專利名稱：從金銀花中提取金銀花多糖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種中藥活性成份的提取方法，更具體地說它涉及一種從金銀花中提取金銀花多糖的方法。
背景技術(shù)：
多糖在抗腫瘤、抗炎、抗病毒、降血糖、抗衰老、抗凝血、免疫促進等方面發(fā)揮著生物活性作用，因此對多糖的研究與開發(fā)已越來越引起人們的廣泛關(guān)注。金銀花為常見中藥，具有清熱解毒、抗菌消炎、保肝利膽的功能。臨床應(yīng)用于治療瘡瘍、瀉痢、外感、熱病等疾病，也可用于治療呼吸道感染、頭痛咽痛等疾病。至今還未見有金銀花多糖提取方法的相關(guān)報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出一種從金銀花中提取金銀花多糖的方法，本發(fā)明是在通過反復實驗的基礎(chǔ)上，以正交實驗法優(yōu)化金銀花中多糖的醇析水提法，以金銀花多糖提取產(chǎn)率和含量為指標，對提取過程中水浸提時間，浸提溫度，氯仿萃取次數(shù)和沉析用的乙醇濃度等四個因素三個水平的提取效果進行分析，從而確定提取金銀花多糖的最佳提取條件，為金銀花多糖的開發(fā)利用提供依據(jù)。
本發(fā)明的目的是通過如下措施來達到的金銀花多糖的提取采用水提乙醇析出沉淀法，其原理是根據(jù)多糖易溶于水，難溶于乙醇，石油醚，氯仿等溶劑的性質(zhì)，可用水先將粗多糖從金銀花中提取出來，用sevag試劑法除蛋白，再用氯仿，石油醚等除去脂溶性雜質(zhì)，最后用乙醇將其從水提物中沉淀析出，從而分離出金銀花多糖，經(jīng)干燥即得到固體的多糖。需要說明的是在實際應(yīng)用中也可先用氯仿，石油醚等除去脂溶性雜質(zhì)后，再用sevag試劑法除蛋白，這樣并不影響金銀花多糖的提取。
從金銀花中提取金銀花多糖的方法，它依次包括如下步驟①.取一定量的金銀花加30倍水恒溫浸泡，浸提時間為2-4小時，浸提恒溫在70-90℃范圍內(nèi)，過濾，得提取液；②.將浸泡過的金銀花殘渣再加15-20倍水繼續(xù)恒溫浸泡30分鐘，恒溫在70-90℃范圍內(nèi)，過濾得提取液；第三次將浸泡的金銀花加15-20倍水繼續(xù)恒溫浸泡30分鐘，恒溫在70-90℃范圍內(nèi)，過濾得提取液；合并三次提取液；③.將提取液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至定量金銀花的2倍量，用sevag試劑法除蛋白2次，用等量氯仿或石油醚萃取除去脂溶性雜質(zhì)1-3次，取水層；④.水層加乙醇，收集乙醇濃度為50-80％范圍析出的沉淀，沉淀用丙酮和乙醚分別洗滌2次，干燥，即得固體金銀花多糖。
在上述技術(shù)方案中，所述浸泡時間為4小時、浸提溫度為90℃、等量氯仿萃取次數(shù)為1次，沉淀用乙醚濃度為80％。
在上述技術(shù)方案中，所述浸泡時間為2小時、浸提溫度為90℃、等量氯仿萃取次數(shù)為3次，沉淀用乙醚濃度為80％。
在上述技術(shù)方案中，所述浸泡時間為2小時、浸提溫度為90℃、等量氯仿萃取次數(shù)為1次，沉淀用乙醚濃度為80％。
本發(fā)明具有如下優(yōu)點本發(fā)明公開了一種從金銀花中提取多糖的方法，填補了金銀花多糖提取方法的空白，本方法提取金銀花多糖具有快速、簡便、成本低、收率高的優(yōu)點，有利于更進一步研究金銀花多糖在治療有關(guān)疾病中的應(yīng)用。
具體實施例方式
下面通過實施例詳細說明本發(fā)明的實施情況1金銀花多糖的提取及含量測定方法從金銀花中提取金銀花多糖的方法，它依次包括如下步驟①.取50g的金銀花加30倍水1500ml恒溫浸泡，浸提時間為2-4小時，浸提恒溫在70-90℃范圍內(nèi)，過濾，得提取液；②.將浸泡過的金銀花殘渣再加900ml水繼續(xù)恒溫浸泡30分鐘，恒溫在70-90℃范圍內(nèi)，過濾得提取液；第三次將浸泡過的金銀花加900ml水繼續(xù)恒溫浸泡30分鐘，恒溫在70-90℃范圍內(nèi)，過濾得提取液；合并三次提取液；③.將提取液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至定量金銀花的2倍量，用sevag試劑法除蛋白2次，用等量氯仿或石油醚萃取除去脂溶性雜質(zhì)1-3次，取水層；④.水層加乙醇，收集乙醇濃度為50-80％范圍析出的沉淀，沉淀用丙酮和乙醚分別洗滌2次，干燥，即得固體金銀花多糖。
