專利名稱：：作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑男碌陌被交苌锏闹谱鞣椒ㄗ鳛榻M蛋白脫乙酰基酶抑制劑的新的氨基苯基衍生物本發(fā)明涉及具有組蛋白脫乙?；?HDAC)抑制酶活性的化合物。還涉及它們的制備、含有它們的組合物以及它們?cè)隗w外和體內(nèi)抑制HDAC的用途和作為藥物的用途，例如用作抑制例如癌癥和牛皮痺的增殖病癥的藥物。已知細(xì)胞核組蛋白是負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄和其它DNA模制過(guò)程(例如復(fù)制、修復(fù)、重組和染色體分離)的組織的整合和動(dòng)力成分。其用于轉(zhuǎn)譯后的修飾，包括乙?；?、磷酸化、甲基化、遍在蛋白化和ADP-核糖基化。組蛋白脫乙?；冈诖朔Q為"HDAC，，，是催化除去蛋白質(zhì)賴氨酸殘基上的乙?；揎椀拿?，包括核心核小體組蛋白H2A、H2B、H3和H4。HDAC與在此稱為"HAT"的組蛋白轉(zhuǎn)乙酰酶一起調(diào)節(jié)組蛋白乙酰化的水平。核小體組蛋白乙酰化的平衡在許多基因的轉(zhuǎn)錄中起重要作用。組蛋白的低乙?；c凝聚染色質(zhì)結(jié)構(gòu)有關(guān)，導(dǎo)致基因轉(zhuǎn)錄的抑制，而乙?；慕M蛋白與更多開(kāi)放的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄的活化有關(guān)。已知十一種結(jié)構(gòu)上相關(guān)的HDAC,并將其分為兩類。I類HDAC由HADC1、2、3、8和11組成，而II類HADC由HDAC4、5、6、7、9和10組成。第三類HDAC在結(jié)構(gòu)上與I類和II類HDAC不相關(guān)。I/II類HDAC按照鋅-依賴的機(jī)理起作用，而III類HDAC是NAD-依賴的。除組蛋白之外，其它的蛋白質(zhì)也是乙?；牡孜铮貏e是轉(zhuǎn)錄因子，例如p53、GATA-1和E2F;核受體，例如糖皮質(zhì)激素受體、曱狀腺受體、雌激素受體；和細(xì)胞-周期調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)，例如pRb。乙?；牡鞍踪|(zhì)已經(jīng)與蛋白質(zhì)穩(wěn)定相聯(lián)，如p53穩(wěn)定、輔因子的補(bǔ)充和增強(qiáng)的DNA結(jié)合。p53是肺瘤抑制基因，可根據(jù)許多應(yīng)力信號(hào)(例如DNA損傷)誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯或細(xì)胞程序死亡。對(duì)于p53誘導(dǎo)的細(xì)胞周期停滯，主要的靶標(biāo)似乎是p21基因。除了被p53活化，已經(jīng)通過(guò)p21與細(xì)胞周期蛋白/依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶配合物的結(jié)合證明其導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯在G1和G2相，在衰老期間向上調(diào)節(jié)，以及與增殖細(xì)胞核抗原相互作用。HDAC抑制劑的研究指出其在細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞分化、細(xì)胞程序死亡和轉(zhuǎn)化的顯型的反轉(zhuǎn)中起重要作用。例如，抑制劑TrichostatinA(TSA)導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯在Gl和G2相、恢復(fù)不同細(xì)胞系的轉(zhuǎn)化的顯型和誘導(dǎo)Fnend白血病細(xì)胞的分化等。已經(jīng)報(bào)道了TSA(和辛二?；桨樊惲u肟酸SAHA)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)終末分化和阻止小鼠體內(nèi)腫瘤的形成(Finninetal.,Nature,401:188-1931999)。還報(bào)道了TrichostatinA用于纖維化的治療，例如肝臟纖維化和肝硬化(Geertsetal.,歐洲專利申請(qǐng)EP0827742，1998年3月11日公開(kāi))。HDAC抑制劑的藥效基團(tuán)由與HDAC的含鋅活性位點(diǎn)相互作用的金屬結(jié)合區(qū)、連接區(qū)和與活性點(diǎn)邊緣上的殘基相互作用的表面識(shí)別區(qū)或去t端區(qū)《且成。還報(bào)道過(guò)HDAC的抑制劑誘導(dǎo)p21基因表達(dá)。通過(guò)染色質(zhì)重制，然后乙?；趐21啟動(dòng)子區(qū)域中的組蛋白H3和H4，促進(jìn)了借助這些抑制劑的p21基因轉(zhuǎn)錄激活。這種p21的活化以不依賴p53的方式發(fā)生，因此HDAC抑制劑在具有突變的p53基因的細(xì)胞中起作用，突變的p53基因是許多腫瘤的檢-瞼標(biāo)記。此外，HDAC抑制劑可以具有間接的活性，例如增加宿主的免疫應(yīng)答和抑制胂瘤的血管生成，因此可以抑制原發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)和阻礙轉(zhuǎn)移(Maietal.,MedicinalResearchReviews,25:261-309,2005)。鑒于如上所述，HDAC抑制劑在細(xì)胞增殖疾病或病癥(包括具有突變p53基因的腫瘤)的治療中可能具有巨大的潛能。2003年8月14曰乂>開(kāi)的專利申請(qǐng)EP14722167>開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑碾p環(huán)異輕肝酸鹽(bicyclichydroxamate)。此外，在2003年9月18日公開(kāi)的專利中請(qǐng)EP1485099、EP1485348、EP1485353、EP1485354、EP1485364、EP1485365、EP1485370、EP1485378中公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑娜〈倪咪诨滓Щ惲u肟酸類，而EP1485365^>開(kāi)了R306465。在2003年10月9日公開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1492534公開(kāi)了作為HDAC抑制劑的含有哌。秦連接基團(tuán)的氨基甲酸化合物。在2003年10月23日公開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1495002公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑娜〈倪咪诨交綍貂０坊衔?。2003年11月13日公開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1501508公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑谋锦０奉?。白脫乙酰基酶抑制劑的衍生物，在芳基基團(tuán)和異羥肟酸之間含有烷基連接基。2004年2月12日公開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1525199公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑?雜)芳基烯基取代的雙環(huán)異羥肟酸類。2004年6月24日公開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1572626公開(kāi)了作為藥理學(xué)試劑的亞芳基羧酸(2-氨基-苯基)-酰胺衍生物。2004年7月29日公開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1581484公開(kāi)了具有抗炎和抗胂瘤活性的N-羥基-苯曱酰胺衍生物。2004年7月29日^^開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1585735乂>開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰基酶抑制劑的取代芳基異羥肟酸鹽衍生物。2004年8月19日公開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1592667公開(kāi)了作為藥理學(xué)試劑的單-酰化的O-苯乙胺衍生物。2004年8月19日公開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1590340公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰基酶抑制劑的二氨基次苯基衍生物。2004年8月26日公開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1592665公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑谋郊柞０费苌?。2004年8月26日公開(kāi)的專利申請(qǐng)WO04/072047公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑倪胚犷?、苯并咪唑類和萘并咪唑類。2004年9月30日公開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1608628公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑姆欠枷汶s環(huán)系統(tǒng)連接的異羥肟酸鹽。2004年10月14日^A開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1613622^^開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑姆粫?shū)于生物。2004年10月28日^^開(kāi)的專利申請(qǐng)EP1611088^^開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰基酶抑制劑的異羥肟酸鹽衍生物。2005年3月31日公開(kāi)的專利中請(qǐng)WO05/028447公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑谋讲⑦溥蝾?。