專利名稱：用于體外診斷中風的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用于體外診斷中風(stroke)的方法和試劑盒。
背景技術：
中風，也稱為腦血管意外(CVA)，是導致每年診斷為中風的估計700，000名患者的死亡率和發(fā)病率的原因之一。目前中風在美國位列引起死亡的第三大原因。術語"中風"包括兩種非常不同的臨床背景，對其進行區(qū)分非常重要。因此，缺血性中風通常由血管堵塞引起，并且最好是在癥狀開始的三個小時內通過凝塊溶解劑(例如 t-PA)進行治療。與此相反，出血性中風由腦內出血引起的，禁止通過抗凝劑對其進行治療 (已證明這樣的治療是致死性的)。短暫性腦缺血發(fā)作(Transient ischemic attack, TIA，經(jīng)常俗稱為"小中風〃) 由腦部特定區(qū)域的供血變化引起，導致短暫的神經(jīng)機能障礙(根據(jù)定義，其持續(xù)小于M小時)；如果癥狀繼續(xù)持續(xù)，則將其分類為中風(參見例如^Transient Ischemic Attacks Stroke (CVA) =MerckManual Home Edition)。經(jīng)診斷具有TIA的患者有時被告知具有發(fā)展中風的風險。如果供血受損的時間持續(xù)幾分鐘以上，那么腦部該區(qū)域的神經(jīng)細胞死亡并且引起永久性神經(jīng)缺損。患TIA的群體的三分之一隨后具有復發(fā)的TIA并且由于永久性神經(jīng)細胞損失，三分之一患有中風(Transient ischemic attack Mount Sinai Hospital，New York)。因此，由于這些患者具有增加的發(fā)展中風的風險，鑒定TIA是有益的。在存在指示中風的癥狀(例如突然麻痹或失明、意識錯亂、嚴重頭痛、語言不清和偏癱)的患者中，中風的診斷，以及缺血性和出血性中風之間的細分目前基本上依靠計算機體層攝影(CT)。然而CT不能完全滿足需要，因為其在急性中風的診斷中評估的靈敏度小于沈％ (Chalela等人(2007)Lancet 369 :293-298)，這與缺血性中風的檢測中很差的性能 (靈敏度小于 33% )有關(Reynolds 等人(2003)Clin. Chem. 49 :1733-1739)。磁共振成象 (MRI)已顯示在急性中風(靈敏度84%，Chalela等人(2007) Lancet 369 :293-298)，特別是缺血性中風的診斷中優(yōu)于CT。然而，MRI掃描儀是昂貴的設備并且在急救室中并不總是可獲得的。因此，對于診斷中風和TIA，仍然需要可選的或補充的方法(特別是針對CT的可選的或補充的方法)。在這方面，已表明生物化學標志物可用作檢測中風的輔助手段，特別是在缺血性中風的早期檢測中。S-IOOb (星形膠質細胞活化的標志物)和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)是得到最好表征的此類標志物(Jauch等人O006)Mroke 37:2508-2513)。心臟型脂肪酸結合蛋白 (H-FABP)還被認為是有前景的標志物(Lescuyer等人Q005)Mol. Diagn. 9 :1_7)。然而，似乎由這些標志物分別提供的區(qū)分能力的臨床價值不足。因此，已提出將組合數(shù)個標志物(例如S-100b、B型神經(jīng)營養(yǎng)生長因子(BNGF) ,von Willebrand因子(vWF)、基質金屬蛋白酶-9 (MMP-9)和單核細胞趨化蛋白_1 (MCP-I))的組用于診斷缺血性中風(Reynolds等人(2003)Clin. Chem. 49 :1733-1739)。實際上，已顯示該組對癥狀發(fā)作6小時內的缺血性中風樣品提供93%的特異性和92%的靈敏度。然而，在發(fā)作3小時內，靈敏度只有87%，這可能是由于標志物的個體靈敏度/特異性太低。因此，仍然需要提供良好的個體靈敏度/特異性比率的可選的標志物，以用于單標志物測試或用于改進多標志物的組(通過增加靈敏度/特異性或通過允許降低組中標志物(其水平必須被測量)的數(shù)目)。