從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種生物堿的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種生物堿的方法。本發(fā)明中，用高速逆流色譜法從細(xì)果角茴香中提取分離四種生物堿類(lèi)化合物，相對(duì)傳統(tǒng)的柱色譜法操作簡(jiǎn)單，分離時(shí)間明顯縮短，得到的化合物純度也相對(duì)較高。
【專(zhuān)利說(shuō)明】從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種生物堿的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種生物堿的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]藏藥角茴香（HypecoumleptocarpumHook.f.etThoms)為罌粟科角茴香屬植物， 別名咽喉草、山黃連或野茴香等，藏藥名為巴爾哇打、巴爾巴達(dá)。生長(zhǎng)于海拔4300m以下的 草原、草甸、砂礫地上，味苦性涼，清血熱、溫?zé)岷投緹帷！段鞑爻Ｓ弥胁菟帯贩Q(chēng)其有解熱鎮(zhèn)痛、 消炎解毒之功效，可治傷風(fēng)感冒、頭痛、四肢關(guān)節(jié)疼痛、膽囊炎，并解食物中毒。《陜甘寧青中 草藥選》中稱(chēng)：細(xì)果角茴香能治流感、咽喉腫痛、目赤等癥?，F(xiàn)代分析化學(xué)和天然產(chǎn)物化學(xué) 研究發(fā)現(xiàn)：細(xì)果角茴香中含有多種生物堿成分，如：原阿片堿、隱品堿、血根堿等。
[0003] 細(xì)果角茴香生物堿是從細(xì)果角茴香全草中提取得到的生物堿。通過(guò)查閱文獻(xiàn)，發(fā) 現(xiàn)還沒(méi)有對(duì)其活性成分進(jìn)行系統(tǒng)研究。根據(jù)同屬植物的研究發(fā)現(xiàn)，該屬植物的活性成分主 要為生物堿。到目前為止只報(bào)道了使用傳統(tǒng)的柱色譜法對(duì)細(xì)果角茴香中生物堿分離的報(bào) 道。
[0004]高速逆流色譜（High-speedcounter-currentchromatography，簡(jiǎn)稱(chēng)HSCCC)分離 技術(shù)是一種連續(xù)高效的液-液分配色譜分離技術(shù)，它不用任何固態(tài)的支撐物或載體，利用 兩相溶劑體系在高速旋轉(zhuǎn)的螺旋管內(nèi)建立起一種特殊的單向性流體動(dòng)力學(xué)平衡，其中一相 作為固定相，另一相作為流動(dòng)相，在連續(xù)洗脫的過(guò)程中能保留大量的固定相，物質(zhì)的分離依 據(jù)其在兩相中分配系數(shù)的不同而實(shí)現(xiàn)，特別適合于天然產(chǎn)物活性成分的分離。
[0005]目前還未見(jiàn)有人使用HSCCC技術(shù)對(duì)細(xì)果角茴香中的生物堿進(jìn)行分離純化。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種利用HSCCC技術(shù)從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種 生物堿的方法。
[0007] 具體地，本發(fā)明提供了從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種生物堿的方法，它包括 如下操作步驟：
[0008] (1)粗提物的制備：
[0009] 取細(xì)果角茴香，用70% -95%v/v乙醇為溶劑提取，提取液濃縮除去乙醇后，所得 浸膏加鹽酸，除去不溶物，溶液脫脂后，加堿調(diào)節(jié)PH至9-10,再用氯仿萃取，收集氯仿層，除 去溶劑后，干燥得到生物堿粗提物；
[0010] (2)采用高速逆流色譜法分離：
[0011] 取氯仿-甲醇-〇.IMHCl= 4 : 3 : 2,置于分液漏斗中配制兩相溶劑系統(tǒng)，取 下相為固定相，上相位流動(dòng)相；將固定相充滿(mǎn)逆流色譜的色譜柱，在25-28°C下，主機(jī)正轉(zhuǎn)， 轉(zhuǎn)速為800-900r/min，然后以I. 5-1. 8mL/min的流速泵入流動(dòng)相，至兩相溶劑在柱中達(dá)到 平衡狀態(tài)；步驟（1)制備的粗提物，以流動(dòng)相為溶劑溶解，制備樣品溶液；將樣品溶液進(jìn) 樣，在紫外檢測(cè)器下分別接收各目標(biāo)成分，即可分別得到leptopidine，oxohydrastinine, (-)-N-methylanadine,N-Feruloyltyramine0
