專利名稱：：微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及適用于核酸等樣品的檢測的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法和利用該確認(rèn)方法的樣品的定量方法以及含有該微粒的樣品檢測試劑本申請要求2006年7月13日在日本申請的特愿2006-192741號的優(yōu)先權(quán)，并在此援引其內(nèi)容。
背景技術(shù)：
：以往，關(guān)于檢測作為測定對象物的樣品的方法，已知有使樣品與作為樣品檢測試劑的分散性微粒特異性地結(jié)合來檢測的方法。例如，已知以濃度已知的蛋白質(zhì)為標(biāo)準(zhǔn)樣品來進行蛋白質(zhì)定量的方法(參照專利文獻1)。具體而言，例如在健康診斷等時進行的血液檢查中，對各檢査項目進行測定時，使用標(biāo)準(zhǔn)血清作為標(biāo)準(zhǔn)樣品。另一方面，還提出了樣品為核酸時的樣品檢測方法(參照專利文獻2)，但未選定類似上述蛋白質(zhì)定量法中使用的標(biāo)準(zhǔn)樣品。此外，作為將核酸用作標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法，報道了例如將人工合成多核苷酸作為核酸擴增工序中的標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法(參照專利文獻3)、在基因表達分析中基于基因組DNA的基因來制備標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法(參照專利文獻4)。而且，在上述樣品檢測方法中，樣品檢測試劑需要具有正常的檢測活性。但是，專利文獻3和4中所述的標(biāo)準(zhǔn)樣品用于確認(rèn)在實時PCR等核酸擴增工序中的核酸擴增量。而且，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的種類，檢測信號有熒光、發(fā)光、電泳、凝集、吸光度等各種信號。專利文獻3和4中所述的方法因需要改變檢測方法和檢測系統(tǒng)而存在通用性低的問題。另外，迄今為止未報道有適用于通過使作為樣品的核酸與分散性微粒特異性地結(jié)合來檢測的6標(biāo)準(zhǔn)樣品。此外，當(dāng)使用生物體來源的基因作為標(biāo)準(zhǔn)樣品時，根據(jù)其保存情況以及檢測工序中的條件，有可能出現(xiàn)分解，或難以精制，或混入雜質(zhì)。如上所述，由于沒有具有通用性的適用于核酸檢測的標(biāo)準(zhǔn)樣品，因此存在以下問題難以確認(rèn)在標(biāo)準(zhǔn)樣品以及樣品的檢測中使用的試劑是否具有正常的檢測活性，并且也難以更正核酸檢測值。因此，若有不會分解和混入雜質(zhì)等的標(biāo)準(zhǔn)樣品及其簡便的使用方法或試劑盒，就能夠解決上述技術(shù)問題。專利文獻l:日本特開平6-167495號公報專利文獻2:日本專利第3545158號公報專利文獻3:日本特開2003-265190號公報專利文獻4:日本特表2004-532034號公報
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明是鑒于上述情況而完成的發(fā)明，其目的在于提供適用于以核酸等為代表的生物體相關(guān)物質(zhì)的樣品檢測的試劑的樣品檢測活性的確認(rèn)方法和利用該確認(rèn)方法的樣品定量方法以及含有該試劑的樣品檢測試劑盒。為了解決上述課題，本發(fā)明的第1發(fā)明是一種微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，將含有2種以上配體的標(biāo)準(zhǔn)樣品和含有與各配體特異性地結(jié)合的受體且光學(xué)上能夠區(qū)分的2種以上的微粒進行混合，并檢測生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)。本發(fā)明的第2發(fā)明是基于上述第1發(fā)明的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，在緩沖液中進行上述標(biāo)準(zhǔn)樣品與上述微粒的混合。本發(fā)明的第3發(fā)明是基于上述第2發(fā)明的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，將上述標(biāo)準(zhǔn)樣品與上述緩沖液混合后，向該混合液中添加上述微粒。本發(fā)明的第4發(fā)明是基于上述第2發(fā)明的微粒的樣品檢測活性的活性確認(rèn)方法，其中，將上述微粒與上述緩沖液混合后，向該混合液中添加上述標(biāo)準(zhǔn)樣品。本發(fā)明的第5發(fā)明是基于上述第14發(fā)明的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，上述微粒為磁性微粒，并對生成的凝集物施加磁力。本發(fā)明的第6發(fā)明是基于上述第15發(fā)明的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，將上述標(biāo)準(zhǔn)樣品和上述微粒在44(TC下進行混合。本發(fā)明的第7發(fā)明是基于上述第16的發(fā)明的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，將通過微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法檢測的標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測值同與該標(biāo)準(zhǔn)樣品為相同種類且相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品的已知檢測值進行比較。本發(fā)明的第8發(fā)明是基于上述第16的發(fā)明的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，使用濃度己知的標(biāo)準(zhǔn)樣品每隔任意的時間段進行微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法。本發(fā)明的第9發(fā)明是一種樣品的定量方法，其中，在通過上述第16的發(fā)明的方法確認(rèn)微粒的樣品檢測活性后，將含有2種以上與該微粒中的受體特異性結(jié)合的配體的樣品和該微粒混合，并檢測生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)，然后再次進行上述微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)。本發(fā)明的第10發(fā)明是一種樣品的定量方法，其中，用上述第16的發(fā)明的方法，使用相同種類且已知的不同的多個濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品進行微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)，導(dǎo)出標(biāo)準(zhǔn)樣品檢測值與標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度之間的函數(shù)，利用將含有與該標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體為相同種類且相同數(shù)目的配體的樣品與該微?；旌蠒r的樣品檢測值和所述函數(shù)，對樣品進行定量。本發(fā)明的第11發(fā)明是一種樣品檢測試劑盒，其具備含有2種以上配體的標(biāo)準(zhǔn)樣品和含有與各配體特異性結(jié)合的受體且光學(xué)上能夠區(qū)分的2種以上的微粒。本發(fā)明的第12發(fā)明是一種樣品檢測試劑盒，其具備含有2個以上配體的2種以上混合而成的標(biāo)準(zhǔn)樣品和含有與各配體特異性結(jié)合的受體且光學(xué)上能夠區(qū)分的2種以上的微粒。本發(fā)明的第13發(fā)明是基于上述第11或12發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體是半抗原。