本發(fā)明涉及人類卵巢衰老的診斷領(lǐng)域，更具體地講，涉及人卵母細(xì)胞質(zhì)量下降相關(guān)的microrna及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
卵母細(xì)胞質(zhì)量下降是指卵母細(xì)胞受精、受精后卵裂、形成囊胚、著床和繼續(xù)妊娠的能力下降，主要表現(xiàn)為減數(shù)分裂時(shí)期紡錘體異常、染色體排列錯(cuò)誤、端?？s短以及黏連蛋白缺失等。卵母細(xì)胞質(zhì)量下降會增加非整倍體卵母細(xì)胞的產(chǎn)生概率，并最終導(dǎo)致不孕和流產(chǎn)。卵母細(xì)胞質(zhì)量下降的發(fā)生率隨著女性年齡升高而增加，還受到環(huán)境、生活方式、疾病和醫(yī)療性等因素影響。卵母細(xì)胞質(zhì)量下降，尤其是非整倍體的產(chǎn)生，將直接導(dǎo)致胎兒流產(chǎn)、新生兒智力和生理功能異常以及腫瘤的發(fā)生，極大影響人類的生育健康和人口素質(zhì)。
隨著女性因教育、工作和社會因素等原因推遲生育年齡，以及國家計(jì)劃生育政策的改變，要求妊娠的高齡女性明顯增多。卵母細(xì)胞質(zhì)量下降是高齡女性不孕和助孕治療反復(fù)失敗的關(guān)鍵，目前已成為生殖醫(yī)學(xué)面臨的一個(gè)重大難題。
目前的生殖醫(yī)學(xué)臨床工作，主要是根據(jù)女性基礎(chǔ)竇狀卵泡數(shù)來決定促排卵方案，b超和性激素檢查也只能監(jiān)測卵泡發(fā)育的數(shù)量。由于取卵之前根本無法預(yù)知該周期的卵母細(xì)胞質(zhì)量，造成相當(dāng)一部分女性尤其是大部分的高齡女性，因?yàn)楫?dāng)周期卵母細(xì)胞質(zhì)量不佳而無法獲得優(yōu)良胚胎，最終無法獲得臨床妊娠，白白耗費(fèi)了患者及其家屬大量的時(shí)間、精力和金錢；同時(shí)助孕治療失敗，也給患者及其家屬造成了極大的精神壓力。因此，在促排卵治療前，亟需一種能預(yù)測當(dāng)周期卵母細(xì)胞質(zhì)量的方法，用于決定該周期是否適合啟動(dòng)促排卵治療，以及后續(xù)的取卵、移植、黃體支持等一系列工作。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本技術(shù)：
人針對上述問題進(jìn)行研究，提供了一組與人卵母細(xì)胞質(zhì)量下降相關(guān)的microrna，用于預(yù)測當(dāng)周期卵母細(xì)胞質(zhì)量，為臨床診療提供參考。
本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：一組與人卵母細(xì)胞質(zhì)量下降相關(guān)的microrna，所述microrna有15個(gè)，包括hsa-mir-99a、hsa-mir-99b、hsa-mir-125a、hsa-mir-450a、hsa-mir-127、hsa-mir-200c、hsa-mir-10b、hsa-mir-200b、hsa-mir-200a、hsa-mir-218、hsa-mir-429、hsa-mir-7974、hsa-mir-141、hsa-mir-27b和hsa-mir-125b。
上述microrna在判斷人卵母細(xì)胞質(zhì)量下降中的應(yīng)用：與正常質(zhì)量卵母細(xì)胞的女性相比，在卵母細(xì)胞質(zhì)量下降女性的顆粒細(xì)胞、卵泡液和血清中，所述microrna的表達(dá)量明顯升高，且每個(gè)microrna的表達(dá)量均達(dá)到2.5倍以上（2.5倍-29.2倍）。根據(jù)基因互作分析，揭示所述microrna主要與pi3k-akt-mtor信號通路、igf-1受體信號通路和血管生成密切相關(guān)。
按照如下方法可篩選出滿足本發(fā)明目的microrna：（1）體外收集38歲以上女性自然衰老卵巢中獲得的卵母細(xì)胞、顆粒細(xì)胞、卵泡液和血清，以及30歲以下女性正常卵巢中獲得的卵母細(xì)胞、顆粒細(xì)胞、卵泡液和血清；（2）根據(jù)卵母細(xì)胞受精、卵裂、囊胚形成、著床和繼續(xù)妊娠能力區(qū)分為卵母細(xì)胞質(zhì)量正常組和卵母細(xì)胞質(zhì)量下降組；使用深度測序方法，體外檢測兩組顆粒細(xì)胞和血清中microrna全序列表達(dá)；進(jìn)行表達(dá)差異分析，獲得與卵母細(xì)胞質(zhì)量下降相關(guān)的microrna；（3）根據(jù)基因互作分析，揭示所述microrna的靶基因及其作用機(jī)制，主要與pi3k-akt-mtor信號通路、igf-1受體信號通路和血管生成密切相關(guān)。
本發(fā)明的有益效果如下：
使用該方法可判斷卵母細(xì)胞質(zhì)量是否下降。在月經(jīng)周期第2天，檢測血清中所述15個(gè)microrna的表達(dá)量；如果所有值均超過年輕正常女性表達(dá)量的2.5倍以上，可判斷為卵母細(xì)胞質(zhì)量下降；建議取消該周期促排卵治療，給予其他輔助性治療或等待下一個(gè)月經(jīng)周期。本發(fā)明在促排卵治療前即可預(yù)知卵母細(xì)胞質(zhì)量以決定是否啟動(dòng)促排卵治療，可有效節(jié)省患者及其家屬的時(shí)間、精力、治療費(fèi)用及并減少其精神壓力；可廣泛應(yīng)用于婦產(chǎn)科的孕前咨詢、啟動(dòng)促排卵治療指針等方面。
附圖說明
圖1為所述microrna的表達(dá)量在卵母細(xì)胞質(zhì)量下降組與卵母細(xì)胞質(zhì)量正常組的倍數(shù)。
具體實(shí)施方式
下面說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式。
一組人卵母細(xì)胞質(zhì)量下降相關(guān)的microrna，所述microrna有15個(gè)，包括hsa-mir-99a、hsa-mir-99b、hsa-mir-125a、hsa-mir-450a、hsa-mir-127、hsa-mir-200c、hsa-mir-10b、hsa-mir-200b、hsa-mir-200a、hsa-mir-218、hsa-mir-429、hsa-mir-7974、hsa-mir-141、hsa-mir-27b和hsa-mir-125b。在月經(jīng)周期第2天，檢測血清中所述15個(gè)microrna的表達(dá)量；如果所有值均超過年輕正常女性表達(dá)量的2.5倍以上，可判斷為卵母細(xì)胞質(zhì)量下降；建議取消該周期促排卵治療，給予其他輔助性治療或等待下一個(gè)月經(jīng)周期。本發(fā)明在促排卵治療前即可預(yù)知卵母細(xì)胞質(zhì)量以決定是否啟動(dòng)促排卵治療，可有效節(jié)省患者及其家屬的時(shí)間、精力、治療費(fèi)用及并減少其精神壓力；可廣泛應(yīng)用于婦產(chǎn)科的孕前咨詢、啟動(dòng)促排卵治療指針等方面。
以上描述是對本發(fā)明的解釋，不是對發(fā)明的限定，本發(fā)明所限定的范圍參見權(quán)利要求，在不違背本發(fā)明的精神的情況下，本發(fā)明可以作任何形式的修改。