[0012] 本發(fā)明分離得到的leptopidine，oxohydrastinine, (_)-N-methylanadine， N-Feruloyltyramine,是指純度大于 92 % 的leptopidine,oxohydrastinine, (-)-N-methylanadine,N-Feruloyltyramine。
[0013] 已有研究發(fā)現(xiàn)，這類(lèi)生物堿有抗炎，鎮(zhèn)痛，抗病毒的活性。
[0014] 本發(fā)明一個(gè)【具體實(shí)施方式】中，色譜分離時(shí)的溫度為25°C，轉(zhuǎn)速為850r/min，流動(dòng) 相泵入速度為I. 6mL/min。
[0015] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，乙醇濃度為95%v/v，提取溫度為50-70°C，例如60°C。
[0016] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，鹽酸的加入量為浸膏體積的4倍，鹽酸體積分?jǐn)?shù)為2%。
[0017] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，脫脂處理是采用石油醚或氯仿萃取實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明一個(gè)具體 實(shí)施方式中，采用石油醚進(jìn)行脫脂處理，石油醚沸程60-90°C。
[0018] 進(jìn)一步地，步驟（1)中，所述堿為氨水。
[0019] 進(jìn)一步地，步驟（2)中，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。
[0020] 進(jìn)一步地，步驟（2)中，粗提物用量為200mg。
[0021] 進(jìn)一步地，步驟（2)中，將樣品溶液進(jìn)樣，在紫外檢測(cè)器下分別接收出峰 時(shí)間10CK300min內(nèi)的各目標(biāo)成分，即可分別得到leptopidine，oxohydastinine， (-)-N-methylanadine,N-Feruloyltyramine。
[0022] 更進(jìn)一步地，步驟（2)中，將樣品溶液進(jìn)樣，在紫外檢測(cè)器下分別接收出峰 時(shí)間120_270min內(nèi)的各目標(biāo)成分，即可分別得到leptopidine，oxohydrastinine, (-)-N-methylanadine,N-Feruloyltyramine。
[0023] 優(yōu)選地，步驟（2)中，接收出峰時(shí)間為120-125min的目標(biāo)成分，即可得到 leptopidine;接收出峰時(shí)間為142_157min的目標(biāo)成分，即可得到oxohydrastinine;接 收出峰時(shí)間為207_226min的目標(biāo)成分，即可得到（-)-N-methylanadine;接收出峰時(shí)間為 258_270min的目標(biāo)成分，即可得到N-Feruloyltyramine。
[0024] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：用高速逆流色譜法從細(xì)果角茴香中提取分離四種生物堿類(lèi)化合 物，相對(duì)傳統(tǒng)的柱色譜法操作簡(jiǎn)單，分離時(shí)間明顯縮短，得到的化合物純度也相對(duì)較高。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0025] 圖1高速逆流色譜圖
[0026] 圖2HPLC圖a為粗樣圖，b，c，d，e分別為四個(gè)化合物的液相圖
[0027] 圖3氯仿-甲醇-0·IMHCl(2 :I: 1)的色譜圖

【具體實(shí)施方式】
[0028] 實(shí)施例1本發(fā)明提取分離方法
[0029] 1、細(xì)果角茴香粗提物的制備
[0030] 將2.0千克細(xì)果角茴香加入20L95%乙醇提取3h，重復(fù)3次。提取過(guò)程為60攝 氏度避光狀態(tài)下進(jìn)行。合并3次提取液收集濾液后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮除去乙醇，得到浸膏 500ml。浸膏用2L2%體積分?jǐn)?shù)的鹽酸溶解，過(guò)濾，除去不容物，得到生物堿的酸液。酸液 用2L石油醚萃取（沸程60-90°C)，重復(fù)三次，除去脂溶性雜質(zhì)。酸液用濃氨水調(diào)節(jié)pH值 至9-10。然后用氯仿萃取，得到12. 6g生物堿粗樣，用于后面的高速逆流色譜。