需要說明的是浸泡金銀花的用水量一般以淹沒充分散開的金銀花為佳，有機溶劑也可采用除氯仿、石油醚、乙醇之外的其它有機溶劑。
2金銀花多糖含量的測定方法用苯酚-硫酸法測定不同濃度葡萄糖的吸光度來制定濃度-吸光度標準曲線，再將樣品配成一定濃度的溶液測其吸光度，代入濃度-吸光度標準曲線方程經(jīng)計算得到所得多糖含量。
2.1標準曲線的制備精密稱取干燥至恒重的葡萄糖對照品10.2mg，置l00mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得葡萄糖對照品溶液。準確量取上述對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分別置10mL量瓶中，再分別各取0.5ml加濃硫酸7.5ml和5％苯酚1.5ml，于40℃保溫30分鐘，在490nm波長處測定吸收度，得回歸方程C＝132.57A-20.67，r＝0.9971。結(jié)果表明在10.2～51.0μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。
3.正交試驗設(shè)計按照上述試驗的提取工藝，下面經(jīng)過多次(9個具體的實施例)單因子對比試驗，正交試驗設(shè)計為水浸提時間(h)、浸提溫度(℃)、100ml氯仿萃取次數(shù)和沉淀的乙醇濃度等四個因素，每因素3水平(見表1)，以金銀花多糖的產(chǎn)率和含量為考察指標，用L9(34)正交表安排試驗。
表1 正交試驗因素水平表(試驗條件)

(注試驗時其它條件完全相同)3.1結(jié)果按正交實驗設(shè)計方法提取金銀花多糖，收率和含量結(jié)果見表2。
表2 正交試驗設(shè)計及結(jié)果

(注試驗時其它條件完全相同)3.2最佳產(chǎn)率工藝提取條件的確定由表2中產(chǎn)率的R值可以看出，影響提取產(chǎn)率的因素排序為B＞A＞D＞C，B的影響最大，C則最小。經(jīng)過運算可得出每個因素各水平之和K1、K2、K3。綜合各因素K值和直觀比較，得出理論上最佳提取產(chǎn)率的工藝條件為A3B3C1D3。故確定其最佳提取產(chǎn)率工藝條件為浸提時間為4h，浸提溫度為90℃，等量氯仿萃取次數(shù)為1次，沉析用的乙醇濃度為80％。
3.3最佳含量工藝提取條件的確定此外，由表2中含量的R值來分析，影響其含量的因素排序為B＞D＞A＞C。B和D的影響較顯著，A和C則不顯著。說明提取過程中，浸提溫度對金銀花多糖的含量影響是最大的，溫度高有利于提高金銀花多糖的含量；乙醇濃度對金銀花多糖含量的影響也較大，由表中可看出濃度為80％時含量較高；浸提時間和氯仿的萃取次數(shù)則影響較小。從其含量的K1、K2、K3看到，所得金銀花多糖含量最佳的工藝條件為A1B3C3D3。要得到金銀花多糖含量高的最佳提取工藝條件應(yīng)為浸提時間為2h，浸提溫度為90℃，100ml氯仿萃取次數(shù)為3次，沉析用的乙醇濃度為80％。
3.4驗證實驗為驗證最佳工藝，稱取金銀花50g，按照優(yōu)化后所得最佳提取工藝即加入30倍量水提取3次，浸提時間為2h，浸提溫度為90℃，100ml氯仿萃取次數(shù)為1次，沉析用的乙醇濃度為80％進行提取，每次2小時，對所得多糖稱重并進行測定。結(jié)果表明，多糖得率為4.78％，金銀花多糖相對百分含量為78.10％，可知與正交表中的最優(yōu)水平一致，這說明本發(fā)明所確定的工藝合理。
