本申請(qǐng)涉及植物育種，特別涉及一種與絲瓜果實(shí)耐褐變連鎖的分子標(biāo)記及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、絕大部分普通肉絲瓜在運(yùn)輸、加工及蒸、炒過(guò)程中，果皮、果肉及湯汁易褐變，不僅影響營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和食用價(jià)值，更嚴(yán)重影響其商品性。由于絲瓜褐變需要通過(guò)蒸煮等方式測(cè)量，比較費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不利于性狀的田間選擇，而利用分子標(biāo)記可有效提高耐褐變性狀的選擇效率。

2、絲瓜(luffa，2n＝2x＝26)系葫蘆科(cucurbitaceae)絲瓜屬一年生攀緣性草本植物，在我國(guó)廣泛種植，主要有普通絲瓜【luffa?cylindrica(l.)roem.】和有棱絲瓜【luffaacutangula(l.)roxb.】?jī)蓚€(gè)栽培種，其中普通絲瓜中的肉絲瓜褐變現(xiàn)象比較普遍。

3、申請(qǐng)內(nèi)容

4、本申請(qǐng)是鑒于上述課題而進(jìn)行的，其目的在于，提供一種分子標(biāo)記；該分子標(biāo)記用于篩選絲瓜果實(shí)的褐變性狀。

5、具體如下，本申請(qǐng)第一方面提供了分子標(biāo)記在如下方面中的應(yīng)用，

6、(i)、預(yù)測(cè)、篩選和/或鑒定絲瓜果實(shí)褐變；

7、和/或，(ii)、絲瓜的改良；

8、所述分子標(biāo)記位于絲瓜基因組第3號(hào)染色體的第43044275位堿基；

9、所述改良包括通過(guò)分子標(biāo)記輔助選擇育種加速子代絲瓜中的果實(shí)耐褐變植株的選擇。

10、本申請(qǐng)第二方面提供了引物組，所述引物組包括：

11、(i)第一正向引物組：

12、所述第一正向引物組包括具有如seq?id?no.1所示的核苷酸序列和接頭序列；

13、seq?id?no.1：tttttggcaaataaaaattttctcagaac。

14、和/或，(ii)第二正向引物組：

15、所述第一正向引物組包括具有如seq?id?no.2所示的核苷酸序列和接頭序列；

16、seq?id?no.2：

17、tttttggcaaataaaaattttctcagaat。

18、和/或，(iii)反向引物組，

19、所述反向引物組具有如seq?id?no.3所示的核苷酸序列；

20、seq?id?no.3：

21、tgtggtactgctgaaaatcaggta。

22、和/或，(ⅳ)與(i)～(iii)任一項(xiàng)所示的核苷酸序列編碼相同蛋白質(zhì)，但因遺傳密碼的簡(jiǎn)并性而與(i)～(iii)任一項(xiàng)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；

23、和/或，(ⅴ)與(i)～(ⅳ)任一項(xiàng)所示的核苷酸序列經(jīng)取代、缺失或添加一個(gè)或多個(gè)核苷酸序列獲得的核苷酸序列，且與(i)～(ⅳ)任一項(xiàng)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；

24、和/或，(ⅵ)與(i)～(ⅴ)任一項(xiàng)所述的核苷酸序列具有至少90％序列同源性的核苷酸序列，

25、和/或，所述接頭序列包括seq?id?no.4或seq?id?no.5所示的核苷酸序列。

26、seq?id?no.4：

27、gaaggtgaccaagttcatgc。

28、seq?id?no.5：

29、gaaggtcggagtcaacggat。

30、本申請(qǐng)第三方面提供了如第二方面所述的引物組在如下方面中的應(yīng)用：

31、(i)、預(yù)測(cè)、篩選和/或鑒定絲瓜果實(shí)褐變；

32、和/或，(ii)、絲瓜的改良；

33、和/或，(iii)、預(yù)測(cè)、篩選和/或鑒定絲瓜果實(shí)褐變的試劑盒；

34、所述改良包括通過(guò)分子標(biāo)記輔助選擇育種加速子代絲瓜中的果實(shí)耐褐變植株的選擇。

35、本申請(qǐng)第四方面提供了試劑盒，包括如第二方面所述的引物組。

36、本申請(qǐng)第五方面提供了如第四方面所述的試劑盒在如下方面中的應(yīng)用：

37、(i)、預(yù)測(cè)、篩選和/或鑒定絲瓜果實(shí)褐變；

38、和/或，(ii)、絲瓜的改良；

39、所述改良包括通過(guò)分子標(biāo)記輔助選擇育種加速子代絲瓜中的果實(shí)耐褐變植株的選擇。

40、本申請(qǐng)第六方面提供了絲瓜果實(shí)褐變的篩選方法，包括如下步驟：提取絲瓜基因組dna，使用如第二方面所述的引物組和/或如第四方面所述的試劑盒鑒定絲瓜的基因型，篩選得到耐褐變絲瓜。

41、可選地，根據(jù)所述基因型篩選耐褐變絲瓜的標(biāo)準(zhǔn)如下：

42、(i)、若所述絲瓜基因組第3號(hào)染色體的第43044275位堿基為cc時(shí)，與該位點(diǎn)為tt時(shí)相比，所述絲瓜具有更高的耐褐變能力，即cc型植株耐褐變果實(shí)比例顯著高于與tt型植株；

