鹽緩沖液配制的甘氨酸溶液，再4°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)后，用清洗貯存液進(jìn)行清洗，所得膠乳抗體沉淀重懸于清洗貯存液中，得膠乳抗體懸液，置于4°C環(huán)境放置。6.如權(quán)利要4或5所述的檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述兩種小鼠抗人脂聯(lián)素單克隆抗體采用clone:Adn37抗體和clone:Adn26抗體；所述醛基微球的粒徑為100300nm，最好為150nm，醛基微球的質(zhì)量百分比為0.5%5%。7.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述碳酸鹽緩沖液pH為8.59.6，最好為9.6；質(zhì)量百分比為20100mmol/L，最好為50mmol/L；所述37°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)的時(shí)間為416h，最好為16h；所述NaBH4溶液的質(zhì)量百分比為0.050.5g/L，最好為0.lg/L；所述4°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)的時(shí)間為24h，最好為4h；所述甘氨酸溶液的質(zhì)量百分比為10lOOmmol/L，最好為50mmol/L；所述再4°C旋轉(zhuǎn)反應(yīng)的時(shí)間為224h，最好為16h。8.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述清洗貯存液PH為7.48.8，最好為8.0，包括緩沖劑、表面活性劑和穩(wěn)定劑；緩沖劑為磷酸鹽、三羥甲基氨基甲烷或甘氨酸，緩沖劑在清洗貯存液中所占的質(zhì)量百分比為10lOOmmol/L，最好為25mmol/L，表面活性劑和穩(wěn)定劑的質(zhì)量百分比分別為0.0.5%和0.05%0.5%，最好為0.2%和0.1%。9.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述兩種膠乳抗體懸液混合是兩種膠乳抗體懸液等體積混合。10.如權(quán)利要求4所述的檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述緩沖劑種類與步驟2)中清洗貯存液中緩沖劑保持一致；所述應(yīng)用液PH值為7.48.0，最好為8.0；所述表面活性劑所占的質(zhì)量百分比為0.0.5%，最好為0.2%，防腐劑所占的質(zhì)量百分比為0.05%1%，最好為0.1%，高分子加速劑所占的質(zhì)量百分比為2%8%，最好為4%；氯化鈉所占的質(zhì)量百分比為0.10%，最好為1.2%，緩沖劑的質(zhì)量百分比為50200mmol/L，最好為100mmol/L。全文摘要檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒及其制備方法，涉及一種免疫透射比濁的檢測(cè)方法。檢測(cè)脂聯(lián)素的顆粒增強(qiáng)免疫透射比濁試劑盒包括盒體、應(yīng)用液瓶和包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶，應(yīng)用液瓶中裝應(yīng)用液，應(yīng)用液的組成為表面活性劑、防腐劑、高分子加速劑、氯化鈉和緩沖劑；包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液瓶中裝包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液，包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液的組成為包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體膠乳、表面活性劑、穩(wěn)定劑和緩沖劑。先制備膠乳抗體，再制備包被抗人脂聯(lián)素單克隆抗體的膠乳懸液，然后制備應(yīng)用液，最后配制脂聯(lián)素系列標(biāo)準(zhǔn)品。文檔編號(hào)G01N33/531GK101968492SQ201010526950公開(kāi)日2011年2月9日申請(qǐng)日期2010年10月29日優(yōu)先權(quán)日2010年10月29日發(fā)明者張忠英,游攀,金宏偉,陳美珺申請(qǐng)人:廈門(mén)大學(xué)附屬中山醫(yī)院