專利名稱：：液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于化學(xué)分析檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：氨基酸是煙葉中的重要組成部分，是與煙氣香味、巻煙品質(zhì)和品牌特征密切相關(guān)的煙草成分，氨基酸參與煙葉中的非酶棕色反應(yīng)，即美拉德反應(yīng)，此反應(yīng)可產(chǎn)生多種重要的致香成分。因此，測定煙草中的氨基酸對配方研制、工藝生產(chǎn)和品質(zhì)控制都有十分重要的意義。近年來，隨著電噴霧離子化(ESI)和串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)技術(shù)的發(fā)展，液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(LC-ESI-MS/MS)在復(fù)雜化合物分析中得到廣泛的應(yīng)用。但目前尚未見采用液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析煙草樣品氨基酸的相關(guān)報(bào)道。在理想的狀態(tài)下，同一品牌型號(hào)巻煙的各種氨基酸含量應(yīng)基本相同；根據(jù)Asn與Pro含量的關(guān)系，可以初步判定煙草樣品是否屬于白肋煙或混合型巻煙。采用液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用方法可同時(shí)快捷的分析20種氨基酸含量，對于實(shí)際巻煙生產(chǎn)中的應(yīng)用意義重大。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用。包括應(yīng)用于測試多種或批量煙草樣品中氨基酸含量；測試多種或批量煙草樣品中氨基酸含量，可以判斷巻煙或單料煙所屬分類。并應(yīng)用于煙草生產(chǎn)同質(zhì)化控制。本發(fā)明的有益效果是提供了液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的具體應(yīng)用，對控制巻煙品質(zhì)有重要意義。圖120種氨基酸和內(nèi)標(biāo)正纈氨酸的提取離子流圖圖2加標(biāo)前l(fā)ie和Leu提取離子流圖圖3加標(biāo)后lie和Leu提取離子流圖圖4加標(biāo)前Val和Nva提取離子流圖圖5加標(biāo)后Val和Nva提取離子流圖圖626氨基酸的二級(jí)質(zhì)譜圖具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例來進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。實(shí)施例l液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用分析氨基酸的方法本實(shí)施例在進(jìn)行煙草及其制品的氨基酸分析檢測中，采用液相色譜分析-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜分析的方法，在實(shí)驗(yàn)的過程中對液相色譜分析條件的總結(jié)和限定同樣適用于單獨(dú)的質(zhì)譜分析。1、儀器、材料與試劑美國熱電公司LC-MSLTQ液相色譜-離子阱質(zhì)譜儀，配備自動(dòng)進(jìn)樣器、四元梯度質(zhì)譜泵，LTQ離子阱質(zhì)譜帶電噴霧電離源(ESI)，Xcalibur1.4SRI系統(tǒng)控制軟件；意大利ClaindN2LCMS氮?dú)獍l(fā)生器；法國MilliporeElementA10純水機(jī)；美國Cole-Parmer8892超聲清洗器；SartoriousCP225D電子天平(Max220g，d=0.01mg(80g),0.1mg(220g));Whatman0.2(jjn尼龍針式濾頭；磨樣機(jī)磨出的煙草粉末。混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(Fluka公司)，含17種氨基酸，濃度各為lmM;內(nèi)標(biāo)物L(fēng)-正纈氨酸(上海麗珠東風(fēng)生物技術(shù)有限公司)；天冬酰胺.水(上海伯奧生物科技有限公司)；色氨酸，脯氨酸和谷氨酰胺(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；Y-氨基丁酸(Sigma公司)；L-哌啶-2-羧酸、九氟戊酸(NFPA)(Aldrich公司)；甲醇和乙腈(MERCK公司)；優(yōu)級(jí)純濃鹽酸；Milli-Q級(jí)水，由MillioreElementA10制備，若不經(jīng)特別說明，實(shí)驗(yàn)中用水均為Milli-Q級(jí)水。