本發(fā)明的第14發(fā)明是基于上述第1113發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體的種類與樣品中的配體的種類相同。本發(fā)明的第15發(fā)明是基于上述第1114發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述標(biāo)準(zhǔn)樣品中配體的數(shù)目和種類與樣品中配體的數(shù)目和種類相同。本發(fā)明的第16發(fā)明是基于上述第1115發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述標(biāo)準(zhǔn)樣品的種類與樣品相同。本發(fā)明的第17所述的發(fā)明是基于上述第1116發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體由分子量為18060000的分子形成。本發(fā)明的第18發(fā)明是基于第1117發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體具有在至少0IO(TC的溫度范圍內(nèi)與上述微粒中的受體特異性結(jié)合的能力。本發(fā)明的第19發(fā)明是基于上述第1118發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體是選自熒光物質(zhì)、地高辛配基、氨基酸殘基數(shù)為6以上的多肽、2個以上單糖結(jié)合而成的糖鏈、生物素、蛋白質(zhì)、聚組氨酸、透明質(zhì)酸(HA)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、序列號l表示的肽以及它們的衍生物中的l種以上。本發(fā)明的第20發(fā)明是基于上述第1119發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，在上述標(biāo)準(zhǔn)樣品中含有具有鏈狀結(jié)構(gòu)的高分子物質(zhì)。本發(fā)明的第21發(fā)明是基于上述第20發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述高分子物質(zhì)為水溶性的。本發(fā)明的第22發(fā)明是基于第20或21發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述高分子物質(zhì)在其主鏈或側(cè)鏈的末端具有上述配體。本發(fā)明的第23發(fā)明是基于上述第2022發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述高分子物質(zhì)是選自多糖、聚乙二醇、多核苷酸、多肽、聚丙烯酸衍生物、聚丙烯酰胺、聚酯、聚醚、聚酰胺以及它們的衍生物中的1種以上。本發(fā)明的第24發(fā)明是基于上述第2023發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述高分子物質(zhì)主鏈的長度為15200nm。本發(fā)明的第25發(fā)明是基于上述第2024發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，在上述標(biāo)準(zhǔn)樣品與上述微粒的混合中使用的溶液中，上述高分子物質(zhì)為直鏈狀。本發(fā)明的第26發(fā)明是基于上述第1125發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子長度為樣品的分子長度的80120%。本發(fā)明的第27發(fā)明是基于上述第1126發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，以已知的不同的多個濃度具備上述標(biāo)準(zhǔn)樣品。本發(fā)明的第28發(fā)明是基于上述第27發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述多個標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度為lpMl)iiM的范圍。本發(fā)明的第29發(fā)明是基于上述第1128發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述微粒的粒徑為0.110|im。本發(fā)明的第30發(fā)明是基于上述第1129發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述微粒是磁性微粒。本發(fā)明的第31發(fā)明是基于上述第30發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其中，上述磁性微粒的粒徑為0.120pm。本發(fā)明的第32發(fā)明是基于上述第1131發(fā)明的樣品檢測試劑盒，其具備在上述標(biāo)準(zhǔn)樣品與上述微粒的混合中使用的溶液。根據(jù)本發(fā)明，能夠簡便、迅速且精度良好地對適用于以核酸等為代表的生物體相關(guān)物質(zhì)的樣品檢測的微粒的樣品檢測活性進行確認(rèn)。而且，能夠簡便、迅速且精度良好地檢測樣品。本發(fā)明適宜于例如對血液中或經(jīng)凍結(jié)或經(jīng)固定化處理的組織樣品中含有的核酸、或?qū)⒃摵怂崽幚砗蟮臉悠愤M行檢測。因此，本發(fā)明可用于例如臨床檢查的簡便化和迅速化，也可在從樣品的簡單檢查到全自動分析中得到廣泛應(yīng)用。圖1A是表示制備標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法的概念圖。圖1B是表示制備標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法的概念圖。圖1C是表示制備標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法的概念圖。圖1D是表示制備標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法的概念圖。圖2A是表示結(jié)合有受體的微粒的圖。圖2B是表示結(jié)合有受體的微粒的圖。圖3是表示與靶核酸連接而產(chǎn)生凝集時的微粒的概念圖。圖4A是表示兩5'末端被生物素修飾的PCR產(chǎn)物的圖。圖4B是表示兩5'末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物的圖。圖4C是表示一個5'末端被生物素修飾、另一個5'末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物的圖。符號說明30標(biāo)準(zhǔn)樣品31第1配體32第2配體33第1微粒331第l受體34第2微粒341第2受體具體實施例方式以下，詳細(xì)說明本發(fā)明。另外，下述配體只要沒有特殊說明則是指標(biāo)準(zhǔn)樣品中含有的配體。在本發(fā)明中，標(biāo)準(zhǔn)樣品是指含有2種以上的配體，且主要由一個分子或多個分子形成的締合物。微粒是指分散性微粒，使用2種以上含有與標(biāo)準(zhǔn)樣品中的各配體特異性結(jié)合的受體且光學(xué)上能夠區(qū)分的微粒。這里，光學(xué)上能夠區(qū)分具體而言是指例如顏色不同即光的吸收/反射/散射、發(fā)光、熒光等的波長不同、或粒徑不同、形狀不同、材質(zhì)不同等。例如，即使微粒的顏色和濃度相同，若微粒的粒徑不同，則光的透射率就不同，因而能夠?qū)⑦@些微粒從光學(xué)上區(qū)分。另外，若微粒的形狀不同，則光散射的程度就不同，因此能夠?qū)⑦@些微粒從光學(xué)上區(qū)分。此外，若微粒的材質(zhì)不同，則微粒的表面物性就不同，使得光學(xué)特性不同，因此能夠?qū)⑦@些微粒從光學(xué)上區(qū)分。本發(fā)明中使用的微粒也可以采用具有多個以這里列舉的要素為代表的光學(xué)上能夠區(qū)分的要素的微粒。而且，微粒通過配體和受體與上述標(biāo)準(zhǔn)樣品結(jié)合，一個微粒上可以結(jié)合多個標(biāo)準(zhǔn)樣品，進而各標(biāo)準(zhǔn)樣品又與其他微粒結(jié)合，從而使多個微粒相互連接，結(jié)果產(chǎn)生微粒凝集。