S:457.6[M+H]+.〔2用32啡0(456. 26).
[0130] 實施例21.化合物IIi的制備
[013。 操作同實施例5,不同的是將IIa的原料N，N-二甲基乙二胺替換為4-N-(2-胺乙 基）-l-N-Boc-贓嗦。白色固體，烙點190-19rC，收率64%。
[0132]
[0133]化合物IIi波譜分析數(shù)據(jù)袖NMR(400MHz,CDCI3) 5 :2. 19 (S,細，2XCHs), 2. 47 (S, 1H,畑），2. 64 (S,細，3邸2)，3. 07 (S, 4H,2邸2)，3. 33 化J= 4Hz, 2H,邸2)，4. 91 (S, 1H,畑），5. 3 3 化J= 1. 4Hz, 1H,Py-H)，5. 58 化J= 1. 28Hz, 1H,Py-H)，6. 56 (S, 1H,畑），7. 42 (S, 2H,化-H )，7. 52 (dd,J=2.9細Z,9. 12Hz, 4H,化-H);"CNMRdOOMHz,CDCI3)5:16. 16, 38. 40, 44. 55， 51. 55, 56. 83,86. 23, 109. 43, 117. 84, 132. 87, 133. 20, 133. 29, 145. 03, 153. 96, 154. 72, 159 .47, 165. 99 ;ESI-MS:468. 5[M+田02品9?^70(467. 24).
[0134] 實施例22.化合物Im的制備
[013引操作同實施例4,不同的是將Ia的原料N，N-二甲基乙二胺替換為氨基乙醒縮二甲 醇。白色固體，烙點143-145°C，收率77%。
[0136]
[0137]化合物Im波譜分析數(shù)據(jù)：?NMR(400MHz,CDCI3)S:2.09(S,細，2XCHs) ，2. 30 (S, 3H,邸3)，3. 40 (S,6H, 2X畑3)，3. 42 (d,J= 5. 60Hz, 2H,畑2)，4. 52 (t,J= 5. 40Hz, 1H,CH)，4. 58 (t,J= 5.68Hz, 1H,畑），5. 40 (d,J= 1. 3細Z, 1H,P廠H)，5. 63 (d,J =1. 20Hz, 1H,Py-H)，6. 57 (S, 1H,畑），6. 89 (S, 2H,化-H)，7. 51 (q,J= 5. 36Hz, 4H,化-H); 口CNMRdOOMHz，CDCI3)5 :15. 10, 20. 81，43. 56, 54. 03, 85. 95,86. 80, 102. 69, 102. 98, 11 7. 64, 119. 75, 129. 55, 130.68, 133. 26, 135. 06, 146. 24, 147. 97, 154. 31, 160. 16, 167. 29 ； ESI-MS: 433.6[M+H]C25H2SN4O3(432. 22).
[013引實施例23.化合物IIm的制備
[0139]操作同實施例5,不同的是將IIa的原料N，N-二甲基乙二胺替換為氨基乙醒縮二 甲醇。白色固體，烙點167-169°C，收率64%。
[0140]
[01 川 化合物IIm波譜分析數(shù)據(jù)：?NMR(400MHz,CDCI3) 5 :2. 19 (S,細，2XCHs), 3. 41 (S,6H, 2X邸3)，3. 43 (S, 2H,細2)，4. 53 (t,J= 4Hz, 1H,CH)，4. 73 (S, 1H,NH)，5. 3 4 (s,Py-H), 5. 61 (s, 1H,Py-H),6. 84 (s, 1H,NH), 7. 42 (s, 2H,Ph-H), 7. 53 (s, 4H,Ph-H)； "CMlR(l00MHz，CDCI3) 5 :16. 16, 43. 63, 54. 14, 85. 40,86. 20, 102. 60, 109. 48, 118. 1 2, 118. 49, 119. 56, 132. 87, 133. 17, 133. 30, 144. 78, 153. 87, 154. 37, 158. 92, 166. 15 ; ESI-MS: 444.6[M+H] 〔25&5咐33 (443. 20).
