聯(lián)合治療iii的制作方法
【專利說明】聯(lián)合治療I I I 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及組合癌癥治療領(lǐng)域。
[0002] 發(fā)明背景 HDAC4屬于組蛋白脫乙酰酶的第IIa類家族，所述組蛋白脫乙酰酶?jìng)鹘y(tǒng)地以它們對(duì)細(xì) 胞核組蛋白蛋白質(zhì)上的賴氨酸殘基脫乙?；捅碛^遺傳地抑制基因表達(dá)的能力命名。然 而，近幾十年已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些HDAC在細(xì)胞核，以及在細(xì)胞質(zhì)中調(diào)控很多非組蛋白蛋白質(zhì)（由 Yao 和 Yang 在 J Biomed Biotechnol. (2011) 2011 ;146493 中綜述）。第 IIa 類 HDAC 的特征特性包括（i)存在保守的N-端調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域，含有用于細(xì)胞核-細(xì)胞質(zhì)間穿梭的NLS (核定位信號(hào))，以及用于轉(zhuǎn)錄因子和輔阻遏物的結(jié)合基序（ii)組織特異性表達(dá)和；（iii)對(duì) 磷酸化作用介導(dǎo)的外部/內(nèi)部刺激的反應(yīng)性（Parra和Verdin, Curr Opin Pharmacol. (2010) 10 (4) ;454-60)。
[0003] 在心肌和平滑肌，心臟和大腦中觀察到高HDAC4表達(dá)。HDAC4可以與輔阻遏物(例 如N-CoR和SMRT)和其它HDAC (HDAC3和5)聯(lián)合，通過結(jié)合組織特異性轉(zhuǎn)錄因子(例如 MEF2、Runx2、p53和SRF)抑制很多基因的表達(dá)（Parra和Verdin，2010，食_上)。數(shù)個(gè)研 究涉及異常的HDAC4表達(dá)和對(duì)發(fā)育缺陷和神經(jīng)退行性疾病的亞細(xì)胞定位（Majdzadeh等， Front Biosci. (2008) 13 ;1072-82)。對(duì)特異的細(xì)胞刺激應(yīng)答，多種激酶(主要地為CAMK) 可以在保守的絲氨酸殘基(在人中為Ser-246、Ser-467和Ser-632)使HDAC4磷酸化，產(chǎn)生 對(duì)14-3-3蛋白質(zhì)的停泊位點(diǎn)，所述14-3-3蛋白質(zhì)在細(xì)胞質(zhì)中誘捕HDAC，因此解除對(duì)靶啟動(dòng) 子的HDAC介導(dǎo)的抑制。在另一方面，已經(jīng)顯示PP2A和PPl磷酸酶介導(dǎo)的脫磷酸化使HDAC4 NLS暴露并且促進(jìn)其核輸入（Parra和Verdin，2010，力71)。
[0004] Wilson 等在 Mol Biol Cell. (2008) 19 (10);4062-75 中報(bào)導(dǎo)，在增殖的小鼠結(jié) 腸隱窩中有強(qiáng)的HDAC4表達(dá)。已經(jīng)證明HDAC4或其它數(shù)種HDAC的沉默，以及使用pan-HDAC 抑制劑處理，在DNA損傷條件下通過p53直接地或間接地上調(diào)p21抑制癌細(xì)胞增殖（Basile 等，J Biol Chem. (2006) 281(4);2347-57; Wilson 等，2008，力7」：)。在高通量研究中， 人乳腺腫瘤樣品顯示出顯著的HDAC4過表達(dá)，暗示了 HDAC4在人癌癥中的潛在作用（Witt 等，Cancer Lett. (2009) 277 (1);8-21)。
[0005] 近期的更多發(fā)現(xiàn)已經(jīng)鑒定了數(shù)種細(xì)胞質(zhì)靶，它們突出了 HDAC4在發(fā)育、血管生成、 細(xì)胞凋亡和化學(xué)抗性的調(diào)控中的作用。顯示在細(xì)胞質(zhì)中HDAC4和它與HIFl α結(jié)合的活性對(duì) 視網(wǎng)膜神經(jīng)生存是需要的（Chen 和 C^pko，Science. (2009) 323 (5911);256-9)。HDAC4 介導(dǎo)的HIFl a N-端賴氨酸的脫乙酰作用穩(wěn)定了 HIFl α，并且促進(jìn)其靶基因，即VEGF和糖 酵解基因 （LDHA 和 Glutl)的轉(zhuǎn)錄（Geng 等，J Biol Chem. (2011) 286(44);38095-102)。 因此，HDAC4似乎使細(xì)胞準(zhǔn)備適應(yīng)低含氧量的/應(yīng)激條件，并且同樣有助于腫瘤血管生成。 重要地，在該報(bào)導(dǎo)中，對(duì)HDAC4沉默的前列腺癌細(xì)胞在低含氧量條件下對(duì)多西他賽治療更 加有響應(yīng)。
[0006] 還顯示在卵巢癌中，HDAC4過表達(dá)通過STATl的激活和核轉(zhuǎn)位(脫乙?；S后磷酸 化)，增強(qiáng)順鉬抗性。相反，更特異的HDAC4抑制劑，APHA4a，誘導(dǎo)半胱天冬酶活性并且恢復(fù) 順鉬敏感性（Stronach 等，Cancer Res. (2011) 71 (13);4412_22)。
[0007] 最近，顯示了細(xì)胞核HDAC4和細(xì)胞質(zhì)HDAC4兩者在神經(jīng)元生存和毛細(xì)血管擴(kuò)張性 失調(diào)（AT)發(fā)病機(jī)理中的重要性（Li等，Nat Med. (2012) 18 (5); 783 - 790)。顯示由于 ATM的丟失，增強(qiáng)的PP2A活性促進(jìn)HDAC4的細(xì)胞核積累和多種啟動(dòng)子的表觀遺傳抑制。相 反地，細(xì)胞質(zhì)HDAC4抑制細(xì)胞周期的再進(jìn)入和半胱天冬酶-3激活。重要地，這些發(fā)現(xiàn)在癌 癥領(lǐng)域同樣非常重要，因?yàn)榭梢宰C明PP2A激活通過將促存活細(xì)胞質(zhì)HDAC4轉(zhuǎn)移至抗存活細(xì) 胞核HDAC4對(duì)改善在大腦中的癌細(xì)胞殺死有用的。
