本發(fā)明涉及一種與雞蛋重性狀相關(guān)的cspg4基因分子標記引物及其應用，屬于生物。

背景技術(shù)：

1、蛋重是雞蛋品質(zhì)的重要評價指標，在蛋結(jié)構(gòu)評估與蛋分級中扮演著關(guān)鍵角色。蛋重的大小不僅影響雞蛋的食用價值，還影響其種用價值，因此蛋重的選育是必不可少的。影響蛋重的因素主要有體重和日齡等，其中蛋重與產(chǎn)蛋日齡呈正相關(guān)的趨勢，隨著母雞日齡的增加，蛋重也隨之增加直至產(chǎn)蛋中期慢慢趨于平緩。開產(chǎn)蛋重還影響開產(chǎn)初期乃至整個產(chǎn)蛋周期的雞蛋品質(zhì)，通過提高開產(chǎn)蛋重對產(chǎn)蛋性狀進行改良，選育出優(yōu)秀的雞只顯得尤為重要。利用分子標記來準確鑒定影響雞開產(chǎn)蛋重性狀的基因，將其運用到早期的育種選擇中，選育開產(chǎn)蛋重較大的群體，可以優(yōu)化整個產(chǎn)蛋期的雞蛋質(zhì)量，提高資源利用效率。影響雞開產(chǎn)蛋重的生理因素主要有雞的開產(chǎn)日齡、開產(chǎn)體重和產(chǎn)蛋階段等，開產(chǎn)蛋重和體重的大小影響著開產(chǎn)初期乃至整個產(chǎn)蛋周期的產(chǎn)蛋質(zhì)量，且蛋重與雞的日齡呈正相關(guān)。cspg4基因在胚胎發(fā)育過程中幫助細胞遷移和分化，可能影響胚胎的發(fā)育從而引起蛋重的變化。cspg4基因還可能與卵巢中一個重要的通路密切相關(guān)，在卵巢中被上調(diào)表達，可能調(diào)控排卵過程，為cspg4基因與繁殖性狀之間的關(guān)聯(lián)提供了新的見解。尚未見報道cspg4基因在雞繁殖性狀中的研究。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提出一種與雞蛋重性狀相關(guān)的cspg4基因分子標記引物及其應用，快速檢測篩選雞的蛋重。

2、本發(fā)明測量了母雞的蛋重，利用全基因組重測序技術(shù)進行snp基因分型，通過全基因組關(guān)聯(lián)分析篩選得到與雞開產(chǎn)蛋重性狀顯著相關(guān)的cspg4基因分子標記，為雞開產(chǎn)蛋重性狀選育提供了新的基因和分子標記資源。

3、本發(fā)明通過以下技術(shù)方案解決技術(shù)問題：首先提供一種與雞蛋重性狀相關(guān)的cspg4基因分子標記引物，所述分子標記引物的核苷酸序列如seq?id?no:1和seq?id?no:2所示，所述分子標記位于雞參考基因組grcg7b版本10號染色體上第2731932位堿基處，堿基突變?yōu)閠或g。序列如seq?id?no:3或seq?id?no:4所示第199位堿基。

4、本發(fā)明進一步提供上述分子標記引物的應用，用于雞開產(chǎn)蛋重性狀相關(guān)的snp基因型的檢測。檢測方法包括以下步驟，

5、第一步、提供待測雞dna樣品，用分子標記引物對進行pcr擴增，得到擴增產(chǎn)物，所述擴增產(chǎn)物長度為305bp，含有雞10號染色體第2731932位堿基；

6、第二步、將pcr產(chǎn)物進行sanger測序；

7、第三步、根據(jù)第二步的測序結(jié)果判斷雞10號染色體第2731932位堿基snp分子標記基因型。

8、其中，第一步所述的分子標記引物對的脫氧核糖核苷酸序列為：

9、上游引物：5’-tttgaccccagatgagaggagt-3’（seq?id?no:?1）

10、下游引物：5’-gtaggagcgcacggaataaagt-3’（seq?id?no:?2）

11、其反應體系終濃度25?μl計，

12、待測雞dna?50?ng

13、2?x?accurate?taq?master?mix?12.5?μl

14、上游引物?1?μl

15、下游引物?1?μl

16、滅菌水?補充至?25?μl。

17、所述的pcr擴增的反應條件為：94℃預變性5min；94℃變性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸60sec，共30循環(huán)；72℃延伸2min；4℃保存；擴增產(chǎn)物的核苷酸序列如seq?id?no：3或seq?id?no：4所示，擴增產(chǎn)物長度為305bp，包含雞10號染色體第2731932位堿基。

