肽的?；椒?br>【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及將一個(gè)或多個(gè)?；腚幕虻鞍踪|(zhì)中的方法。更具體地說(shuō)，本發(fā)明涉 及將天然存在的GLP-I或其類似物中含有賴氨酸殘基的e-氨基酰化的改進(jìn)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 利拉魯肽（liraglutide，1)是人胰高血糖素樣肽I(glucagon-likepeptide-1, GLP-1)的類似物，由丹麥諾和諾德公司研制，適用于單用二甲雙胍或磺脲類藥物最大可耐 受劑量治療后血糖仍控制不佳的2型糖尿病患者。
[0003]利拉魯肽（liraglutide，1)的結(jié)構(gòu)式為Arg34Lys26-(N_ e_(Y-Glu (N-a-十六酰 基）））-GLP_l[卜37]。
[0004] 中國(guó)專利申請(qǐng)CN1344248提供了酰化肽或蛋白質(zhì)上的一個(gè)或多個(gè)氨基的方法，該 方法包括：在堿性條件下，在非質(zhì)子傳遞極性溶劑和水的混合物中，將具有至少一個(gè)游離氨 基的肽（或蛋白質(zhì)）與?；噭┓磻?yīng)；該方法采用高沸點(diǎn)的N-甲基吡咯烷酮（NMP)與水的 混合溶劑作為反應(yīng)溶劑，其收率通過(guò)分析RP-HPLC，發(fā)現(xiàn)反應(yīng)混合物含有77% (峰面積）的 Arg34Lys26 [N-e-U-Glu(N-十六烷酰基））]-GLP-I[7_37]。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 術(shù)語(yǔ)定義
[0006] 術(shù)語(yǔ)"C3-39烷基"、"C3-39鏈烯基"和"C3-39鏈二烯基"分別包括C3-39直鏈和 支鏈烴基，優(yōu)選為直鏈飽和、單不飽和二不飽和的C3-39烴基。C3-39烷基的具體實(shí)例為庚 基、壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基、十七烷基和十九烷基。
[0007] 術(shù)語(yǔ)"留族殘基"是指親脂基團(tuán)，其與和R2相連的羰基一起衍生于留族羧酸，即， 衍生于三_、四-和五環(huán)全飽和或部分不飽和C16_36烴，所述基團(tuán)R2_C( = 0)-的實(shí)例是石膽 酸?；↖ithocholoyl)、脫氧膽酸酰基（deoxycholoyl)和膽酸?；╟holoyl)。
[0008] 術(shù)語(yǔ)"約"或"大約"通常是指在給定的值或范圍的10%以內(nèi)，適當(dāng)?shù)卦?%以內(nèi) 或者是在3 %以內(nèi)?；蛘撸瑢?duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員而言，術(shù)語(yǔ)"約"或"大約"表示在平均 值的可接受的標(biāo)準(zhǔn)誤差范圍內(nèi)。
[0009] -種酰化肽或蛋白質(zhì)的氨基的方法，該方法包括：
[0010] 在堿存在下，在質(zhì)子溶劑中，將具有至少一個(gè)游離氨基的肽或蛋白質(zhì)與通式I的 ?；噭┻M(jìn)行?；磻?yīng)，
[0011]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種?；幕虻鞍踪|(zhì)的氨基的方法，該方法包括： 在堿存在下，在質(zhì)子溶劑中，將具有至少一個(gè)游離氨基的肽或蛋白質(zhì)與通式I所示的 ?；噭┻M(jìn)行?；磻?yīng)，
其中，n= 0-8 #是COOR4;R4選自氫； R2是親脂部分；R3表示羧基的保護(hù)基團(tuán)，可以是C1-C10的烷基或N-羥基丁二酰亞胺基 式（a)所示
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的?；噭┦荖-十六烷?；劝彼醳-N-羥基丁 酰亞氨酯，其結(jié)構(gòu)如式（la)所示：
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的肽或蛋白質(zhì)為GLP-1和其類似物，其 為Arg26-GLP-1[卜37]、Arg34-GLP-1[卜37]、Lys26-GLP-1[卜37]、Arg26'34Lys36-GLP-l[卜37]、 Arg26'34Lys38-GLP-l[7-38]、Arg26'34Lys39-GLP-l[7-39]、Arg26'34Lys4〇-GLP-l[7-4。]，或者為 Arg34-GLP-1 [卜37]。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的質(zhì)子溶劑為醇類溶劑或水，或醇類溶劑與水的 混合溶劑，或者為甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、或其組合；或者為甲醇，或者為水。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的質(zhì)子溶劑為乙醇與水的混合溶劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，在所述的混合溶劑中，醇類溶劑與水的體積比為大約 7:1至大約1:10，。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述的堿為烷基胺，選自三乙基胺、二乙胺、N，N-二異 丙基乙基胺或苯胺的一種或幾種。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，相對(duì)于1. 0摩爾的肽，所述烷基胺的用量為40. 0摩爾 以上，或者為大約50摩爾至大約300摩爾，或者為大約60摩爾。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述?；磻?yīng)溫度為5°C-35°C，或者為大約20°C。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1-9任一所述的方法，其包括：將2. 62g的Arg34-GLP-l[7-37]溶 解于370ml的水中，控溫20°C，攪拌下加入4. 73g三乙胺，然后加入N-十六烷酰基谷氨酸 Y-N-羥基丁酰亞氨酯（1. 13g)，反應(yīng)2h后，取反應(yīng)液0. 5ml，加入乙腈：水=1:1溶液稀釋 至1. 5ml，送RP-HPLC檢測(cè)，當(dāng)液相檢測(cè)Arg34-GLP-1[7_37]的含量低于1 % (峰面積）后，終 止反應(yīng)，后處理：用lmol/LHAc溶液調(diào)pH至中性，淬滅反應(yīng)。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種?；幕虻鞍踪|(zhì)的氨基的方法，該方法包括：a)在堿存在下，在質(zhì)子溶劑中，將具有至少一個(gè)游離氨基的肽或蛋白質(zhì)與通式I所示的?；噭┓磻?yīng)，其中，n＝0-8；R1是COOR4；R2是親脂部分；R3表示與羧基連接后形成活性酯或活性N-羥基亞氨酸酯的基團(tuán)如N-羥基丁二酰亞胺基；和R4選自氫、C1-12烷基和芐基；和b)如果R4不是氫，在堿性條件下皂化?；说碾孽セ?COOR4)；以得到N-?；碾摹１景l(fā)明酰化肽或蛋白質(zhì)的氨基的方法采用質(zhì)子溶劑，收率高，如通過(guò)分析RP-HPLC，表明反應(yīng)混合物含有85％以上(峰面積)的產(chǎn)品，且質(zhì)子溶劑毒性低價(jià)格低廉。
【IPC分類】C07K1-107, C07K14-605
【公開(kāi)號(hào)】CN104558097
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410823253
【發(fā)明人】吳亞克, 黎達(dá)生, 陳志軍
【申請(qǐng)人】廣東東陽(yáng)光藥業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2014年12月23日