2、實(shí)驗(yàn)方法2.1色譜條件熱電HyPURITYC18色譜柱(200咖X2.1腿，5Mm)，安捷倫Reliance保護(hù)柱套和EclipseXDB-C8保護(hù)柱(12.5X2.1mm,5to)。進(jìn)樣方式全環(huán)(5PL);流速200叱/min;柱溫箱25°C;樣品盤溫度15°C;注射器沖洗體積(flushvolume):1000叱；洗針體積(washvolume):800叱。流動(dòng)相A:99%水-1%乙腈-0.1%NFPA;流動(dòng)相B:10%水-90%乙腈-0.1%NFPA。流動(dòng)相梯度見表l。表l流動(dòng)相梯度時(shí)間流動(dòng)相流動(dòng)相TimeEluentEluent(min)A(%)B⑨<table>complextableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>2.2質(zhì)譜條件氮?dú)鈮毫?.64MPa;氦氣壓力0.38MPa;極性正電離；掃描形式全掃描；采集時(shí)間40min;激活時(shí)間30ms;吹掃氣0LTQ單位；噴霧電壓5kV;毛細(xì)管溫度350°C;掃描范圍標(biāo)準(zhǔn)；掃描速率標(biāo)準(zhǔn)；分段、分段時(shí)間、分離寬度、歸一化碰撞能量等設(shè)置見表2，其中第3分段的鞘氣和輔助氣分別為38LTQ單位和OLTQ單位，其余分段的鞘氣和輔助氣分別為46LTQ單位和19LTQ單位。其他參數(shù)由自動(dòng)調(diào)諧確定或依照LTQ質(zhì)譜的默認(rèn)設(shè)置。表2分段、分段時(shí)間、分離寬度、歸一化碰撞能量等條件設(shè)置氨基酸分段~~分段時(shí)間~離子變換~~分離寬度歸一化碰撞<table>complextableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>激活Q掃描范圍ActivatiMassrangeonQ(mz)Pro116.0470.02300.2560-120Cys241.0^152.0300.25150、181Gaba104.0^87.02.5300,2584-105Pip130.0j84.02.5300.2582-132Val118.0—72.02350.3568-75Met150.0j132.8300.30100-135His156.0~>110.0300.259(M13215.5Tyr182.0—165-03300.25100-185Lys147.0—130.02300.25128-132lie,Leu132.0—86-02300.2582-89Aig175.0j158.02300.2557-161Phe34166.0~>120.0300.2511(M70Try48.5205.0^188.02300.25150-1902.3標(biāo)準(zhǔn)曲線制作采用內(nèi)標(biāo)法定量。配制含內(nèi)標(biāo)正纈氨酸濃度為1.7^iM的氨基酸混和標(biāo)準(zhǔn)溶液I(天冬氨酸(Asp)、絲氨酸(Ser)、谷氨酰胺(G]n)、蘇氨酸(Thr)、谷氨酸(Glu)、胱氨酸(Cys)、Y-氨基丁酸(Gaba)、哌啶酸(Pip)、纈氨酸(Val)、甲硫氨基酸(Met)、組氨酸(His)、酪氨酸(Tyr)、賴氨酸(Lys)、異亮氨酸(Ile)、精氨酸(Arg)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Try)的濃度均為50的0.03MHC1溶液)；配制含內(nèi)標(biāo)正纈氨酸濃度為1.7-的氨基酸混和標(biāo)準(zhǔn)溶液II(脯氨酸(Pro)和天冬酰胺(Asn)的濃度分別為500^iM的0.03MHCl溶液)。用含正纈氨酸濃度為1.7^iM的0.03MHC1把標(biāo)準(zhǔn)溶液I和標(biāo)準(zhǔn)溶液II配成系列濃度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.4樣品處理稱取O.10.2g煙末置于錐形瓶中，加入20mL含正纈氨酸濃度為1.7一的0.03MHC1溶液，超聲震蕩15min，搖蕩錐形瓶片刻使溶液濃度分配均勻，經(jīng)0.2Mm濾膜過濾后直接進(jìn)樣。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.1色譜條件的確定3.1.1氨基酸對溫度的要求溫度較高時(shí)，氨基酸混標(biāo)容易發(fā)生反應(yīng)，使某些氨基酸含量降低。因此，所有氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液在不使用時(shí)應(yīng)及時(shí)保存在2"C以下，并且在分析樣品時(shí)把樣品盤設(shè)定在較低的溫度15°C。