2005年4月7日公開(kāi)的專利申請(qǐng)WO05/030704和W005/030705公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑谋郊柞０奉?。2005年5月6日公開(kāi)了專利申請(qǐng)WO05/040101公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑孽；暹B接的和磺酰脲連接的異羥肟酸類。2005年5月6日公開(kāi)的專利申請(qǐng)WO05/040161公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑穆?lián)芳基連接的異羥肟酸類。2005年8月18日公開(kāi)的專利申請(qǐng)WO05/075469公開(kāi)了作為組蛋白脫乙?；敢种苿┑泥邕蚧惲u肟酸類和噻二唑基異羥肟酸類。2005年9月22日公開(kāi)的專利申請(qǐng)WO05/086898公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰基酶抑制劑的雜戊環(huán)異羥肟酸類。2005年10月6日公開(kāi)的專利申請(qǐng)WO05/092899公開(kāi)了作為組蛋白脫乙酰基酶烯基苯酰胺類。本發(fā)明的化合物在結(jié)構(gòu)上、藥理學(xué)活性和/或藥理學(xué)效價(jià)方面與先有技術(shù)不同。要解決的問(wèn)題是提供具有高酶催化活性和細(xì)胞活性的組蛋白脫乙?；敢种苿?，其具有提高的生物利用度和/或體內(nèi)效價(jià)。本發(fā)明的新化合物解決了上述問(wèn)題。本發(fā)明的化合物顯示了出色細(xì)胞活性。在細(xì)胞的內(nèi)和體內(nèi)水平，其均具有很高的p21基因活化能力。它們具有所希望的藥物代謝動(dòng)力學(xué)分布圖和對(duì)P450酶的低親合性，這降低了藥物-藥物相互作用的風(fēng)險(xiǎn)，并具有較寬的安全界限。本發(fā)明的化合物的有益特性是代謝穩(wěn)定性、溶解度和/或p21誘導(dǎo)性能。更特別的是本發(fā)明的化合物在水溶液中具有提高的溶解度和/或在體內(nèi)具有提高的p21啟動(dòng)子誘導(dǎo)性能。其N-氧化物形式、藥學(xué)可接受的加成鹽和立體化學(xué)異構(gòu)形式，其中n是整數(shù)0、1或2,并且當(dāng)n是0時(shí)，表示直接鍵；m是整數(shù)1或2;X是N或CH;Y是O、S或NR8;其中RS是氫、cl6烷基、Cw烷氧基d—6烷基、(^3.6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烷基甲基、苯基d-6烷基、-0(=0)-01119尺1()或-3(=0)2-:^(013)2;其中各119和111()獨(dú)立地是氫、氨基或氨基d-6烷基；以及當(dāng)Y是NR8，并且W在吲哚基的7-位時(shí)，112和R8可一起形成二價(jià)基團(tuán)-(CH2)2-(a腸l)，或-(CH2)3-(a-2);W是氫、Cw烷基、羥基Cw烷基、氰基d-6烷基、d-6烷基磺?；?、Cl6烷基羰基或者單-或二(C^烷基)氨基磺?；?；W是氬、羥基、氨基、卣代、Cw烷基、氰基、C2—6烯基、多卣代d-6烷基、硝基、苯基、Cw烷基羰基、羥基羰基、d-6烷基羰基氨基、Cm烷氧基或者單-或二(Cw烷基)氨基；R"是羥基或氨基；w是氫、噻吩基、呋喃基或苯基，并且各噻吩基、呋喃基或苯基可任選被以下基團(tuán)取代卣代、氨基、硝基、氰基、羥基、苯基、Cj-6烷基、(二Cw烷基)氨基、d-6烷基氧基、苯基Cw烷基氧基、羥基d—6烷基、Cw烷基氧基羰基、羥基羰基、d-6烷基羰基、多卣代d-6烷基氧基、多卣代Cw烷基、d-6烷基磺?；⒘u基羰基Cw烷基、d—6烷基羰基氨基、氨基磺?；?、氨基磺酰基Cw烷基、異噁唑基、氨基羰基、苯基C^6烯基、苯基C3-6炔基或吡啶基C3-6炔基；R5、116和W各自獨(dú)立地是氫、氨基、硝基、呋喃基、卣代、Cw烷基、Cw烷基氧基、三氟曱基、噻吩基、苯基、C"烷基羰基氨基、氨基羰基d-6烷基或-C^C-CH2-R11。術(shù)語(yǔ)"組蛋白脫乙?；敢种苿?或"組蛋白脫乙酰基酶的抑制劑"用來(lái)表示能夠與組蛋白脫乙?；赶嗷プ饔貌⒁种破浠钚?，更具體地講是抑制其酶活性的化合物。抑制組蛋白脫乙?；该富钚砸馕吨档徒M蛋白脫乙?；笍慕M蛋白除去乙酰基的能力。優(yōu)選的，此抑制是特定的，即，所述組蛋白脫乙酰基酶抑制劑在一定濃度下降低組蛋白脫乙?；笍慕M蛋白除去乙?；哪芰Γ龅臐舛鹊陀谠撘种苿┊a(chǎn)生其它不相關(guān)生物效應(yīng)的濃度。在上述定義和在下文中所用的卣代是一般指氟代、氯代、溴代和碘代；d.2烷基是指直鏈飽和烴基團(tuán)，其具有1或2個(gè)碳原子，例如甲基或乙基；Cw烷基是指C^烷基和具有3-6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的飽和烴基，例如例如丙基、丁基、l-甲基乙基、2-曱基丙基、戊基、2-甲基-丁基、己基、2-甲基戊基等；多鹵代Cw烷基表示含有三個(gè)相同或不同卣代取代基，例如三氟曱基；C^烯基表示含一個(gè)雙鍵的直鏈和支鏈烴基并具有2到6個(gè)碳原子，例如例如乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、3-曱基-2-丁烯基等；C3—6炔基是指含一個(gè)三鍵的直鏈和支鏈烴基并具有3到6個(gè)碳原子，例如例如2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、3-己炔基等；Cw環(huán)烷基包括具有3到7個(gè)碳的環(huán)烴基，如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、環(huán)庚基等。藥學(xué)可接受的加成鹽包括藥學(xué)可接受的酸加成鹽和藥學(xué)可接受的堿加成鹽。在上文提到的藥學(xué)可接受的酸加成鹽是指包括式(I)化合物能形成的治療活性的無(wú)毒的酸加成鹽形式。具有堿性的式(I)化合物可以通過(guò)將所述堿形式用合適的酸處理轉(zhuǎn)化為它們的藥學(xué)可接受的酸加成鹽。合適的酸包括例如無(wú)才幾酸，如氫卣酸，例如鹽酸或氫溴酸；>5克酸；硝酸；磷酸等酸；或有機(jī)酸，例如乙酸、三氟醋酸、丙酸、羥乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸(即，丁二酸)、馬來(lái)酸、富馬酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、檸檬酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸、對(duì)曱苯磺酸、環(huán)拉酸、水楊酸、對(duì)氨基水楊酸、樸酸等酸。具有酸性的式(I)化合物通過(guò)將所述酸形式用合適的有機(jī)或無(wú)機(jī)堿處理可轉(zhuǎn)化為它們藥學(xué)可接受的堿加成鹽。合適的堿鹽形式包括例如銨鹽、堿金屬鹽和堿土堿金屬鹽(例如鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、4丐鹽等)、與有機(jī)堿形成的鹽(例如千星青霉素鹽、N-曱基-D-葡萄糖胺鹽、海巴胺鹽(hydrabaminesalts))以及與例如精氨酸、賴氨酸等氨基酸形成的鹽。術(shù)語(yǔ)"酸或堿加成鹽"還包括式(I)化合物能形成的水合物和溶劑加成形式。這類形式的實(shí)例例如是水合物、醇化物等。這里使用的術(shù)語(yǔ)"式(I)化合物的立體化學(xué)異構(gòu)形式"定義為所有式(I)化合物可能具有的、由相同原子以相同鍵序組成但是具有不同的不可互換的三維結(jié)構(gòu)的可能的化合物。除非另作說(shuō)明或指示，化合物的化學(xué)命名包括所述化合物可能具有的所有可能的立體化學(xué)異構(gòu)形式的混合物。所述混合物可能含所述化合物基本分子結(jié)構(gòu)的所有非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體和/或?qū)τ钞悩?gòu)體。式(I)化合物的所有立體化學(xué)異構(gòu)形式的純凈形式或彼此混合形式均包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。式(I)化合物的N-氧化物形式包括那些式(I)化合物，其中一個(gè)或多個(gè)氮原子被氧化成所謂的N-氧化物，特別是其中哌啶基、哌嗪基或噠嗪基的一個(gè)或多個(gè)氮被氧化的那些N-氧化物。一些式(I)化合物可能還以其互變異構(gòu)形式存在。盡管這類形式未在上式中明確指出，但是也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。在下文中無(wú)論何時(shí)使用，術(shù)語(yǔ)"式(I)化合物，，還包括藥學(xué)可接受的加成鹽和所有的立體異構(gòu)形成。這里使用的術(shù)語(yǔ)"組蛋白脫乙酰基酶"和"HDAC"用于表示從在組蛋白N-末端的賴氨酸殘基的s-氨基除去乙?；囊幌盗忻傅娜魏我环N。除非上下文另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)"組蛋白"用于表示來(lái)自任何物種的任何組蛋白蛋白質(zhì)，包括H1、H2A、H2B、H3、H4和H5。人HDAC蛋白質(zhì)或基因產(chǎn)品非限制性地包括HDAC-1、HDAC-2、HDAC-3、HDAC-4、HDAC畫(huà)5、HDAC誦6、HDAC國(guó)7、HDAC國(guó)8、HDAC國(guó)9、HDAC-10和HDAC-ll。所述組蛋白脫乙?；高€可來(lái)自原生動(dòng)物或真菌來(lái)源。第一組感興趣的化合物包括其中W的不是氬的那些式(I)化合物。第二組感興趣的化合物包括被下列一個(gè)或多個(gè)條件限定的那些式(I)化合物a)n是0或1;b)m是1或2;c)X是N或CH;d)Y是NR8，其中R8是氬、Cw烷基、(:3_6環(huán)烷基或(^6環(huán)烷基甲基；e)W是氫、Cw烷基、羥基d-6烷基或d-6烷基磺?；籪)f是氫或卣代；g)R"是氨基；h)W是氫或噻吩基；和i)R5、116和117各為氫。第三組感興趣的化合物包括被下列一個(gè)或多個(gè)條件限定的那些式(I)化合物a)n是0或1;b)m是1或2;c)X是N或CH;d)Y是NR8,其中R8是氫、Cw烷基、(:3-6環(huán)烷基或C^環(huán)烷基甲基；e)W是氫、d-6烷基、羥基Cw烷基、Cw烷基羰基或d-6烷基磺酰基；f)f是氫或卣代；g)W是氨基；h)R4是氫；和i)R5、116和117各為氳。