一種用醋酸提取胰激肽酶原的方法及提高胰激肽酶原穩(wěn)定性的藥物組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是以豬胰為原料提取、沉淀豬胰制成丙酮粉后，靈活運用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂脫水等傳統(tǒng)蛋白純化技術(shù)，制備胰激肽酶原。
【背景技術(shù)】
[0002]胰激肽酶原(kallikein)是從豬胰臟中分離純化制得的天然酶類藥物，臨床上又稱血管舒緩素，具有舒展毛細血管和小動脈的作用，在臨床上常用來治療高血脂，防治脂肪肝、動脈粥樣硬化、高血壓、心絞痛等多種疾病，它的開發(fā)具有重要的醫(yī)學(xué)和社會價值。在我國，胰激肽酶原生產(chǎn)還存在很大的發(fā)展空間。
[0003]傳統(tǒng)的純化胰激肽酶原的工藝由于工藝復(fù)雜、成本較高；離子交換層析是目前是適合胰激肽酶原工業(yè)化生產(chǎn)的最普遍方法；而選擇離子交換樹脂的主要依據(jù)是被分離物的性質(zhì)和分離目的，包括被分離物和主要雜質(zhì)的解離特性、分子量、濃度、穩(wěn)定性、所處介質(zhì)的性質(zhì)以及分離的具體條件和要求。其中最重要的一條是根據(jù)分離要求和分離環(huán)境保證分離目的物與主要雜質(zhì)對樹脂的吸附力有足夠的差異。被分離物中雜質(zhì)越多，這種差異性顯然會越不明顯。在實際大生產(chǎn)中，原料中都含有雜質(zhì)，如果在采用這些高端色譜技術(shù)之前，不對原料或者粗制品進行預(yù)處理，勢必會因為原料中的雜質(zhì)含量過多而減短離子交換介質(zhì)的壽命，降低樹脂吸附效率，且洗脫中會存在拖尾現(xiàn)象，延長生產(chǎn)周期，影響產(chǎn)品收率及比活。
[0004]胰激肽酶原是以的豬胰臟為原料，因此，必須對原料進行預(yù)處理、提純得到粗制的胰激肽酶原，然后再采用離子交換層析技術(shù)進行精制生產(chǎn)。
[0005]本發(fā)明是靈活運用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂、脫水等傳統(tǒng)蛋白純化技術(shù)，從豬胰臟中制備胰激肽酶原，該技術(shù)不僅操作簡單、生產(chǎn)成本低廉，而且避免了胰激肽酶原降解失活，提尚廣品比活。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是用醋酸溶液從合格的豬胰臟中提取胰激肽酶原。
[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案是:以豬胰為原料提取、沉淀豬胰制成丙酮粉后，靈活運用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂脫水等傳統(tǒng)蛋白純化技術(shù)，制備胰激肽酶原。本發(fā)明具有生產(chǎn)周期短，操作簡單、成本低廉的特點，非常適用于規(guī)模化大生產(chǎn)。包括如下步驟:
(1)醋酸提取:將豬胰臟制成丙酮粉后，加入18~22倍量0.01-0.03mol/L醋酸溶液，于10°C攪拌提取10~14小時，離心，得上清液；將殘渣加8~12倍量0.01-0.03mol/L醋酸溶液再次進行攪拌提取4~8小時，離心，合并兩次上清液；
(2)丙酮沉淀:收集上清液，加入2~10°C丙酮使溶液的濃度達到33%，攪勻，過濾，得濾液；將濾液中補加2~10°C丙酮至溶液的濃度達到70%，攪勻，靜置3~6小時，離心，收集沉淀。沉淀用丙酮、乙醚脫脂、脫水，干燥，得胰激肽酶原。
【具體實施方式】
[0008]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0009]實施例1
所述的以豬胰為原料提取、沉淀豬胰制成丙酮粉后，靈活運用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂脫水等傳統(tǒng)蛋白純化技術(shù)，制備胰激肽酶原，包括如下步驟:
(1)醋酸提取:將豬胰臟10Kg制成丙酮粉后，加入20倍量0.02mol/L醋酸溶液，于10°C攪拌提取12小時，離心，得上清液；將殘渣加10倍量0.02mol/L醋酸溶液再次進行攪拌提取6小時，離心，合并兩次上清液29.8L。
[0010](2)丙酮沉淀:收集上清液，加入5°C丙酮使溶液的濃度達到33%，攪勻，過濾，得濾液；將濾液中補加5°C丙酮至溶液的濃度達到70%，攪勻，靜置4小時，離心，收集沉淀。沉淀用丙酮、乙醚脫脂、脫水，干燥，得胰激肽酶原97g。
[0011]實施例2
將實施例1制備的胰激肽原酶6000單位、淀粉21.7g、置混合機內(nèi)，攪拌5分鐘，再加入糊精33g、糖粉22g、檸檬酸三鈉0.08g于混合機內(nèi)，攪拌20分鐘后將預(yù)先配好的粘合劑(取羥丙基甲纖維素2.0g加75%乙醇20ml使溶解，即得)和潤滑劑硬脂酸鎂0.0037g，緩緩均勻地加入混合機內(nèi)攪拌，至顆粒形成，放入制粒機中制粒，中間體檢驗，合格后用壓片機制成1000片，片芯檢驗合格后包腸溶衣。
[0012]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護范圍。
【主權(quán)項】
1.一種用醋酸提取胰激肽酶原的方法及提高胰激肽酶原穩(wěn)定性的藥物組合物，其特征在于，該方法包括如下步驟: (1)醋酸提取:將豬胰臟制成丙酮粉后，加醋酸溶液攪拌提取，離心，得上清液；將殘渣加醋酸溶液再次進行攪拌提取，離心，合并兩次上清液； (2)丙酮沉淀:收集上清液，加入丙酮攪勻，過濾，得濾液；將濾液中補加丙酮，靜置，離心，收集沉淀；沉淀用丙酮、乙醚脫脂、脫水，干燥，得胰激肽酶原。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(1)中，丙酮粉與醋酸溶液的比例為lKg: 18~22L，醋酸溶液的濃度為:0.01-0.03mol/L ;加入醋酸溶液的提取時間為:10~14小時。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(2)中，所用丙酮的溫度為2~10°C;第一次加入丙酮的量為至溶液濃度達到33% ;補加丙酮的量為至溶液濃度達到70%。4.一種藥物組合物，其含有根據(jù)權(quán)利要求1-3制備的胰激肽酶原作為活性成分，還含有淀粉、糊精、糖粉、檸檬酸三鈉、硬脂酸鎂、羥丙基甲纖維素、75%乙醇。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用醋酸提取胰激肽酶原的方法及提高胰激肽酶原穩(wěn)定性的藥物組合物。本發(fā)明的技術(shù)方案是以豬胰為原料提取、沉淀豬胰制成丙酮粉后，靈活運用醋酸提取、丙酮沉淀，乙醚脫脂脫水等傳統(tǒng)蛋白純化技術(shù)，制備胰激肽酶原。本發(fā)明操作簡單，生產(chǎn)周期短，成本低廉，非常適用于規(guī)模化大生產(chǎn)。
【IPC分類】A61P9/12, A61P3/06, C12N9/64, A61P9/10, A61K38/48, A61P1/16
【公開號】CN105400762
【申請?zhí)枴緾N201510832548
【發(fā)明人】劉乃山, 林曉磊, 劉翠珍
【申請人】青島康原藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請日】2015年11月26日