專利名稱：一種漁用微生態(tài)養(yǎng)水劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于淡、海水水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)水質(zhì)調(diào)控和病害防治的微生態(tài)養(yǎng)水劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展，養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，集約化程度的不斷提高以及池塘老化、水質(zhì)環(huán)境污染、管理與技術(shù)措施滯后等諸多原因，水產(chǎn)動植物病害時有發(fā)生，新的病害不斷涌現(xiàn)，有的已呈暴發(fā)性趨勢。以中國為例初步統(tǒng)計，目前人工養(yǎng)殖的魚、蝦、貝、藻、蟹、鱉、蛙等水產(chǎn)動植物的主要病害就有200余種以上，每年我國因病害所造成的產(chǎn)量損失就達15-30％，全國約有10-15％的養(yǎng)殖面積受到不同程度的影響，直接經(jīng)濟損失達數(shù)十億元，并有繼續(xù)加重的局勢。水產(chǎn)動植物病害已嚴(yán)重地制約著漁業(yè)的發(fā)展。俗話說，“養(yǎng)魚先養(yǎng)水”，水質(zhì)的好壞直接影響著養(yǎng)殖體是否能健康生長。中國自20世紀(jì)90年代引進有效微生物菌群(EM)基本技術(shù)，在90年代中后期開始開發(fā)出一些產(chǎn)品，至今微生物制劑的產(chǎn)品已不少，但很多只是對EM技術(shù)的簡單模仿，由于EM技術(shù)中的EM是″有效微生物菌群″的英文縮寫，它是日本的琉球大學(xué)比嘉照夫教授研制出來的新型復(fù)合微生物菌劑，這種菌劑是由光合細(xì)菌、放線菌、酵母菌、乳酸菌等10個屬80多種微生物復(fù)合培養(yǎng)而成的。目前，EM技術(shù)在日本，以色列，美國等農(nóng)業(yè)強國都有應(yīng)用，而且取得了非常好的效果。但EM技術(shù)是一種通用技術(shù)，用于提高農(nóng)業(yè)、牧業(yè)、林業(yè)、水產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)能力，在治理環(huán)境、保護環(huán)境以及人類保健等方面，都有著一定的作用，但在具體進行EM生產(chǎn)時，由于成本等原因，不可能80多種分開培養(yǎng)后來混合制成微生物制劑，由于不同微生物的營養(yǎng)要求和培養(yǎng)條件相差很大，也不可能一起培養(yǎng)，同時，由于用途的不同，能夠有效發(fā)揮作用的微生物和起主導(dǎo)作用的微生物也不同，比如在養(yǎng)殖業(yè)上要求具備以下功能微生物①能改善水質(zhì)環(huán)境，降解殘余飼料，消除養(yǎng)殖體糞便惡臭；②提高養(yǎng)殖體的防病抗病能力，提高成活率；③改善養(yǎng)殖體的腸道微生物環(huán)境，使有益微生物定植于腸道，有利于養(yǎng)殖體吸收營養(yǎng)，明顯提高繁殖率和日增重；④促進水體中綠色藻類生長，提高水中溶解氧。
本發(fā)明所述的微生態(tài)養(yǎng)水劑就是根據(jù)養(yǎng)殖業(yè)的特點分離和篩選出具有不同功能的微生物，并把它們專門設(shè)計、組合成能高效發(fā)揮群體功能優(yōu)勢的一種漁用微生態(tài)制劑，同時在這種微生態(tài)制劑還專門加入維生素B和維生素C，更進一步提高養(yǎng)殖體的營養(yǎng)吸收和抗病能力，是一種高效漁用微生態(tài)養(yǎng)水劑，兼有養(yǎng)水和抗病的功效，它包括如下6種的微生物凝結(jié)芽孢桿菌1.949(Bcilluscoagulans)、產(chǎn)朊假絲酵母AS2.1180(Candida utilis)、類球紅假單胞菌1.1737(Rhodospseudomonas sphaerioide)、醋化醋桿菌1.117(Acetoberbacteraceti)、發(fā)酵乳桿菌AS1.122(Lactbacillus fermentum)和地衣芽孢桿菌1.105(Bacillus licheniformis)，它們各自發(fā)揮不同的功能。
