專利名稱：多功能干片檢測(cè)板及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種多功能干片檢測(cè)板及其制備方法和在醫(yī)學(xué)診斷方面的應(yīng)用。 具體的說(shuō)是一種能夠快速定量或定性完成多項(xiàng)生化指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)的多功能干片 檢測(cè)板的結(jié)構(gòu)、制備方法、及其在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、臨床診斷方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)向來(lái)是疾病診斷最為準(zhǔn)確有效的手段之一。在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)發(fā)展日 新月異的今天，人們已經(jīng)可以利用當(dāng)今各學(xué)科先進(jìn)技術(shù)服務(wù)于臨床檢驗(yàn)，及時(shí)有 效的對(duì)疾病進(jìn)行診斷。自上世紀(jì)末，人們已將集生命科學(xué)技術(shù)、電子技術(shù)、計(jì)算 機(jī)技術(shù)等先進(jìn)技術(shù)于一體的全自動(dòng)生化儀應(yīng)用于臨床生化檢驗(yàn)，開創(chuàng)了生化項(xiàng)目 檢驗(yàn)的自動(dòng)化道路。由于全自動(dòng)生化儀存在價(jià)格高昂，體積龐大， 一次性樣品總 量大，對(duì)試劑要求高，操作相對(duì)繁瑣等問題，致使其無(wú)法全面普及。
干(生物)化學(xué)檢測(cè)技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新型生化檢驗(yàn)技術(shù)。干(生 物)化學(xué)檢測(cè)技術(shù)以其獨(dú)特的性能正在為臨床實(shí)驗(yàn)室所接受，成為臨床生化檢驗(yàn) 常規(guī)和急診檢測(cè)工作的新生力量。與傳統(tǒng)方法相比，具有操作簡(jiǎn)單、速度快、污 染少、結(jié)果穩(wěn)定準(zhǔn)確等諸多優(yōu)點(diǎn)。干(生物)化學(xué)檢測(cè)的方式，通常是將參與反 應(yīng)的各化學(xué)、生物試劑按比例配成溶液，加與固相反應(yīng)載體之上，經(jīng)干燥后可用 于臨床檢測(cè)。檢測(cè)過(guò)程中，干(生物)化學(xué)試劑溶解速度快、局部濃度高、反應(yīng) 速度快，同時(shí)，可保證一些試劑在固體干物料狀態(tài)下保持長(zhǎng)期穩(wěn)定。
目前，干(生物)化學(xué)快速檢測(cè)技術(shù)，在臨床檢測(cè)領(lǐng)域尚屬于新興技術(shù)，在 國(guó)內(nèi)外應(yīng)用尚不十分廣泛，其主要原因除了技術(shù)上存在一定難度之外，其檢測(cè)方 式上只能實(shí)現(xiàn)單人單項(xiàng)目檢測(cè)，檢測(cè)效率偏低，這也是阻礙干(生物)化學(xué)檢測(cè) 技術(shù)進(jìn)一步發(fā)展和全面普及的重要原因。

發(fā)明內(nèi)容