[0142] 實施例24.目標化合物的體外抗HIV細胞活性篩選試驗（M1T法）
[0143] 測試原理
[0144]MT-4細胞感染了HIV病毒后會在5-7天內(nèi)發(fā)生病變，在加入有抑制HIV活性的化 合物后，細胞內(nèi)的HIV復制會受到抑制，從而達到保護細胞而不發(fā)生病變的目的。向感染了 HIV的MT-4細胞中加入已知濃度的待測物溶液，然后將細胞恒溫培養(yǎng)5-7天后，最后用MTT 法測定細胞的活力。計算得出使50%細胞免于病變的藥物濃度即ECw,W評價目標化合物 抗HIV活性。同樣方法可W得到待測化合物使50 %未感染HIV細胞發(fā)生病變的濃度即CCw, 并計算出待測化合物的"選擇系數(shù)"（selectivityindex),計算公式：SI=CCstj/ECg。。
[0145]MlT分析法原理：MTT即嚷挫藍是一種黃色染料，MlT分析法是一種檢測細胞存活 和生長的方法，原理是活細胞的班巧酸脫氨酶能將外源性MT還原為甲瑣，而死細胞無此 功能。通過酶聯(lián)免疫檢測儀用比色法間接反映活細胞數(shù)量。
[0146] 測試材料和方法
[0147](I)HIV-I(IIIB)、HIV-2(R孤）毒株和RES056耐藥株及MT-4細胞：由比利時魯議 大學Rega研究院微生物與免疫學研究所提供。
[014引 似MTT=Sigma公司。
[0149] 做樣品處理：待測化合物臨用前用DMSO配成適當?shù)臐舛?，并用雙蒸水稀釋5倍， 各5個稀釋度。
[0150](4)陽性對照藥：奈韋拉平（NVP)、齊多夫定（AZT)、地拉韋晚值LV)、依法韋倫 巧FV)和依曲韋林巧TV，TMC125)。
[0151] (5)測試方法：待測化合物稀釋后加入感染HIV的MT-4細胞懸濁液中，經(jīng)過一段 時間培育后用MTT比色法測定細胞活力，用酶標儀590nm下測定吸光度（A)值并計算出 ECso,CCw化及SI。
[0152] (6)MlT染色法：加入待測化合物的細胞培養(yǎng)一段時間后，再向分別加入MT溶液 20y以繼續(xù)培養(yǎng)一定時間，棄去染色液，再向每孔加入二甲基亞諷150y以混合均勻后，在 酶標儀中590nm下測定吸光度A。
[0153] 具體操作如下：準備好96孔細胞培養(yǎng)板，加入MT-4細胞培養(yǎng)液50M1 (約含 1XIO4)，再加入20yL感染HIV-I的MT-4細胞混懸液（每毫升含100倍CCID50)，感染病 毒為HIV-I(IIIB)、HIV-2(R0D)和RES056,加空白培養(yǎng)基作對照（毒性測定），然后再加入 不同濃度的待測化合物或者陽性對照藥物，每個濃度平行3次。然后在5%C〇2氛圍，37°C 下培養(yǎng)細胞5天，再向每個孔中加入20yLMlT溶液巧mg/mL)，培養(yǎng)2小時，再加入二甲基 亞諷溶解，使用酶標儀在590nm處測定吸收度A，計算待測化合物的細胞增值率P%，并計算 出ECs。，CCwW及選擇性指數(shù)SI(結(jié)果見表2,表扣。
[0154] 表2. 6-取代二芳基化晚衍生物抗HivaiIB及ROD株）的活性和毒性（MT-4細 胞）
[0155]

[0157] 注：3ECw:保護50%感染HIV-I的MT-4細胞免于細胞病變的化合物濃度；bcCw:使 50%未感染HIV-I的細胞發(fā)生病變的化合物濃度；ESI選擇性系數(shù)：CCw/ECw的比值。