以下，標(biāo)準(zhǔn)樣品與微粒的結(jié)合只要沒有特殊說明則是指通過上述配體和受體的結(jié)合。另外，在本發(fā)明中，特異性結(jié)合是指例如如DNA或RNA的互補核苷酸序列間的穩(wěn)定雙鏈的形成(雜交)、或抗原與抗體或生物素與抗生物素蛋白等那樣的在特定物質(zhì)間選擇性地形成的、基于特異性高的分子間作用力的結(jié)合。ii而且，通過檢測生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)，確認(rèn)微粒的樣品檢測活性是否正常。關(guān)于光學(xué)性質(zhì)的檢測，具體而言，例如可通過紫外可見紅外區(qū)域的透射率或吸光度的測定、熒光測定、發(fā)光測定、光學(xué)顯微鏡觀察等來進行，利用該檢測值來判斷微粒的樣品檢測活性。若微粒的樣品檢測活性正常，則生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)反映應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)樣品結(jié)合的所有種類微粒的光學(xué)性質(zhì)。另一方面，若生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)未反映應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)樣品結(jié)合的微粒中任一種的光學(xué)性質(zhì)，則光學(xué)性質(zhì)未被反映的微粒的樣品檢測活性存在異常。例如，當(dāng)使用顏色不同的微粒作為光學(xué)上能夠區(qū)分的2種以上的微粒時，若這些微粒的樣品檢測活性沒有異常，則生成的凝集物的顏色為這些所有微粒的顏色的混合色。但是，若任一種微粒的樣品檢測活性存在異常，則凝集物的顏色不是所使用的所有微粒的顏色的混合色。標(biāo)準(zhǔn)樣品可根據(jù)檢測對象的樣品的種類來選擇使用各種標(biāo)準(zhǔn)樣品，優(yōu)選生物體相關(guān)物質(zhì)。生物體相關(guān)物質(zhì)是指從生物體提取、分離等得到的物質(zhì)，不僅包括從生物體直接提取的物質(zhì)，還包括對它們進行化學(xué)處理或化學(xué)修飾等而得到的物質(zhì)。例如，可列舉出核酸、蛋白質(zhì)等以及它們的化學(xué)處理物或化學(xué)修飾物等。例如，若是核酸，可列舉出包括cDNA、基因組DNA、合成DNA、mRNA、全RNA、hnRAN、合成RNA在內(nèi)的所有核酸以及核酸類似物，可以是天然存在的核酸，也可以是人工合成的核酸。若是蛋白質(zhì)，例如可列舉出激素類、腫瘤標(biāo)記物、酶、抗體、抗原、抗體酶、其他蛋白質(zhì)、具有多個表位的蛋白質(zhì)，可以是天然存在的蛋白質(zhì)，也可以是人工合成的蛋白質(zhì)。其中，本發(fā)明優(yōu)選核酸。另外，還可以優(yōu)選使用未在此列舉的水溶性高分子化合物。在本發(fā)明中，標(biāo)準(zhǔn)樣品是指含有與微粒中的受體特異性結(jié)合的配體的生物相關(guān)物質(zhì)。含有配體的標(biāo)準(zhǔn)樣品可用現(xiàn)有公知的方法來制備。作為一個例子，用圖1對含有2種配體的核酸即標(biāo)準(zhǔn)樣品30的制備方法進行說明，可列舉出下述各種方法(i)針對作為對象的核酸10，使用光或鉑、或通過接頭使第1配體31和第2配體32與該核酸的堿基和/或5'末端共價結(jié)合的方法(圖1A)，例如使核酸的5'末端的堿基的氨基與配體的羧基共價結(jié)合的方法;(ii)在核酸合成時使用結(jié)合有第1配體31的第1引物11以及結(jié)合有第2配體1232的第2引物12，利用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法延長堿基序列的方法(圖IB);(iii)在PCR法中，在分別取至少1個結(jié)合有第1配體31的核苷酸13以及至少1個結(jié)合有第2配體32的核苷酸14的同時，使堿基序列延長的方法(圖1C);(iv)使用末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶，將結(jié)合有第l配體31或第2配體32的核苷酸在核酸的3'末端加尾的方法(圖1D)等。當(dāng)使用生物體樣品或任意的受試物等那樣的作為對象的核酸與其他核酸共存的試樣時，優(yōu)選上述(ii)和(iii)的方法。當(dāng)作為對象的核酸單獨存在時，可以使用任一方法。另外，例如生物樣品等中含有的作為對象的核酸可以用PCR法擴增后用于標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備，也可以不擴增而直接用于標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備。圖1所示為制備以含有2種配體的雙鏈核酸為標(biāo)準(zhǔn)樣品的例子，上述(i)和(iv)的方法也可適用于制備以含有2種配體的單鏈核酸為標(biāo)準(zhǔn)樣品的情況。而且，(0(iv)的方法均可適用于含有2種以上配體的核酸的制備。當(dāng)將核酸以外的例如蛋白質(zhì)、核酸及蛋白質(zhì)以外的水溶性高分子化合物等用作標(biāo)準(zhǔn)樣品時，也可以通過使配體中的官能團與上述蛋白質(zhì)、水溶性高分子化合物等中含有的官能團共價結(jié)合等現(xiàn)有公知的方法來制備標(biāo)準(zhǔn)樣品。配體只要能夠與微粒中的受體特異性結(jié)合即可，沒有特殊限制，作為優(yōu)選的配體，例如可列舉出選自親水性有機化合物、半抗原、地高辛配基、熒光素、Alexa、異硫氰酸熒光素(FITC)、2，4-二硝基苯酚(DNP)、四甲基羅丹明(TAMRA)、氨基酸殘基數(shù)為6以上的多肽、2個以上單糖結(jié)合而成的糖鏈、生物素、蛋白質(zhì)、聚組氨酸、透明質(zhì)酸(HA)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、序列號1表示的肽(Flag)以及它們的衍生物中的1種以上。生物素、地高辛配基、熒光素、Alexa、DNP等具有易于從市場獲得且廉價的優(yōu)點。另外，糖鏈和肽具有化學(xué)結(jié)構(gòu)的設(shè)計自由度高、容易備齊多種的優(yōu)點。標(biāo)準(zhǔn)樣品中配體的數(shù)目可以是每種一個或多個，可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測方法來選擇。另外，標(biāo)準(zhǔn)樣品中設(shè)置配體的位置只要不妨礙配體與受體的特異性結(jié)合即可，沒有特殊限制，可考慮標(biāo)準(zhǔn)樣品制備的容易性來適當(dāng)選擇。例如，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)樣品為核酸時，優(yōu)選其5'末端部位。另外，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)樣品是由多個分子形成的締合物時，可以僅在該締合物中的一個分子中含有配體，也可以在多個分子中含有配體。配體優(yōu)選在標(biāo)準(zhǔn)樣品和微粒混合時通用的溫度范圍即至少0100°c的溫度范圍內(nèi)具有與上述微粒中的受體特異性結(jié)合的能力。溫度范圍進一步優(yōu)選為44(TC，更優(yōu)選為1838'C。如后所述，利用本發(fā)明的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，能夠?qū)z測對象的樣品進行定量。在此情況下，標(biāo)準(zhǔn)樣品中配體的種類優(yōu)選與樣品中配體的種類相同，更優(yōu)選標(biāo)準(zhǔn)樣品中配體的數(shù)目和種類均與樣品中配體的數(shù)目和種類相同。這樣，能夠更高精度地進行樣品的定量。標(biāo)準(zhǔn)樣品優(yōu)選其中含有具有鏈狀結(jié)構(gòu)的高分子物質(zhì)的樣品。具體而言，可以在標(biāo)準(zhǔn)樣品中含有具有鏈狀結(jié)構(gòu)的高分子物質(zhì)作為其一部分，更優(yōu)選標(biāo)準(zhǔn)樣品本身為具有鏈狀結(jié)構(gòu)的高分子物質(zhì)。