[0008] 考慮到癌癥是影響全世界所有社區(qū)的毀滅性疾病，并且固有的和獲得的抗性是涉 及目前使用的化學(xué)治療的主要問題，在本領(lǐng)域中對(duì)于誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的新的癌癥治療方案存 在確定的需求。
[0009] 發(fā)明簡(jiǎn)述 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了至少一種類型的HDAC4沉默劑和式（I)的化合物的組合，用 于作為藥物使用。式（T)的化合物縣有以下一般結(jié)構(gòu)： 其中
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 至少一種類型的HDAC4沉默劑和式（I)的組合產(chǎn)品：
其中 R'是H或烷基； R' '是H或烷氧基； R1和R2是H或一同形成氧代； R3和R4單獨(dú)地是H、0H或一同形成氧代； R5、R6、R6'、R7和R8單獨(dú)地選自H、烷基、烷氧基、羥基、羥基烷基、烷氧基羰基或單-和 -燒基氣基； X是〇12或0 ;并且 n是0或1 用于作為藥物使用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的組合產(chǎn)品，其中HDAC4沉默劑選自siRNA分子、DsiRNA分子、人工 miRNA前體、shRNA分子、反義寡核苷酸和核糖核酸酶。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1的所述組合產(chǎn)品，其中所述HDAC4沉默劑包含選自SEQ ID NO :1至 170的核酸序列。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1的所述組合產(chǎn)品，其中所述式（I)的化合物選自

5. 根據(jù)權(quán)利要求1的所述組合產(chǎn)品，用于選自腦癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成膠質(zhì) 細(xì)胞瘤的過度增生疾病的治療。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的所述組合產(chǎn)品，其中所述HDAC4沉默劑和所述式（I) 的化合物是同時(shí)地、循序地或分開地施用。
7. 包含根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的組合產(chǎn)品和至少一種藥物可接受載體的藥物組合 物。
8. 通過在需要這樣的致敏作用的人或動(dòng)物主體中沉默HDAC4基因使過度增生細(xì)胞對(duì) 化學(xué)治療劑敏感的方法。
9. 在需要這樣的治療的人或動(dòng)物主體中治療過度增生疾病的方法，通過伴隨地、同時(shí) 地、循序地對(duì)所述主體施用至少一種類型的HDAC4沉默劑和式（I)的化合物：
其中 R'是H或烷基； R' '是H或烷氧基； R1和R2是H或一同形成氧代； R3和R4單獨(dú)地是H、0H或一同形成氧代； R5、R6、R6'、R7和R8單獨(dú)地選自H、烷基、烷氧基、羥基、羥基烷基、烷氧基羰基或單-和 -燒基氣基； X是〇12或0 ;并且 n是0或1。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8或9的所述方法，其中所述HDAC4沉默劑選自siRNA分子、DsiRNA 分子、人工miRNA前體、shRNA分子、反義寡核苷酸和核糖核酸酶。
11. 根據(jù)權(quán)利要求8或9的所述方法，其中所述HDAC4沉默劑包含選自SEQ ID NO :1至 170的核酸序列。
12. 根據(jù)權(quán)利要求8或9的所述方法，其用于選自腦癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、星形細(xì)胞瘤、成膠 質(zhì)細(xì)胞瘤的過度增生疾病的治療。
13. 根據(jù)權(quán)利要求8至12任一項(xiàng)的所述方法，其中所述HDAC4沉默劑和所述式（I)的 化合物是同時(shí)地、循序地或分開地施用。
【專利摘要】本發(fā)明基于發(fā)現(xiàn)沉默HDAC4基因使癌癥細(xì)胞對(duì)某些小分子化學(xué)治療劑的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)活性敏感。因此，本發(fā)明分別涉及聯(lián)合治療、致敏方法和藥物組合物。
【IPC分類】C12N15-113, A61K31-553, A61K31-7088, A61P35-00
【公開號(hào)】CN104619845
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201380047501
【發(fā)明人】J.維斯特馬克, A.考爾
【申請(qǐng)人】圖爾庫大學(xué)
【公開日】2015年5月13日
【申請(qǐng)日】2013年7月11日
【公告號(hào)】CA2878873A1, EP2872631A1, US20150209369, WO2014009609A1