為了避免柱溫較高時(shí)氨基酸可能在柱內(nèi)產(chǎn)生變化，把柱溫箱設(shè)定在25°C。適當(dāng)降低柱溫的另一個(gè)好處是可以明顯增加同分異構(gòu)體亮氨酸(Leu)和異亮氨酸(lie)在色譜柱上的分離度，見附圖1。但柱溫不宜設(shè)定過低，以免柱壓過大，同時(shí)亦使Phe和Try出峰延遲，增加分析時(shí)間。3.1.2色譜柱和流動(dòng)相在<:18分析柱上試驗(yàn)過多種流動(dòng)相，結(jié)果表明ThermoHyPURITYC18配合99%水-1%乙腈-0.1%NFPA以及10%水-90%乙腈-0.1%NFPA作流動(dòng)相可以獲得良好的色譜峰形以及適宜的色譜運(yùn)行時(shí)間，并且可使同分異構(gòu)體Leu和Ile達(dá)到基線分離，見附圖1。NFPA用作流動(dòng)相改性劑。此外，NFPA還有利于增強(qiáng)電噴霧質(zhì)譜對氨基酸的正電離檢測信號(hào)。乙腈容易洗脫NFPA，過多的NFPA容易增加背景干擾，影響檢測靈敏度，因此，流動(dòng)相B的使用比例不易過高，實(shí)驗(yàn)把流動(dòng)相B的比例控制在25呢以下，可達(dá)到良好分離檢測的效果。需注意的是，NFPA會(huì)在色譜柱內(nèi)不斷積聚并慢慢改變固定相的性質(zhì)，使氨基酸的出峰時(shí)間改變。為了保證良好的保留時(shí)間重現(xiàn)性，更方便的進(jìn)行定性定量分析，在進(jìn)樣100針后，用100%乙腈沖洗色譜柱30min，洗脫過多積聚的NFPA，再用流動(dòng)相平衡色譜柱后進(jìn)樣。3.1.3內(nèi)標(biāo)物的選擇正纈氨酸不存于煙草氨基酸中，在本實(shí)驗(yàn)條件下穩(wěn)定且能和其同分異構(gòu)體纈氨酸在色譜上完全分離，且價(jià)格較低，是比較理想的內(nèi)標(biāo)物。3.1.4氨基酸同分異構(gòu)體的鑒別亮氨酸(Leu)和異亮氨酸(Ile)、纈氨酸(Val)和正纈氨酸(Nva)互為同分異構(gòu)體，二級(jí)質(zhì)譜相似，無法單用質(zhì)譜力卩以鑒定，因此需結(jié)合色譜分離進(jìn)行區(qū)分。實(shí)驗(yàn)通過加標(biāo)法，分別加入一定量的lie和Val對出峰順序進(jìn)行判斷。加入Ile或Val標(biāo)準(zhǔn)后，前面流出的色譜峰高明顯增高，峰面積明顯增大，可以判定Ile和Val分別較Leu和Nva先流出，見附圖2附圖5提取離子流圖。3.2質(zhì)譜條件的確定質(zhì)譜的條件的恰當(dāng)設(shè)置對氨基酸的準(zhǔn)確及高靈敏度檢測十分重要。實(shí)驗(yàn)對比了二級(jí)全掃描(FullMS2)和選擇離子監(jiān)測(SIM)兩種掃描模式。二級(jí)全掃描能有效地降低背景干擾，獲得更高的靈敏度，且選擇性優(yōu)于SIM，檢測效果較佳，因此實(shí)驗(yàn)選擇二級(jí)全掃描進(jìn)行定量分析。在21種氨基酸的二級(jí)質(zhì)譜中，見附圖626，除Arg和Cys外，其余氨基酸主要的離子碎片均為脫羧基、脫羥基或脫氨基峰，即[M-HCOOH+H]+、[M-H20+H]+或[M-N2H+H]+。定量離子的準(zhǔn)確選擇關(guān)系到質(zhì)譜定量的特征選擇性。定量離子優(yōu)先選取相對豐度較大的特征子離子，以獲得較好的靈敏度。對于Glu，因子離子m/zl30的特征性不強(qiáng)，有干擾峰重疊，因此選擇相對豐度次強(qiáng)的脫羧基峰m/z102。不同的分段(Segment)可調(diào)用獨(dú)立的調(diào)諧文件，有利于提高檢測的靈敏度。實(shí)驗(yàn)根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間間隔，劃為4個(gè)分段。適當(dāng)?shù)膾呙璺秶欣诮档捅尘霸胍艏半s質(zhì)干擾，提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度，實(shí)驗(yàn)對各氨基酸的掃描范圍進(jìn)行了優(yōu)化設(shè)置，見表2所示。3.3前處理?xiàng)l件的確定3.3.1不同提取溶液對色譜峰形的影響本發(fā)明用不同濃度的酸性溶液對煙草中的氨基酸進(jìn)行提取，包括甲酸、乙酸和鹽酸溶液。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，lmM乙酸提取溶液使Val、Nva、His、lie和Leu等氨基酸的色譜峰分叉開裂，且隨著濃度的提高，色譜峰分叉開裂的現(xiàn)象越為明顯。甲酸提取溶液也有類似的現(xiàn)象。而HC1提取溶液則能在C18柱上獲得較好的峰形。3.3.2不同提取溶液的提取效果實(shí)驗(yàn)對比了幾種較常用的提取溶液的提取效果，S卩70%甲醇溶液、80%乙醇溶液和O.1MHC1。