在主鏈或側(cè)鏈的末端具有上述配體的高分子物質(zhì)由于容易制備，易于規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)樣品中配體的數(shù)目，因而優(yōu)選使用。作為上述高分子物質(zhì)，優(yōu)選可列舉出選自多糖、聚乙二醇、多核苷酸、多肽、聚丙烯酸衍生物、聚丙烯酰胺、聚酯、聚醚、聚酰胺以及它們的衍生物中的1種以上。作為這種高分子物質(zhì)，例如可列舉出在鏈狀結(jié)構(gòu)的末端結(jié)合有配體的聚乙二醇、多肽以及多糖等。另外，結(jié)合有配體的合成多核苷酸也易于制備，如上所述，通過使用在5，末端結(jié)合有配體的引物進行PCR法，可容易地得到在5'末端結(jié)合有配體的核酸。這些在5'末端結(jié)合有配體的核酸均是容易制備且標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體數(shù)目易于規(guī)定的高分子物質(zhì)的一個例子。上述高分子物質(zhì)主鏈的長度優(yōu)選為15200nm。更優(yōu)選為20180nm，進一步優(yōu)選為45100nm。當(dāng)主鏈?zhǔn)呛怂釙r，核酸堿基數(shù)優(yōu)選為500個堿基對(bp)以下，更優(yōu)選為50250bp。更優(yōu)選為55200bp，進一步優(yōu)選為58120bp。含有配體的分子的分子長度由于會影響配體與受體間特異性結(jié)合的形成容易性，因此當(dāng)在配體結(jié)合高分子物質(zhì)時，通過使主鏈的長度如上所述，使特異性結(jié)合容易形成。另外，在本發(fā)明中，作為標(biāo)準(zhǔn)樣品，優(yōu)選生物體相關(guān)物質(zhì)，當(dāng)將以這種生物體相關(guān)物質(zhì)為代表的水溶性物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)樣品使用時，上述高分子物質(zhì)優(yōu)選為水溶性的。另外，在上述標(biāo)準(zhǔn)樣品與上述微粒的混合中使用的溶液中，上述高分子物質(zhì)優(yōu)選為直鏈狀。當(dāng)不是直鏈狀而例如是環(huán)狀等時，配體在該溶液中很難露出，有時很難與受體特異性結(jié)合。標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子長度優(yōu)選與作為檢測對象的樣品的分子長度為同等程度。具體而言，標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子長度優(yōu)選為樣品的分子長度的80120%。更優(yōu)選為90110%，進一步優(yōu)選為95105%。這樣能夠更高精度地進行樣品的定量。當(dāng)在抗原和抗體間等形成上述特異性結(jié)合時，配體需要為能夠進行特異性結(jié)合的合適的大小。例如，優(yōu)選由分子量為18060000的分子形成的配體。分子量更優(yōu)選為18010000，進一步優(yōu)選為1801000。本發(fā)明中使用的微粒是分散性微粒，例如如膠體粒子那樣在溶液中分散的微粒，優(yōu)選使用乳膠粒子，但不限于此。而且，微粒中含有與標(biāo)準(zhǔn)樣品中的各配體特異性結(jié)合的受體。作為受體，例如可以使用抗體、凝集素、鏈霉親和素等，但不限于這些。其中，優(yōu)選使用蛋白質(zhì)，特別是抗體。微粒中含有的受體可以是1種，也可以是2種以上而使微粒能夠與標(biāo)準(zhǔn)樣品中的多種配體結(jié)合。圖2表示本發(fā)明中使用的微粒的一個例子。這里所示的為在含有第1配體和第2配體這2種配體的標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測中使用的微粒。圖2A是表示只含有多個與第1配體特異性結(jié)合的第1受體331的第1微粒33的圖，圖2B是表示只含有多個與第2配體特異性結(jié)合的第2受體341的第2微粒34的圖。另外，圖2A和圖2B均為俯視圖，圖示了第1受體331和第2受體341均為6個，但不一定限于6個。另外，第1微粒33和第2微粒34是光學(xué)上能夠相互區(qū)分的微粒。微粒的粒徑優(yōu)選為0.1pm10.0nm。更優(yōu)選為0.1pmlpm，更優(yōu)選為0.1pm0.35^im。若使用這種粒徑的微粒，易于得到穩(wěn)定的凝集物。膠乳粒子主要由聚苯乙烯構(gòu)成，與甲基丙烯酸共聚以提高親水性和分散性。膠乳粒子分為表面上無官能團的單純型(plaintype)和有官能團的官能團型兩種。單純型的表面的電荷因甲基丙烯酸的存在而帶負(fù)電荷，能夠與蛋白質(zhì)分子中帶正電荷的區(qū)域形成離子鍵。另外，還能夠與蛋白質(zhì)分子形成疏水鍵。單純型的膠乳粒子僅通過與蛋白質(zhì)混合即吸附蛋白質(zhì)，因此蛋白質(zhì)的固定操作容易。作為受體，可以使用后述的各種受體，當(dāng)使用各種蛋白質(zhì)時，如上所述，優(yōu)選使用單純型的膠乳粒子作為微粒。具有官能團的膠乳粒子設(shè)計成在表面露出羧基或氨基等的形式，可以使用各種類型的官能團型膠乳粒子。在將官能團型膠乳粒子與受體結(jié)合時，只要使官能團型膠乳粒子中的官能團與受體的官能團結(jié)合即可，可以采用現(xiàn)有公知的方法。例如有，用水溶性碳二亞胺使羧酸與氨基結(jié)合的EDAC法、將1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)與N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)預(yù)先混合后使羧酸與氨基結(jié)合的方法、使用具有雙極性的接頭使氨基彼此交聯(lián)的方法、將活化后的醛基或甲苯磺?；c受體中的官能團結(jié)合的方法等。在本發(fā)明中，在不有損本發(fā)明效果的范圍內(nèi)可以使用現(xiàn)有公知的任何方法，特別優(yōu)選EDAC法。而且，與單純型的膠乳粒子同樣，當(dāng)使用各種蛋白質(zhì)作為受體時，優(yōu)選使用官能團型膠乳粒子。另外，即使是膠乳粒子以外的微粒，也可以根據(jù)微粒的種類通過現(xiàn)有公知的方法與受體結(jié)合。另外，關(guān)于微粒，使用光學(xué)上能夠區(qū)分的2種以上的微粒，可以按照現(xiàn)有公知的方法賦予微粒以光學(xué)性質(zhì)。例如，當(dāng)使用顏色不同的微粒時，可以將預(yù)先染成各自顏色的上述材質(zhì)成型來制作微粒，也可以在微粒成型后染成各自的顏色來制作。當(dāng)使用粒徑不同的微粒、形狀不同的微粒時，可以按各自規(guī)定的粒徑、規(guī)定的形狀進行成型來制作。而且，當(dāng)使用材質(zhì)不同的微粒時，可以使用規(guī)定的材質(zhì)來制作。此外，可以對上述粒徑、形狀、材質(zhì)不同的成型后的微粒表面實施聚合物等的涂布處理。在本發(fā)明中，作為微粒，也可以使用磁性微粒。此時，通過對生成的凝集物施加磁力，使該凝集物的聚集、與溶液的分離以及多余雜質(zhì)的除去變得容易，更容易進行凝集物的光學(xué)性質(zhì)的確認(rèn)。作為使用的磁性微粒，例如可列舉出由四氧化三鐵(Fe304)、三氧化二鐵(Y-Fe203)、各種鐵氧體、鐵、錳、鎳、鈷、鉻等金屬或含有鈷、鎳、錳等的合金形成的磁性微粒、或在內(nèi)部含有這些磁性微粒的聚苯乙烯、聚丙烯腈、聚甲基丙烯腈、聚甲基丙烯酸甲酯、聚己內(nèi)酰胺、聚對苯二甲酸乙二醇酯等疏水性聚合物、或聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺、聚乙烯吡咯垸酮、聚乙烯醇、聚(丙烯酸(2-羥乙基)酯)、聚(甲基丙烯酸(2-羥乙基)酯)、聚(丙烯酸(2，3-二羥丙基)酯)、聚(甲基丙烯酸(2，3-二羥丙基)酯)、聚乙二醇甲基丙烯酸酯等交聯(lián)得到的親水性聚合物、或上述聚合物的單體的2-4種左右的共聚物等的膠乳、明膠、脂質(zhì)體、或?qū)⑸鲜龃判晕⒘９潭ɑ饺槟z、明膠、脂質(zhì)體等表面上而得到的粒子等。使用上述方法可賦予磁性微粒以光學(xué)性質(zhì)。磁性微粒的粒徑?jīng)]有特殊限制，但優(yōu)選為0.1pm20拜。更優(yōu)選為0,1]aml(om，進一步優(yōu)選為0.1(im0.35|im。