proBNP(l-108)，108個氨基酸的前體蛋白在體內被切割以產(chǎn)生(i)腦鈉肽(也稱為BNP (32)或簡稱BNP)，其由proBNP (1-108)的32個C-末端的氨基酸組成和(ii) NT-proBNP (1-76)，其由proBNP (1-108)的76個N-末端的氨基酸組成(Giuliani等人 (2006) Clinical Chemistry 52:1054-61)。在生物學上，BNP是血壓調節(jié)劑，其主要由左心室響應體積擴張和壓力過載而釋放。已顯示proBNP (1-108)在患有嚴重心力衰竭的患者中循環(huán)(Hammerer Lercher 等人(2008)Clinical Chemistry 54:5)。發(fā)明簡述本發(fā)明基于發(fā)明人的出乎意料的發(fā)現(xiàn)單獨的proBNP(1-108)在中風檢測中具有高的區(qū)分能力(例如95%的靈敏度和95%的特異性，如在血漿樣品中測量的)。因此，本發(fā)明涉及用于體外診斷個體的中風和短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)的方法， 其包括下列步驟(a)測量個體的生物樣品中proBNP (1-108)或包含RAPRSP序列(SEQID NO 1)的 proBNP (1-108)的片段的水平；(b)將測量的水平與臨界值(cut-off value)相比較；(c)從而確定個體中是否已經(jīng)發(fā)生中風或TIA。在上述方法的一個實施方案中，本發(fā)明更特別地涉及一種方法，其包括下列步驟(a')測量個體的生物樣品中proBNP (1-108)或包含RAPRSP序列(SEQ ID N0: 1)的proBNP (1-108)的片段的水平；(b')測量個體的生物樣品中至少一個另外的中風標志物的水平；(c')將proBNP (1-108)的水平或proBNP (1-108)的片段的水平和至少一個另外的中風標志物的水平與一個或數(shù)個臨界值進行比較；(d')從而確定個體中是否已經(jīng)發(fā)生中風或TIA。在本發(fā)明的另一個實施方案中，上述方法進一步包括測量至少一個心血管疾病的標志物的水平。本發(fā)明還涉及用于診斷中風的試劑盒，其包含-至少一個適用于檢測proBNP(l-108)，或包含RAPRSP序列(SEQIDN0:1)的 proBNP (1-108)的片段的抗體；和-至少一個包含proBNP (1-108)，或包含 RAPRSP 序列(SEQ ID NO 1)的 proBNP(1-108)的片段的校準物(calibrator)，優(yōu)選其濃度為1至1000pg/ml。本發(fā)明還涉及proBNP (1-108)或包含RAPRSP序列(SEQ ID NO 1)的 proBNP (1-108)的片段用于體外診斷中風或TIA的用途。附圖簡述

圖1表示中風和對照群體中H-FABP濃度的分布(縱軸，ng/ml)。
圖2表示中風和對照群體中proBNP(1-108)濃度的分布(縱軸，pg/ml)。圖3表示中風、TIA和對照群體中proBNP (1-108)濃度的分布(縱軸，pg/ml)。圖4表示中風和對照群體中proBNP(1-108)濃度的分布(縱軸，pg/ml)。圖5表示中風和對照群體中S-IOOb濃度的分布(縱軸，ng/ml)。圖6表示中風和對照群體中NSE濃度的分布(縱軸，ng/ml)。發(fā)明詳述如本文預期的，“診斷"或確定"診斷"指確定個體中是否已經(jīng)發(fā)生中風。如本文預期的，“中風"指所有的腦血管意外。特別地，術語"中風"包括急性和慢性中風及缺血性和出血性中風。缺血性中風的特征在于腦血管的部分或全部阻塞，其可以導致由這些血管供血的腦組織的梗死和壞死。在短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)中，阻塞自發(fā)地終止，引起持續(xù)不超過M 小時的機能障礙。出血性中風的特征在于通常由腦血管破裂引起的腦內出血。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的中風選自缺血性中風和出血性中風。更優(yōu)選地，如本文預期的，中風是急性缺血性中風。有利地，本發(fā)明的方法提供早期中風診斷。對于缺血性中風而言，早期中風診斷特別重要，因為據(jù)估計，在中風癥狀開始3小時內治療阻塞的血管，將防止大多數(shù)不可逆的腦損傷。