凝結(jié)芽孢桿菌，它可以產(chǎn)生大量有益代謝產(chǎn)物，同時分泌一些殺菌物質(zhì)，殺死或抑制腐敗菌和其它有害微生物的生長，維持養(yǎng)殖體腸道吸收，而且其代謝產(chǎn)物，可促進腸蠕動，幫助養(yǎng)殖體消化吸收，同時對不良環(huán)境的抵抗力強，特別是抗高溫、抗高胃酸的能力強，在腸道的定植性也強，這更增添了它的優(yōu)點。
類球紅假單胞菌是一種以光為能源進行營養(yǎng)繁殖的微生物。其菌體含有豐富的蛋白質(zhì)、多種維生素，以及生物素、類胡蘿卜素、輔酶Q等生活活性物質(zhì)。它還具獨特的生理功能，即能夠吸收水體中氨和氮、亞硝酸鹽硫化氫以及有機酸等，消除水體環(huán)境中的有害物質(zhì)，使水質(zhì)得到凈化，病原菌難以發(fā)展。同時，可以促進水中綠色藻類的生長，增加水中溶解氧。
醋化醋桿菌，它從類球紅假單胞菌中攝取糖類固態(tài)氮，然后一部分供給綠色藻類，另一部分再還給這種光合細(xì)菌，形成好氣性和嫌氣性細(xì)菌結(jié)構(gòu)的共生態(tài)，形成一種益生菌群。益生菌群作為一個功能群體，采用適當(dāng)?shù)谋壤酮毺氐陌l(fā)酵工藝把經(jīng)過仔細(xì)篩選出來的好氣性和嫌氣性有益微生物混合培養(yǎng)，形成多種多樣的微生物群落，它們在生長過程中產(chǎn)生有用物質(zhì)及其分泌物質(zhì)成為各自或相互生長的基質(zhì)(食物)，正是通過這樣一種共生增殖關(guān)系，組成了復(fù)雜而穩(wěn)定的微生態(tài)系統(tǒng)，使得它們具備功能齊全的優(yōu)勢。同時醋化醋桿菌分泌的代謝產(chǎn)物對很多有害病原菌有拮抗作用。
地衣芽孢桿菌，在生長代謝過程中產(chǎn)生多組分抗菌活性物質(zhì)，已知者有短桿菌肽、枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素和頭孢菌素C等，故對致病菌和內(nèi)源性感染的條件致病菌，具有明顯的拮抗作用，有促進巨噬細(xì)胞非特異性吞噬作用。同時，對不良環(huán)境的抵抗力也強，在不同的環(huán)境條件下均能生長繁殖。
發(fā)酵乳桿菌是乳酸菌的一種，乳酸具有很強的殺菌能力，能有效抑制有害微生物的活動，以及有機物的急劇腐敗分解。乳酸菌能夠使常態(tài)下不易分解的木質(zhì)素和纖維素等變得容易分解，并且消除未分解有機物產(chǎn)生的種種弊端，在有機物發(fā)酵分解上發(fā)揮突擊隊的重要作用，它將未腐熟的有機物質(zhì)轉(zhuǎn)化成對動植物有效的養(yǎng)份。乳酸菌的另一個重要作用，就是能夠抑制連作障礙產(chǎn)生的致病菌增殖。
產(chǎn)朊假絲酵母能利用氨基酸、糖類及其它有機物質(zhì)產(chǎn)生發(fā)酵力，產(chǎn)生出促進細(xì)胞分裂的活性化物質(zhì)。酵母菌在EM集團軍中對于促進其它的有效微生物(如乳酸菌、放線菌)增殖所需要的基質(zhì)(食物)的生產(chǎn)提供重要的給養(yǎng)保障。此外，酵母菌生產(chǎn)的單細(xì)胞蛋白是動物不可缺少的有效養(yǎng)份。
