一種富鐵蟲草花的生產(chǎn)方法
【專利說明】
(一)
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及富鐵蟲草花的生產(chǎn)方法，具體涉及一種利用農(nóng)業(yè)廢棄物啤酒糟清潔生產(chǎn)富鐵蟲草花的方法。
(二)
【背景技術(shù)】
[0002]蟲草的藥用價(jià)值很高，具有補(bǔ)腎益肺，止血化痰的作用，它可以治療久咳虛喘、陽萎遺精、病后體虛、腰膝酸痛等療效顯著。由于蟲草具有多種藥用價(jià)值，導(dǎo)致國內(nèi)和國際市場對蟲草的需求很大，進(jìn)而導(dǎo)致供不應(yīng)求，開采過度。所以人們對于采用人工發(fā)酵培養(yǎng)蟲草的技術(shù)非常重視。國內(nèi)外研究人員采取液體深層發(fā)酵的方法來生產(chǎn)蟲草菌絲體以及固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蟲草花，希望用人工培養(yǎng)菌絲體和蟲草花來代替天然蟲草。這種方法成本低廉、反應(yīng)條件溫和，因此該法被廣泛應(yīng)用，該法可以在一定程度上保護(hù)蟲草這一珍稀物種。
[0003]鐵是人體重要的必需微量元素之一，也是比較容易缺乏的元素。鐵缺乏是我國主要的營養(yǎng)缺乏病之一?，F(xiàn)多采用無機(jī)鐵進(jìn)行鐵強(qiáng)化，但存在鐵離子對粘膜的刺激，胃腸道副作用較大，吸收率低等而限制了其使用。因此研究低毒高效補(bǔ)鐵劑一直是開發(fā)的方向。利用蟲草菌經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)蟲草花，可使鐵由無機(jī)態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)橛袡C(jī)態(tài)，提高生物利用率，毒副作用大大降低，且蟲草花本身就含有極豐富的蛋白質(zhì)，具有人體所必需的8種氨基酸及B族維生素、豐富的酶系統(tǒng)。因此，富鐵蟲草花作為強(qiáng)化食品的鐵源是預(yù)防鐵缺乏和缺鐵性貧血的一項(xiàng)行之有效的措施。
[0004]本發(fā)明擬以啤酒糟為原料，采用蛹蟲草菌發(fā)酵生產(chǎn)富鐵蟲草花，實(shí)現(xiàn)蟲草花低成本的關(guān)鍵技術(shù)突破，增加農(nóng)民收入。
(三)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為了得到質(zhì)量高、成本低廉的富鐵蟲草花，本發(fā)明提供一種原材料新穎、成本低、綠色生產(chǎn)、環(huán)境友好，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化的富鐵蟲草花的生產(chǎn)方法。
[0006]本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0007]—種富鐵蟲草花的生產(chǎn)方法，所述方法按如下步驟進(jìn)行:
[0008](I)斜面培養(yǎng):將出發(fā)菌株蛹蟲草(常規(guī)菌株，市購可得)接種于斜面培養(yǎng)基，20?30°C恒溫培養(yǎng)7?1d，獲得斜面菌體；
[0009]所述斜面培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨8?12g/L、葡萄糖30?50g/L、瓊脂13?20g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶劑為水，pH為5.5?6.5 ；
[0010](2)種子液培養(yǎng):將步驟(I)獲得的斜面菌體接種至種子培養(yǎng)基中，在20?30°C，150?200r/min的搖床條件下振蕩培養(yǎng)7?10d，獲得種子液；
[0011]所述種子培養(yǎng)基的配方為:葡萄糖10?15g/L、K2HP04.3H20 0.4?0.6g/L、KH2P〇4
0.4?0.68/1、1^-甘氨酸0.8?1.28/1、]\%304.7H20 0.4?0.6g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶劑為水，pH為5.5?6.5;
[0012](3)固體發(fā)酵:將烘干至恒重的啤酒糟粉末與硫酸亞鐵、水混合均勻，118?130°C滅菌20?30min，得到固體發(fā)酵培養(yǎng)基，冷卻待用;將步驟(2)培養(yǎng)好的種子液接種至所得固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在20?30°C進(jìn)行恒溫發(fā)酵培養(yǎng)30?40d，得到成品富鐵蟲草花；
[0013]所述種子液的接種體積量為5?15mL/100g固體發(fā)酵培養(yǎng)基;所述硫酸亞鐵的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的質(zhì)量計(jì)為800?1000yg/g;所述烘干至恒重的啤酒糟粉末與水的料液質(zhì)量比為1:2?3。
[0014]本發(fā)明中，所述的出發(fā)菌株蛹蟲草為尖頭蟲草I號(hào)，購自山東梁山縣正大菌業(yè)科技開發(fā)中心。所述的啤酒糟為可商購獲得的普通啤酒糟，任何啤酒生產(chǎn)企業(yè)所產(chǎn)生的副產(chǎn)物啤酒糟都可以適用。