作為在磁性微粒上結(jié)合受體的方法，可列舉出使該受體進行物理吸附的方法或使其化學(xué)擔(dān)載的方法。作為物理吸附的方法，例如可列舉出使受體直接吸附于磁性微粒而固定化的方法、使受體與白蛋白等其他蛋白質(zhì)化學(xué)結(jié)合后吸附而固定化的方法。作為化學(xué)擔(dān)載的方法，例如可列舉出將存在于磁性微粒表面的氨基、羧基、巰基、羥基、醛基、環(huán)氧基等各種官能團活化后，使之與受體上的各種官能團結(jié)合從而直接將受體固定在磁性微粒上的方法；通過使磁性微粒和受體通過間隔分子化學(xué)結(jié)合而固定化的方法；使受體與白蛋白等其他蛋白質(zhì)化學(xué)結(jié)合后，使該蛋白質(zhì)與磁性微?；瘜W(xué)結(jié)合的方法。這里任一種化學(xué)結(jié)合方法釆用現(xiàn)有公知的方法即可。另外，作為上述間隔分子，例如可列舉出烷基鏈、聚乙二醇、聚氧乙烯、多糖、聚丙烯酸衍生物、聚酰胺等。對于在標(biāo)準(zhǔn)樣品與微?；旌蠒r生成凝集物的過程，以將含有2種配體的核酸作為標(biāo)準(zhǔn)樣品使用的情況為例，結(jié)合圖3進行詳細(xì)說明。圖3中，符號30為標(biāo)準(zhǔn)樣品，標(biāo)準(zhǔn)樣品30的一個5'末端結(jié)合有第l配體31，另一個5'末端結(jié)合有第2配體32。另外，符號33為第1微粒，其只含有多個與第1配體31特異性結(jié)合的第1受體331。符號34為第2微粒，其只含有多個與第2配體32特異性結(jié)合的第2受體341。標(biāo)準(zhǔn)樣品30通過第1配體31與第1受體331的結(jié)合而與第1微粒33結(jié)合，通過第2配體32與第2受體341的結(jié)合而與第2微粒34結(jié)合。因此，雖然在此省略了圖示，但上述第1微粒33和第2微粒34分別通過配體與受體的結(jié)合而與多個標(biāo)準(zhǔn)樣品結(jié)合，上述多個標(biāo)準(zhǔn)樣品又分別與第1微粒和第2微粒結(jié)合。這樣，多個微粒相互連接，結(jié)果產(chǎn)生了微粒的凝集。另外，在圖3中，從受體延伸的虛線簡易地表示結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)樣品。均圖示了6個第1受體331和第2受體341,但不一定限于6個。另外，第1微粒33和第2微粒34是光學(xué)上能夠相互區(qū)分的微粒，生成的凝集物是全部反映這些微粒的光學(xué)性質(zhì)的凝集物。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)樣品為多種時，例如當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)樣品中含有的2種以上的配體在這些每種標(biāo)準(zhǔn)樣品中不同時，只要只混合含有與多種中的一種標(biāo)準(zhǔn)樣品中含有的配體特異性結(jié)合的受體的微粒，即可選擇性檢測出該種標(biāo)準(zhǔn)樣品。同樣地，按各標(biāo)準(zhǔn)樣品分別制備含有與標(biāo)準(zhǔn)樣品中的2種以上的配體特異性結(jié)合的受體的微粒，將這些微粒用于混合，即可同時檢測出多種標(biāo)準(zhǔn)樣品。如上所述，只要適當(dāng)選擇用于混合的微粒，即可檢測出一種標(biāo)準(zhǔn)樣品或同時檢測出多種標(biāo)準(zhǔn)樣品。另外，本發(fā)明的標(biāo)準(zhǔn)樣品或樣品的檢測是指對使標(biāo)準(zhǔn)樣品或樣品與微粒結(jié)合而生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)進行檢測。另外，標(biāo)準(zhǔn)樣品中的2種以上的配體可以如上所述那樣采用每種標(biāo)準(zhǔn)樣品都完全不同的配體，也可以使2種以上的配體中的例如一種為多種標(biāo)準(zhǔn)樣品間的共同配體。由此，能夠簡化檢測工序。此外，微粒的凝集反應(yīng)即使在混合2種以上的標(biāo)準(zhǔn)樣品的條件下也具有特異性。因此，將2種以上的標(biāo)準(zhǔn)樣品混合并用其將任意的微粒凝集時，成為凝集素的1種標(biāo)準(zhǔn)樣品的反應(yīng)不會被其他種類的標(biāo)準(zhǔn)樣品阻礙。由此，通過混合2種以上的標(biāo)準(zhǔn)樣品，可以提供能夠檢測、測定多種微粒的共同的標(biāo)準(zhǔn)樣品。通過標(biāo)準(zhǔn)樣品的共同化，能夠減少樣品數(shù)量和準(zhǔn)備時間及人力。關(guān)于進行標(biāo)準(zhǔn)樣品和微粒的混合時的溫度、時間、使用的溶液，可考慮配體-受體的組合種類等，根據(jù)情況來適當(dāng)選擇。18當(dāng)用生物體相關(guān)物質(zhì)等水溶性物質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)樣品時，優(yōu)選使用緩沖液等水溶液。作為緩沖液，例如可列舉出磷酸、Tris、HEPES、MOPS、MOPSO、CHAPS、乙酸鈉、檸檬酸鈉、Earle、Hanks等。并且，例如，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)樣品為核酸時，與微粒的混合優(yōu)選在緩沖液中于44(TC下進行530分鐘。溫度范圍更優(yōu)選為1540°C，進一步優(yōu)選為1828。C或3638。C。1828°C為室溫，3638"C是生物體反應(yīng)的一般性最適溫度。當(dāng)使用相同種類的標(biāo)準(zhǔn)樣品和微粒多次進行標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測時，為了得到更高精度的檢測值，標(biāo)準(zhǔn)樣品與微粒的混合優(yōu)選在相同條件下進行。另一方面，通過改變進行混合的時間來追蹤標(biāo)準(zhǔn)樣品檢測值隨時間的變化，還能夠確認(rèn)由標(biāo)準(zhǔn)樣品與微粒的結(jié)合引起的凝集物生成的終點。標(biāo)準(zhǔn)樣品與微粒的混合只要在溶液中進行即可，其混合方法不受特殊限制。例如，可以向溶液中添加標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液和微粒，也可以向溶液中添加標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液和微粒分散液。另外，也可以僅將標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液和微粒分散液混合。其中，優(yōu)選制備標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液和微粒分散液，然后將它們用于混合。當(dāng)向溶液中添加標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液和微粒分散液時，用于制備標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液和微粒分散液的溶液優(yōu)選與添加它們時的溶液是同種類的。作為溶液，優(yōu)選使用上述緩沖液。當(dāng)將標(biāo)準(zhǔn)樣品與微粒混合時，當(dāng)在進行混合的溶液中的標(biāo)準(zhǔn)樣品或微粒的濃度過高時，已知會發(fā)生阻礙標(biāo)準(zhǔn)樣品與微粒結(jié)合的前帶效應(yīng)。因此，為了高精度地檢測凝集物的光學(xué)性質(zhì)，優(yōu)選在標(biāo)準(zhǔn)樣品和微粒的混合前，調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液和/或微粒分散液的濃度，使標(biāo)準(zhǔn)樣品與微粒的結(jié)合恰當(dāng)?shù)剡M行。例如，具體而言，優(yōu)選將標(biāo)準(zhǔn)樣品與緩沖液混合并調(diào)節(jié)濃度后在該混合液中添加微粒的方法、或?qū)⑽⒘Ｅc緩沖液混合并調(diào)節(jié)濃度后在該混合液中添加標(biāo)準(zhǔn)樣品的方法。