因此，優(yōu)選上述步驟(a)在個體中指示中風的至少一個癥狀開始后6小時內，更優(yōu)選 3小時內，和最優(yōu)選2小時內進行。指示中風的癥狀對本領域技術人員來說是公知的和顯著的，包括突然麻痹或失明、意識錯亂、嚴重頭痛、語言不清和偏癱。所述個體優(yōu)選是人?！?proBNP(1-108)“指 BNP(32)和 NT-proBNP(1-76)的前體。如本文預期的，“proBNP(1-108) 〃 包括所有其天然變體。例如，proBNP(1-108)由 SEQ ID NO :4 不。在體內，proBNP (1-108)經(jīng)常是部分截短的，特別地，例如通過循環(huán)的蛋白酶使其缺失N-末端側或任選地C-末端側的一個或多個氨基酸，從而形成所謂的“proBNP (1-108) 片段〃。此類proBNP(1-108)片段的一個實例，通過二肽酶切割而產(chǎn)生的proBNP(3-108)片段由 Lam 等人(2007) J.Am. Coll. Cardiol. 49 :1193-1202 描述。據(jù)信，不僅 proBNP (1-108) 具有診斷價值，而且其各種天然片段也具有診斷價值。因此，本發(fā)明不僅可依賴于測量 proBNP (1-108)的水平，還可依賴于測量proBNP (1-108)的片段的水平。表述〃 proBNP(1-108)“禾口〃 proBNP(1-108)的片段〃還包括已經(jīng)經(jīng)歷至少一種翻譯后修飾(例如磷酸化、糖基化等)的任何多肽。例如khellenberger等人Q006)Arch. Biochem.Biophys. 51 :160-6已經(jīng)表明，proBNP (1-108)是完全或部分0-糖基化的糖蛋白。如本文預期的，proBNP(1-108)的片段包含RAPRSP序列(SEQID NO 1)。該RAPRSP 序列具有被體內切割以產(chǎn)生NT-proBNP(l-76) ^P BNP(32)的proBNP(1-108)的位點。因而，RAPRSP是proBNP (1-108)特有的，并且在BNP (32)和NT-proBNP (1-76)中沒有發(fā)現(xiàn)，因此根據(jù)本發(fā)明的proBNP (1-108)的片段的定義，排除BNP (32)和NT-proBNP (1-76)。進一步優(yōu)選，根據(jù)本發(fā)明的proBNP (1-108)的片段包含!7GRKMDR序列(SEQ ID NO 2)。該序列包含在proBNP(1-108) ^ BNP(32)部分中。更優(yōu)選，proBNP(1-108)的片段包含 BNP (32)的完整序列(SEQ ID NO :3)。表述“另外的中風標志物”指除了上述proBNP(l-108)或proBNP(1-108)的片段以外的任何生物化學標志物，其水平指示中風或TIA，如上定義的。表述〃心血管疾病的標志物〃指可用于檢測或診斷心血管疾病的任何標志物。此類標志物是本領域技術人員公知的。優(yōu)選地，心血管疾病的標志物選自C反應蛋白(CRP) 和心肌肌鈣蛋白I (cTnl)。測量心血管疾病的標志物的水平在本發(fā)明的方法中可以是有利的，因為其允許排除心血管疾病作為proBNP(l-108)的水平變化的原因。優(yōu)選地，使用免疫測定測量或確定proBNP (1-108)、proBNP (1-108)的片段、至少一種另外的中風標志物、或至少一種心血管疾病的標志物的水平。如本文預期的，“免疫測定"指任何這樣的方法，其中使用至少一種與其特異性結合的化合物(或配體)確定proBNP (1-108)、proBNP (1-108)的片段、至少一種另外的中風標志物、或至少一種心血管疾病的標志物的水平。與其特異性結合的化合物(或配體) 可以是任何類型，但是優(yōu)選其為抗體、適體(aptamer)或通過噬菌體展示獲得的肽。免疫測定方法是本領域技術人員公知的，并且可以根據(jù)本領域技術人員公知的各種形式(例如以固相或均相，以一個或兩個步驟，通過夾心法或通過競爭法)進行。優(yōu)選地，可以使用在兩個配體之間(一個是捕獲配體和另一個是檢測配體)的固相夾心法。這類免疫測定對本領域對技術人員來說是尤其公知的。例如，kferian等人 (2007) Clin. Chem. 53 :866-873 的文章給出了用于分析 BNP (32)和 proBNP (1-108)的夾心免疫測定(或在2個位點上的免疫測定)的實例，其每次使用一對抗體(固定在固相中的抗體和檢測用的標記的抗體)。