[0015]本發(fā)明所述的生產(chǎn)方法，步驟(I)中，優(yōu)選所述斜面培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨1.0g/L、葡萄糖40g/L、瓊脂15g/L、氯霉素0.1 g/L，溶劑為水，pH為6。
[0016]步驟(2)中，優(yōu)選所述種子培養(yǎng)基的配方為:葡萄糖10g/L、K2HP04.3H20 0.5g/L、KH2PO4 0.58/1丄-甘氨酸1.(^/1、1%304.7H20 0.5g/L、氯霉素0.lg/L，溶劑為水，pH為6。
[0017]步驟(3)中，優(yōu)選所述硫酸亞鐵的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的質(zhì)量計(jì)為900yg/g;優(yōu)選所述烘干至恒重的啤酒糟粉末與水的料液質(zhì)量比為1:2.3;優(yōu)選所述種子液的接種體積量為I OmL/1 OOg固體發(fā)酵培養(yǎng)基。
[0018]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:
[0019](I)使用啤酒糟為富鐵蟲草花發(fā)酵培養(yǎng)的原材料，在國內(nèi)外未見相關(guān)的報(bào)道和應(yīng)用；
[0020](2)本發(fā)明使用農(nóng)業(yè)廢棄物啤酒糟為基質(zhì)，生產(chǎn)成本低。
(四)
【具體實(shí)施方式】
[0021]下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。
[0022]以下實(shí)施例中，出發(fā)菌株:菌株蛹蟲草為尖頭蟲草I號(hào)，購自山東梁山縣正大菌業(yè)科技開發(fā)中心;啤酒糟粉末:購自英博雙鹿啤酒有限公司。
[0023]實(shí)施例1
[0024](I)斜面培養(yǎng):將出發(fā)菌株蛹蟲草接種于斜面培養(yǎng)基，20°C恒溫培養(yǎng)7d，至菌絲體布滿斜面，獲得斜面菌體。所述斜面培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨8g/L、葡萄糖30g/L、瓊脂13g/L、氯霉素0.08g/L，溶劑為水，pH為5.5。
[0025](2)種子液培養(yǎng):將活化后的斜面菌體接種于種子培養(yǎng)基中，在22°C，150r/min的搖床條件下振蕩培養(yǎng)7d，至培養(yǎng)基中有均勻分布的松散菌絲體，獲得種子液。所述種子培養(yǎng)基的配方為:葡萄糖 10g/L、K2HP04.3H20 0.4g/L,KH2PO4 0.4g/L、L_甘氨酸0.8g/L、MgS〇4.7H20 0.4g/L、氯霉素0.08g/L，溶劑為水，pH為5.5。
[0026](3)固體發(fā)酵:將烘干至恒重的啤酒糟粉末15g與硫酸亞鐵12mg、水30mL混合均勻，作為初始固體培養(yǎng)基，118°C滅菌30min，冷卻待用。將培養(yǎng)好的種子液以5 % (v/w)接種量接入固體培養(yǎng)基中，在22°C進(jìn)行恒溫發(fā)酵培養(yǎng)30天，得到成品富鐵蟲草花。
[0027]上述發(fā)酵結(jié)束，對所得的蟲草花進(jìn)行鐵含量分析，測得有機(jī)鐵量21.2mg/g蟲草花。
[0028]實(shí)施例2
[0029](I)斜面培養(yǎng):將出發(fā)菌株蛹蟲草接種于斜面培養(yǎng)基，20°C恒溫培養(yǎng)Sd，至菌絲體布滿斜面，獲得斜面菌體。所述斜面培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨10g/L、葡萄糖40g/L、瓊脂15g/L、氯霉素0.1g/L，溶劑為水，pH為6。
[0030](2)種子液培養(yǎng):將活化后的斜面菌體接種于種子培養(yǎng)基中，在22°C，180r/min的搖床條件下振蕩培養(yǎng)Sd，至培養(yǎng)基中有均勻分布的松散菌絲體，獲得種子液。所述種子培養(yǎng)基的配方為:葡萄糖 12g/L、K2HP04.3H20 0.5g/L,KH2PO4 0.5g/L、L_甘氨酸I.0g/L、MgS〇4.7H20 0.5g/L、氯霉素0.lOg/L，溶劑為水，pH為6。
[0031](3)固體發(fā)酵:將烘干至恒重的啤酒糟粉末15g與硫酸亞鐵13.5mg、3水5mL混合均勻，作為初始固體培養(yǎng)基，121°C滅菌30min，冷卻待用。將培養(yǎng)好的種子液以1 % (v/w)接種量接入固體培養(yǎng)基中，在22°C進(jìn)行恒溫發(fā)酵培養(yǎng)35天，得到成品富鐵蟲草花。
[0032]上述發(fā)酵結(jié)束，對所得的蟲草花進(jìn)行鐵含量分析，測得有機(jī)鐵量23.6mg/g蟲草花。
[0033]實(shí)施例3
[0034](I)斜面培養(yǎng):將出發(fā)菌株蛹蟲草接種于斜面培養(yǎng)基，30°C恒溫培養(yǎng)1d，至菌絲體布滿斜面，獲得斜面菌體。所述斜面培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨12g/L、葡萄糖50g/L、瓊脂20g/L、氯霉素0.12g/L，溶劑為水，pH為6.5。
[0035](2)種子液培養(yǎng):將活化后的斜面菌體接種于種子培養(yǎng)基中，在30°C，200r/min的搖床條件下振蕩培養(yǎng)10d，至培養(yǎng)基中有均勻分布的松散菌絲體，獲得種子液。所述種子培養(yǎng)基的配方為:葡萄糖 15g/L、K2HP04.3H20 0.6g/L,KH2PO4 0.6g/L、L_甘氨酸I.2g/L、MgSO4.7H20 0.68/1、氯霉素0.128/1，溶劑為水，？!1為6.5。