[0031] 2、利用HPLC法對(duì)四種生物堿分配系數(shù)的測(cè)定
[0032] 分配系數(shù)是指每種化合物在兩相中濃度的比值。利用HPLC對(duì)四種生物堿在逆流 系統(tǒng)中的分配系數(shù)測(cè)定結(jié)果如下：
[0033]表1
[0034]

【權(quán)利要求】
1. 從藏藥細(xì)果角茴香中提取分離四種生物堿的方法，其特征在于：它包括如下操作步 驟： (1) 粗提物的制備： 取細(xì)果角茴香，用70% -95% v/v乙醇為溶劑提取，提取液濃縮除去乙醇后，所得浸膏 加鹽酸，除去不溶物，溶液脫脂后，加堿調(diào)節(jié)pH至9?10，再用氯仿萃取，收集氯仿層，除去 溶劑后，干燥得到生物堿粗提物； (2) 采用高速逆流色譜法分離： 取氯仿-甲醇_〇. 1M HC1 = 4 : 3 : 2,置于分液漏斗中配制兩相溶劑系統(tǒng)，取下相 為固定相，上相位流動(dòng)相；將固定相充滿(mǎn)逆流色譜的色譜柱，在25-28°C下，主機(jī)正轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn) 速為800-900r/min，然后以1. 5-1. 8mL/min的流速泵入流動(dòng)相，至兩相溶劑在柱中達(dá)到 平衡狀態(tài)；步驟（1)制備的粗提物，以流動(dòng)相為溶劑溶解，制備樣品溶液；將樣品溶液進(jìn) 樣，在紫外檢測(cè)器下分別接收各目標(biāo)成分，即可分別得到leptopidine，oxohydrastinine, (-)-N-methylanadine, N_Feruloyltyramine〇
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，乙醇濃度為95% v/v，提取 溫度為50-70°C，優(yōu)選為60°C。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，鹽酸的加入量為浸膏體積的 4倍，鹽酸體積分?jǐn)?shù)為2 %。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，脫脂處理是采用石油醚或氯 仿萃取實(shí)現(xiàn)；優(yōu)選使用石油醚。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，所述堿為氨水。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2)中，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟⑵中，粗提物用量為200mg。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2)中，將樣品溶液進(jìn)樣，在紫外 檢測(cè)器下分別接收出峰時(shí)間100-300min內(nèi)的各目標(biāo)成分，即可分別得到leptopidine， oxohydrastinine, (-)-N-methylanadine, N-Feruloyltyramine〇
9. 根據(jù)權(quán)利要求1或8所述的方法，其特征在于：步驟（2)中，將樣品溶液進(jìn)樣，在紫 外檢測(cè)器下分別接收出峰時(shí)間120_270min內(nèi)的各目標(biāo)成分，即可分別得到1印topidine， oxohydrastinine, (-)-N-methylanadine, N-Feruloyltyramine〇
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：步驟⑵中，接收出峰時(shí)間為 120_125min的目標(biāo)成分，即可得到leptopidine ;接收出峰時(shí)間為142_157min的目 標(biāo)成分，即可得到oxohydrastinine ;接收出峰時(shí)間為207-226min的目標(biāo)成分，即 可得到（-)-N-methylanadine ;接收出峰時(shí)間為258_270min的目標(biāo)成分，即可得到 N-Feruloyltyramine〇
【文檔編號(hào)】C07D455/03GK104327071SQ201410542614
【公開(kāi)日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2014年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月29日
【發(fā)明者】丁晨旭, 張秋龍, 胡娜, 馬濤, 李文聰, 索有瑞 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所