醋化醋桿菌，它從光合細(xì)菌中攝取糖類和固態(tài)氮，然后一部分供給綠色藻類，另一部分再還給光合細(xì)菌，形成好氣性和嫌氣性細(xì)菌構(gòu)成的共生態(tài)，形成一種益生菌群。益生菌群作為一個功能群體，它們在生長過程中產(chǎn)生有用物質(zhì)及其分泌物質(zhì)成為各自或相互生長的基質(zhì)(食物)，正是通過這樣一種共生增殖關(guān)系，組成了復(fù)雜而穩(wěn)定的微生態(tài)系統(tǒng)，使得它們具備功能齊全的優(yōu)勢。同時醋化醋桿菌分泌的代謝產(chǎn)物對很多有害病原菌有拮抗作用。
本發(fā)明所提供的高效漁用微生態(tài)制劑是由6種不同微生物通過無菌發(fā)酵而制得的微生物發(fā)酵液，在該發(fā)酵液中含有凝結(jié)芽孢桿菌1.949(Bcilluscoagulans)、產(chǎn)朊假絲酵母AS2.1180(Candida utilis)、類球紅假單胞菌1.1737(Rhodospseudomonas sphaerioide)、醋化醋桿菌1.117(Acetoberbacteraceti)、發(fā)酵乳桿菌AS1.122(Lactbacillus fermentum)和地衣芽孢桿菌1.813(Bacillus licheniformis)，六種菌濃度達5×109cfu/ml以上。
所述六種菌的具體資料是1、凝結(jié)芽孢桿菌1.949(Bcillus coagulans)保藏于CGMCC，中國普通微生物菌種保藏中心；2、產(chǎn)朊假絲酵母AS2.1180(Candida utilis)保藏于CGMCC，中國普通微生物菌種保藏中心；3、類球紅假單胞菌1.1737(Rhodospseudomonas sphaerioide)保藏于CGMCC，中國普通微生物菌種保藏中心；4、醋化醋桿菌1.117(Acetoberbacter aceti)保藏于CGMCC，中國普通微生物菌種保藏中心；5、發(fā)酵乳桿菌AS1.122(Lactbacillus fermentum)保藏于CGMCC，中國普通微生物菌種保藏中心；6、地衣芽孢桿菌1.813(Bacillus licheniformis)保藏于CGMCC，中國普通微生物菌種保藏中心。
上述菌種在《中國普通微生物菌種保藏中心菌種目錄》(中國微生物菌種保藏管理委員會等編著，主編周宇光，1997，第二版，中國農(nóng)業(yè)科技出版社出版)和《中國菌種目錄》(中國微生物菌種保藏管理委員會編著，1983，輕工業(yè)出版社出版)上已公開記載，其中《中國菌種目錄》(中國微生物菌種保藏管理委員會編著，1983，輕工業(yè)出版社出版，P122)上公開記載，其中醋化醋桿菌1.117(Acetoberbacter aceti)、凝結(jié)芽孢桿菌1.949(Bcilluscoagulans)、類球紅假單胞菌1.1737(Rhodospseudomonas sphaerioide)分別記載在《中國普通微生物菌種保藏中心菌種目錄》的P1、P7、P51等頁面，地衣芽孢桿菌1.813(Bacillus licheniformis)、發(fā)酵乳桿菌AS1.122(Lactbacillus fermentum)和產(chǎn)朊假絲酵母AS2.1180(Candida utilis)分別記載在《中國菌種目錄》P55、P122、P291等頁面。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題提供一種具有不同功能、能高效發(fā)揮群體功能優(yōu)勢的高濃度微生物菌群的漁用微生態(tài)制劑及其生產(chǎn)方法，它通過6種不同微生物的簡單組合，高效發(fā)揮養(yǎng)水和抗病的功效，使生產(chǎn)方便、所含微生物濃度高、功效明顯。