為解決干(生物)化學(xué)檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)效率偏低的問題，進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)更多臨床 生化指標(biāo)的快速檢測(cè)，我們基于干化學(xué)檢測(cè)技術(shù)，發(fā)明了一種多功能干片檢測(cè)板， 配合使用干片式快速檢測(cè)儀，可以實(shí)現(xiàn)一次檢測(cè)同時(shí)完成1 4 (亦可擴(kuò)展更多) 項(xiàng)生化指標(biāo)的檢測(cè)，檢測(cè)時(shí)間少于5分鐘，所需樣本量少，大大提高了檢測(cè)效率。
目前，本發(fā)明涉及的產(chǎn)品技術(shù)路線成熟，并取得了較好的臨床效果。
多功能干片檢測(cè)板由血標(biāo)本分離區(qū)(全血過(guò)濾板)和固相試劑反應(yīng)區(qū)(固相 反應(yīng)載體膜)兩部分組成。其中血標(biāo)本分離區(qū)的功能是將全血中的血漿或血清與 血細(xì)胞自動(dòng)分離并傳送到相應(yīng)的固相試劑反應(yīng)區(qū)，其主要部件包括全血過(guò)濾紙、 支撐墊及聚乙烯塑料支架；固相試劑反應(yīng)區(qū)的功能是將各種反應(yīng)試劑和顯色劑預(yù) 先固化在高分子材料上，當(dāng)分離出的血漿或血清傳送到反應(yīng)區(qū)時(shí)完成相應(yīng)的化學(xué) 反應(yīng)，其主要部件包括固相反應(yīng)載體膜、碳纖維條架等。
多功能千片檢測(cè)板的結(jié)構(gòu)，包括吸附生化試劑的固相反應(yīng)載體膜l、碳纖維 條架2、上層附有薄玻纖紙3的支撐墊5、加裝了全血過(guò)濾紙4的硬質(zhì)支架7及 彈性墊6;其特征在于，固相反應(yīng)載體膜1固定在碳纖維條架2的各個(gè)窗口之上； 碳纖維條架2通過(guò)固定在硬質(zhì)支架7兩端的彈性墊6與硬質(zhì)支架7相連接；硬質(zhì) 支架7中間內(nèi)嵌了加樣槽，加樣槽前端有全血過(guò)濾紙4;硬質(zhì)支架7靠近固相反 應(yīng)載體膜的一側(cè)粘貼有支撐墊5，支撐墊5上有薄玻纖紙3。當(dāng)彈性墊6被壓縮 時(shí)全血過(guò)濾紙4能與薄玻纖紙3相接觸，同時(shí)薄玻纖紙3能與固相反應(yīng)載體膜1 相接觸；全血樣本即是通過(guò)全血過(guò)濾紙4實(shí)現(xiàn)血細(xì)胞與血清的分離，其后血清得 以傳輸至薄玻纖紙3并最終傳至固相反應(yīng)載體膜1上與生化試劑發(fā)生指示反應(yīng)。
上述所說(shuō)的固相反應(yīng)載體膜為一種高分子材料。支撐墊為具有一定彈性的疏 水材料；其上粘附的薄玻纖紙為一種玻璃纖維紙。硬質(zhì)支架為一種硬度較高的高 分子材料，可以是聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯等塑料或有機(jī)玻璃等。
多功能干片檢測(cè)板可以有多個(gè)固相反應(yīng)區(qū)，最好為四個(gè)，即每個(gè)多功能干片 檢測(cè)板可在碳纖維條架上加裝1~4片相對(duì)獨(dú)立的固相反應(yīng)載體膜。由于固相反應(yīng) 區(qū)中所固化的化學(xué)試劑不同，因此，臨床檢測(cè)時(shí)只需一滴血液標(biāo)本即可同時(shí)完成 不同項(xiàng)目指標(biāo)的檢測(cè)，體現(xiàn)了該發(fā)明產(chǎn)品的先進(jìn)性和創(chuàng)新性。