第四組感興趣的化合物包括被下列一個(gè)或多個(gè)條件限定的那些式OO化合物a)n是0或1;b)m是1或2;c)X是N或CH;d)Y是NR8,其中RS是氫、Cw烷基、C3-6環(huán)烷基或C3-6環(huán)烷基甲基；e)W是氫、Cw烷基、羥基d—6烷基、d—6烷基羰基或CL6烷基磺?；籪)R"是氫或卣代；g)W是氨基；h)W是氫或噻吩基；和i)R5、R6和R7各為氫。感興趣的化合物的優(yōu)選組包括被下列一個(gè)或多個(gè)條件限定的那些式(I)化合物a)n是1;b)m是1或2;c)X是N或CH;d)Y是NR8，其中RS是d-6烷基例如甲基或乙基；e)R1是氫、羥基d-6烷基或d-6烷基磺?；籪)W是氫或鹵代例如氟代或氯代，尤其是在4-、5-或7-位；g)W是氨基；h)R"是氫或噻吩基；和i)R5、116和117各為氫。感興趣的化合物的最優(yōu)選組包括,皮下列一個(gè)或多個(gè)條件限定的那些式(I)化合物a)n是1;b)m是1;c)X是N;d)Y是NR8,其中RS是甲基；e)W是氫；f)W是氫或卣代例如氟代或氯代，尤其是在4-、5-或7-位；g)R3是-NH2;h)W是氫或2-噻吩基；和i)R5、116和117各為氬。特別優(yōu)選的式(I)化合物是化合物No.2,即下式化合物式(I)化合物、其藥學(xué)可接受的鹽以及其N-氧化物和立體化學(xué)異構(gòu)形式可以以常規(guī)方式制備。起始物質(zhì)和一些中間體是已知的化合物，并且是商業(yè)可得的，或者可以根據(jù)本領(lǐng)域公知的常規(guī)反應(yīng)操作或發(fā)專利申i青EP1485099、EP1485348、EP1485353、EP1485354、EP1485364、EP1485365、EP1485370和EP1485378中所述制備。一些制備方法將在下文更詳細(xì)描述。獲得最終式(I)化合物的其它方法描述于實(shí)施例。式(iyft合物可以通過(guò)將式(n)中間體(其中M表示氫或石成金屬如鈉或鋰)與式(ni)化合物在堿例如三乙胺和苯并三唑-i-基氧基-三吡咯烷并-磷徵六氟磷酸酯(PyBOP)存在下反應(yīng)來(lái)制備。—所述反應(yīng)是在適宜的溶劑例如四氫呋喃或二氯曱烷或其混合物中進(jìn)行的?；蛘?，式(i)化合物可以通過(guò)在適宜的溶劑例如二氯甲烷中將式(n)化合物轉(zhuǎn)化成?；壤缤ㄟ^(guò)用磺酰氯(SOCl2)處理，然后將所得酰基氯化合物與式(ni)化合物在堿例如吡啶存在下在適宜的溶劑例如二氯曱烷或THF中反應(yīng)。通過(guò)本領(lǐng)域已知的反應(yīng)或官能團(tuán)轉(zhuǎn)化，式(I)化合物還可以相互轉(zhuǎn)化，其取決于在該分子中的其它基團(tuán)的敏感性，例如羧酸酯類水解成相應(yīng)的羧酸或醇；酰胺類水解成相應(yīng)的羧酸和胺類；腈類水解成相應(yīng)的酰胺類；通過(guò)本領(lǐng)域已知的重氮化反應(yīng)接著由氫置換所述的重氮基，苯基上的氨基可以被氫取代；醇類可以轉(zhuǎn)化成酯類和醚類；伯胺類可以轉(zhuǎn)化成仲胺類或叔胺類；雙鍵可氫化成相應(yīng)的單鍵；在適宜的鈀催化劑存在下通過(guò)插入一氧化碳，苯基上的碘基團(tuán)可以轉(zhuǎn)化成酯基。酸、i與適宜的堿:屬石成例如i氧化鈉，在^t宜的溶劑如乙醇中，通常在回流下反應(yīng)來(lái)制備。以類似的方式，式(III)中間體可以如上所述通過(guò)將式(IVa)中間體與式(Va)中間體反應(yīng)來(lái)制備?！贘以通遼付式(1V)甲l曰J體與式(V1)甲間體(其中w是適宜的離去基團(tuán)例如，例如卣代如氟、氯、溴或硤，或磺酰氧基團(tuán)Cp烷基O、<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>式(m)中間體可以通過(guò)將式(iv)的羧酸乙酯與適宜的式(v)的醛(其中t是O或1),在適宜的試劑例如硼氬化鈉如四氪硼化鈉存在下，在適宜的溶劑例如醇如甲醇中反應(yīng)來(lái)制備。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>15如曱基磺?；趸?、4-甲基苯基磺酰基氧基等)反應(yīng)來(lái)制備。該反應(yīng)可在反應(yīng)惰性溶劑中進(jìn)行，該溶液例如，例如醇如甲醇、乙醇、2-曱氧基國(guó)乙醇、丙醇、丁醇等；醚如4,4國(guó)二嗯烷、l,l'-氧基二丙烷等；酮如4畫(huà)曱基-2-戊酮或N,N-二曱基甲酰胺，硝基苯，乙腈等。添加適宜的堿例如堿金屬的或堿土金屬的碳酸鹽或碳酸氫鹽，例如三乙胺或碳酸鈉，可以用于清除在反應(yīng)期間釋放的酸。少量的適宜的金屬碘化物如碘化鈉或^典化鉀可以^皮加入以促進(jìn)該反應(yīng)。攪拌可以增強(qiáng)反應(yīng)的速度。該反應(yīng)可以方^f更地在室溫至反應(yīng)混合物回流溫度的溫度范圍內(nèi)進(jìn)4亍，如果需要，該反應(yīng)可以在加壓下進(jìn)行。以類似的方式，式(III)中間體可以如上所述通過(guò)將式(VII)中間體與式(vni)中間體(其中w是適宜的離去基團(tuán))反應(yīng)來(lái)制備。式(I)化合物和一些中間體可能在其結(jié)構(gòu)中具有至少一個(gè)立體中心。該立體中心可以R或S構(gòu)象存在。在上述方法中制備的式(I)化合物通常是對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物，所述對(duì)映異構(gòu)體可用本領(lǐng)域已知的拆分方法彼此分離。式(I)的外式。隨后分離所述非對(duì)映體鹽形式，例如通過(guò)選擇結(jié)晶或分級(jí)結(jié)晶，然后用堿釋出對(duì)映異構(gòu)體。分離式(I)化合物對(duì)映異構(gòu)體形式的另一種方法涉及用手性固定相的液相色譜。所述純立體化學(xué)異構(gòu)形式還可從合適原料的相應(yīng)純立體化學(xué)異構(gòu)形式獲得，條件是反應(yīng)立體選擇性地發(fā)生。如果需要特定的立體異構(gòu)體，優(yōu)選通過(guò)立體有擇的制備方法合成所述化合物。這些方法使用對(duì)映異構(gòu)純的原料是有利的。式(I)化合物、其藥學(xué)可接受的酸加成鹽和立體異構(gòu)形式具有有價(jià)值的藥理學(xué)特性，因?yàn)樗鼈兙哂薪M蛋白脫乙?；?HDAC)抑制效果。本發(fā)明提供了一種通過(guò)給予有效量的本發(fā)明化合物抑制細(xì)胞(包括轉(zhuǎn)化的細(xì)胞)異常生長(zhǎng)的方法。細(xì)胞的異常生長(zhǎng)指的是不受正常調(diào)節(jié)機(jī)制(例如接觸抑制喪失)支配的細(xì)胞生長(zhǎng)。這包括腫瘤生長(zhǎng)的抑制，通過(guò)導(dǎo)致癌細(xì)胞生長(zhǎng)停滯、終末分化和/或細(xì)胞程序死亡而直接抑制，以及抑制腫瘤的新血管形成而間接抑制。本發(fā)明還提供一種通過(guò)給受試者給予有效量的本發(fā)明化合物抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法，該受試者例如是需要這類治療的哺乳動(dòng)物(特別是人)。特別是，本發(fā)明提供了一種通過(guò)給予有效量的本發(fā)明化合物抑制腫瘤生長(zhǎng)的方法?？梢种频哪[瘤的實(shí)例包括但不限于肺癌C例如腺癌，并且包括非小細(xì)胞肺癌)、胰癌(例如，胰腺癌，例如外分泌胰腺的癌)、結(jié)腸癌(例如，結(jié)腸直腸癌，例如結(jié)腸&泉癌和結(jié)腸l^瘤)、前列&泉癌(包括前期病變)、淋巴系統(tǒng)的造血腫瘤(例如，急性淋巴細(xì)胞性白血病、B-細(xì)胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤)、骨髓性白血病(例如，急性髓性白血病(AML))、曱狀腺小嚢癌、脊髓發(fā)育不良綜合癥(MDS)、間質(zhì)源性腫瘤(例如，纖維內(nèi)瘤和;f黃紋肌肉瘤)、黑素瘤、畸胎癌、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、皮膚良性腫瘤(例如，角化棘皮瘤)、乳房癌(例如，前期乳腺癌)、腎癌、卵巢癌、膀胱癌和表皮癌。根據(jù)本發(fā)明的化合物可以用于其它的治療目的，例如a)在用于治療癌癥的對(duì)腫瘤放射照射之前、期間或之后通過(guò)給予本發(fā)明化合物促進(jìn)腫瘤對(duì)放射療法的敏感性；b)治療關(guān)節(jié)病和骨病理學(xué)病癥，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、幼年關(guān)節(jié)炎、痛風(fēng)、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡；c)抑制平滑肌細(xì)胞增殖，包括血管增殖病癥、動(dòng)脈粥樣硬化和再狹窄；d)治療炎癥和與皮膚病癥，如潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病、過(guò)敏性鼻炎、移植物抗宿主疾病(graftvs.hostdisease)、結(jié)膜炎、哮喘、ARDS、貝切特氏病、移植排斥反應(yīng)、蕁麻疹、過(guò)敏性皮炎、斑禿、硬皮病、皮滲、濕滲、皮肌炎、痤瘡、糖尿病、全身性紅斑狼癡、川崎病、多發(fā)性硬化、肺氣胂、嚢性纖維化和慢性支氣管炎；e)治療子宮內(nèi)膜異位、子宮平滑肌瘤、功能障礙性子宮出血和子宮內(nèi)膜增生；f)治療眼的血管化，包括侵襲視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜血管的血管病變；g)治療心臟功能紊亂；h)抑制免疫抑制癥狀，如治療HIV感染；i)治療腎功能紊亂；j)抑制內(nèi)分泌異常；k)抑制葡萄糖異生作用的功能紊亂；l)治療神經(jīng)病，如帕金森氏癥，或治療導(dǎo)致認(rèn)知異常的神經(jīng)病，例如阿爾茨海默氏病或與神經(jīng)元疾病相關(guān)的聚谷氨酰胺病(polyglutamine);m)治療精神錯(cuò)亂，例如精神分裂癥、雙相型障礙、抑郁癥、焦慮和精神異常；n)抑制神經(jīng)肌肉的病變，例如肌萎縮性側(cè)索硬化；o)治療脊髓性肌萎縮；p)治療其它的受基因加強(qiáng)表達(dá)治療作用的病癥；q)加強(qiáng)基因療法；r)抑制脂肪生成；s)治療寄生蟲(chóng)病，如瘧疾。因此，本發(fā)明公開(kāi)了用作藥物的式(I)化合物，以及這些式(I)化合物在制備治療一種或多種上述病癥的藥物中的用途。式(I)化合物、其藥學(xué)可接受的酸加成鹽和其立體異構(gòu)形式具有有-階值的診斷特性，因?yàn)樗鼈兛捎糜跍y(cè)定或確定生物樣品中的HDAC，包括:;險(xiǎn)測(cè)或測(cè)定在標(biāo)記^[匕合物和HDAC之間配合物的形成。