3.5最佳工業(yè)化提取條件的確定提取條件的影響從表2的結(jié)果，我們還看出(1)水浸提的時間有三個，分別為2h、3h和4h，這三個時間條件對產(chǎn)率的影響結(jié)果表明浸提時間越長，產(chǎn)率越高，但金銀花多糖的含量在浸提3h和4h時有所下降，且在浸提2h中3號的含量比其他的高很多，因此選取浸提時間為2h，時間過長，浸出的雜質(zhì)越多，另外從時間與效率、成本來看，浸提時間選2h是最好的。(2)浸提溫度對產(chǎn)率和含量的影響都是最大的，溫度升高，產(chǎn)率和含量也升高，因此適當提高浸提溫度是必要的，在此我們選擇90℃作為浸提的最佳溫度。(3)氯仿萃取次數(shù)對產(chǎn)率和含量的影響都是最小的，隨著萃取次數(shù)的增加，產(chǎn)率和含量的變化不明顯，從時間與效率、成本來看，萃取1次就可以了。(4)乙醇沉析用的濃度考察了三個水平，分別為50％、70％和80％。其對產(chǎn)率的影響雖不是很大，但乙醇濃度越高，產(chǎn)率也越高，而且乙醇濃度對含量的影響較大，濃度越高，含量越高，故從產(chǎn)率與產(chǎn)品的質(zhì)量來考慮，選用乙醇濃度為80％最好，不但可降低乙醇的使用量，還可減少乙醇回收所帶來的成本。綜上所述，考慮金銀花多糖的提取產(chǎn)率、純度與成本等因素，對醇析水提法提取金銀花多糖的條件再次優(yōu)化，本發(fā)明選取了另一種工藝條件水浸提時間為2h，浸提溫度為90℃，100ml氯仿萃取次數(shù)為1次，沉析用的乙醇濃度為80％。
需要說明的是對于所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，在不改變本發(fā)明原理的前提下還可以對本發(fā)明做出若干的改變或變形，這同樣屬于本發(fā)明的保護范圍。
權(quán)利要求
1.從金銀花中提取金銀花多糖的方法，其特征在于它依次包括如下步驟①.取一定量的金銀花加30倍水恒溫浸泡，浸提時間為2-4小時，浸提恒溫在70-90℃范圍內(nèi)，過濾，得提取液；②.將浸泡過的金銀花殘渣再加15-20倍水繼續(xù)恒溫浸泡30分鐘，恒溫在70-90℃范圍內(nèi)，過濾得提取液；第三次將浸泡的金銀花加15-20倍水繼續(xù)恒溫浸泡30分鐘，恒溫在70-90℃范圍內(nèi)，過濾得提取液；合并三次提取液；③.將提取液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至定量金銀花的2倍量，用sevag試劑法除蛋白2次，用等量氯仿或石油醚萃取除去脂溶性雜質(zhì)1-3次，取水層；④.水層加乙醇，收集乙醇濃度為50-80％范圍析出的沉淀，沉淀用丙酮和乙醚分別洗滌2次，干燥，即得固體金銀花多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從金銀花中提取金銀花多糖的方法，其特征在于所述浸泡時間為4小時、浸提溫度為90℃、等量氯仿萃取次數(shù)為1次，沉淀用乙醚濃度為80％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從金銀花中提取金銀花多糖的方法，其特征在于所述浸泡時間為2小時、浸提溫度為90℃、等量氯仿萃取次數(shù)為3次，沉淀用乙醚濃度為80％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的從金銀花中提取金銀花多糖的方法，其特征在于所述浸泡時間為2小時、浸提溫度為90℃、等量氯仿萃取次數(shù)為1次，沉淀用乙醚濃度為80％。
全文摘要
從金銀花中提取金銀花多糖的方法，它采用水提乙醇析出沉淀法，用水先將粗多糖從金銀花中提取出來，用sevag試劑法除蛋白，再用氯仿，石油醚等除去脂溶性雜質(zhì)，最后用乙醇將其從水提物中沉淀析出，從而分離出金銀花多糖，經(jīng)干燥即得到固體的多糖。本發(fā)明填補了金銀花多糖提取方法的空白，具有快速、簡便、成本低、收率高的優(yōu)點，有利于更進一步研究金銀花多糖在醫(yī)療上的應(yīng)用。
文檔編號C08B37/00GK1733808SQ20051001940
公開日2006年2月15日 申請日期2005年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月8日
發(fā)明者馬力, 陳華庭, 陳東生, 張玉, 陳文 申請人:華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬協(xié)和醫(yī)院