稱取等量的煙草樣品，通過對比氨基酸色譜峰面積，來比較三種溶液的提取效果。由表3可見，80%乙醇提取的氨基酸含量最低，70。/。甲醇提取的Val、His、Tyr、Lys、Phe和Try等多種氨基酸含量均明顯低于用0.1MHC1提取的。綜合比較，0.1M的鹽酸溶液的提取效果較好。表3不同提取溶液的提取效果對比AspAsnSerGinThrGluProValHisTyrLysIsoArgPheTry70%MeOH1450031000146036500165047201530001430325049702837641631700440080%EtOH25901310061116500983211010600131012902590ND26013524100294001MHCI1520030200U604330012203130125000694018100109001623791778080077403.3.3不同濃度的HCl溶液的提取效果稱取等量煙末樣品，對比不同濃度HCl提取溶液的提取效果見表4。0.1MHCl對Ser、Glu、Lys和Arg的提取效果較差，0.05MHC1的對Lys和Arg的提取效果均不好。0.03MHCl對Lys的提取效果明顯增加。綜合比較，選用0.03MHC1作為提取溶液。表4不同濃度的HC1溶液的提取效果對比<table>complextableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>3.3.4萃取時(shí)間稱取O.lg煙末，加入20mL萃取溶液，在超聲震蕩下分別萃取15min、30min、45min和60min，過0.2Pm濾膜后進(jìn)LC-MS分析。每個(gè)樣品進(jìn)兩針，峰面積取平均值。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，15min的提取時(shí)間已經(jīng)能達(dá)到提取效果。由于稱樣量較少，萃取溶劑量大大超過稱樣量，而氨基酸能較快的溶解于鹽酸溶液，因此能較快的達(dá)到溶解平衡。3.4方法驗(yàn)證20種待測氨基酸的在煙草中的含量相差懸殊，有的低于檢測限，如Cys，有的則含量高達(dá)0.2%以上，如Pro。為了同時(shí)測定20種氨基酸，實(shí)驗(yàn)建立了兩種不同濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即對含量較高的Pro和Asn建立一種濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對其他氨基酸建立另一種濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)曲線。這樣，一個(gè)樣品一次進(jìn)樣便可得出所有氨基酸的測試數(shù)據(jù)，達(dá)到節(jié)約時(shí)間，提高效率的目的。方法的檢出限通過實(shí)際測定系列低濃度的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)樣品，以S/N=3來確定。方法檢出限良好，在0.010.05^iM(S/N=3)之間，相關(guān)系數(shù)(,)均大于0.9977，精密度在0.784.93RSD96之間。實(shí)驗(yàn)通過標(biāo)準(zhǔn)加入法確定方法的回收率。準(zhǔn)確稱取煙末204.09mg，用20mL萃取液提取，平行測定5次，取平均值作為回收率計(jì)算的依據(jù)。然后稱取煙末三份，分別為191.60mg、209.80mg和159.33mg，根據(jù)2.4的樣品處理方法，分別加標(biāo)，使加標(biāo)濃度分別為1|JI、10^M和20]liM。其中，對含量低于l|_iM的氨基酸，只進(jìn)行l(wèi)一加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，對含量低于1.5|liM的氨基酸，進(jìn)行l(wèi))oM和IO一加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，對于含量較高的Asn和Pro，進(jìn)行10|iM和20|oM加標(biāo)實(shí)驗(yàn)。氨基酸回收率基本在81108%之間，Ile和Arg的回收率較低，分別為75%和53%。20種氨基酸的檢出限、定量限、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、精密度和回收率見表5。表520種氨基酸的檢出限(LOD)、線性范圍、相關(guān)系數(shù)(一)、精密度<table>complextableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例2液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用把建立好的方法用于測試多種煙草樣品，結(jié)果見表6和表7。