多功能干片檢測(cè)板的檢測(cè)原理是通過(guò)血標(biāo)本中的被測(cè)物與固相反應(yīng)載體膜 上的生化試劑相接處后，發(fā)生顯示反應(yīng)，經(jīng)特定的"干片式快速檢測(cè)儀"，通過(guò) 光學(xué)傳感器，檢測(cè)反應(yīng)膜上的顏色變化進(jìn)而計(jì)算出被測(cè)物的濃度。不同生化指標(biāo) 的檢測(cè)，其化學(xué)反應(yīng)顯色原理不盡相同，檢測(cè)過(guò)程中，檢測(cè)儀內(nèi)部傳感器對(duì)光電 信號(hào)的采集及信號(hào)分析、數(shù)據(jù)處理方式亦不相同。干片檢測(cè)板上化學(xué)反應(yīng)過(guò)程在 檢測(cè)儀恒溫控制下自動(dòng)進(jìn)行，具有反應(yīng)速度快、重復(fù)性好、準(zhǔn)確度、精密度高等 優(yōu)點(diǎn)。
多功能干片檢測(cè)板的制備方法，包括如下步驟
① 切割、固定將固相反應(yīng)載體膜l、薄玻纖紙3、全血過(guò)濾紙4按規(guī)格切 割，并分別固定或加裝在碳纖維條架2、支撐墊5及硬質(zhì)支架7的凹槽內(nèi)。
② 點(diǎn)樣按檢測(cè)不同生化指標(biāo)所需試劑配方，配制反應(yīng)工作液，定量點(diǎn)樣 于不同固相反應(yīng)載體膜上。
③ 干燥將點(diǎn)樣后的載體膜在30-6CTC烘箱中干燥30-120分鐘。
組裝將固定載體膜1的碳纖維條架2與硬質(zhì)支架7通過(guò)彈性墊6的上
下兩層膠固定在一起。
多功能干片檢測(cè)板的應(yīng)用，包括臨床上用于快速定量或定性檢測(cè)血糖、血脂 (高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、總膽固醇、甘油三酯等)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草 轉(zhuǎn)氨酶、乙肝表面抗原等、腎功能指標(biāo)(肌酐、尿素氮、總二氧化碳和血鉀)及 部分血常規(guī)指標(biāo)等。由于本發(fā)明產(chǎn)品具有反應(yīng)迅速、準(zhǔn)確度、精密度高等特點(diǎn)， 故實(shí)際應(yīng)用中可滿足常規(guī)診斷、急診、血源篩查等多方面要求。
本發(fā)明涉及產(chǎn)品多功能干片檢測(cè)板的設(shè)計(jì)開發(fā)及技術(shù)路線科學(xué)、合理，自動(dòng) 化程度高，性能穩(wěn)定，功能齊全，外觀精巧，方便易用。檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高，重 復(fù)性好，檢測(cè)速度快，完全可以滿足各級(jí)醫(yī)院及流動(dòng)采血車上大規(guī)?？焖贆z驗(yàn)的 需要。


下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。
圖1為本發(fā)明產(chǎn)品多功能干片檢測(cè)板橫截面示意圖。
圖2為固相反應(yīng)載體膜及碳纖維條架的正面放大示意圖。
其中，1-固相反應(yīng)載體膜；2-碳纖維條架；3-薄玻纖紙；4-全血過(guò)濾紙；5-支撐墊；6-彈性墊；7-硬質(zhì)支架.
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一 ALT干片檢測(cè)板
ALT干片檢測(cè)板基于丙酮酸氧化酶法對(duì)人體血標(biāo)本中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶進(jìn)行定 量檢測(cè)的。首先ALT催化丙氨酸和a-酮戊二酸轉(zhuǎn)化生成丙酮酸和谷氨酸,丙酮酸 與磷酸根、02等在丙酮酸氧化酶催化作用下氧化生成乙酰憐酸和過(guò)氧化氫,生成
的過(guò)氧化氫具有強(qiáng)氧化性,可以將還原性的顯色劑氧化從而產(chǎn)生顏色變化。反應(yīng) 式如下
丙氨酸+01-酮戊二酸.