43、(ii)、若所述絲瓜基因組第3號(hào)染色體的第43044275位堿基為ct時(shí)，與該位點(diǎn)為tt時(shí)相比，所述絲瓜具有更高的耐褐變能力，即ct型植株耐褐變果實(shí)比例顯著高于與tt型植株。

44、本申請(qǐng)第七方面提供了絲瓜果實(shí)選育的方法，包括如下步驟：提取絲瓜基因組dna，使用如第二方面所述的引物組和/或如第四方面所述的試劑盒pcr擴(kuò)增，根據(jù)pcr產(chǎn)物的熒光信號(hào)判斷，獲得相應(yīng)品種。

45、可選地，根據(jù)所述熒光信號(hào)判斷基因型評(píng)價(jià)絲瓜耐褐變性能的標(biāo)準(zhǔn)如下：

46、(i)、若只檢測(cè)到第一引物組對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)，則所述絲瓜基因組第3號(hào)染色體的第43044275位堿基為cc時(shí)，與該位點(diǎn)為tt時(shí)相比，所述絲瓜具有更高的耐褐變能力，即cc型植株耐褐變果實(shí)比例顯著高于與tt型植株；

47、(ii)、若同時(shí)檢測(cè)第一引物組和第二引物組對(duì)應(yīng)的熒光信號(hào)，則所述絲瓜基因組第3號(hào)染色體的第43044275位堿基為ct，與該位點(diǎn)為tt時(shí)相比，所述絲瓜具有更高的耐褐變能力，即ct型植株耐褐變果實(shí)比例顯著高于與tt型植株。

48、可選地，所述pcr擴(kuò)增的反應(yīng)程序包括：

49、(i)、94℃～95℃預(yù)變性14min～15min，94℃～95℃變性20s～30s，65℃～56℃退火延伸60s～70s，10個(gè)～15個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)降低0.6℃～0.8℃；

50、和/或，(ii)、94℃～95℃變性20s～30s，55℃～57℃退火延伸60s～70s，26個(gè)～30個(gè)循環(huán)。

51、本申請(qǐng)至少具備如下有益效果：

52、本申請(qǐng)的分子標(biāo)記直接用于絲瓜褐變和相對(duì)應(yīng)的基因型的鑒定，進(jìn)而依賴(lài)該分子標(biāo)記進(jìn)行輔助育種，能夠有效的解決常規(guī)育種周期長(zhǎng)，易受到環(huán)境影響的問(wèn)題。通過(guò)早期利用該分子標(biāo)記可以快速篩選到滿(mǎn)意的植株，有效的減小了種植規(guī)模，減少了后期鑒定的工作量。提高了選擇的效率和準(zhǔn)確性?？梢杂糜诟鞣N品種的絲瓜鑒定，對(duì)研究絲瓜果實(shí)的分子機(jī)制具有重大的意義。因此，本申請(qǐng)?jiān)诮z瓜果實(shí)褐變育種實(shí)踐和研究上均具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

技術(shù)特征：

1.分子標(biāo)記在如下方面中的應(yīng)用，其特征在于，

2.引物組，其特征在于，所述引物組包括：(i)第一正向引物組：

3.如權(quán)利要求2所述的引物組在如下方面中的應(yīng)用：

4.試劑盒，其特征在于，包括如權(quán)利要求2所述的引物組。

5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒在如下方面中的應(yīng)用：

6.絲瓜果實(shí)褐變的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：提取絲瓜基因組dna，使用如權(quán)利要求2所述的引物組和/或如權(quán)利要求4所述的試劑盒鑒定絲瓜的基因型，篩選得到耐褐變絲瓜。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，根據(jù)所述基因型篩選耐褐變絲瓜的標(biāo)準(zhǔn)如下：

8.絲瓜果實(shí)選育的方法，其特征在于，包括如下步驟：提取絲瓜基因組dna，使用如權(quán)利要求2所述的引物組和/或如權(quán)利要求4所述的試劑盒pcr擴(kuò)增，根據(jù)pcr產(chǎn)物的熒光信號(hào)判斷，獲得相應(yīng)品種。

9.權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，根據(jù)所述熒光信號(hào)判斷基因型評(píng)價(jià)絲瓜耐褐變性能的標(biāo)準(zhǔn)如下：

10.如權(quán)利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述pcr擴(kuò)增的反應(yīng)程序包括：

技術(shù)總結(jié)
本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N與絲瓜果實(shí)耐褐變連鎖的分子標(biāo)記及應(yīng)用，該應(yīng)用包括(I)、預(yù)測(cè)、篩選和/或鑒定絲瓜果實(shí)褐變；和/或，(II)、絲瓜的改良；所述分子標(biāo)記位于絲瓜基因組第3號(hào)染色體的第43044275位堿基；所述改良包括通過(guò)分子標(biāo)記輔助選擇育種加速子代絲瓜中的果實(shí)耐褐變植株的選擇。本申請(qǐng)通過(guò)對(duì)普通絲瓜耐褐變主效基因的定位與標(biāo)記開(kāi)發(fā)，實(shí)現(xiàn)了耐褐變育種的分子標(biāo)記輔助選擇，有效提高耐褐變性狀的選擇效率；本申請(qǐng)對(duì)建立高效絲瓜品質(zhì)育種分子體系和提高絲瓜品質(zhì)育種水平具有重要意義。

技術(shù)研發(fā)人員：韓小霞,胡新軍,閔子揚(yáng),李勇奇,袁祖華
受保護(hù)的技術(shù)使用者：湖南省蔬菜研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/9