本發(fā)明涉及赤霉酸生產(chǎn)，特別涉及一種降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法。

背景技術：

1、赤霉素ga3(gibberellic?acid?3，簡稱ga3)是赤霉菌產(chǎn)生的一種植物生長調(diào)節(jié)激素，它在植物生長和發(fā)育中起著重要的調(diào)節(jié)作用，被應用于許多領域，包括農(nóng)業(yè)、林業(yè)和釀造業(yè)，具有良好的經(jīng)濟價值和社會效益。ga3的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法主要包括植物提取、化學合成和微生物發(fā)酵；然而，從植物中提取ga3的產(chǎn)量較低，易產(chǎn)生大量廢物且成本高，化學合成方法也受到繁瑣的工藝步驟和由此產(chǎn)生的污染等限制；隨著合成生物學的快速發(fā)展，微生物生產(chǎn)ga3越來越受到關注。

2、目前，ga3可由多種真菌發(fā)酵生產(chǎn)，例如藤倉赤霉菌f?.f?ujikuroi，黑曲霉aspergillus?niger和尖孢鐮刀菌fusarium?oxysporum；同一簇的菌株串珠鐮刀菌f.moniliforme產(chǎn)量較高，但是需要固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。因此，主要應用于工業(yè)化生產(chǎn)赤霉素ga3的是藤倉赤霉菌f?.fujikuroi，其產(chǎn)量較高且能夠進行可控發(fā)酵。

3、近年來，由于在農(nóng)業(yè)和園藝業(yè)的廣泛應用，ga3市場具有顯著的潛力和市場需求，己經(jīng)利用藤倉赤霉菌實現(xiàn)ga3的工業(yè)化生產(chǎn)。

4、cn108285915a公開了一種ga3的發(fā)酵方法，該發(fā)酵方法采用藤倉赤霉菌，將接種好的種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基內(nèi)，在發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，發(fā)酵過程中，通入發(fā)酵罐內(nèi)的空氣流量為2000~3000nm3/h,當溶氧反彈20%，開啟自動流加葡糖糖溶液等將溶氧控制在20%~30%。雖然cn108285915a的發(fā)酵液中ga3含量較高，但發(fā)酵液中ga3含量還需進一步提高以提升經(jīng)濟性。

5、iso-ga3為在發(fā)酵下罐的發(fā)酵液中檢測到的一種雜質(zhì)，如何降低iso-ga3含量而提高ga3含量成為行業(yè)技術人員的追求。

6、上述背景技術是為了便于理解本發(fā)明，并非是申請本發(fā)明之前已向普通公眾公開的公知技術。

技術實現(xiàn)思路

1、針對上述缺陷，本發(fā)明提供一種降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，可以降低發(fā)酵后發(fā)酵液中iso-ga3的含量，提高含量ga3。

2、技術方案是：一種降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，該方法在發(fā)酵的補料過程中，將經(jīng)致冷的補料隨空氣進入發(fā)酵罐，致冷的補料溫度<25℃，

3、進一步地，所述致冷的補料溫度為5~20℃。

4、進一步地，該方法包括以下步驟：

5、s1,取種子液和發(fā)酵培養(yǎng)液，種子液質(zhì)量為發(fā)酵培養(yǎng)液質(zhì)量的5~15%；

6、s2,將種子液和發(fā)酵培養(yǎng)液加入發(fā)酵罐內(nèi)；

7、s3,進行發(fā)酵反應，得降低iso-ga3含量的ga3發(fā)酵液。

8、進一步地，s3中，發(fā)酵反應條件為：

9、發(fā)酵溫度為28~30℃；空氣流量為1500～4600?nm3/h，ph?5.0～5.2，壓力為0.01～0?.05mpa；

10、發(fā)酵至溶氧反彈50~80%，開始同時補料，初始補料速度：葡萄糖溶液20~200l/h,色拉油5~65l/h，當溶氧低于15~25％，降低補料速度，當溶氧高于28~38％，提高補料速度。