18、所述第三步中，判斷標準是snp位點為t/t基因型雞的開產(chǎn)蛋重高于t/g和g/g基因型個體，t/g基因型雞的開產(chǎn)蛋重高于g/g基因型個體。

19、本發(fā)明通過cspg4基因分子標記檢測雞開產(chǎn)蛋重性狀的基因型，得出t/t基因型雞的開產(chǎn)蛋重高于t/g和g/g基因型個體，t/g基因型雞的開產(chǎn)蛋重高于g/g基因型個體。通過以待測雞的基因組dna為模板，采用特異性引物對其進行pcr擴增，然后將該pcr擴增產(chǎn)物進行sanger測序和snp分子標記基因分型，基于該snp分子標記的基因型可以實現(xiàn)對雞開產(chǎn)蛋重性狀進行選擇。在育種中，可根據(jù)育種目標，通過淘汰t/g和g/g基因型個體，保留t/t基因型個體，其有益效果是該分子標記可以作為雞育種的遺傳標記，選育開產(chǎn)蛋重大的雞；可以高效快速地鑒定雞開產(chǎn)蛋重性狀，并提高雞群蛋重的整齊度，為雞的早期選育提供科學依據(jù)，對于雞育種具有重要價值。此外，本發(fā)明公開的檢測方法簡單易操作，在實驗室即可開展。

技術(shù)特征：

1.?一種與雞蛋重性狀相關(guān)的cspg4基因分子標記引物，其特征在于：所述分子標記引物的核苷酸序列如seq?id?no:1和seq?id?no:2所示，所述分子標記位于雞10號染色體上第2731932位堿基處，堿基突變?yōu)閠或g。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述與雞蛋重性狀相關(guān)的cspg4基因分子標記引物的應用，其特征在于：用于雞開產(chǎn)蛋重性狀相關(guān)的snp基因型的檢測。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述與雞蛋重性狀相關(guān)的cspg4基因分子標記引物的應用，其特征在于：檢測方法包括以下步驟，

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述與雞蛋重性狀相關(guān)的cspg4基因分子標記引物的應用，其特征在于：反應體系終濃度25?μl計，

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述與雞蛋重性狀相關(guān)的cspg4基因分子標記引物的應用，其特征在于：所述第三步中，判斷標準是snp位點為t/t基因型雞的開產(chǎn)蛋重高于t/g和g/g基因型個體，t/g基因型雞的開產(chǎn)蛋重高于g/g基因型個體。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種與雞蛋重性狀相關(guān)的CSPG4基因分子標記引物及其應用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過以待測雞的基因組DNA為模板，采用特異性引物對其進行PCR擴增，然后將該PCR擴增產(chǎn)物進行Sanger測序和SNP分子標記基因分型，進而對雞開產(chǎn)蛋重性狀選擇。T/T基因型雞的開產(chǎn)蛋重高于T/G和G/G基因型個體，T/G基因型雞的開產(chǎn)蛋重高于G/G基因型個體。通過淘汰T/G和G/G基因型個體，保留T/T基因型個體，其有益效果是該分子標記作為雞育種的遺傳標記，選育開產(chǎn)蛋重較大且均勻的雞；可高效快速地鑒定雞開產(chǎn)蛋重性狀，提高雞群蛋重的整齊度，為雞的早期選育提供科學依據(jù)，對于雞育種具有重要價值。

技術(shù)研發(fā)人員：馮春剛,杜岳松,丁紀強,李東鋒,何佳林,李靜,徐婷,戴鈺鈺
受保護的技術(shù)使用者：南京農(nóng)業(yè)大學
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9