所述片全測(cè)或確定方法可以4吏用用標(biāo)記試劑標(biāo)記的4匕合物，標(biāo)i己試劑例如是放射性同位素、酶、熒光物質(zhì)、發(fā)光物質(zhì)等。放射性同位素的實(shí)例包括心1251、mI、3H和14C。酶通常通過(guò)合適底物的結(jié)合，接著催化可檢測(cè)反應(yīng)來(lái)檢測(cè)酶。酶的實(shí)例包括例如(3-半乳糖苷酶、P-葡萄糖苦酶、堿性磷酸酶、過(guò)氧化物酶和蘋(píng)果酸脫氫酶，優(yōu)選辣根過(guò)氧化酶。發(fā)光物質(zhì)包括例如魯米諾、魯米諾衍生物、螢光素、水母發(fā)光蛋白和安光素酶。生物樣品可以定義為身體組織或體液。體液的例子是腦脊液、血液、血漿、血清、尿5痰液、唾液等o考慮到本發(fā)明化合物有用的藥理學(xué)特性，其可配制到多種藥物形式中用于給藥。為了制備本發(fā)明的藥物組合物，有效量特定的化合物以堿或酸加成鹽的形式作為活性成分與藥學(xué)可接受的載體完全混合，載體可以采用多種形式，取決于希望給藥的制劑的形式。這些藥物組合物理想地是適合的單元?jiǎng)┬?，?yōu)選用于口服、直腸給藥、經(jīng)皮給藥或腸道外注射。例如，在口服劑型組合物的制備中，可使用任何常用的藥物介質(zhì)，例如，例如在口服液體藥劑例如懸浮液、糖漿劑、酏劑和溶液的情況下，使用水、二醇、油、醇等；在粉末、丸、膠嚢和片的情況下使用固體載體如淀粉、糖、高嶺土、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等。由于給藥容易，片劑和膠嚢是最有利的口服單位劑型，在這樣的情況下，顯然使用的是固體藥物載體。對(duì)于腸道外給藥的組合物，雖然可以包括其它成分，例如助溶成分，但是載體通常含有無(wú)菌水，至少占大部分。例如，可制備可注射的溶液，其中載體包括生理鹽水、葡萄糖溶液或生理鹽水和葡萄糖溶液的混合物。也可制備可注射的懸浮液，在這樣的情況下，可使用合適的液體載體、助懸劑等。在適用于經(jīng)皮給藥的組合物中，載體任選含有滲透增強(qiáng)劑和/或合適的潤(rùn)濕劑，任選與比例較小的任何性質(zhì)的合適添加劑結(jié)合，添加劑對(duì)皮膚不產(chǎn)生顯著的有害影響。所述添加劑可促進(jìn)對(duì)皮膚的給藥和/或有助于制備所需組合物。這些組合物可以多種方式給藥，例如作為透過(guò)皮膚起作用的貼片、作為點(diǎn)滴劑(spot-on)或作為軟膏。以劑量單元形式配制上述藥物組合物對(duì)于方便給藥和用量的一致性是特別有益的。在說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中所用的單位劑型指的是物理上地不連續(xù)的、合適作為單位劑量的單位，每個(gè)單位含有預(yù)定量的活性成分，適于產(chǎn)生所需的治療效果，并與需要的藥物載體結(jié)合。這樣的單位劑型的例子是片劑(包括劃痕片劑或包衣片劑)、膠嚢、丸劑、粉劑包、扁嚢劑(wafers)、可注射的溶液或懸浮液、茶匙劑、湯匙劑等，及其分隔開(kāi)的多重劑量組合。從在下文中提供的測(cè)試結(jié)果，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地確定有效量。通常，治療有效量可以從0.005mg/kg體重到100mg/kg體重，特別是從0.005mg/kg體重到10mg/kg體重。在一天內(nèi)將需要的劑量分成兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或更多個(gè)小劑量以合適的間隔給藥可能是適當(dāng)?shù)摹Ｋ鲂┝靠梢耘渲瞥蓡卧獎(jiǎng)┝啃问?，例如每個(gè)單元?jiǎng)┝啃问胶泻?.5-500mg、特別是10mg-500mg的活性成分。作為本發(fā)明的另一個(gè)方面，提出了HDAC-抑制劑與另一抗癌劑組合，特別是用作藥物，更準(zhǔn)確地說(shuō)是在癌癥或相關(guān)疾病的治療中。對(duì)于上述病癥的治療，本發(fā)明的化合物可有利地與一種或多種其它藥劑聯(lián)合使用，更具體地講是與其它的抗癌劑聯(lián)合使用。抗癌劑的實(shí)例是4白配位^:合物，例如順輛、卡柏或奧沙利鉑；-紫杉烷化合物，如紫杉醇(紫杉醇)或多西紫杉醇；-拓樸異構(gòu)酶I抑制劑，如喜樹(shù)堿化合物，例如伊立替康或托泊替康；-拓樸異構(gòu)酶II抑制劑，如抗胂瘤鬼臼毒素衍生物，例如依托泊苷或替尼泊苷；-抗腫瘤長(zhǎng)春花生物>喊，例如長(zhǎng)春》成、長(zhǎng)春新;成或長(zhǎng)春瑞濱；-抗鐘瘤核苦衍生物，例如5—氟尿嘧啶、吉西他濱或卡培他濱；-烷基化劑，如氮芥或亞硝基脲，例如環(huán)磷酰胺、苯丁酸氮芥、卡莫司汀或洛莫司?。?抗腫瘤蒽環(huán)素(anthracycline)衍生物，例如柔紅霉素、多柔比星、伊達(dá)比星或米托蒽醌；國(guó)HER2抗體，例如曲妥單抗(曲妥單抗)；-雌激素受體拮抗劑或選擇性的雌激素受體調(diào)節(jié)劑，例如他莫昔芬、托瑞米芬、屈洛昔芬、氟維司群(faslodex)或雷洛昔芬；-芳香酶(芳香酶)抑制劑，如依西美坦、阿那曲唑、來(lái)曲唑(letrazole)和伏氯哇；-分化劑，如類視黃醇、維生素D和維甲酸代謝作用阻滯劑(RAMBA),例如異維生素A酸(accutane);-DNA轉(zhuǎn)曱基酶抑制劑，例如氮胞苷；-激酶抑制劑，如flav叩eridol、曱磺酸伊馬替尼或吉非替尼(gefitinib);國(guó)法尼基4爭(zhēng)4b酶(farnesyltransfemse)承卩制劑；-其它的HDAC抑制劑；-泛素-蛋白酶體途徑抑制劑，例如萬(wàn)珂(Velcade);或-yondelis。在此所用的術(shù)語(yǔ)"柏配位化合物"表示任何抑制胂瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的鉑配位化合物，其提供離子形式的鉑。術(shù)語(yǔ)"紫杉烷化合物"表示具有紫杉烷環(huán)系的一類化合物，其與紫杉屬(Taxus)某些樹(shù)種的萃取物相關(guān)或由所述萃取物書(shū)f生。術(shù)語(yǔ)"拓樸異構(gòu)酶抑制劑"用于表示能夠改變真核細(xì)胞內(nèi)DNA拓樸結(jié)構(gòu)的酶。它們對(duì)于重要的細(xì)胞功能和細(xì)胞增殖很關(guān)鍵。在真核細(xì)胞中有兩種類型的拓樸異構(gòu)酶，即I型和II型。拓樸異構(gòu)酶I是大約100,000分子量的單體酶。所述酶與DNA結(jié)合并引入一個(gè)暫時(shí)性單鏈缺口，解開(kāi)雙螺旋(或使其解開(kāi))，然后經(jīng)缺口再次封閉，之后從DNA鏈上分離。拓樸異構(gòu)酶II具有類似的作用機(jī)理，包括引入DNA鏈的缺口或形成自由基。術(shù)語(yǔ)"喜樹(shù)堿化合物"用于表示與母體喜樹(shù)堿化合物相關(guān)或由其衍生的化合物，母體喜樹(shù)堿化合物是從中國(guó)樹(shù)種Camptothecinacuminata和印度杉于種Nothapodytesfoetida獲4尋的不溶于7Jc的生物石咸。術(shù)語(yǔ)"鬼臼霉素化合物"用于表示與母體鬼臼霉素有關(guān)或由其衍生的化合物，鬼臼霉素萃取自曼德拉草植物(mandrake)。術(shù)語(yǔ)"抗胂瘤長(zhǎng)春花生物堿"用于表示與長(zhǎng)春花植物(Vincarosea)的萃取物有關(guān)或由其衍生的化合物。術(shù)語(yǔ)"烷基化劑"包括不同類的化學(xué)試劑，其具有共同的特性，即，其具有在生理?xiàng)l件下給生物學(xué)生命大分子(例如DNA)提供烷基的能力。對(duì)于大多數(shù)更重要的試劑，例如氮芥類和亞硝基脲類，在復(fù)雜的降解反應(yīng)之后在體內(nèi)生成活性的烷基化片斷，其中一些降解反應(yīng)是酶催化的。烷基化劑最重要的藥理作用是干擾涉及細(xì)胞增殖基本進(jìn)程，特別是DNA合成和細(xì)胞分裂。烷基化劑能夠干擾迅速增殖的組織中DNA功能和完整性，這提供為其治療應(yīng)用和其許多的毒性提供了基礎(chǔ)。術(shù)語(yǔ)"抗月中瘤蒽環(huán)素書(shū)亍生物"包括從真菌iS^e;.;ez^cz^wm獲得的抗生素及其衍生物，其特征在于具有四環(huán)素環(huán)結(jié)構(gòu)，通過(guò)糖苷鍵連接一個(gè)特殊的糖氨基糖柔胺(daunosamine)。已經(jīng)指出在原發(fā)性乳房癌中人表皮生長(zhǎng)因子受體2蛋白質(zhì)(HER2)的擴(kuò)增與某些患者的不良臨床預(yù)后結(jié)果有關(guān)。曲妥單抗是一種高度純化重組DNA-衍生的人化單克隆IgGl-K抗體，其高親合性和高特異性地與HER2受體的胞外域結(jié)合。許多乳腺癌具有雌激素受體，雌激素可促進(jìn)這些腫瘤的生長(zhǎng)。術(shù)語(yǔ)"雌激素受體拮抗劑"和"選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑"用來(lái)表示與雌激素受體(ER)結(jié)合的雌二醇的竟?fàn)幮砸种莆?。選擇性的雌激素受體調(diào)節(jié)劑與ER結(jié)合時(shí)，導(dǎo)致受體的三維形狀改變，調(diào)節(jié)其與雌激素效應(yīng)元件(ERE)在DNA上的結(jié)合。在絕經(jīng)后婦女中，循環(huán)的雌激素的主要來(lái)源是腎上腺和卵巢雄激素(雄烯二酮和睪丸激素)在周圍組織中通過(guò)芳香酶酶轉(zhuǎn)化為雌激素(雌甾酮和雌二醇)。通過(guò)芳香酶抑制或鈍化導(dǎo)致雌激素?fù)p失對(duì)于一些患有激素依賴性乳腺癌的絕經(jīng)后患者是有效的和選擇性的治療。在此使用的術(shù)語(yǔ)"抗雌激素劑"不但包括雌激素受體拮抗劑和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，而且包括如上所述的芳香酶抑制劑。術(shù)語(yǔ)"分化劑"包括可以多種方式抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)分化的化合物。已知在多種正常和惡性細(xì)胞類型的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)和分化中，維生素D和類一見(jiàn)黃醇起了重要的作用。維甲酸代謝阻滯劑(RAMBA's)通過(guò)抑制維甲酸的細(xì)胞色素P450-介導(dǎo)的分解代謝提高內(nèi)源性維甲酸的水平。DNA曱基化變化屬于人類腫瘤形成中最常見(jiàn)的異常。在選擇的基因的啟動(dòng)子中，高曱基化通常與所涉及基因的鈍化有關(guān)。