ALT
丙酮酸+谷氨酸
丙酮酸+磷酸鹽+02 + , 翻麟髓，乙酰磷酸+H202+C02
顯色劑(還原態(tài))+H202卿纖，顯色劑(氧化態(tài))+H20
每片檢測(cè)板上包含有下列生化反應(yīng)試劑:
L-丙氨酸 a-酮戊二酸 TPP MgCl2
丙酮酸氧化酶
過(guò)氧化物酶
顯色劑
168~252|_ig
15.7~25.6昭
10.9~17.4昭
L7 2.4fxg
1.9~2.8U
18.0~26.3U
24.8~35.6pg
ALT干片檢測(cè)板的制備
① 切割、固定將固相反應(yīng)載體膜l、薄玻纖紙3、全血過(guò)濾紙4按規(guī)格切 割，并分別固定或加裝在碳纖維條架2、支撐墊5及聚乙烯塑料支架7的凹槽內(nèi)。
② 點(diǎn)樣按上述試劑配方，配制反應(yīng)工作液，定量1.5-2.5^1/片點(diǎn)樣于固 相反應(yīng)載體膜上。
③ 干燥將點(diǎn)樣后的固定有載體膜1的碳纖維條架2在3CTC-6(TC講箱中 干燥30-120分鐘。
組裝將干燥好的固定載體膜1的碳纖維條架2與聚乙烯塑料支架7通 過(guò)彈性墊6的上下兩層膠固定在一起。密封于鋁箔袋中，0-l(TC冰箱中儲(chǔ)存、備 用。
制得的干片檢測(cè)板結(jié)構(gòu)如圖1和2所示，包括吸附生化試劑的固相反應(yīng)載體
膜l、碳纖維條架2、上層附有薄玻纖紙3的支撐墊5、加裝了全血過(guò)濾紙4的
硬質(zhì)支架7及彈性墊6;固相反應(yīng)載體膜1固定在碳纖維條架2的各個(gè)窗口之上;
碳纖維條架2通過(guò)固定在硬質(zhì)支架7兩端的彈性墊6與硬質(zhì)支架7相連接；硬質(zhì) 支架7中間內(nèi)嵌了加樣槽，加樣槽前端有全血過(guò)濾紙4;硬質(zhì)支架7靠近固相反 應(yīng)載體膜的一側(cè)粘貼有支撐墊5，支撐墊5上有薄玻纖紙3。
臨床檢測(cè)
取25-45pl指尖末梢血，加于ALT干片檢測(cè)板的加樣槽內(nèi)，并將檢測(cè)板放于 "干片式快速檢測(cè)儀"內(nèi)，4分鐘內(nèi)檢測(cè)儀自動(dòng)顯示結(jié)果。 實(shí)施例二(血脂、血糖干片檢測(cè)板)
血脂、血糖干片檢測(cè)板基于膽固醇氧化酶法、磷酸甘油氧化酶法、以及葡萄 糖氧化酶法對(duì)人體血標(biāo)本中的總膽固醇、高密度脂蛋白、甘油三酯和葡萄糖進(jìn)行 定量檢測(cè)的。其反應(yīng)方程式分別如下
總膽固醇+水 "隱- 游離膽固醇+脂肪酸
膽固醇+02+H20 月,糊 乙酰磷酸+H202+C02
顯色劑(還原態(tài))+H202魏翻-顯色劑(氧化態(tài))+H20
甘油三酯+水 - -丙三醇+脂肪酸
丙三醇+ATP 甘油激酶、Mg2+ , 磷酸甘油+ADP 碟酸甘油+02磷酸甘油氧化酶 磷酸二羥丙酮+11202 顯色劑(還原態(tài))+H202魏儲(chǔ)自 一 顯色劑(氧化態(tài))+H20
葡萄糖+02 葡萄糖氧化酶， D-脫氧葡萄糖內(nèi)酯+H202
顯色劑(還原態(tài))+H202魏寸翻*顯色劑(氧化態(tài))+H20
每片檢測(cè)板上包含有下列生化反應(yīng)試劑
膽固醇酯酶
膽固醇氧化酶
甘油激酶
磷酸甘油氧化酶
辣根過(guò)氧化酶
MgCl2
葡萄糖氧化酶 ATP
顯色劑
0.1~0.9U
0.01~0.07U
0.2~0.7U
0.1~0.9U
0.1~0.5U
1.7~2.4(ig
0.2~1U
18~26嗎
50~120嗎
血脂、血糖干片檢測(cè)板的制備