通過檢測方法，特別是"檢測配體"來顯示生物樣品中抗原的存在。通過識別與捕獲配體識別的位點不同的表位位點，標記的檢測配體能夠與捕獲的抗原結合。術語"標記的"指直接標記和間接標記(例如通過其他配體，直接標記它們自己，或使用標記的"親和對"試劑，例如但不限于標記的抗生物素蛋白-生物素對等)。在夾心法的情況下，優(yōu)選選擇捕獲配體以便其特異性識別患者的天然抗原上的表位，并且優(yōu)選選擇檢測配體以便其特異性識別患者的天然抗原上的另一個表位。優(yōu)選地，將捕獲配體固定在固相上。作為固相的非限定性實例，可以使用微板，特別是聚苯乙烯微板(例如NimC，Denmark出售的微板)。還可以使用固體顆?；蛑榱＃槾胖?例如由 Dynal,Merck-Eurolab (France)(商標 Es taporTM)禾口 Polymer Laboratories 生產(chǎn)的那些)，或甚至聚苯乙烯或聚丙烯試管，玻璃、塑料或硅芯片等。ELISA測定，放射免疫測定或任何其他的檢測方法可以用來顯示形成的抗原-抗體復合物的存在。因此，配體特別是抗體的不同類型的標記是可行的(放射性標記、酶標記、熒光標記等)。也可以通過基于質量累積的方法(例如表面等離子共振(SPR))，通過壓電檢測， 通過質譜法或任何其他方法(其在沒有第二標記配體的情況下允許研究配體-抗原型相互作用)進行檢測。術語"特異性的"，當它涉及配體的識別或配體與靶的結合時，指所述配體與所述靶相互作用，而基本上不與另一個靶(其在結構上與所述靶不相似)相互作用。
如本文預期的，“抗體”指屬于任何物種例如人、小鼠、大鼠、兔、山羊或駱駝的抗體?？贵w還可以是嵌合抗體，即包含來源于不同物種的部分的抗體。優(yōu)選的嵌合抗體是所謂的“人源化的”抗體，其中恒定部分％和⑦是人來源的而可變部分％和\)是其他物種，例如小鼠來源的?？梢酝ㄟ^本領域技術人員已知的任何方法，例如通過動物免疫，或通過重組法或合成法來產(chǎn)生本發(fā)明的抗體。而且根據(jù)本發(fā)明的“抗體”還包括包含所述抗體的至少一個互補位的抗體片段，例如Fab、F(ab' )2、scFv片段和駱駝單鏈抗體。本發(fā)明的抗體可以是多克隆抗體，特別是單特異性多克隆抗體，或單克隆抗體。“適體”是本領域技術人員公知的。適體是能夠特異性結合靶(特別是蛋白質靶) 的核苷酸(特別是核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸)或肽性質的化合物。特別地，Ellington 等人(1990) Nature 346 :818-22 和 Bock 等人(1992) Nature 355 :564-6 描述了核苷酸性質的適體和其產(chǎn)生。Hoppeleyler等人Q000)J.Mol Med. 78 :426-30描述了肽性質的適體和其產(chǎn)生?！删w展示〃表示用于選擇在噬菌體的衣殼上表達且由插入衣殼編碼基因中的核酸序列編碼的多肽配體的技術。該方法是本領域技術人員公知的，并且特別地由Scott & Smith (1990) Science 249 :386-390 和 Marks 等人(1991) J. Mol. Biol. 222 :581-597 描述。優(yōu)選地，可通過噬菌體展示獲得的多肽是scFv型多肽(單鏈可變片段)。特別地，Winter 等人(1994)Annu. Rev. Immunol. 12 :433-455 描述了該技術。優(yōu)選地，上述免疫測定包含靶向表位的抗體，所述表位包含RAPRSP序列(SEQ ID NO :1)。更優(yōu)選地，所述抗體由按照布達佩斯條約于2005年4月四日保藏在CNCM(國立