術(shù)語(yǔ)"DNA曱基轉(zhuǎn)移酶抑制劑"用來(lái)表示通過(guò)DNA轉(zhuǎn)曱基酶的藥理學(xué)抑制和胂瘤抑制基因表達(dá)的再活化起作用的化合物。術(shù)語(yǔ)"激酶抑制劑"包括激酶的有效抑制劑，起涉及細(xì)胞周期發(fā)展和細(xì)i包程序死亡(編程性細(xì)力包死亡)。術(shù)語(yǔ)"法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑"用來(lái)表示凈皮設(shè)計(jì)用于阻止Ras和其它細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的法尼基化的化合物。它們已經(jīng)顯示出對(duì)惡性細(xì)胞增殖和存活有效。術(shù)語(yǔ)"其它的HDAC抑制劑"包括但不限于-羧酸酯類，例如丁酸酯、肉桂酸、4-苯基丁酸酯或丙戊酸；-異羥坊酸類，例如辛二?；桨樊惲u肟酸(SAHA)、含哌嗪的SAHA類似物、聯(lián)芳基異羥肟酸A-161906及其^唑基醚-、四氫吡啶-和四氬萘酮-類似物、雙環(huán)芳基-N-羥基羧酰胺類、pyroxamide、CG-1521、PXD-101、石黃酰胺異羥肝酸、LAQ-824、LBH-589、曲古抑菌素A(trichostatinA,TSA)、oxamflatin、scriptaid、與scriptaid相關(guān)的三環(huán)分子、間-羧基肉桂酸二異羥肟酸(CBHA)、CBHA樣異羥肟酸類、trapoxin-異羥肟酸類似物、CRA-024781、R306465和苯甲酰基-和雜芳基-相關(guān)的異羥肟酸類、氨基辛二酸酯和丙二酰基二酰胺；曙環(huán);f犬四肽類，<列長(zhǎng)口trapoxin、apididn、纟宿酚酸肽(depsipeptide)、spiruchostatin-相關(guān)的化合物、RedFK-228、含巰基的環(huán)狀四肽類(SCOPs)、含異羥肟酸的環(huán)狀四肽類(CHAPs)、TAN-174s和-苯甲酰胺為，例如MS-275或CI-994,或國(guó)depudecin。術(shù)語(yǔ)"泛素-蛋白酶體通道抑制劑，，用于表示抑制蛋白酶體內(nèi)細(xì)胞蛋白質(zhì)(包括細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白質(zhì))的靶向破壞的化合物。為了治療癌癥，根據(jù)本發(fā)明的化合物可如上所述與放射聯(lián)合給藥于患者。放射的意思是指電離輻射，并且特別是伽馬輻射，尤其是通過(guò)直線加速器或通過(guò)現(xiàn)在通用的放射性核素發(fā)射的射線。通過(guò)放射性核素對(duì)腫瘤輻照可以是外部的或內(nèi)部的。本發(fā)明還涉及抗癌劑和本發(fā)明的HDAC抑制劑的才艮據(jù)本發(fā)明的組合物。本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的組合物，其用于醫(yī)藥治療，例如抑制肺瘤細(xì)^9包的生長(zhǎng)。本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的組合物，其用于抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。本發(fā)明還涉及抑制人受試者內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的方法，其包括給所述受試者給予有效量的本發(fā)明組合物。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種抑制細(xì)胞異常生長(zhǎng)的方法，包括通過(guò)給予有效量本發(fā)明組合物轉(zhuǎn)化細(xì)胞。其它的藥劑和HDAC抑制劑可以同時(shí)(例如，以分離的或單一的組合物)或以任一順序相繼給藥。就后一種情況而言，兩種化合物可在一定周期內(nèi)以足夠保證實(shí)現(xiàn)有益效果或協(xié)同效應(yīng)的量和方式給藥。應(yīng)理藥方案取決于所給予的特定的其^藥劑和HD口AC抑制劑、口它們的給藥途徑、所治療的特定腫瘤和;故治療的特定宿主。最恰當(dāng)?shù)慕o藥方法和順序以及劑量和給藥方案可容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員用常規(guī)方法并考慮在此所列出的信息確定。柏配位化合物有利地以每個(gè)療程每平方米體表面積1-500mg(mg/m"的劑量給藥，例如50-400mg/m2,特別地，順氯氨鉑劑量為約75mg/m2,卡鉑劑量為約300mg/m2。紫杉烷化合物有利地以每個(gè)療程每平方米體表面積50-400mg(mg/m2)的劑量給藥，例如75-250mg/m2,特別地，紫杉醇劑量為約175-250mg/m2，多西紫杉醇劑量為約75-150mg/m2。喜樹(shù)堿化合物有利地以每個(gè)療程每平方米體表面積0.1-400mg(mg/m2)的劑量給藥，例如l-300mg/m2,特別地，伊立替康劑量為約100-350mg/m2,托泊替康劑量為約l-2mg/m2?？闺狭龉砭识舅貢?shū)f生物有利地以每個(gè)療程每平方米體表面積30-300mg(mg/m2)的劑量給藥，例如50-250mg/m2,特別地，依托泊苷劑量為約35-100mg/m2,替尼泊苷劑量為約50-250mg/m2?？鼓[瘤長(zhǎng)春花生物堿有利地以每個(gè)療程每平方米體表面積2-30mg(mg/m勺的劑量給藥，特別地，長(zhǎng)春堿劑量為約3-12mg/m2,長(zhǎng)春新》成劑量為約l-2mg/m2,長(zhǎng)春瑞濱劑量為約10-30mg/m?？鼓[瘤核苷書(shū)f生物有利地以每個(gè)療程每平方米體表面積200-2500mg(mg/m2)的劑量給藥，例如700-1500mg/m2,特別地，5畫(huà)氟尿嘧咬劑量為200-500mg/m2，吉西他濱劑量為約800-1200mg/m2,卡培他濱劑量為約1000-2500mg/m2。烷基化劑如氮芥或亞硝基脲有利地以每個(gè)療程每平方米體表面積100-500mg(mg/m2)的劑量給藥，例如120-200mg/m2,特別地，環(huán)磷酰胺劑量為約100-500mg/m2,苯丁酸氮芥劑量為約0.l-0.2mg/kg,卡莫司汀劑量為約150-200mg/m2,洛莫司汀劑量為約100-150mg/m2?？鼓[瘤蒽環(huán)素衍生物有利地以每個(gè)療程每平方米體表面積10-75mg(mg/m"的劑量給藥，例如15-60mg/m2,特別地，多柔比星劑量為40-75mg/m2，柔紅霉素劑量為約25-45mg/m2,4尹達(dá)比星劑量為約10-15mg/m2。曲妥單抗有利地以每個(gè)療程每平方米體表面積1-5mg(mg/m2)的劑量給藥，特別是2-4mg/m2。根據(jù)特定的藥劑和被治療的癥狀，抗雌激素藥劑有利地以每天約l-100mg的劑量給藥。他莫昔芬有利地以5-50mg的劑量口服給藥，優(yōu)選10-20mg每天兩次，連續(xù)治療足夠的時(shí)間以實(shí)現(xiàn)和保持治療效果。托瑞米芬有利地以約60mg的劑量一天一次經(jīng)口給藥，連續(xù)治療足夠的時(shí)間以實(shí)現(xiàn)和保持治療效果。阿那曲唑有利地以約lmg的劑量一天一次經(jīng)口給藥。屈洛昔芬有利地以約20-100mg的劑量一天一次經(jīng)口給藥。雷洛昔芬有利地以約60mg的劑量一天一次經(jīng)口給藥。依西美坦有利地以約25mg的劑量一天一次經(jīng)口給藥。這些劑量可以每療程例如一次、兩次或多次給藥，其可例如每隔7天、14天、21天或28天重復(fù)。考慮到它們的有用的藥理學(xué)特性，本發(fā)明組合物的成分，即所述的其它藥劑和所述的HDAC抑制劑可以;波配制成用于給藥目的的各種藥物形式。所述成分可分別地配制在單一的藥物組合物中，或配制在含有這兩種成分的整體藥物組合物中。本發(fā)明因此還涉及藥物組合物，其含有所述的其它藥劑和所述的HDAC抑制劑以及一種或多種藥物載體。本發(fā)明還涉及藥物組合物形式的根據(jù)本發(fā)明的組合物，其含有抗癌劑和根據(jù)本發(fā)明的HDAC抑制劑以及一種或多種藥物載體。本發(fā)明進(jìn)一步涉及根據(jù)本發(fā)明的組合物在生產(chǎn)抑，J腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的藥物組合物中的用途。本發(fā)明進(jìn)一步涉及一種產(chǎn)品，其含有作為第一活性成分的根據(jù)本發(fā)明的HDAC抑制劑和作為第二活性成分的抗癌劑，所述產(chǎn)品為組合的制劑，用于同時(shí)、單獨(dú)或相繼用于治療罹患癌癥的患者。實(shí)驗(yàn)部分在下文中，術(shù)語(yǔ)'K2C03'表示碳酸鉀，'CH2Cl2'表示二氯甲烷，，MgS04，表示硫酸鎂，'DIPE'表示二異丙醚，THF表示四氬吹喃，'EtOAc'表示乙酸乙酯，'DMF表示N,N-二曱基甲酰胺，'DMSO'表示二曱亞砜，'Et3N，表示三乙胺，'NaBH4'表示四氬硼化鈉(-l),'NaBH3CN'表示氰基硼氬化鈉，'PyBOP'表示苯并三唑-l-基氧基-三吡咯烷并-磷鎮(zhèn)六氟磷酸酯，'DIPEA'表示N-乙基-N-(l-曱基乙基)-2-丙胺，'NH40H'表示氫氧化銨，'CH30H'表示甲醇，'NH4HC03'表示碳酸氬銨，'M.P.'表示熔點(diǎn)。A.中間體的制備實(shí)施例Ala)制備中間體1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>在N2流下將2-[2-(5-氯-lH-吲哚-3-基)乙基]-lH-異吲哚-l,3(2H)-二酮(0.017mol)在DMF(17ml)中的溶液在室溫下加至氫化鈉(0.034mol)在DMF(llml)中的混懸液中。將該混合物在室溫下4覺(jué)拌1小時(shí)。滴力口1-碘代丙烷(0.034mo1)。將該混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，傾入到H20和NaCl中，再用EtOAc萃取。將有機(jī)層用H20洗滌，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑，得到7.77g的中間體1。b)制備中間體2將中間體1(0.021mol)和肼/H2O(0.106mol)在乙醇(100ml)中的混合物攪拌并回流2小時(shí)，然后冷卻至室溫，傾入到H20中，再用CH2C12萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑，得到5g(100%)的中間體2。實(shí)施例A2a)制備中間體3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>在N2流下將2-(曱基磺?；?