煙草中的Cys含量很低，在所有樣品中均未能被檢出。烤煙煙葉的氨基酸總量一般占煙草含量的0.3%0.96%之間，白肋煙的氨基酸含量較高，一般為烤煙煙葉的23倍。白肋煙的Asp、Thr、Glu、Gaba、Val、Lys、Ile、Arg、Leu、Phe和Asn的含量明顯較高，His含量則相對較高。白肋煙的Asn含量最高，是其Pro含量的兩倍以上。而非白肋煙一般而言是Pro含量最高，但也有少數(shù)Asn高于Pro的樣品，如樣品湖南03和美國01等，但這些煙草樣品的Asn含量一般低于Pro含量的1.5倍。根據(jù)Asn與Pro含量的關(guān)系，可以初步判定煙草樣品是否屬于白肋煙。對于使用白肋煙較多的混合型巻煙，如巻煙F01、F02，巻煙O和巻煙P，也有類似的現(xiàn)象，即Asp、Thr、Glu、Gaba、Val、Lys、Arg和Asn含量較高。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，混合型巻煙的Asn含量要高于Pro含量，而對于其他類型的巻煙制品，則是Pro的含量要高于Asn的含量。根據(jù)Pro和Asn含量的高低，可初步判定巻煙是否屬于混合型。實(shí)驗(yàn)比較了不同生產(chǎn)地點(diǎn)生產(chǎn)的巻煙C-ll的氨基酸含量情況巻煙C-11-1、C-ll-3和C-ll-4的Ser、Gln、Thr、Glu、Gaba、Pip、Met、Val、ffis、Tyr、Lys、Ile、Arg、Leu、Phe、Tyr、Pro和Asn等18種氨基酸含量較為一致，而巻煙C-ll-2相應(yīng)的氨基酸含量則呈現(xiàn)出不同程度的偏高。在理想的狀態(tài)下，同一品牌型號(hào)巻煙的各種氨基酸含量應(yīng)基本相同，以此作為生產(chǎn)同質(zhì)化的初步判定依據(jù)，可以得出，巻煙C-11-1、C-ll-3和C-ll-4的生產(chǎn)同質(zhì)化控制做得較好。同一產(chǎn)地同一品牌同一規(guī)格不同包裝(軟盒或硬盒)的巻煙產(chǎn)品的各種氨基酸含量均差別不大，如巻煙B-04(軟)和B-05(硬)，巻煙G-03(軟)和G-04(硬)。這與它們的配方一致、投料一致以及包裝密封較好均有關(guān)系。表6煙草中的氨基酸含量(表示為mg/g煙末)<table>complextableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>湖南060.2210.0600.4970.0260,193<LOD0.0950.0400.0440,0140，1250.0400,022<LOD0.009<LOD0.1140.1003.6861,172湖南070.2510.0800.9740,0310.277<LOD0.1400.0750.0610.0160,2050,0540.0330.0050.0120，0080,1790.1613.8582.103湖南080.1700.0670.6540,0250,205<LOD0.1110.0550.0600,0150,1630.0490.027<LOD0.0110.0080.1340,1253.4901.620湖南090.1630.0640.4770,0220,144<LOD0.0740.0230.0520.0120.1070.0460.018<LOD0,0080,0060.1230,0923,3780.975湖南100.1830.0710,4180.0220。151<LOD0.0780.0200,0510.0140.0980.0480.014<LOD<LOD<LOD0,1100.1032.8200.773湖南110.2240.0850.7160.0400.222<LOD0.1100.0380,0820.0150.1560.0590.0450.0110.015<LOD0.1660.1334.2792,083湖南120.1920.0680,4740.0220.163<LOD0,0900,0240.0480.0120.1030.0520.014<LOD0.0060.0070.1230,0982.4950.799湖南130.1970.0460.2720.0190.142<LOD0.0730.0180.0620.0050.0820.0500.0170.0050.0060.0090.1170.0721,7431.028四川Ol0.2500.0890.9190.0400.226<LOD0.1030.0130.0860.0070.1250.0660,0240.008<LOD0,0090.1650.1462.1781.120四川020.1470.0940.9880.0310.162<LOD0.0880.0400.0680.0070.1900.0650.0440.0060.013<LOD0.1710.1563.2091.617四川030.1600.0560,5380,0220.150<LOD0.0640,0110,0540.0050.0