Institut Pasteur, 25, rue du Docteur Roux,75 724 Paris Cedex 15, France)的保藏號為1-3073的雜交瘤分泌。所述抗體特別地在國際公開案W02004/014952 中進行了描述。該抗體是有利的，因為其允許特異性檢測根據(jù)本發(fā)明的ProBNP(1-108)和 proBNP (1-108)的所有片段(除了 BNP (32)、NT_proBNP (1_76)和它們各自的片段外)，從而確保獲得proBNP (1-108)和它的多種片段的完全診斷益處。還優(yōu)選，免疫測定包含靶向包含TORKMDR序列的表位的抗體。更優(yōu)選地，所述抗體由按照布達佩斯條約由 Bio-Rad(3boulevard RaymondPoincare,92430Marnes la Coquette, France)于2007年4月13日保藏在CNCM(國立微生物保藏中心，hstitut Pasteur, 25, rue duDocteur Roux, 75 724 Paris Cedex 15, France)的保藏號為 1-3746 的雜交瘤分泌。所述抗體特別地在國際申請PCT/EP2008/060188中進行了描述。有利地，將靶向包含RAPRSP序列(SEQ ID NO 1)的表位的抗體和靶向包含 FGRKMDR序列的表位的抗體組合到相同的免疫測定中，從而允許特異性檢測根據(jù)本發(fā)明的 proBNP (1-108)或 proBNP (1-108)的片段。優(yōu)選地，當涉及proBNP (1-108)或proBNP (1-108)的片段時，上述臨界值為至少獲自顯然健康的個體群體的生物樣品中根據(jù)本發(fā)明的proBNP (1-108)或proBNP (1-108)的片段的平均水平。更優(yōu)選地，上述臨界值為至少相應于獲自顯然健康的個體群體的根據(jù)本發(fā)明的proBNP (1-108)或proBNP (1-108)的片段的水平的第75百分位數(shù)、第95百分位數(shù)或第99百分位數(shù)的值。最優(yōu)選，該臨界值為至少0、1、2、3、5、10、50或100pg/ml。當臨界值為至少0pg/ml時，其指本發(fā)明的方法的上述步驟a)和b)，或a')和c')簡單地包括確定個體的生物樣品中是否存在上述proBNP(1-108)或proBNP(1-108)的片段。
類似地，當涉及至少另外的中風標志物時，上述臨界值優(yōu)選為至少獲自顯然健康的個體群體的生物樣品中所述至少一個另外的中風標志物的平均水平。確定根據(jù)本發(fā)明的臨界值完全在本領域技術人員的能力范圍內。特別地，優(yōu)選小心測量相同性質的生物樣品中proBNP(l-108)、根據(jù)本發(fā)明的proBNP(l-108)的片段、或至少一個另外的中風標志物的水平。如本文預期的，“顯然健康的個體群體"指優(yōu)選地不存在上述指示中風的癥狀的個體。將proBNP(l-108)或proBNP(1-108)的片段的水平和至少一個另外的中風標志物的水平與一個或幾個臨界值相比較，這表示一方面ProBNP (1-108)或proBNP (1-108)的片段的水平，以及另一方面至少一個另外的中風標志物的水平，可以各自與各自的臨界值相比較，或它們可以與單個臨界值相比較。優(yōu)選，在測量proBNP (1-108)或proBNP (1-108)的片段的水平的相同生物樣品中， 測量至少另外的中風標志物的水平或至少一個心血管疾病的標志物的水平。如本文預期的，表述"生物樣品"包括取得的樣品和已經(jīng)經(jīng)歷各種處理(特別地使樣品適用于本發(fā)明的工藝和方法)的樣品。根據(jù)本發(fā)明的生物樣品可以為任何類型，然而優(yōu)選所述生物樣品選自血液樣品、血清樣品、血漿樣品、腦脊液樣品、尿液樣品和唾液樣
P
ΡΠ O
實施例實施例11.方法a.樣品在獲自中風開始后小于3小時的個體的70個血清樣品(15個出血性中風樣品 (HM)和55個缺血性中風樣品(IM))和來自顯然健康的個體的148個對照血清樣品中測定 proBNP(1-108)禾口 H-FABP 的水平。b.生物標志物的測量使用BioPlex 2200proBNP (1-108)分析(Bio-Rad)來測定 proBNP (1-108)的水平。BioPlex 2200將多種磁珠和流式細胞術組合以在完全自動化隨機存取平臺上提供多種分析物的檢測。用2種熒光團(分類染料，CLl和CU)染色磁性顆粒(8μπι直徑，羧基修飾的表面)，所述熒光團發(fā)射不同波長并且在635nm處顯著地吸收。報告熒光團β-藻紅蛋白(PE)因為其高摩爾消光系數(shù)、量子產(chǎn)率、對光漂白的抗性、無自淬滅和穩(wěn)定性而被選擇。檢測器同時測量三個波長的光2個分類染料和報告染料。