更優(yōu)選微粒以微粒分散液、標(biāo)準(zhǔn)樣品以標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的形式來使用。關(guān)于用于混合的標(biāo)準(zhǔn)樣品與微粒之間的量關(guān)系，例如當(dāng)微粒的濃度為0.0010.2質(zhì)量％時，標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度優(yōu)選為lpMlpM。如上所述，通過將標(biāo)準(zhǔn)樣品與微粒混合后檢測生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)，能夠確認(rèn)微粒的樣品檢測活性。而且，將此時的標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測值同與該標(biāo)準(zhǔn)樣品為相同種類且相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品的已知檢測值進行比較，能夠容易地確認(rèn)微粒的樣品檢測活性。例如，針對微粒的每個制造批次，通過將使用各批次微粒時的標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測值同與該標(biāo)準(zhǔn)樣品為相同種類且相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品的已知檢測值進行比較，能夠確認(rèn)制造批次間的微粒的樣品檢測活性有無不均。同樣地，通過將使用在銷售目的地保存中的微粒時的標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測值與微粒制造地所保留的標(biāo)準(zhǔn)樣品的已知檢測值進行比較，能夠確認(rèn)在銷售目的地保存中的微粒的樣品檢測活性有無異常，從而能夠預(yù)先避免使用不合格微粒。如此，本發(fā)明的樣品檢測活性的確認(rèn)方法在微粒的品質(zhì)管理上很有效。另外，通過使用濃度已知的標(biāo)準(zhǔn)樣品每隔各任意的時間段進行微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)，能夠定期地確認(rèn)微粒的樣品檢測活性是否正常。這里，進行微粒的樣品檢測活性確認(rèn)的時期可根據(jù)目的來任意設(shè)定。此時，如果例如在確認(rèn)樣品檢測活性的同時，將該確認(rèn)中使用的光學(xué)上能夠區(qū)分的微粒分別單獨地在樣品檢測中使用來確認(rèn)檢測值，當(dāng)發(fā)現(xiàn)樣品檢測活性降低時，能夠確定該活性降低是由哪種微粒引起的。本發(fā)明的樣品檢測試劑盒具備的如到目前為止所述的那樣具備含有2種以上配體的標(biāo)準(zhǔn)樣品和含有與各配體特異性結(jié)合的受體并光學(xué)上能夠區(qū)分的2種以上的微粒。優(yōu)選微粒為微粒分散液的形式，標(biāo)準(zhǔn)樣品為標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液的形式。而且，優(yōu)選還同時具有在標(biāo)準(zhǔn)樣品與微粒的混合中使用的溶液。若使用這種樣品檢測試劑盒，則無需每次制備標(biāo)準(zhǔn)樣品和微粒，能夠簡化微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)步驟、樣品的定量步驟。另外，樣品檢測試劑盒優(yōu)選以己知的不同的多個濃度具備標(biāo)準(zhǔn)樣品和微粒。此時，對于標(biāo)準(zhǔn)樣品，優(yōu)選調(diào)制成使用頻率較高的lpMl^M的濃度范圍。標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度更優(yōu)選為10pM500nM，進一步優(yōu)選為100pM綱nM。若使用這種樣品檢測試劑盒，則不僅能夠大幅簡化微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)步驟、樣品的定量步驟，還能夠減少伴隨著標(biāo)準(zhǔn)樣品和微粒的濃度調(diào)節(jié)而產(chǎn)生的濃度不均等品質(zhì)的不均。另外，由于標(biāo)準(zhǔn)樣品或微粒按各20濃度分別配備，因此還能夠減少雜質(zhì)混入或分解等的危險性。另一方面，通過利用本發(fā)明的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，能夠高精度地進行樣品的定量。即，在進行微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)后，將含有與該微粒中的受體特異性結(jié)合的2種以上的配體的樣品與該微?；旌希z測生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)，然后再次進行上述微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)。此時，若標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測值在樣品檢測前后均正常，則能夠保證使用樣品檢測活性正常的微粒高精度地進行了樣品的定量。另外，使用相同種類且己知的不同的多個濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品來進行微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)，導(dǎo)出標(biāo)準(zhǔn)樣品檢測值與標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度之間的函數(shù)，從含有與該標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體為相同種類的配體的樣品和該微?；旌蠒r的樣品檢測值和上述函數(shù)，也能夠?qū)悠愤M行定量。此時，樣品中含有的各配體的數(shù)目優(yōu)選與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同。另外，標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子長度優(yōu)選與樣品為同等程度。上述用于定量的樣品可以與標(biāo)準(zhǔn)樣品的種類不同，而與標(biāo)準(zhǔn)樣品為相同種類時，凝集物的生成過程相同，檢測精度更高，因而優(yōu)選。另外，關(guān)于使用樣品時的凝集物的光學(xué)性質(zhì)的檢測，可與使用標(biāo)準(zhǔn)樣品時同樣地進行，在此省略其說明。實施例以下，用具體實施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明。但本發(fā)明不受以下的實施例的任何限制。(實施例1)(1)分別采用序列號2表示的堿基序列的5'末端被生物素修飾得到的引物、序列號3表示的堿基序列的5'末端被FITC修飾得到的引物、作為模板的由序列號4表示的堿基序列形成的56bp的合成DNA，分別得到兩5'末端被生物素修飾的PCR產(chǎn)物、兩5，末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物、一個5'末端被生物素修飾而另一個5'末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物后，用Tris緩沖液將它們的濃度調(diào)節(jié)至100pM、lnM、10nM、100nM、1pM。另外，將兩5'末端被生物素修飾的PCR產(chǎn)物、兩5'末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物混合，將各PCR產(chǎn)物分別調(diào)節(jié)至上述濃度。將這些PCR產(chǎn)物作為被檢測的樣品使用。如圖4A、圖4B及圖4C所示，作為樣品的物質(zhì)的兩末端被2個配體修飾。圖4A表示兩5'末端被生物素修飾的PCR產(chǎn)物，圖4B表示兩5'末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物，圖4C表示一個5'末端被生物素修飾而另一個5，末端被FITC分別修飾的PCR產(chǎn)物。