-5-嘧啶甲酸乙酯(0.094mol)在乙腈(40ml)中的溶液在10°C下加至4-哌啶甲醇(0.086mol)和K2C03(0.172mol)在乙腈(200ml)中的混懸液中。將該混合物置于室溫，然后攪拌4小時(shí)，傾入到H20中，再用EtOAc萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(23g)從乙腈/乙醚中結(jié)晶。蒸發(fā)母層，再將獲得的殘余物通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH97/3/0.1;20-45pm)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到4.6g(20%)(M.P.:129。C)的中間體3。b)制備中間體4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>在N2流下將DMSO(0.127mol)在-78。C下加至乙二酰氯(ethanedioyldichloride，0.061mol)在CH2C12(110ml)中的溶液中。將該混合物攪拌15分鐘。加入中間體3(0.051mol)在CH2C12(200ml)中的溶液。將該混合物在-78。C下攪拌1小時(shí)30分鐘。滴加Et3N(0.26mol)。將該混合物在-78。C下攪拌15分鐘，然后冷卻至室溫達(dá)2小時(shí)30分鐘。加入1120。將該混合物用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(14g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液環(huán)己烷/EtOAc70/30;20-45pm)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到7.6g(57%)的中間體4。c)制備中間體5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>在N2流下將NaBH3CN(0.034mol)和乙酸(0.023mol)力口至中間體2(0.021mol)和中間體4(0.021mol)在CH3OH(500ml)中的溶液中。將該混合物攪拌72小時(shí)，傾入到10%K2C03溶液中，再用EtOAc萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(10.4g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)珪膠(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH97/3/0.1;15-40pm)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到5.5g(54。/o)的中間體5。d)制備中間體6<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>將中間體5(0.001mol)和氫氧化鈉(0.004mol)在乙醇(50ml)中的混合物攪拌并回流5小時(shí)，然后冷卻至室溫，蒸發(fā)至干燥。將殘余物置于乙醚中。將沉淀物物濾出，干燥，得到0.407g(85%)(M.P.:>260°C)的中間體6為鈉鹽(.Na)。實(shí)施例A3a)制備中間體7<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>將2-[4-(氨基甲基)-l-哌啶基]-5-嘧啶甲酸乙酯(0.0076mol)和1-甲基-lH-吲哚-3-甲醛(0.0114mol)在CH3OH(80ml)t的混合物攪拌并回流15小時(shí)，然后冷卻至室溫。分批加入NaBH4(0.012mol)。將該混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，傾入到H20中，再用EtOAc萃取。將有才幾層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(3.2g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH95/6/0.5;15-40pm)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到1.6g(53Q/。)的中間體7。b)制備中間體8將中間體7(0.0037mol)和氫氧化鈉(0.0074mol)在乙醇(60ml)中的混合物在50。C下攪拌15小時(shí)，然后冷卻至室溫，再蒸發(fā)溶劑至干燥，得到1.5g(10Qo/o)的中間體8為鈉鹽(.Na)。a)制備中間體9在N2流下將氫化鈉(0.0026mo1,60%,在油中)分批加至5-氟-lH-。引咮-3-曱醛(0.0024mol)在DMF(8ml)中的溶液中。將該混合物在室溫下攪拌30分鐘。滴加l-碘代丙烷(0.0029mo1)。將該混合物在室溫下攪拌2小時(shí)，再傾入到水水中。將沉淀物過(guò)濾，用H20洗滌，干燥，得到0.44g(88%)的中間體9。實(shí)施例A5a)制備中間體10在N2流下將2-[4-(氨基曱基)-l-哌啶基]-5-嘧啶曱酸乙酯(0.0053mol)、中間體9(0.008mol)和MgS04(1.5g)在CH3OH(100ml)中的混合物攪拌并回流過(guò)夜，然后冷卻至5。C。加入NaBH4(0.009lmol)。將該混合物在室溫下攪拌4小時(shí)，傾入到1120中，再用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04)，過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(3.4g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH97/3/0.5;15-40pm)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到1.3g(54。/。)的中間體10。b)制備中間體11Hf)',人將中間體10(0.0029mol)和氬氧化鈉(0.0057mol)在乙醇(50ml)中的混合物在60。C攪拌過(guò)夜，然后冷卻至室溫，蒸發(fā)溶劑，得到0.8g(54%)的中間體li為鈉鹽(.Na)。實(shí)施例A6a)制備中間體12在N2流下將4-哌啶曱醇(0.033mol)在CH2Cl2(80ml)t的溶液在室溫下加至2-氯-5-嘧啶曱酸曱酯(0.066mol)和DIPEA(0.083mol)在CH2C12(100ml)中的溶液中。將該混合物在室溫下攪拌3小時(shí)30分鐘，傾入到水水中，再用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將殘余物置于戊烷中。將沉淀物物濾出，干燥，得到7.88g(95%)的中間體12。b)制備中間體13在N2流下將DMSO(0.058mo1)在-78。C下滴加至乙二酰氯(0.0278mol)在CH2C12(50ml)中的溶液中。將該混合物攪拌15分鐘。滴加中間體12(0.023mol)在CH2C12(200ml)中的溶液。將該混合物在-78。C下攪拌1小時(shí)30分鐘。滴加Et3N(0.118mol)。將該混合物在-78。C下攪拌1小時(shí)，傾入到H2〇中，再用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04)，過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物從乙醚中結(jié)晶。將沉淀物物濾出，干燥，得到3.06g(54y。)的中間體13。c)制備中間體14在N2流下將NaBH3CN(0.019mol)在5。C下分批加至中間體13(0.0125mol)和1H-吲咮-3-乙胺(0.0125mol)在CH3OH(250ml)f的溶液中。力口入乙酸(lml)。將該混合物在室溫下攪4半48小時(shí)。加入K2C0310%。將該混合物用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04)，過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(5g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2CI2/CH30H/NH40H96/4/0,3;15-40)im)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到3g(60%)的中間體14。d)制備中間體15將中間體14(0.0064mol)和氫氧化鈉(0.025mol)在乙醇(80ml)中的混合物在80。C下攪拌過(guò)夜，然后冷卻至室溫，蒸發(fā)。將殘余物置于乙醚中。將沉淀物物濾出，干燥，得到2g(78。/。)的中間體15為鈉鹽(.Na)。實(shí)施例A7a)制備中間體16將2-[4-(氨基甲基)-l-哌啶基]-5-嘧啶甲酸乙酯(0.0049mo1)、1H-。引咮-3-乙醇甲磺酸鹽(0.0054mol)和K2CO3(0.01mol)在乙腈(20ml)中的混合物攪拌并回流過(guò)夜，然后冷卻，傾入到水水中，再用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04)，過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(2.2g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2CI2/CH3OH/NH4OH96/4/0.2;15-4(Him)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到0.442g(22。/。)的中間體16。b)制備中間體17曱磺酰氯(0.0018mol)在室溫下滴加至中間體16(0.0012mol)和Et3N(0.0036mol)在CH2Cl2(15ml)t的溶液中。將該混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，傾入到H20中，再用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04)，過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑，得到0.6g(100。/。)的中間體17。c)制備中間體18將中間體17(0.012mol)和氫氧化鈉(0.036mol)在乙醇(40ml)中的混合物在60。C下攪拌5小時(shí)，然后蒸發(fā)至干燥。將殘余物置于乙醚中。將該混合物蒸發(fā)至干燥，得到0.6g(100%的中間體18為鈉鹽(.Na)。實(shí)施例A8a)制備中間體19丙酰氯(0.0018mol)在0。