① 切割、固定將固相反應(yīng)載體膜l、薄玻纖紙3、全血過(guò)濾紙4按規(guī)格切 割，并分別固定或加裝在碳纖維條架2、支撐墊5及聚乙烯塑料支架7的凹槽內(nèi)。
② 點(diǎn)樣按上述試劑配方，配制反應(yīng)工作液，定量1.5-2.5^1/片點(diǎn)樣于固
相反應(yīng)載體膜上。
③ 干燥將點(diǎn)樣后的固定有載體膜1的碳纖維條架2在30°C-6(TC烘箱中 干燥30-120分鐘。 ，
組裝將干燥好的固定載體膜1的碳纖維條架2與聚乙烯塑料支架7通 過(guò)連接墊6的上下兩層膠固定在一起。結(jié)構(gòu)如圖1和2.密封于鋁箔袋中，0-10 "C冰箱中儲(chǔ)存、備用。
臨床檢測(cè)
取25-45pl指尖末梢血，加于血脂、血糖干片檢測(cè)板的加樣槽內(nèi)，并將檢測(cè) 板放于"干片式快速檢測(cè)儀"內(nèi)，4分鐘內(nèi)檢測(cè)儀自動(dòng)顯示結(jié)果。
實(shí)施例三腎功能(肌酐、尿素氮、血鉀、二氧化碳含量)檢測(cè)板
肌酐的檢測(cè)原理基于肌酐在肌酐酶作用下生成肌酸，肌酸在肌酸酶作用下生 成肌氨酸，最后肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生成雙氧水，從而使顯色劑氧化
顯色° 肌酐酶
肌酐+H20-一肌酸
肌酸酶肌酸+1120 -一尿素+肌氨酸
肌氨酸氧化酶
肌氨酸+ H20+ 02-一甘氨酸+甲醛+ H202
過(guò)氧化物酶
&02+顯色劑(還原態(tài))-^H20+顯色劑(氧化態(tài))
尿素氮的檢測(cè)原理基于尿素在尿素酶的作用下生成氨，氨在次氯酸鈉和水楊 酸鈉作用下顯色。
尿素酶
尿素+21120 _— 2NH3+C02
NH3+次氯酸鈉+水楊酸鈉Na2Fe(r'N)6NO -靛藍(lán)色
血鉀的檢測(cè)原理基于反應(yīng)體系中的離子載體(2,3-naphtho-15-crown-5) —旦 與鉀離子特異性結(jié)合，會(huì)使報(bào)告底物(7-decyl-MEDPIN)失去質(zhì)子，從而改變 其顏色。
碳酸氫根的檢測(cè)基于碳酸氫根會(huì)直接影響反應(yīng)體系的pH值，從而使酚紅顯 現(xiàn)出不同的顏色。
每片檢測(cè)板上包含有下列生化反應(yīng)試劑
肌酐酶1.9-3.6U
肌酸酶4.8~7.2U
肌氨酸氧化酶1.8~3.9U
過(guò)氧化物酶20~40U
MgCl25.6~7.8|ig
顯色劑24.8~35.6pg
尿素酶1.3~3.5U
次氯酸鈉2.0~8.0)Ag
水楊酸鈉96~146嗎
Na2Fe(CN)6NO10~25嗎
2,3-naphtho-15隱crown-55~15(xg
7-decyl掘DPIN1~6嗎
酚紅1.2~4.8嗎 腎功能千片檢測(cè)板的制備過(guò)程，除試劑與實(shí)施例一基本相同。 臨床檢測(cè)
取25-45pl指尖末梢血，加于腎功能干片檢測(cè)板的加樣槽內(nèi)，并將檢測(cè)板放 于"千片式快速檢測(cè)儀"內(nèi)，4分鐘內(nèi)檢測(cè)儀自動(dòng)顯示結(jié)果。
本發(fā)明不限于這些公開的實(shí)施方案，本發(fā)明將覆蓋在專利書中所描述的范圍，以及權(quán)利 要求范圍的各種變型和等效變化。
權(quán)利要求
1、一種多功能干片檢測(cè)板，包括吸附生化試劑的固相反應(yīng)載體膜(1)、碳纖維條架(2)、上層附有薄玻纖紙(3)的支撐墊(5)、加裝了全血過(guò)濾紙(4)的硬質(zhì)支架(7)及彈性墊(6)；其特征在于，固相反應(yīng)載體膜(1)固定在碳纖維條架(2)的各個(gè)窗口之上；碳纖維條架(2)通過(guò)固定在硬質(zhì)支架(7)兩端的彈性墊(6)與硬質(zhì)支架(7)相連接；硬質(zhì)支架(7)中間內(nèi)嵌了加樣槽，加樣槽前端有全血過(guò)濾紙(4)；硬質(zhì)支架(7)靠近固相反應(yīng)載體膜的一側(cè)粘貼有支撐墊(5)，支撐墊(5)上有薄玻纖紙(3)。