[0036](3)固體發(fā)酵:將烘干至恒重的啤酒糟粉末15g與硫酸亞鐵15mg、水40mL混合均勻，作為初始固體培養(yǎng)基，130°C滅菌30min，冷卻待用。將培養(yǎng)好的種子液以15%(v/w)接種量接入固體培養(yǎng)基中，在30°C進(jìn)行恒溫發(fā)酵培養(yǎng)40天，得到成品富鐵蟲草花。
[0037]上述發(fā)酵結(jié)束，對所得的蟲草花進(jìn)行鐵含量分析，測得有機(jī)鐵量22.4mg/g蟲草花。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種富鐵蟲草花的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述方法按如下步驟進(jìn)行: (1)斜面培養(yǎng):將出發(fā)菌株蛹蟲草接種于斜面培養(yǎng)基，20?30°C恒溫培養(yǎng)7?1d，獲得斜面菌體； 所述斜面培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨8?12g/L、葡萄糖30?50g/L、瓊脂13?20g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶劑為水，pH為5.5?6.5 ； (2)種子液培養(yǎng):將步驟(I)獲得的斜面菌體接種至種子培養(yǎng)基中，在20?30°C，150?200r/min的搖床條件下振蕩培養(yǎng)7?10d，獲得種子液； 所述種子培養(yǎng)基的配方為:葡萄糖10?15g/L、K2HP04.3H20 0.4?0.6g/L、KH2P040.4?0.6g/L、L-甘氨酸0.8?I.2g/L,MgSO4.7H20 0.4?0.6g/L、氯霉素0.08?0.12g/L，溶劑為水，pH為5.5 ?6.5; (3)固體發(fā)酵:將烘干至恒重的啤酒糟粉末與硫酸亞鐵、水混合均勻，118?130°C滅菌20?30min，得到固體發(fā)酵培養(yǎng)基，冷卻待用;將步驟(2)培養(yǎng)好的種子液接種至所得固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在20?30°C進(jìn)行恒溫發(fā)酵培養(yǎng)30?40d，得到成品富鐵蟲草花； 所述種子液的接種體積量為5?15mL/1 OOg固體發(fā)酵培養(yǎng)基;所述硫酸亞鐵的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的質(zhì)量計(jì)為800?1000yg/g;所述烘干至恒重的啤酒糟粉末與水的料液質(zhì)量比為1:2?3。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(I)中，所述斜面培養(yǎng)基的配方為:蛋白胨1.0g/L、葡萄糖40g/L、瓊脂15g/L、氯霉素0.1 g/L，溶劑為水，pH為6。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述種子培養(yǎng)基的配方為:葡萄H10g/L,K2HPO4.3H20 0.5g/L,KH2PO4 0.5g/L、L_甘氨酸I.0g/L、MgS〇4.7H20 0.5g/L、氯霉素0.1g/L，溶劑為水，pH為6。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述硫酸亞鐵的添加量以烘干至恒重的啤酒糟粉末的質(zhì)量計(jì)為900yg/g。5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述烘干至恒重的啤酒糟粉末與水的料液質(zhì)量比為1:2.3。6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述種子液的接種體積量為1OmL/1 OOg固體發(fā)酵培養(yǎng)基。
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種富鐵蟲草花的生產(chǎn)方法，所述的生產(chǎn)方法為：將出發(fā)菌株蛹蟲草接種于斜面培養(yǎng)基，20～30℃恒溫培養(yǎng)7～10d，獲得斜面菌體；將斜面菌體接種至種子培養(yǎng)基中，在20～30℃，150～200r/min的搖床條件下振蕩培養(yǎng)7～10d，獲得種子液；將烘干至恒重的啤酒糟粉末與硫酸亞鐵、水混合均勻，118～130℃滅菌20～30min，得到固體發(fā)酵培養(yǎng)基，冷卻待用；將培養(yǎng)好的種子液接種至所得固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，在20～30℃進(jìn)行恒溫發(fā)酵培養(yǎng)30～40d，得到成品富鐵蟲草花；本發(fā)明使用農(nóng)業(yè)廢棄物啤酒糟為富鐵蟲草花發(fā)酵培養(yǎng)的原材料，在國內(nèi)外未見相關(guān)的報(bào)道和應(yīng)用，生產(chǎn)成本低。
【IPC分類】C12R1/645, C12N1/14
【公開號(hào)】CN105505795
【申請?zhí)枴緾N201511029655
【發(fā)明人】楊勝利, 張慧, 王貝, 陳宏
【申請人】浙江工業(yè)大學(xué)
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2015年12月31日