本發(fā)明解決技術(shù)問題所采用的方案一、采用菌株凝結(jié)芽孢桿菌1.949(Bcillus coagulans)、產(chǎn)朊假絲酵母AS2.1180(Candida utilis)、類球紅假單胞菌1.1737(Rhodospseudomonassphaerioide)、醋化醋桿菌1.117(Acetoberbacter aceti)、發(fā)酵乳桿菌AS1.122(Lactbacillus fermentum)和地衣芽孢桿菌1.813(Bacilluslicheniformis)。類球紅假單胞菌1.1737從保藏斜面種直接入盛在透明容器的液體培養(yǎng)基中，然后密封透明容器，置于自然光下培養(yǎng)。其它五個菌種中的任何一個菌種都經(jīng)保藏斜面種、生產(chǎn)斜面種、一級液體活化種的階段，然后接入二級液體活化種(種子罐)，最終進入發(fā)酵罐培養(yǎng)。
二、培養(yǎng)基的配制1.類球紅假單胞菌培養(yǎng)基的配制a)保藏斜面種培養(yǎng)基(g/L)牛肉膏1.5，酵母膏1.5，胰蛋白胨5.0，葡萄糖1.0，NaCl，K2HPO44.8，KH2PO41.32，瓊脂20，深井水1000ml，pH7.2。115℃滅菌20分鐘。
b)液體種培養(yǎng)基(g/L)牛肉膏1.5，酵母膏1.5，胰蛋白胨5.0，葡萄糖1.0，NaCl，K2HPO44.8，KH2PO41.32，深井水1000ml，pH7.2。115℃滅菌20分鐘。
2.凝結(jié)芽孢桿菌培養(yǎng)基的配制a)保藏斜面種培養(yǎng)基(g/L)蛋白胨20.0，酵母膏10.0，葡萄糖2.0，MnSO4·H2O 0.05，瓊脂20，用麩皮水定容至1000ml，pH7.2~7.4，121℃滅菌20分鐘。
b)液體種培養(yǎng)基(g/L)蛋白胨10.0，酵母膏10.0，葡萄糖60.0，MgSO4·7H2O
0.5，CaCO310.0，MnSO4·H2O 0.05，用水定容至1000ml，pH7.2~7.4，121℃滅菌20分鐘。
c)發(fā)酵培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖20，尿素6.0，玉米漿10，蛋白胨10，酵母膏10，MnSO4·H2O 0.05，用水定容至1000ml，pH7.0，121℃滅菌20分鐘。
以下菌種的發(fā)酵培養(yǎng)基與此相同！3.產(chǎn)朊假絲酵母培養(yǎng)基的配制a)保藏斜面種培養(yǎng)基(g/L)12Bx°麥芽汁1000ml，瓊脂15，pH自然。117℃滅菌30分鐘。
b)液體種培養(yǎng)基(g/L)8Bx°麥芽汁1000ml，pH自然。117℃滅菌30分鐘。
4.醋化醋桿菌培養(yǎng)基的配制a)保藏斜面種培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖80.0，酵母膏10.0，CaCO320.0，瓊脂20，用水定容至1000ml，pH6.8，121℃滅菌20分鐘。
b)液體種培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖100.0，酵母膏15.0，CaCO320.0，用水定容至1000ml，pH6.8，121℃滅菌20分鐘。
5.發(fā)酵乳桿菌培養(yǎng)基的配制a)保藏斜面種培養(yǎng)基(g/L)乳酪蛋白胨10.0，牛肉膏10.0，酵母膏5.0，葡萄糖5.0，吐溫80 1.0，醋酸鈉5.0，擰檬酸二胺2.0，KH2PO42.0，MgSO4·7H2O 0.2，MnSO4·H2O 0.05，瓊脂20，用水定容至1000ml，pH6.8，121℃滅菌20分鐘。
b)液體種培養(yǎng)基(g/L)乳酪蛋白胨10.0，牛肉膏10.0，酵母膏5.0，葡萄糖20.0，吐溫80 1.0，醋酸鈉5.0，擰檬酸二胺2.0，KH2PO42.0，MgSO4·7H2O 0.2，MnSO4·H2O 0.05，瓊脂20，用水定容至1000ml，pH6.8，121℃滅菌20分鐘。
6.地衣芽孢桿菌a)保藏斜面種培養(yǎng)基(g/L)蛋白胨5.0，牛肉膏3.0，NaCl 5.0，MnSO4·H2O0.005，瓊脂20，用水定容至1000ml，pH7.0，121℃滅菌20分鐘。