11、進一步地，所述補料為葡萄糖溶液與色拉油。

12、進一步地，所述葡萄糖溶液濃度為45wt%。

13、進一步地，所述液體培養(yǎng)液為：

14、玉米蛋白粉?????????5~7.5?g/l

15、蔗糖???????????????1~?10g/l

16、磷酸二氫鉀?????????1~?10g/l

17、葡萄糖?????????????1~?10g/l

18、mgso4.7h2o?????????0.5~1.5?g/l

19、色拉油?????????????1~3?g/l

20、硫酸銨?????????????0.5~1.5?g/l

21、feso4.7h2o?????????0.005~0.015?g/l

22、znso4.7h2o?????????0.005~0.015?g/l

23、mnso4.h2o??????????0.005~0.015?g/l

24、namoo4.2h2o????????0.001~0.006?g/l

25、cuso4.5h2o?????????0.001~0.006?g/l

26、cocl2.6h2o?????????0.001~0.006?g/l

27、大豆蛋白???????????1~10?g/l以及

28、溶劑為水。

29、進一步地，所述液體培養(yǎng)液為：

30、玉米蛋白粉?????????10~30?g/l

31、蔗糖???????????????1~?10g/l

32、磷酸二氫鉀?????????1~?10g/l

33、葡萄糖?????????????1~?10g/l

34、mgso4.7h2o?????????0.5~1.5?g/l

35、色拉油?????????????1~3?g/l

36、硫酸銨?????????????0.5~1.5?g/l

37、feso4.7h2o?????????0.005~0.015?g/l

38、znso4.7h2o?????????0.005~0.015?g/l

39、mnso4.h2o??????????0.005~0.015?g/l

40、namoo4.2h2o????????0.001~0.006?g/l

41、cuso4.5h2o?????????0.001~0.006?g/l

42、cocl2.6h2o?????????0.001~0.006?g/l；以及

43、溶劑為水。

44、進一步地，所述種子液為藤倉赤霉菌培養(yǎng)的種子液，藤倉赤霉菌保藏編號為cgmccno.23265。

45、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的發(fā)明原理及有益效果在于：

46、本發(fā)明發(fā)明人在偶然的情況下令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，在發(fā)酵過程中，通過補料補碳源時，冷卻降溫可以降低下罐的發(fā)酵液中的iso-ga3，而ga3的含量提高。

技術特征：

1.一種降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，其特征在于，該方法在發(fā)酵的補料過程中，將經(jīng)致冷的補料隨空氣進入發(fā)酵罐，致冷的補料溫度<25℃。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，其特征在于，所述致冷的補料溫度為5~20℃。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項所述的降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，其特征在于，s3中，發(fā)酵反應條件為：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，其特征在于，所述補料為葡萄糖溶液與色拉油。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，其特征在于，所述葡萄糖溶液濃度為45wt%。

7.?根據(jù)權(quán)利要求4所述的降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，其特征在于，所述液體培養(yǎng)液為：

8.?根據(jù)權(quán)利要求4所述的降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，其特征在于，所述液體培養(yǎng)液為：

9.?根據(jù)權(quán)利要求4所述的降低iso-ga3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，其特征在于，所述種子液為藤倉赤霉菌培養(yǎng)的種子液，藤倉赤霉菌保藏編號為cgmcc?no.23265。

技術總結(jié)
本發(fā)明公開了一種降低ISO?GA3的生產(chǎn)赤霉酸的發(fā)酵方法，該方法在發(fā)酵的補料過程中，將經(jīng)致冷的補料隨空氣進入發(fā)酵罐，致冷的補料溫度<25℃。本發(fā)明可以降低發(fā)酵后發(fā)酵液中ISO?GA3的含量，提高GA3的含量。

技術研發(fā)人員：景飛江,王敏,熊仁科,左建英,李玉婷
受保護的技術使用者：四川龍蟒福生科技有限責任公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/6