[0158] 表3. 6-取代二芳基化晚衍生物抗HIV突變株活性（MT-4細胞）
[0160] 注：3ECw:保護50%感染HIV-I的MT-4細胞免于細胞病變的化合物濃度。
[OW] 結(jié)論：新合成的化合物抗野生型HIV-I的活性ECsc值在0. 035yM~1. 99yM范圍 內(nèi)，幾乎有一半的化合物在細胞試驗中抗病毒活性強于NVP。值得注意的是，化合物If巧Cw=35nM),Ia巧Cs。= 4：3nM)和IIa(EC5。= 41nM)呈現(xiàn)出與DLV(ECs。= 3：3nM)相似的活性。另 夕F，化合物Ib、IIb和I比對臨床上常見的單突變株和雙突變株呈現(xiàn)了較好的活性。尤其是 化合物1扣對K103N突變株的活性巧Cs。= 49nM)明顯強于對照藥物NVP巧C5。= 6. 78yM)、 DLV巧Csc= 2. 48yM)和EFV(EC5。= 0. 12yM)。所有新合成的化合物對HIV-2 (R孤）沒有抑 制作用，可認為是經(jīng)典的非核巧類抑制劑。
【主權(quán)項】
1. 6-取代二芳基吡啶衍生物，其特征在于是具有如下通式I所示的結(jié)構(gòu)：其中， R1為CH3、CN或氰基乙烯基； X為0或NH; NHR2為不同鏈長度的烷基胺、含飽和雜環(huán)的胺、含芳香雜環(huán)的胺、氨基酸或磷酸酯基取 代的胺。2. 如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，通式I中，R1為CH3或CN;X為0;NHR2為 NN-二甲基乙二胺、4-(2-胺乙基）嗎啉、環(huán)丙基甲基胺、2-甲氧基乙胺、丙烯胺、環(huán)丙胺、四 氫糠胺、3-氨基丙腈、4_N-(2-胺乙基）-哌嗪或氨基乙醛縮二甲醇。3. 如權(quán)利要求2所述的化合物，其特征在于是下述結(jié)構(gòu)的化合物之一：4.如權(quán)利要求1或2所述的化合物的制備方法，其特征在于步驟如下： 以2,6-二氯吡啶（Y-1)為初始原料，首先在三氟乙酸中經(jīng)過氧化氫氧化得到2, 6-二 氯P比啶氣氧化物（Y_2)粗品，然后Y-2經(jīng)二氯氧磷氯化得二氯P比啶（Y-3)，二氯P比啶與不同 取代基取代的苯酚（胺）發(fā)生親核取代生成中間體2, 6-二氯-4-三取代苯酚（胺）基吡 啶（Υ-4);接著，以二氧六環(huán)做溶劑，在醋酸鈀、4, 5-雙二苯基膦-9, 9-二甲基氧雜蒽、碳酸 銫的條件下，Υ-4與4-氨基苯甲腈發(fā)生C-N偶聯(lián)反應(yīng)得到關(guān)鍵中間體Υ-5,最后Υ-5與不同 取代的胺發(fā)生偶聯(lián)得到目標產(chǎn)物6-取代二芳基吡啶衍生物； 合成路線如下：試劑及條件：（i)30% (g/w)過氧化氫，三氟乙酸，回流；（ii)三氯氧磷，回流；（iii) 取代苯酚或苯胺，碳酸鉀，二甲基甲酰胺，隊，60°(：;(")4-氨基苯甲腈，醋酸鈀，4,5-雙二 苯基膦-9, 9-二甲基氧雜蒽，碳酸銫，氮氣，1，4-二氧六環(huán)，90°C; (v)NHR2,三（二亞芐基丙 酮）二鈀，4, 5-雙二苯基膦-9, 9-二甲基氧雜蒽，碳酸銫，氮氣，1，4-二氧六環(huán)，回流； R^NHR'X同上述通式I所示； 所述的取代苯酚為均三甲基苯酚、2, 6-二甲基-4-氰基苯酚或2, 6-二甲基-4-氰基乙 烯基苯酸； 所述的取代苯胺為均三甲基苯胺、2, 6-二甲基-4-氰基苯胺或2, 6-二甲基-4-氰基乙 烯基苯胺。