b)液體種培養(yǎng)基(g/L)葡萄糖20，尿素4.0，玉米漿6，蛋白胨10，酵母膏10，MnSO4·H2O 0.05，pH7.0，用水定容至1000ml，pH7.0，121℃滅菌20分鐘。
三、制備方法
制備微生態(tài)養(yǎng)水劑時，類球紅假單胞菌單獨培養(yǎng)，其余5種菌分別在不同的保藏斜面種培養(yǎng)基和液體種培養(yǎng)基培養(yǎng)后，再取體積相同的5種菌的液體種混合，接入種子罐混合培養(yǎng)，種子罐培養(yǎng)成熟后，按10％接種量接入發(fā)酵罐中，種子罐和發(fā)酵罐均采用發(fā)酵培養(yǎng)基作為營養(yǎng)基質(zhì)。
1.類球紅假單胞菌的培養(yǎng)類球紅假單胞菌的培養(yǎng)采用液體連續(xù)擴大的方法進行，具體操作過程如下用接種針將在保藏斜面種培養(yǎng)基已培養(yǎng)好的斜面種在無菌條件下接入裝有50ml已滅菌的液體種培養(yǎng)基的50ml三角瓶(整個三角瓶裝滿液體培養(yǎng)基)中，用膠塞密封住瓶口，靜置于室外有陽光處，用陽光照射，在氣溫超過28℃，陽光充足的時候，一般經(jīng)過4天的培養(yǎng)，液體變紅，這時可以用分光光度計于650nm處直接測定液體原液的光密度(O.D.值)，當(dāng)O.D.值超過1.0，其菌濃度超過1.0×109cfu/ml時，這時可以用血球計數(shù)法計算其菌濃度。當(dāng)菌濃度確實超過1.0×109cfu/ml，可將培養(yǎng)好細(xì)菌的三角瓶移入室內(nèi)陰涼處放置，備用。如果要進一步擴大培養(yǎng)，可以取培養(yǎng)好50ml類球紅假單胞菌的培養(yǎng)液按10％接種量接入裝有500ml已滅菌的液體種培養(yǎng)基的500ml三角瓶(整個三角瓶裝滿液體培養(yǎng)基)中，培養(yǎng)方法同前，依此類推。
血球計數(shù)法方法如下將培養(yǎng)完畢的成熟培養(yǎng)液，以無菌操作方法吸取1毫升待測樣品注入盛有9毫升滅菌蒸餾水的試管，混勻成1∶10稀釋液，并按上述相同操作做10倍遞增稀釋。吸取不同濃度的稀釋液時必須更換吸管。取合適稀釋度的稀釋液通過血球記數(shù)法在顯微鏡下進行記數(shù)。
2.其余5種菌(凝結(jié)芽孢桿菌1.949、產(chǎn)朊假絲酵母AS2.1180、類球紅假單胞菌、醋化醋桿菌1.117、發(fā)酵乳桿菌AS1.122和地衣芽孢桿菌1.813)的培養(yǎng)將在不同保藏斜面種培養(yǎng)基培養(yǎng)好的斜面種用接種環(huán)分別接種一環(huán)于上述不同液體種培養(yǎng)基中，液體活化培養(yǎng)基裝于500ml三角瓶中，三角瓶裝量為20ml，于33℃往復(fù)式搖床振蕩培養(yǎng)15小時，搖床轉(zhuǎn)速為110r/m，沖程為65-75mm，使液體種的菌數(shù)達1.0×109cfu/ml以上；這時，可將5種菌的培養(yǎng)液混合在一起，按1％接種量接入裝有10L已滅菌發(fā)酵培養(yǎng)基的15L種子罐中，于33℃，轉(zhuǎn)速200r/m，風(fēng)量為50L/小時，進行通氣培養(yǎng)，保持罐壓0.1Mpa；從六小時開始，鑒測菌濃度，待菌數(shù)達1.0×109cfu/ml
以上，停止培養(yǎng)。按10％接種量接入裝有100L已滅菌發(fā)酵培養(yǎng)基的150L發(fā)酵罐中，于34℃，轉(zhuǎn)速220r/m，風(fēng)量為3.5M3/小時，進行通氣培養(yǎng)，保持罐壓0.1Mpa；從五小時開始，檢測菌濃度，待菌數(shù)達5.0×109cfu/ml以上，停止培養(yǎng)。如果要進一步擴大培養(yǎng)，可按前面相同的方法進行，依此類推。
3.復(fù)合微生態(tài)制劑的制備取上述培養(yǎng)好類球紅假單胞菌的培養(yǎng)液1份+5份其余5種菌凝結(jié)芽孢桿菌1.949、產(chǎn)朊假絲酵母AS2.1180、類球紅假單胞菌、醋化醋桿菌1.117、發(fā)酵乳桿菌AS1.122和地衣芽孢桿菌1.813)在發(fā)酵罐中混合發(fā)酵培養(yǎng)的培養(yǎng)液。
