專利名稱：篩選高效菌株處理高鹽度石油開采廢水的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種篩選高效菌抹處理高鹽度石油開采廢水的方法。
背景技術(shù)：
原油及石油制品是交通運輸、電力、機(jī)械制造等工業(yè)的重要能源，也是石 油化工、輕工、紡織和食品等工業(yè)所必需的原料。在石油開采過程中，采出的
原油含有大量的水分， 一般情況下含水率高達(dá)70-95%。采油廢水主要是隨原油 一起被開采出來，經(jīng)過油氣分離和脫水處理后脫出的廢水，采油廢水普遍具有 以下特點1、含石油類等高分子難降解有機(jī)污染物。2、含表面活性劑等多種 有機(jī)化學(xué)藥劑。3、含鹽度高，具一定的腐蝕性。4、含殺菌劑。高鹽度石油開 采廢水是目前難處理的廢水之一。這種廢水不僅含有油、有機(jī)物、重金屬和放 射性物質(zhì)等多種物質(zhì)，還含有大量如C1—、 S0廣、Na+、 Ca"等溶解性無機(jī)鹽物質(zhì)， 而水中所含溶解性鹽越多，離子強(qiáng)度愈大， 一般的微生物愈難以生長繁殖。
目前利用篩選高效菌抹處理高鹽度石油開采廢水的方法較少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是在長期受高鹽度的污染的污泥中，采用高鹽度基礎(chǔ)培養(yǎng) 基和篩選培養(yǎng)基進(jìn)行分離純化，利用處理高鹽度石油開采廢水的C0D為目標(biāo)進(jìn) 行復(fù)篩，得到高效菌抹，利用高效菌株處理高鹽度石油開采廢水。
通常的分離純化法選取的基礎(chǔ)培養(yǎng)基利用NaCl試劑調(diào)節(jié)培養(yǎng)基中的鹽度， 篩選培養(yǎng)基是以目標(biāo)碳源加一定的其他營養(yǎng)成分制備得到的培養(yǎng)基，而對于我 們所做的制高鹽度基礎(chǔ)培養(yǎng)基的方法，基礎(chǔ)培養(yǎng)基通過加實際處理的高鹽度廢 水調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的鹽度的方法，篩選培養(yǎng)基直接利用高鹽度石油開采廢水加瓊脂 制備，這樣簡化了反應(yīng)步驟，改變工藝條件，使得操作筒便易行，且節(jié)約成本。
本發(fā)明具體步驟為
(1) 在無菌操作條件下，分別稱取選取的不同污泥，按lg污泥/90ml廢水的 比例進(jìn)行稀釋混勻；再按1(T進(jìn)行稀釋，分別取lml菌液接種到高鹽度基礎(chǔ)培養(yǎng) 基上，放于34-35。C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天；在菌落生長明顯的平板上挑取長勢 良好的菌落接種于含有高鹽度選擇性篩選培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，再置于恒溫培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)。其后再反復(fù)進(jìn)行平板劃線分離，直至得到高鹽度目標(biāo)降解菌；
(2) 將粗篩后得到的高鹽度目標(biāo)降解菌接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在溫度為34-35°C,轉(zhuǎn)速為105-110r/min的搖床中進(jìn)行富集培養(yǎng)23-24h,取lml富集培 養(yǎng)菌液接入到高鹽度石油開采廢水中，降解23-24h，考察廢水中投菌前后COD 的變化，篩選出處理效果較好的菌抹；
(3) 第一次復(fù)篩得到處理效果較好的菌抹以高鹽度基礎(chǔ)培養(yǎng)基富集后取 10.1-10.3ml接種1: 3的廢水中進(jìn)行第 一 階段馴化，即放入到轉(zhuǎn)速 110-120r/min,溫度為34-35。C的搖床中培養(yǎng)48小時，取lmL接種到2: 3的廢 水中進(jìn)行第二階^:的馴化，條件同第一階段。46-48小時后取10ml接種到全部 的廢水中馴化兩天，條件同第一階段，分離出馴化后的菌抹，將菌林保存在-4。C;
(4) 將馴化后得到的優(yōu)勢菌林接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在溫度為34-35°C,轉(zhuǎn) 速為105-110r/min的搖床中進(jìn)行富集培養(yǎng)24h,取lml富集培養(yǎng)菌液接入到高 鹽度石油開采廢水中，降解70-72h,考察廢水中投菌前后COD的變化，篩選出 處理效果較好的菌株；