圖4A和圖4B所示的兩5'末端被相同配體修飾的物質(zhì)也與圖4C所示的物質(zhì)同樣，可作為標(biāo)準(zhǔn)樣品使用。(2)將光的主要吸收波長為800nm的抗生物素抗體敏化珠粒(Pl)以及光的主要吸收波長為450nm的抗FITC抗體敏化珠粒(P2)分別用反應(yīng)緩沖液(pH為7.2的PBS緩沖液)稀釋至0.04質(zhì)量％，按每孔10(^1分別注入96孔板。(3)然后測定450nm、800nm處的溶液的吸光度。(4)在分別注入的珠粒溶液中，分別向含有P1的溶液中添加兩5'末端被生物素修飾的PCR(圖4A)，向含有P2的溶液中添加兩5'末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物(圖4B)，每孔5—然后，通過吸液操作進行攪拌。同樣地，將5^1由兩5'末端被生物素修飾的PCR產(chǎn)物(圖4A)以及兩5，末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物(圖4B)混合得到的溶液加入Pl或P2的珠粒溶液中，通過吸液操作進行攪拌。(5)測定加入PCR產(chǎn)物5分鐘后的450nm、800nm處的溶液的吸光度。(6)算出上述(3)和(5)的吸光度的差值，求得吸光度變化量。結(jié)果如表1所示。(7)將Pl和P2的混合物用反應(yīng)緩沖液(pH為7.2的PBS緩沖液)稀釋至0.04質(zhì)量％，按每孔100^1分別注入96孔板。(8)然后測定650nm處的溶液的吸光度。(9)在分別注入的含有Pl和P2的珠粒溶液中加入5^1作為標(biāo)準(zhǔn)樣品的一個5，末端被生物素修飾而另一個5，末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物(圖4C)，通過吸液操作進行攪拌。(10)測定加入標(biāo)準(zhǔn)樣品5分鐘后的650nm處的溶液的吸光度。(11)算出上述(8)禾n(10)的吸光度的差值，求得吸光度變化量。結(jié)果如表1所示。(12)在測定了吸光度的珠粒溶液中，對于使用的PCR產(chǎn)物的濃度為100nM的珠粒溶液，進一步測定在37'C下保存1個月后的吸光度，與(6)和(11)同樣地求出吸光度變化量。結(jié)果如表2所示。(13)另外，將上述(1)中得到的一個5'末端被生物素修飾而另一個5'末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物(圖4C)的濃度調(diào)節(jié)至10nM、5nM、2.5nM、1.25nM。(14)進而用與上述(1)同樣的材料和方法，得到濃度未知的PCR產(chǎn)物。(15)用與上述(7)(11)相同的步驟求出在上述(13)和上述(14)中得到的PCR產(chǎn)物的吸光度變化量。另外，在測定后，再次測定10nM的PCR產(chǎn)物。結(jié)果如表3所示。表lPCR產(chǎn)物濃度吸光度變化量800nrn450nm650nmPlP2PlP2Pl+P2滿pM0.05520細(xì)60.03980,00240.0513固0.10440扁70.06430.04540.133310nM0.43290細(xì)50.05560.18820,5527100nM0.76540.00040.05280.33280.9774lnM0.96000.00210.04860.41741.2259表2吸光度測定時期吸光度變化量800nm450nm650nmPlP2PlP2Pl+P2PCR產(chǎn)物剛制備后0.76540細(xì)40.05280.33280.9774保存l個月后0.53500.00110.04980.32760.683223表3<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>由表1的結(jié)果可知，使用作為標(biāo)準(zhǔn)樣品的一個5'末端被生物素修飾而另一個5，末端被FITC修飾的PCR產(chǎn)物、抗生物素抗體敏化珠粒(Pl)以及抗FITC抗體敏化珠粒(P2)，利用本發(fā)明的方法，證實珠粒(Pl、P2)的樣品檢測活性正常。另外，從表2的結(jié)果中保存1個月后的Pl+P2的吸光度變化量減少的結(jié)果證實，珠粒試劑的樣品檢測活性降低。而且，將保存1個月后的吸光度變化量與PCR產(chǎn)物剛制備后的吸光度變化量進行比較，可知在P2的情況下兩者的吸光度大致相同，而在P1的情況下，保存1個月后的吸光度大大減少。S卩，證實珠粒試劑的樣品檢測活性的降低是由P1引起的。如此，通過在將樣品檢測活性的確認(rèn)中使用的光學(xué)上能夠區(qū)分的微粒分別單獨地用在樣品檢測中，并比較檢測值，能夠確認(rèn)樣品檢測活性的降低是由哪種微粒引起的。另外，由表3的結(jié)果導(dǎo)出的PCR濃度與吸光度變化量的函數(shù)為Y=20.3X-1.23(Y-PCR產(chǎn)物濃度[nM]、X-吸光度變化量)，當(dāng)在該導(dǎo)出的函數(shù)中代入濃度未知的PCR樣品的測定值時，為7.95nM。如此，從導(dǎo)出的PCR濃度與吸光度變化量的函數(shù)，能夠?qū)舛任粗臉悠愤M行定量。此外，在測定濃度未知的樣品后，再次測定10nM的樣品，結(jié)果與測定濃度未知的樣品前的吸光度變化量為同等程度。由此可間接地證實在測定濃度未知的樣品前后，珠粒的樣品檢測活性正常。另外，2種標(biāo)準(zhǔn)樣品混合后的測定結(jié)果如表4所示。即使將兩5'末端被生物素修飾的標(biāo)準(zhǔn)樣品和兩5'末端被FITC修飾的標(biāo)準(zhǔn)樣品這2種標(biāo)準(zhǔn)樣品混合，由特異性反應(yīng)引起的微粒的吸光度變化量也顯示出與單獨使用1種標(biāo)準(zhǔn)樣品時同樣的趨勢。由此可知，即使將配體不同的2種以上的標(biāo)準(zhǔn)樣品混合，也能夠得到與單獨使用1種標(biāo)準(zhǔn)樣品時同樣的結(jié)果。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>本發(fā)明適用于使臨床檢査簡便化、迅速化等，可在醫(yī)療相關(guān)領(lǐng)域中得到應(yīng)用。權(quán)利要求1、一種微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，將含有2種以上配體的標(biāo)準(zhǔn)樣品和含有與各配體特異性結(jié)合的受體且光學(xué)上能夠區(qū)分的2種以上的微粒進行混合，并檢測生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)。2、如權(quán)利要求1所述的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，在緩沖液中進行所述標(biāo)準(zhǔn)樣品與所述微粒的混合。3、如權(quán)利要求2所述的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，將所述標(biāo)準(zhǔn)樣品與所述緩沖液混合后，向該混合液中添加所述微粒。4、如權(quán)利要求2所述的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，將所述微粒與所述緩沖液混合后，向該混合液中添加所述標(biāo)準(zhǔn)樣品。5、如權(quán)利要求14中任一項所述的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，所述微粒為磁性微粒，并對生成的凝集物施加磁力。6、如權(quán)利要求15中任一項所述的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，將所述標(biāo)準(zhǔn)樣品和所述微粒在44(TC下混合。7、一種微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，將通過權(quán)利要求16中任一項所述的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法檢測的標(biāo)準(zhǔn)樣品的檢測值同與該標(biāo)準(zhǔn)樣品為相同種類且相同濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品的已知檢測值進行比較。