4.高效漁用微生態(tài)養(yǎng)水劑的制備在已混合有六種以上微生物的培養(yǎng)液中，按1g/L分別添加復(fù)合維生素B和維生素C原料藥，然后裝進不同體積的包裝罐中，立即封蓋，制成成品，置于陰涼處存放。
本發(fā)明產(chǎn)生的有益效果具有不同功能、能高效發(fā)揮群體功能優(yōu)勢的高濃度微生物菌群的漁用微生態(tài)制劑及其生產(chǎn)方法，它通過6種不同微生物的簡單組合，就能高效發(fā)揮養(yǎng)水和抗病的功效，具有生產(chǎn)方便、所含微生物濃度高、功效明顯等特點。該產(chǎn)品在淡、海水養(yǎng)殖全過程均可使用。每畝(水深1米)首次施放1公斤，以后每20-30天施放0.5-1公斤，可以保持水色狀態(tài)良好。
實施范例生產(chǎn)60L高效漁用微生態(tài)養(yǎng)水劑的操作實例1.類球紅假單胞菌的培養(yǎng)液的制備用接種針將在保藏斜面種培養(yǎng)基已培養(yǎng)好的斜面種在無菌條件下接入裝有50ml已滅菌的液體種培養(yǎng)基(成分見前)的50ml三角瓶(整個三角瓶裝滿液體培養(yǎng)基)中，共接兩瓶，用膠塞密封住瓶口，靜置于室外有陽光處，用陽光照射，這時氣溫30℃，陽光充足，經(jīng)過4天的培養(yǎng)，液體變紅，用分光光度計于650nm處直接測定液體原液的光密度(O.D.值)，O.D.為1.0。取上述培養(yǎng)好類球紅假單胞菌的培養(yǎng)液(共100m)接入裝有1000ml已滅菌的液體種培養(yǎng)基1000ml三角瓶(整個三角瓶裝滿液體培養(yǎng)基)中，靜置于室外有陽光處，用陽光照射，經(jīng)過4天的培養(yǎng)，液體完全變紅，測定O.D.為1.10。這時將其再接入裝有10L已滅菌的液體種培養(yǎng)基玻璃瓶(整個瓶裝滿液體培養(yǎng)基)中，靜置于室外有陽光處，用陽光照射，經(jīng)過4天的培養(yǎng)，液體完全變紅，測定O.D.為1.12，用血球計數(shù)法計算其菌濃度為2.1×
109cfu/ml，將玻璃瓶移入室內(nèi)陰涼處存放，備用。
2.凝結(jié)芽孢桿菌1.949、產(chǎn)朊假絲酵母AS2.1180、類球紅假單胞菌、醋化醋桿菌1.117、發(fā)酵乳桿菌AS1.122和地衣芽孢桿菌1.813培養(yǎng)液的制備將在不同保藏斜面種培養(yǎng)基培養(yǎng)好的斜面種用接種環(huán)分別接種一環(huán)于前面所述的不同液體種培養(yǎng)基中，液體培養(yǎng)基裝于500ml三角瓶中，三角瓶裝量為20ml，于33℃往復(fù)式搖床振蕩培養(yǎng)15小時，搖床轉(zhuǎn)速為110r/m，沖程為65-75mm，用血球計數(shù)法計算其菌濃度，這時每瓶液體種的菌數(shù)均超過1.0×109cfu/ml；將5種菌的培養(yǎng)液混合在一起，按接入裝有7L已滅菌發(fā)酵培養(yǎng)基的10L種子罐中，于33℃，轉(zhuǎn)速200r/m，風(fēng)量為35L/小時，進行通氣培養(yǎng)，保持罐壓0.1Mpa；經(jīng)9小時培養(yǎng)，用血球計數(shù)法計算其菌濃度為5.5×109cfu/ml，停止培養(yǎng)。將其接入裝有70L已滅菌發(fā)酵培養(yǎng)基的100L發(fā)酵罐中，于34℃，轉(zhuǎn)速220r/m，風(fēng)量為2.65M3/小時，進行通氣培養(yǎng)，保持罐壓0.1Mpa；經(jīng)9小時培養(yǎng)，用血球計數(shù)法計算其菌濃度為為7.0×109cfu/ml，停止培養(yǎng)。無菌排出50L培養(yǎng)液進入已滅菌的100L金屬罐中，備用。