2、 如權(quán)利要求1所述的多功能干片檢測(cè)板，其特征在于吸附生化試劑的 固相反應(yīng)載體膜為高分子材料。
3、 如權(quán)利要求1所述的多功能干片檢測(cè)板，其特征在于支撐墊為具有彈性的疏水材料，其上粘附的薄玻纖紙為玻璃纖維紙。
4、 如權(quán)利要求1所述的多功能干片檢測(cè)板，其特征在于硬質(zhì)支架為硬度 較高的疏水高分子材料。
5、 如權(quán)利要求4所述的多功能干片檢測(cè)板，其特征在于所說(shuō)的硬度較高 的疏水高分子材料，是聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯或有機(jī)玻璃。
6、 如權(quán)利要求1所述的多功能干片檢測(cè)板，其特征在于固定載體膜的碳 纖維條架上，同時(shí)固定l-4片彼此分開、相對(duì)獨(dú)立的固相反應(yīng)載體膜。
7、 一種權(quán)利要求1所述的多功能干片檢測(cè)板的制備方法，包括如下步驟① 切割、固定將固相反應(yīng)載體膜(1)、薄玻纖紙(3)、全血過(guò)濾紙(4)按規(guī)格切割，并分別固定或加裝在碳纖維條架(2)、支撐墊(5)及硬質(zhì)支架(7)的凹槽內(nèi)。② 點(diǎn)樣按檢測(cè)不同生化指標(biāo)所需配方配制反應(yīng)工作液，定量點(diǎn)樣于不同固相反應(yīng)載體膜上。③ 干燥將點(diǎn)樣后的載體膜在30「6(TC烘箱中干燥30-120分鐘。 組裝將固定載體膜(1)的碳纖維條架(2)與硬質(zhì)支架(7)通過(guò)彈性 墊(6)的上下兩層膠固定在一起。
8、 權(quán)利要求1所述的多功能干片檢測(cè)板在快速定量或定性檢測(cè)血糖、血脂、 谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、乙肝表面抗原等、腎功能指標(biāo)及血常規(guī)指標(biāo)中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種多功能干片檢測(cè)板及其制備方法和應(yīng)用，屬于醫(yī)療器械領(lǐng)域。所說(shuō)的多功能干片檢測(cè)板，包括吸附生化試劑的固相反應(yīng)載體膜(1)、碳纖維條架(2)、上層附有薄玻纖紙(3)的支撐墊(5)、加裝了全血過(guò)濾紙(4)的硬質(zhì)支架(7)及彈性墊(6)。本發(fā)明的產(chǎn)品為一次性醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)耗材，屬快速微量檢測(cè)；能夠定量/定性快速檢測(cè)人體血標(biāo)本(全血、血漿、血清)中的多項(xiàng)生化指標(biāo)，檢測(cè)過(guò)程可在5分鐘內(nèi)完成，對(duì)于臨床快速定量檢測(cè)及疾病診斷具有重要意義。
文檔編號(hào)G01N33/50GK101354399SQ20081019618
公開日2009年1月28日 申請(qǐng)日期2008年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月17日
發(fā)明者呂煒鋒, 蔣昵真, 郝曦東 申請(qǐng)人:呂煒鋒