C下加至中間體16(0.0012mol)在Et3N(0.5ml)和CH2Cl2(15ml)中的溶液中。將該混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，傾入到水水中，再用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層用水洗滌，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑，得到0.56g(100%)的中間體19。將該產(chǎn)物直接用于下一反應(yīng)步驟。b)制備中間體20將中間體19(0.0012mol)和氫氧化鈉(0.15g)在乙醇(50ml)中的混合物在60。C下攪拌6小時(shí)，然后冷卻至室溫，蒸發(fā)。將殘余物置于乙醚中。將該混合物蒸發(fā)至干燥，得到0.55g(100o/())的中間體20為鈉鹽(.Na)。將該產(chǎn)物直接用于下一反應(yīng)步驟。實(shí)施例Bl制備化合物1將EtsN(0.0037mol)在室溫下加至中間體6(0.0008mol)、1,2-苯二胺一鹽酸鹽(0.0019mol)和PyBOP(0.0017mol)在THF(40ml)和CH2C12(40ml)中的溶液中。將該混合物在室溫下攪拌2天，傾入到水水中，再用CH2C12萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(1.2g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2Cl2/CH30H/NH40H94/6/0.5;15-40nm)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑。將獲得的殘余物(0,078g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2C12/CH3OH/NH4OH98/2/0.2至90/10/1;3.5pm)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到0,049g(ll%)(M.P.:80。C)的化合物l。實(shí)施例B2制備化合物2將Et3N(0.0108mol)在室溫下加至中間體8(0.0025mol)和1,2-苯二胺一鹽酸鹽(0.0058mol)和PyBOP(0.005mol)在DMF/tamis(50ml)中的溶液中。將該混合物在室溫下攪拌48小時(shí)，傾入到H20中，過(guò)濾。將濾液用EtOAc萃取，然后用1120洗滌3次，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(1.8g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH95/5/0.5;15-40pm)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑。將獲得的殘余物(0.262g,22。/o)從乙腈/DIPE中結(jié)晶。將沉淀物物濾出，干燥，得到0.106g(M.P.:142。C)的化合物2。實(shí)施例B3制備化合物3將Et3N(0.0072mol)加至中間體11(0.0018mol)、1,2-苯二胺一鹽酸鹽(0.0045mol)和PyBOP(0.0036mol)在THF(20ml)和CH2C12(20ml)中的溶液中。將該混合物在室溫下攪拌72小時(shí)，傾入到H20中，再用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層用H20洗滌，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(3g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH93/7/0.5;15-40^im)純化。收集純4匕的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到0.13g(14%)(M.P.:85°C),得到化合物3。實(shí)施例B4制備化合物4將EtgN(O.Olmol)在室溫下加至中間體15(0.0025mol)、1,2-苯二胺一鹽酸鹽(0.0057mol)和PyBOP(0,005mol)在THF(15ml)和CH2C12(15ml)中的溶液中。將該混合物在室溫下攪拌48小時(shí)，傾入到H20中，再用CH2Cl2萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(0.13g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2C12/CH3OH/NH4OH92/8/0.5;15-40)im)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑。將該級(jí)分(0.13g)通過(guò)反相色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH3OH/NH4HC0360/40;5jim)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到0.07g(M.P.:95。C)的化合物4。實(shí)施例B5制備化合物5將Et3N(0.6ml)加至中間體18(0.001mol)、1,2-苯二胺一鹽酸鹽(0.0024mol)和PyBOP(0.002mol)在THF(5ml)和CH2C12(5ml)中的溶液中。將該混合物在室溫下攪拌72小時(shí)，傾入到H20中，再用CH2C12萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(1.5g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液CH2Cl2/CH3OH/NH4OH98/2/0.2;15-40pm)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到0.027g(5%)(M.P.:105。C)的^f匕合物5。實(shí)施例B6制備化合物6將Et3N(0.0048mol)加至中間體20(0.0012mol)、1,2-苯二胺(0.0027mol)、PyBOP(0麓4mol)在CH2C12(5ml)和THF(5ml)中的溶液中。將該混合物在室溫下攪拌48小時(shí)，傾入到水中，再用CH2C12萃取。將有機(jī)層分離，干燥(MgS04),過(guò)濾，再蒸發(fā)溶劑。將該殘余物(1.5g)通過(guò)柱色譜法經(jīng)硅膠(洗脫液EtOAc/CH3OH/NH4OH93〃/0.5;lS-40^im)純化。收集純化的級(jí)分，再蒸發(fā)溶劑，得到0.16g(25%)的化合物6。表F-1列出了根據(jù)以上實(shí)施例之一制備的化合物。<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>c、藥理學(xué)實(shí)施例對(duì)于抑制組蛋白脫乙?；傅捏w外試驗(yàn)(參見(jiàn)實(shí)施例C.l)測(cè)定了由式(I)化合物獲得的HDAC酶活性的抑制作用。式(I)化合物的細(xì)胞活性在A2780腫瘤細(xì)胞上用測(cè)定細(xì)胞毒性或存活率的比色i式馬全確定(MosmannTim,JournalofImmunologicalMethods65:55-63,1983)(參見(jiàn)實(shí)施例C.2)?；衔锏娜芙舛葴y(cè)定的是化合物保持在溶液中的能力。在第一種方法中，測(cè)定化合物在稀釋時(shí)保留在水溶液中的能力(見(jiàn)實(shí)施例C.3.a)。DMSO-儲(chǔ)備溶液在不同的連續(xù)步驟中用單一的含水緩沖劑溶劑稀釋。在此方法中，然后針對(duì)出現(xiàn)的沉淀物在BDGentest溶解度掃描儀上掃描混合物。在第二種方法中，用化學(xué)發(fā)光氮?dú)鈾z測(cè)器可測(cè)定化合物在不同pH值的溶解度(參見(jiàn)實(shí)施例C.3.b)。藥物滲透性表示其從一種介質(zhì)進(jìn)入或通過(guò)另一種介質(zhì)的能力。具體而言，是其穿過(guò)腸膜進(jìn)入和/或從血流進(jìn)入靶體的能力。滲透性(參見(jiàn)實(shí)施例C.4)可以通過(guò)形成濾過(guò)固定的人工膜磷脂雙層測(cè)定。在濾過(guò)固定的人工膜試驗(yàn)中，用96孔微滴定板和96孔濾板形成"夾心，，，從而每個(gè)組成的孔一皮分成雙室，供體溶液在底部，受體溶液在上部，用涂#文了2。/。(wt/v)二油酰基磷脂?；?膽堿的十二烷溶液的125|im微過(guò)濾片(孔徑0.45pm微米)分隔，當(dāng)該體系接觸含水緩沖溶液時(shí)，濾片通道內(nèi)部形成多層雙分子層?；衔锿ㄟ^(guò)該人工膜的滲透性按cm/s計(jì)量。目的在于尋找在4.0和7.4兩個(gè)不同的pH值通過(guò)平行人工膜的藥物的滲透性。用UV-分光光度法在250和500nm之間的最佳波長(zhǎng)4全測(cè)化合物。藥物的代謝作用是指脂溶性的異生化合物或生物內(nèi)生的化合物經(jīng)酶催化轉(zhuǎn)化成極性、水溶性的和可排泄的代謝產(chǎn)物。藥物代謝的主要器官是肝臟。代謝產(chǎn)物往往比母體藥物活性小或是非活性的。但是，一些代謝產(chǎn)物可能具有增強(qiáng)的活性或毒性作用。因此，藥物代謝可包括"解毒"和"中毒"兩種過(guò)程。確定生物處理藥物和化學(xué)試劑能力的主要酶系之一代表性的是細(xì)胞色素P450單氧化酶，其為NADPH依賴的酶?；衔锏拇x穩(wěn)定性可以在體外借助于亞細(xì)胞的人類組織(見(jiàn)實(shí)施例C.5.a)確定。此時(shí)，化合物的代謝穩(wěn)定性可以表示為這些化合物與微粒體培養(yǎng)15分鐘后代謝的藥物的百分比?；衔锏亩客ㄟ^(guò)LC-MS分析確定。已經(jīng)表明多種抗肺瘤劑活化p21蛋白質(zhì)，包括DNA損傷劑和組蛋白脫乙酰基酶抑制劑。DNA損傷劑通過(guò)腫瘤抑制基因p53活化p21基因，而組蛋白脫乙?；敢种苿┙?jīng)轉(zhuǎn)錄因子Spl轉(zhuǎn)錄性地活化p21基因。因此，DNA損傷劑通過(guò)p53效應(yīng)元件活化p21啟動(dòng)子，而組蛋白脫乙酰基酶抑制劑通過(guò)spl位點(diǎn)(位于相對(duì)于TATAbox的-60bp至+40bp區(qū)域)活化p21啟動(dòng)子，導(dǎo)致p21蛋白質(zhì)的表達(dá)提高。當(dāng)細(xì)胞中的p21啟動(dòng)子由未含有p53效應(yīng)元件的p211300bp啟動(dòng)子片l殳組成時(shí)，其相應(yīng)地對(duì)DNA損傷劑沒(méi)有響應(yīng)。