BioPlex 2200proBNP(1-108)測定是兩步法夾心熒光免疫測定。在第一步中， BioPlex 2200系統(tǒng)將50 μ L患者樣品，包被有由保藏在CNCM的保藏號為1-3073的雜交瘤分泌的抗proBNP (1-108)單克隆抗體的磁性染色的珠粒和測定緩沖液組合到反應容器中。然后，在溫育11分鐘和沖洗循環(huán)后，添加與藻紅蛋白(PE)綴合的由保藏在CNCM、保藏號為1-3746的雜交瘤分泌的抗人BNP單克隆抗體，并且溫育2分鐘。在除去過量的綴合物后，使珠?；旌衔锿ㄟ^檢測器，所述檢測器通過PE熒光識別染色的珠粒和珠粒上捕獲的抗原的量。在用一組6個不同的校準物校準后，用pg/mL表示3種質量對照的水平和患者樣品結果。還用各個樣品測試兩種質量對照珠粒以提高整個系統(tǒng)的完整性。使用來自Hycult biotechnology的人H-FABP ELISA試劑盒，按照制造商的說明書，測定H-FABP的水平。c.統(tǒng)計分析用箱線圖表示根據(jù)患者狀況的生物標志物的分布，其是通過五個數(shù)值(最小觀測值，下四分位數(shù)(Ql)，中位數(shù)(Q2)，上四分位數(shù)和最大觀測值)圖形化地描述數(shù)據(jù)組的方便的方法。數(shù)據(jù)已經(jīng)用Box-Cox法標準化以遵循高斯分布并且能夠進行統(tǒng)計分析(Box， G. Ε. P.禾口 Cox，D.R. (1964) An analysis of transformations. JRSS B 26,211—246)。用下列統(tǒng)計檢驗進行對照和中風樣品之間的差異分析WilcOXOn秩和檢驗 (Wilcoxon, F. (1945)Individual comparisons by rankingmethods. Biometrics, 1, 80-8 ，其是非參數(shù)的(不需要假設統(tǒng)計分布并且其可以是學生氏t檢驗的備選檢驗)；以及Welch' s檢驗，其是意欲用于可能具有不等方差的兩個樣品的學生氏t檢驗的改進。所述分析還包括通過Benjamini/Hochber 方法(Benjamini 禾口 Y. Hochberg (1995) Controlling the False Discovery Rate :a practical andpowerful approach to multiple testing. J. R. Statist. Soc. B. Vol. 57 :289-300)校準(校正)這些檢驗方案。標志物的診斷性能由兩個指標表征靈敏度(檢測患病群體的能力)和特異性 (檢測對照群體的能力)。診斷試驗的結果可以進一步通過測定ROC(接收者操作特征)分析的曲線下的面積(AUC)來表征。ROC曲線是對多種濃度的檢驗的靈敏度(Se)和特異性 (Sp)之間的倒數(shù)關系的圖形顯示(M. H. Zweig和G. Campbell (1993) “ Receiver-operating characteristic(ROC)plots :a fundamental evaluation tool inclinical medicine". Clinical chemistry 39(8) :561-57)。2.結果a)由箱線圖表示的生物標志物的分布圖1和2分別表示中風和對照群體中H-FABP和proBNP (1-108)的濃度的分布。表1 對照和中風群體中H-FABP和proBNP (1-108)的水平
標志物群體最小值第一辟分位數(shù)中位數(shù)95X CI第三四分位數(shù)最大值IQRH-FABP對照受試者1. 02. 784. 273. 59-5. 107. 9579. 45. 17中風患者0. 22. 243. 603. 07-4. 215. 8061. 03. 55proBNP對照受試者0. 00. 401. 200. 90-1. 502. 0012. 91. 60中風患者0. 09. 0331. 0518. 15-53. 1091. 831032. 082. 80ProBNP(1-108)標志物在中風樣品中顯示比對照樣品中更高的濃度水平。然而，測量的H-FABP濃度在中風患者樣品和對照樣品之間沒有顯示顯著差異。b)差異分析測定中風樣品和對照樣品之間H-FABP和proBNP(1-108)的水平的差異的統(tǒng)計顯
著性