8、一種微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法，其中，使用濃度已知的標(biāo)準(zhǔn)樣品每隔任意的時間段進行權(quán)利要求16中任一項所述的微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法。9、一種樣品的定量方法，其中，在通過權(quán)利要求16中任一項所述的方法確認(rèn)微粒的樣品檢測活性后，將含有2種以上與該微粒中的受體特異性結(jié)合的配體的樣品和該微粒進行混合，并檢測生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)，然后再次進行所述微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)。10、一種樣品的定量方法，其中，通過權(quán)利要求16中任一項所述的方法，使用相同種類且已知的不同的多個濃度的標(biāo)準(zhǔn)樣品來進行微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)，導(dǎo)出標(biāo)準(zhǔn)樣品檢測值與標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度之間的函數(shù)，利用將含有與該標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體為相同種類且相同數(shù)目的配體的樣品與該微粒混合時的樣品檢測值和所述函數(shù)，來對樣品進行定量。11、一種樣品檢測試劑盒，其具備含有2種以上配體的標(biāo)準(zhǔn)樣品和含有與各配體特異性結(jié)合的受體且光學(xué)上能夠區(qū)分的2種以上的微粒。12、一種樣品檢測試劑盒，其具備含有2個以上配體的2種以上的混合而成的標(biāo)準(zhǔn)樣品和含有與各配體特異性結(jié)合的受體且光學(xué)上能夠區(qū)分的2種以上的微粒。13、如權(quán)利要求11或12所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體是半抗原。14、如權(quán)利要求1113所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體的種類與樣品中的配體的種類相同。15、如權(quán)利要求1113所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中配體的數(shù)目和種類與樣品中配體的數(shù)目和種類相同。16、如權(quán)利要求1115中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品的種類與樣品相同。17、如權(quán)利要求1116中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體由分子量為18060000的分子形成。18、如權(quán)利要求1117中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體具有在至少0100°C的溫度范圍內(nèi)與所述微粒中的受體特異性結(jié)合的能力。19、如權(quán)利要求1118中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中的配體是選自熒光物質(zhì)、地高辛配基、氨基酸殘基數(shù)為6以上的多肽、2個以上單糖結(jié)合而成的糖鏈、生物素、蛋白質(zhì)、聚組氨酸、透明質(zhì)酸(HA)、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)、序列號l表示的肽以及它們的衍生物中的l種以上。20、如權(quán)利要求1119中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，在所述標(biāo)準(zhǔn)樣品中含有具有鏈狀結(jié)構(gòu)的高分子物質(zhì)。21、如權(quán)利要求20所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述高分子物質(zhì)為水溶性的。22、如權(quán)利要求20或21所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述高分子物質(zhì)在其主鏈或側(cè)鏈的末端具有所述配體。23、如權(quán)利要求2022中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述高分子物質(zhì)是選自多糖、聚乙二醇、多核苷酸、多肽、聚丙烯酸衍生物、聚丙烯酰胺、聚酯、聚醚、聚酰胺以及它們的衍生物中的l種以上。24、如權(quán)利要求2023中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述高分子物質(zhì)主鏈的長度為15200nm。25、如權(quán)利要求2024中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，在所述標(biāo)準(zhǔn)樣品與所述微粒的混合中使用的溶液中，所述高分子物質(zhì)為直鏈狀。26、如權(quán)利要求1125中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述標(biāo)準(zhǔn)樣品的分子長度為樣品的分子長度的80120%。27、如權(quán)利要求1126中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，以已知的不同的多個濃度具備所述標(biāo)準(zhǔn)樣品。28、如權(quán)利要求27所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述多個標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度為lpMl^M的范圍。29、如權(quán)利要求1128中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述微粒的粒徑為0.11(Him。30、如權(quán)利要求1128中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述微粒是磁性微粒。31、如權(quán)利要求30所述的樣品檢測試劑盒，其中，所述磁性微粒的粒徑為0.120,32、如權(quán)利要求1131中任一項所述的樣品檢測試劑盒，其具備在所述標(biāo)準(zhǔn)樣品與所述微粒的混合中使用的溶液。全文摘要本發(fā)明提供微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法、樣品檢測試劑盒以及樣品的定量方法。微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)方法的特征在于將含有2種以上配體的標(biāo)準(zhǔn)樣品和含有與各配體特異性結(jié)合的受體且光學(xué)上能夠區(qū)分的2種以上的微?；旌?，并檢測生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)；樣品檢測試劑盒的特征在于其具備上述標(biāo)準(zhǔn)樣品和上述微粒；樣品的定量方法的特征在于通過上述確認(rèn)方法確認(rèn)微粒的樣品檢測活性后，將含有2種以上與該微粒中的受體特異性結(jié)合的配體的樣品和該微?；旌?，并檢測生成的凝集物的光學(xué)性質(zhì)，然后再次進行上述微粒的樣品檢測活性的確認(rèn)；因此本發(fā)明提供試劑的樣品檢測活性的確認(rèn)方法、利用該確認(rèn)方法的樣品的定量方法以及含有該試劑的樣品檢測試劑盒，所述試劑的樣品檢測活性的確認(rèn)方法適用于以核酸等為代表的生物體相關(guān)物質(zhì)的樣品檢測。文檔編號G01N33/543GK101467044SQ20078002206公開日2009年6月24日申請日期2007年7月13日優(yōu)先權(quán)日2006年7月13日發(fā)明者西川和孝申請人:奧林巴斯株式會社