3.將上述培養(yǎng)好的10L類球紅假單胞菌的培養(yǎng)液無菌移入裝有培養(yǎng)好其余5種菌50L的培養(yǎng)液100L金屬罐中，再添加60克復(fù)合維生素B和60克維生素C原料藥，充分?jǐn)嚢杌旌暇鶆颉?br> 4.采用無菌操作將上述含有六種菌和維生素的混合液快速放入不同體積的包裝罐中，既制成高效漁用微生態(tài)養(yǎng)水劑。
權(quán)利要求
1.一種漁用微生態(tài)養(yǎng)水劑及其制備方法，其特征在于含有凝結(jié)芽孢桿菌1.949、產(chǎn)朊假絲酵母AS2.1180、類球紅假單胞菌1.1737、醋化醋桿菌1.117、發(fā)酵乳桿菌AS1.122和地衣芽孢桿菌1.813，六種菌濃度達5×109cfu/ml以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種漁用微生態(tài)養(yǎng)水劑及其制備方法，其特征在于按1g/L分別添加復(fù)合維生素B和維生素C原料藥。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的一種漁用微生態(tài)養(yǎng)水劑及其制備方法，其特征在于球紅假單胞菌單獨培養(yǎng)；其余5種菌(凝結(jié)芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、醋化醋桿菌、發(fā)酵乳桿菌和地衣芽孢桿菌)的保藏斜面種和液體種也是分別進行培養(yǎng)，其保藏斜面種和液體種培養(yǎng)基也是不同的，但這五種菌的液體種是采用等體積混合后一起接入種子罐的，再經(jīng)種子罐接入發(fā)酵罐一起混合培養(yǎng)，種子罐和發(fā)酵罐均采用發(fā)酵培養(yǎng)基作為發(fā)酵基質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種漁用微生態(tài)養(yǎng)水劑及其制備方法，其特征在于凝結(jié)芽孢桿菌、產(chǎn)朊假絲酵母、醋化醋桿菌、發(fā)酵乳桿菌和地衣芽孢桿菌種子罐和發(fā)酵罐采用的培養(yǎng)基為(g/L)葡萄糖15~25，尿素4.0~8.0，玉米漿15~25，蛋白胨15~25，酵母膏15~25，MnSO4·H2O0.02~0.08，pH6.8~7.2。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于淡、海水水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)水質(zhì)調(diào)控和病害防治微生態(tài)養(yǎng)水劑及其制備方法。以具有一些特殊功能的微生物包括凝結(jié)芽孢桿菌1.949(Bcillus coagulans)、產(chǎn)朊假絲酵母AS2.1180(Candida utilis)、類球紅假單胞菌1.1737(Rhodospseudomonas sphaerioide)等，這些菌株經(jīng)無菌發(fā)酵后取得的培養(yǎng)液并添加適量的維生素B和維生素C濃縮液制備而成。產(chǎn)品適合在淡、海水水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中進行水質(zhì)調(diào)節(jié)，促進藻類生長，改善水色，同時可以提高養(yǎng)殖體的抗病能力，是一種高效的漁用微生態(tài)養(yǎng)水劑，兼有養(yǎng)水和抗病的功效，在淡、海水養(yǎng)殖全過程均可使用。
文檔編號C02F3/34GK1498865SQ0215191
公開日2004年5月26日 申請日期2002年11月11日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月11日
發(fā)明者施慶珊, 李良秋, 吳家俊, 許虹, 林小平, 邱玉棠 申請人:廣東合瀛生物工程有限公司