790,0430.012<LOD<LOD<LOD0.1190.0921.6270.690四川040.1360.0370.2300,0090.069<LOD0.0390.0270.0280,0050,0560.0340,008<LOD<LOD<LOD0.0590.0712.3140.429重慶010,1850.0951.168*0.0380.235<LOD0.1320.0550.0890.0100,2280.0790,0450.0050.013O扁0.2010,1872.8611,716重慶020,2440.0710,7610.0240.159<LOD0.0870.0180,0520.0100,1410.0520.020<LOD<LOD<LOD<LOD0.0313.1490.873吉林Ol0.1570,0490,5580.0240,123<LOD0.0790.0110,043O扁0.0920.0410.017<LOD<LOD<LOD0.1140.0852.4900.630吉林020.1530.0350,4560.0190.100<LOD0.0600.0090.0320.0090.0760.0370.013<LOD<LOD<LOD0.1020.0612.3940.501吉林030.1200.0320.381O.O化0.101<LOD0,0570.0070.0260.0090.0620.0320.011<LOD<LOD<LOD0.0850.0492.5110.372吉林040.1150.0260.2600.0130.082<LOD0.0540.0080.027O扁0,0560.0280.011<LOD<LOD<LOD0,0770,0592.1880.408山東Ol0.1500.1351.1挑'0.0550.188<LOD0.1210.0750.0750.0180.2390.0720.0430.0050.012O細(xì)0,2420.2233.4921.675山西Ol0.2360.0930,5740.0380.265<LOD0.1080.0220.093O扁0.1530.0750.0370.0070.0130,0120.2020.1242.3511.739湖北白肋Ol3,722*0.3710.0710.2241.162<LOD0.3310.0260.2150.0060.3260.0330.4190.0370.0970.0590.4460.1791.6017.167湖北白肋021.953*0.4620,2030.4281.568*<LOD0.5850.0300.3040.C050.6120.0840.6610.0520.1590.0970.9400.3653.14710.136*類010.2610.0550.5200.0230.196<LOD0.1110.0650.066O扁0,1230.0600.0360.0070.012O扁0,1460.0941.8922.236美國020.2570.0660,4570.0350.233<LOD0.1380.1160.0770.0070.1250.0660.0420.0150.0170.0110.1530.1022.1552.695美網(wǎng)030.2980.0310.2150,0210.168<LOD0.0780.0530.0570,0050,0730.0450.0210.0120,0080.0080,0870,0631.5491,694200810027694.2勢滯也被14/163<table>complextableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>權(quán)利要求1、一種液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于測試多種或批量煙草樣品中氨基酸含量。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于判斷巻煙所屬分類。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于生產(chǎn)同質(zhì)化控制。全文摘要本發(fā)明公開了一種液相色譜和電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用在煙草生產(chǎn)中的應(yīng)用，通過快速準(zhǔn)確的測定煙草及其制品氨基酸含量，以分析結(jié)果作為依據(jù)，判斷卷煙或單料煙所屬類別，并根據(jù)同一品牌型號(hào)卷煙的各種氨基酸含量應(yīng)基本相同的理論依據(jù)，用氨基酸分析結(jié)果對卷煙同質(zhì)化情況進(jìn)行評價(jià)，以監(jiān)控卷煙品質(zhì)的一致性。文檔編號(hào)G01N30/02GK101344506SQ20081002769公開日2009年1月14日申請日期2008年4月25日優(yōu)先權(quán)日2008年4月25日發(fā)明者黃翼飛申請人:廣東中煙工業(yè)有限責(zé)任公司