(5) 挑處理效果較好的菌株接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中于34-35°C、 105-110r/min 的條件下，振蕩培養(yǎng)23-24h,于3900-4000r/min離心IO分鐘，倒去上清液， 用無菌水洗滌菌體，搖勻5-6分鐘，于3900-4000r/min離心，倒去上清液，用 高鹽度無菌水稀釋菌體，搖勻按不同菌種均勻組合后，制成混合菌液，使混合 菌液的OD值維持在0. 085-0. 90左右，搖勻后取lml混合菌液接種到100ml廢 水中，在34-35。C、 105-110r/min的條件下，于搖床中降解23-24 h，考察廢水 中投菌前后COD的變化，得到高效混合菌林；
(6) 選取高效混合菌株，稀釋10倍的單一菌液的OD值為0.085-0. 90左右， 在無菌條件下，將菌液按(0.8-1.1): (0.8-1.1): (0. 8-1.1)比例混合均勻,用 10°/。稀鹽酸溶液和10%氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)廢水pH為0. 085-0. 90，將菌液按接種量 為0. 65-0. 75°/。接種到廢水中，在35°C、 105-110r/min的條件下，振蕩培養(yǎng) 23-24h。
本發(fā)明操作簡便易行，且節(jié)約成本。
具體實施方式
實施例
(l)在無菌操作條件下，稱取lg選取的污泥，倒入盛有90ml無菌水的250ml 錐形瓶中(內(nèi)含玻璃珠)用手振搖20min，按10—工進(jìn)行稀釋;從各稀釋的試管中分 別取lml菌液接種到高鹽度基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，放于35。C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天。 在菌落生長明顯的平板上挑取長勢良好的菌落接種于含有高鹽度選擇性篩選培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，再置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。其后再反復(fù)進(jìn)行平板劃線分離， 直至得到高鹽度目標(biāo)降解菌。
(2) 將粗篩后得到的高鹽度目標(biāo)降解菌接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在溫度為
35°C,轉(zhuǎn)速為110r/min的搖床中進(jìn)行富集培養(yǎng)24h,取lml富集培養(yǎng)菌液接入 到高鹽度石油開采廢水中，降解24h，考察廢水中投菌前后COD的變化，篩選出 處理效果較好的菌抹。
(3) 第一次復(fù)篩得到的菌林以高鹽度基礎(chǔ)培養(yǎng)基富集后取10. 3ml接種1: 3 的廢水中進(jìn)行第一階段馴化，即放入到轉(zhuǎn)速110r/min，溫度為35。C的搖床中培 養(yǎng)48小時，取lmL接種到2: 3的廢水中進(jìn)行第二階段的馴化，條件同第一階 段。48小時后取10ml接種到全部的廢水中馴化兩天，條件同第一階段，分離出 馴化后的菌抹，將菌抹保存在-4°C。
(4) 將馴化后得到的優(yōu)勢菌林接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在溫度為35°C,轉(zhuǎn)速為 110r/min的搖床中進(jìn)行富集培養(yǎng)24h，取lml富集培養(yǎng)菌液接入到高鹽度石油 開采廢水中，降解72h,考察廢水中投菌前后COD的變化，篩選出處理效果較好 的菌株。
(5) 挑處理效果較好的菌抹接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中于35°C、 110r/min的條件 下，振蕩培養(yǎng)24h，于4000r/min離心IO分鐘，倒去上清液，用無菌水洗滌菌 體，搖勻6分鐘，于4000r/min離心，倒去上清液，用高鹽度無菌水稀釋菌體， 搖勻按不同菌種均勻組合后，制成混合菌液，使混合菌液的OD值維持在O. 90， 搖勻后取lml混合菌液接種到100ml廢水中，在35。C、 110r/min的條件下，于 搖床中降解24 h,考察廢水中投菌前后COD的變化，得到高效混合菌株。
(6)選取高效混合菌抹，稀釋10倍的單一菌液的OD值為0. 90，在無菌條 件下，將菌液按1: 1: 1比例混合均勻，用10°/。稀鹽酸溶液和10°/。氫氧化鈉溶液 調(diào)節(jié)廢水pH為9,將菌液按接種量為0. 7°/。接種到廢水中，在35。C、 110r/min的 條件下，振蕩培養(yǎng)24h。廢水COD從300. Omg/L下降到123. 22mg/L, COD去除率 達(dá)到了 59. 6%。