表2 從對照和中風群體測定的H-FABP和proBNP (1-108)標志物的濃度之間的差異分析
權利要求
1.用于體外診斷個體的中風和短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)的方法，其包括下列步驟(a)測量個體的生物樣品中proBNP(l-108)或包含RAPRSP序列(SEQIDNO 1)的 proBNP (1-108)的片段的水平；(b)將測量的水平與臨界值相比較；(c)從而確定所述個體中是否發(fā)生中風或TIA。
2.根據(jù)權利要求1的方法，其中所述proBNP(1-108)的片段進一步包含TORKMDR序列 (SEQ ID NO :2)。
3.根據(jù)權利要求1或2的方法，其中所述proBNP(1-108)的片段包含BNP(32)的序列 (SEQ ID NO :3)。
4.根據(jù)權利要求1至3任一項的方法，其中所述中風選自缺血性中風，出血性中風和短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)。
5.根據(jù)權利要求1至4任一項的方法，其中在個體的至少一個指示中風的癥狀開始后 6小時內進行步驟(a)。
6.根據(jù)權利要求1至5任一項的方法，其中用免疫測定來測定proBNP(l-108)或 proBNP (1-108)的片段的水平。
7.根據(jù)權利要求6的方法，其中所述免疫測定包含靶向表位的抗體，所述表位包含 RAPRSP 序列(SEQ ID NO :1)。
8.根據(jù)權利要求7的方法，其中所述抗體由按照布達佩斯條約于2005年4月四日保藏在CNCM(巴黎，法國)，保藏號為1-3073的雜交瘤分泌。
9.根據(jù)權利要求6至8任一項的方法，其中所述免疫測定包含靶向表位的抗體，所述表位包含!7GRKMDR 序列(SEQ ID NO 2)
10.根據(jù)權利要求9的方法，其中所述抗體由按照布達佩斯條約于2007年4月13日保藏在CNCM(巴黎，法國)，保藏號為1-3746的雜交瘤分泌。
11.根據(jù)權利要求1至10任一項的方法，其中所述臨界值為至少lpg/ml。
12.根據(jù)權利要求1至11任一項的方法，其包括下列步驟(a')測量所述個體的生物樣品中proBNP (1-108)或包含RAPRSP序列(SEQ ID N0: 1)的proBNP (1-108)的片段的水平；(b')測量所述個體的生物樣品中至少一個另外的中風標志物的水平；(c')將proBNP (1-108)或proBNP (1-108)的片段的水平和所述至少一個另外的中風標志物的水平與一個或幾個臨界值相比較；(d')從而確定所述個體中是否發(fā)生中風或TIA。
13.根據(jù)權利要求12的方法，其中在與其中測量proBNP(1-108)或proBNP (1-108)的片段的水平的生物樣品相同的生物樣品中測量至少另外的中風標志物的水平。
14.根據(jù)權利要求1至13任一項的方法，其中所述生物樣品選自血液樣品、血清樣品、 血漿樣品、腦脊液樣品、尿液樣品和唾液樣品。
15.根據(jù)權利要求1至14任一項的方法，其還包括測量至少一個心血管疾病的標志物的水平。
16.根據(jù)權利要求15的方法，其中所述至少一個心血管疾病的標志物選自CRP和 cTnlo
17. proBNP (1-108)或包含 RAPRSP 序列(SEQ ID NO 1)的 proBNP (1-108)的片段用于體外診斷中風或TIA的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于體外診斷個體的中風和短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)的方法，其包括下列步驟(a)測量個體的生物樣品中proBNP(1-108)或包含RAPRSP序列(SEQ ID NO1)的proBNP(1-108)的片段的水平；(b)將測量的水平與臨界值比較；(c)從而確定所述個體中是否發(fā)生中風或TIA。
文檔編號C07K14/58GK102203129SQ200980129461
公開日2011年9月28日 申請日期2009年7月31日 優(yōu)先權日2008年8月1日
發(fā)明者C·拉呂, I·朱利亞尼, J·蓋甘 申請人:比奧-拉德巴斯德公司