5. 如權(quán)利要求4所述的化合物的制備方法，其特征在于步驟如下： (1)將2,6_二氯吡啶（10.0g，0.067mol)溶于三氟乙酸中，加入30%的過氧化氫溶液 (25mL)，回流3h，反應(yīng)結(jié)束后加入飽和硫代硫酸鈉溶液除去剩余的過氧化氫，減壓濃縮至反 應(yīng)液剩余10mL左右，然后倒入50mL水中，過濾得固體，主要為未反應(yīng)的2, 6-二氯吡啶；濾 液Na2C03調(diào)節(jié)pH為8~9過濾得2, 6-二氯吡啶氮氧化物（Y-2)粗品； ⑵中間體Y-2 (8. 20g，0. 050mol)溶于三氯氧磷（30mL)，回流4h;反應(yīng)結(jié)束后反應(yīng)液 減壓濃縮，殘液傾入冰水溶液中，乙酸乙酯萃取三次，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，干法上 樣；乙酸乙酯：石油醚柱層析，分得白色針狀結(jié)晶三氯吡啶（Y-3); (3) 三取代苯酚或三取代苯胺溶于DMF，加入碳酸鉀，室溫攪拌15min，加入三氯吡啶， 氮氣條件下油浴加熱；反應(yīng)結(jié)束后減壓蒸干，加入水，乙酸乙酯萃取，有機相干燥過濾，蒸 干，乙酸乙酯-石油醚60-90重結(jié)晶得中間體2, 6-二氯-4-三取代苯酚（胺）基吡啶 (Y-4); (4) 中間體Y-4溶于二氧六環(huán)，加入4-氨基苯甲腈、醋酸鈀、4, 5-雙二苯基膦-9, 9-二 甲基氧雜蒽、碳酸銫適量，氮氣保護下加熱反應(yīng)；反應(yīng)結(jié)束后，硅藻土過濾，旋蒸拌樣，乙酸 乙酯：石油醚60-90柱層析得目標化合物Y-5 ; (5) 將不同NHR2和中間體Y-5溶于二氧六環(huán)，然后加入三（二亞芐基丙酮）二 鈀，4, 5-雙二苯基膦-9, 9-二甲基氧雜蒽以及碳酸銫適量，在氮氣保護下加熱回流；反應(yīng)結(jié) 束后硅藻土過濾，硅膠拌樣蒸干，乙酸乙酯：石油醚柱層析得產(chǎn)物，然后乙酸乙酯-石油醚 60-90重結(jié)晶得目標化合物。6. 權(quán)利要求1-3任一項所述的化合物在制備抗HIV的藥物中的應(yīng)用。7. -種抗HIV藥物組合物，包含權(quán)利要求1-3任一項所述化合物和一種或多種藥學上 可接受載體或賦形劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種6-取代二芳基吡啶衍生物及其制備方法和應(yīng)用。所述化合物具有式I所示的結(jié)構(gòu)。本發(fā)明還涉及含有式I結(jié)構(gòu)化合物的藥物組合物以及提供上述化合物在制備抗HIV藥物中的應(yīng)用。
【IPC分類】A61P31/18, A61K31/44, A61K31/496, C07D213/74, A61K31/5377, C07D405/12, A61K31/443
【公開號】CN105294550
【申請?zhí)枴緾N201510676050
【發(fā)明人】劉新泳, 楊佳沛, 展鵬, 康東偉, 盧雪怡
【申請人】山東大學
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2015年10月16日