權(quán)利要求
1.一種篩選高效菌株處理高鹽度石油開采廢水的方法，其特征在于具體步驟為(1)在無菌操作條件下，分別稱取選取的不同污泥，按1g污泥/90ml廢水的比例進(jìn)行稀釋混勻；再按10-1進(jìn)行稀釋，分別取1ml菌液接種到高鹽度基礎(chǔ)培養(yǎng)基上，放于34-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2天；在菌落生長明顯的平板上挑取長勢良好的菌落接種于含有高鹽度選擇性篩選培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，再置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；其后再反復(fù)進(jìn)行平板劃線分離，直至得到高鹽度目標(biāo)降解菌；(2)將粗篩后得到的高鹽度目標(biāo)降解菌接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在溫度為34-35℃，轉(zhuǎn)速為105-110r/min的搖床中進(jìn)行富集培養(yǎng)23-24h，取1ml富集培養(yǎng)菌液接入到高鹽度石油開采廢水中，降解23-24h，考察廢水中投菌前后COD的變化，篩選出處理效果較好的菌株；(3)第一次復(fù)篩得到處理效果較好的菌株以高鹽度基礎(chǔ)培養(yǎng)基富集后取10.1-10.3ml接種1∶3的廢水中進(jìn)行第一階段馴化，即放入到轉(zhuǎn)速110-120r/min，溫度為34-35℃的搖床中培養(yǎng)48小時，取1mL接種到2∶3的廢水中進(jìn)行第二階段的馴化，條件同第一階段；46-48小時后取10ml接種到全部的廢水中馴化兩天，條件同第一階段，分離出馴化后的菌株，將菌株保存在-4℃；(4)將馴化后得到的優(yōu)勢菌株接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，在溫度為34-35℃，轉(zhuǎn)速為105-110r/min的搖床中進(jìn)行富集培養(yǎng)24h，取1ml富集培養(yǎng)菌液接入到高鹽度石油開采廢水中，降解70-72h，考察廢水中投菌前后COD的變化，篩選出處理效果較好的菌株；(5)挑處理效果較好的菌株接種到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中于34-35℃、105-110r/min的條件下，振蕩培養(yǎng)23-24h，于3900-4000r/min離心10分鐘，倒去上清液，用無菌水洗滌菌體，搖勻5-6分鐘，于3900-4000r/min離心，倒去上清液，用高鹽度無菌水稀釋菌體，搖勻按不同菌種均勻組合后，制成混合菌液，使混合菌液的OD值維持在0.085-0.90左右，搖勻后取1ml混合菌液接種到100ml廢水中，在34-35℃、105-110r/min的條件下，于搖床中降解23-24h，考察廢水中投菌前后COD的變化，得到高效混合菌株；(6)選取高效混合菌株，稀釋10倍的單一菌液的OD值為0.085-0.90左右，在無菌條件下，將菌液按(0.8-1.1)∶(0.8-1.1)∶(0.8-1.1)比例混合均勻，用10％稀鹽酸溶液和10％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)廢水pH為0.085-0.90，將菌液按接種量為0.65-0.75％接種到廢水中，在35℃、105-110r/min的條件下，振蕩培養(yǎng)23-24h。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種篩選高效菌株處理高鹽度石油開采廢水的方法。通過高鹽度目標(biāo)碳源菌的篩選分離純化；以降解高鹽度石油開采廢水的COD為目標(biāo)的優(yōu)勢菌株的第一次復(fù)篩；將得到的優(yōu)勢菌株置于實際高鹽度石油開采廢水中進(jìn)行馴化；分離出馴化后的優(yōu)勢菌株進(jìn)行以降解高鹽度石油開采廢水的COD為目標(biāo)的第二次復(fù)篩，經(jīng)過多次篩選得到的優(yōu)勢菌株進(jìn)行組合處理得到最佳混合高效菌；將高效混合菌液接種到廢水中。本發(fā)明操作簡便易行，且節(jié)約成本。
文檔編號C02F3/34GK101306882SQ20081007365
公開日2008年11月19日 申請日期2008年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月30日
發(fā)明者張學(xué)洪, 李艷紅, 王敦球, 申泰銘, 解慶林, 云 雷 申請人:桂林工學(xué)院