化合物誘導(dǎo)p21的能力可通過(guò)試-驗(yàn)化合物誘導(dǎo)p21(其為細(xì)胞水平的HDAC抑制作用的結(jié)果)來(lái)評(píng)價(jià)。所述細(xì)月包可一皮含p211300bp啟動(dòng)子片l殳而不含p53效應(yīng)元件的表達(dá)載體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，由其中與對(duì)照水平相比提高的報(bào)道基因表達(dá)確定化合物具有p21誘導(dǎo)能力。報(bào)道基因是熒光蛋白質(zhì)，報(bào)道基因的表達(dá)以發(fā)射的熒光的量測(cè)定(參見(jiàn)實(shí)施例C.6.)。特定的HDAC抑制劑不應(yīng)抑制其它的酶，例如大量的CYPP450蛋白質(zhì)。CYPP450(大腸桿菌表達(dá)的)蛋白質(zhì)3A4、2D6en2C9將其特定的底物轉(zhuǎn)化為熒光分子。CYP3A4蛋白質(zhì)將7-千氧基-三氟甲基香豆素(BFC)轉(zhuǎn)化為7-羥基-三氟曱基香豆素。CYP2D6蛋白質(zhì)將3-[2-(N,N-二乙基-N-曱基氨基)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素(AMMC)轉(zhuǎn)化為3-[2-(N,N-二乙基氨基)乙基]-7-羥基-4-甲基香豆素鹽酸鹽，CYP2C9蛋白質(zhì)將7_曱氧基-4-三氟甲基香豆素(MFC)轉(zhuǎn)化為7-羥基-三氟甲基香豆素。化合物抑制所述的酶促反應(yīng)將導(dǎo)致熒光信號(hào)的降低。實(shí)施例C丄用熒光標(biāo)記的底物抑制組蛋白脫乙?；傅捏w外試驗(yàn)使用Biomol(cat.No:AK-500-0001)的HDAC熒光活性試-驗(yàn)/藥物發(fā)現(xiàn)試劑盒。HDAC熒光活性試驗(yàn)基于FluordeLys(熒光基因組蛋白脫乙?；纲嚢滨?(FluorogenicHistonedgAcetylaseLysyl))底物和顯影劑組合物。FluordeLys底物含有乙?；嚢彼醾?cè)鏈。底物的脫乙酰作用使所速底物具有感光性，從而在第二個(gè)步驟中，用FluordeLys顯影劑處理生成熒光團(tuán)。HeLa細(xì)胞核萃取物(供應(yīng)商Biomol)以60jig/ml量與75pM的底物一起培養(yǎng)。將FluordeLys底物加入到緩沖劑中，所述緩沖劑含25mMTris、137mMNaCl、2.7mMKC1和lmMMgCl2'6H2〇，pH值7.4。30分鐘后，加入l體積顯影劑。用355nm光激發(fā)焚光團(tuán)，在熒光板檢測(cè)器上檢測(cè)發(fā)射光(450nm)。對(duì)于每個(gè)試驗(yàn)，對(duì)照(含HeLa細(xì)胞核萃取物和緩沖劑)、空白培養(yǎng)(含緩沖劑，但是不含HeLa細(xì)胞核萃取物)和樣品(含溶于DMSO并進(jìn)一步在緩沖劑中稀釋的化合物和HeLa細(xì)胞核萃取物)平行進(jìn)行。在第一種情況下，化合物在1(T5M的濃度測(cè)試。當(dāng)所述化合物在10^M顯示活性時(shí)，產(chǎn)生濃度-響應(yīng)曲線，其中化合物在1(T5M和1(T9M之間的濃度測(cè)試。所有樣品測(cè)試4次。在每個(gè)測(cè)試中，從對(duì)照和樣品數(shù)值扣除空白值。對(duì)照樣品表示底物100%脫乙?；?。對(duì)于每個(gè)樣品，熒光表示為對(duì)照平均值的百分比。如果合適，IC50-值(將代謝產(chǎn)物的量降低至對(duì)照的50%所需的藥物的濃度)用對(duì)已分級(jí)數(shù)據(jù)的概率分析計(jì)算。在此，測(cè)試化合物的作用表示為pIC50(IC50-值的負(fù)對(duì)數(shù)值)(參見(jiàn)表F-2)。實(shí)施例C.2:在A2780細(xì)i包上測(cè)定抗增殖活性將測(cè)試的所有化合物溶于DMSO并進(jìn)一步用培養(yǎng)液稀釋。在細(xì)胞增殖試驗(yàn)中，最終的DMSO濃度從不超過(guò)0.1%(v/v)。對(duì)照樣品含A2780細(xì)胞和DMSO,不含化合物；空白樣品含DMSO,但是不含細(xì)胞。MTT以5mg/ml溶于PBS。制備由O.IM甘氨酸和O.lMNaCl組成的甘氨酸緩沖劑,用NaOH(lN)緩沖到pH10.5(所有試劑來(lái)自于Merck)。人A2780卵巢癌細(xì)I包(T.C.Hamilton博士[FoxChaseCancerCentrePennsylvania,USA]熱心捐贈(zèng))在補(bǔ)充了2mML-谷氨酸鹽、50pg/ml慶大霉素和10%胎牛血清的RPMI1640介質(zhì)中培養(yǎng)。在37。C、濕潤(rùn)的5%C02氣氛中將細(xì)胞常規(guī)保持為單層培養(yǎng)物。細(xì)胞用胰蛋白酶/EDTA溶液以1:40的分流比每周傳代一次。所有介質(zhì)和添加劑從LifeTechnologies獲得。用Gen-Probe類茵質(zhì)體組織培養(yǎng)試劑盒(供應(yīng)商BioMerieux)確定細(xì)力包無(wú)支原體污染。將細(xì)胞接種到NUNC96-孔培養(yǎng)皿(供應(yīng)商LifeTechnologies)中，使其附著在塑料板上過(guò)夜。接種密度為每孔1500個(gè)細(xì)胞，介質(zhì)總體積為200|il。在細(xì)J包粘到所述的一反以后，介質(zhì)凈皮改變，加入藥物和/或溶劑得到最終體積200W。然后培養(yǎng)四天，用200^1新鮮介質(zhì)替代介質(zhì)，用基于MTT的試驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞密度和活力。向每個(gè)孔中加入25^1的MTT溶液，在37°C進(jìn)一步培養(yǎng)所述細(xì)胞2小時(shí)。然后小心地吸出所述介質(zhì)，加入25jil甘氨酸緩沖液，然后加入lOO^il的DMSO將藍(lán)色MTI-曱腐(formazan)產(chǎn)物溶解。在微板振蕩器上振動(dòng)微量培養(yǎng)板10分鐘，用Emax96-孔分光光度計(jì)(供應(yīng)商Sopachem)在540nm測(cè)定吸光度。在一個(gè)試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)條件的結(jié)果為3個(gè)平行測(cè)定孔的平均值。出于最初的篩選目的，化合物在單一固定的l(T6M濃度測(cè)試。對(duì)于活性化合物，重復(fù)實(shí)驗(yàn)以建立完整的濃度-響應(yīng)曲線。對(duì)于每個(gè)試驗(yàn)，對(duì)照樣(不含藥物)和空白樣(不含細(xì)胞或藥物)的培養(yǎng)平行進(jìn)行。從所有的對(duì)照和樣本數(shù)值減去空白試驗(yàn)值。對(duì)于每個(gè)樣本，細(xì)胞生長(zhǎng)的平均值(以吸收度單位)表示為對(duì)照樣細(xì)胞生長(zhǎng)平均值的百分比。如果合適，IC50-值(將代謝產(chǎn)物的量降低至對(duì)照的50%所需的藥物的濃度)用對(duì)已分級(jí)數(shù)據(jù)的概率分析計(jì)算(Finney,DJ.,ProbitAnalyses,2ndEd.Chapter10,GradedResponses,CambridgeUniversityPress,Cambridge1962)。在眾匕，測(cè)試化合物的作用表示為pIC50(IC5o-值的負(fù)對(duì)數(shù)值)(參見(jiàn)表F-2)。實(shí)施例C.3:溶解度C.3.a.在含水介質(zhì)中的動(dòng)態(tài)溶解度5000-9.8pM(1/2稀釋)的DMSO-儲(chǔ)備溶液是在96孔儲(chǔ)備溶液板(每孔200(!l)中在DMSO中制備的。每次稀釋后將樣品混合。然后將等份的此DMSO溶液(2(il)轉(zhuǎn)移到2個(gè)另外的96孔緩沖溶液板中，該板每孔含有200(1l緩沖溶液。每一緩沖溶液板既含有pH7.4的含水緩沖溶液又含有pH4.0的含水緩沖溶液。在最后稀釋之后，將緩沖溶液板混合，并使樣品在室溫下穩(wěn)定1/2小時(shí)。對(duì)于每種化合物進(jìn)行一式二份的稀釋以免偶然誤差。然后在BDGentest溶解度掃描儀上對(duì)形成的沉淀物掃描。基于該混合物中不存在/存在沉淀物，通過(guò)插值計(jì)算動(dòng)態(tài)溶解度。分級(jí)成3級(jí)。具有高溶解度的化合物得3分并具有高于或等于50|liM的溶解度。具有中等溶解度的化合物得2分并具有高于20fiM且低于50iliM的溶解度。具有低溶解度的化合物得1分，對(duì)于這些化合物溶解度低于或等于10|iM。試-瞼了三種化合物，并且在試驗(yàn)中各pH值下分值為1分。C.3.b在pH2.3下的溶解度在pH2.3下，化合物的溶解度還可以使用化學(xué)發(fā)光的氮?dú)鈾z測(cè)器測(cè)定(參見(jiàn)表F-2)。實(shí)施例C.4:平行人工膜滲透性分析將儲(chǔ)備液樣品(10(xl的5mM儲(chǔ)備液的等分樣品在100%DMSo中)稀釋于含有2ml的pH4或pH7.4的含水緩沖系統(tǒng)(PSR4系統(tǒng)溶液濃縮物(pION)的深孔板或預(yù)混合板中。在樣品加入到所述參比板前，將150jal的H沖液加入到孔中，測(cè)定空白樣的UV。此后，棄去所述鄉(xiāng)爰沖液，該板用作參比板。所有測(cè)定在抗UV-板(供應(yīng)商Costar或Greiner)中進(jìn)行。在參比板的空白測(cè)定之后，將150^1的稀釋樣品加到該參比板，將稀釋的樣品200)nl加入到供體板1。將受體濾板l(供應(yīng)商Millipore,型號(hào)MAIPN45)用4^1人工膜形成溶液(l,2-二油酰基-sn-Glycer-3-磷酸膽堿在十二烷中，含0.1%2,6-二叔丁基-4-曱酚)涂敷，置于供體板l的上部形成"夾心"。將緩沖液(200pl)分配到上方的受體孔中。夾心用蓋沖反覆蓋，在室溫下在暗處^f諸藏18小時(shí)。受體板2的空白測(cè)定是通過(guò)在孔中加入的緩沖液然后進(jìn)行UV測(cè)定進(jìn)行的。在受體板2空白測(cè)定之后，棄去緩沖液，將150pl的受體溶液從受體濾板1轉(zhuǎn)移到受體板2。然后除去受體濾板1形成夾心。在供體板2的空白測(cè)定之后(參見(jiàn)上文)，將的供體溶液從供體板l轉(zhuǎn)移到供體板2。掃描(使用SpectraMAX190)供體板2、受體板2和參比板孔的紫外光鐠。用PSR4pCommand軟件處理所有光譜以計(jì)算滲透性。所有化合物計(jì)算三次。在每次試驗(yàn)中使用卡馬西平、灰黃霉素、阿昔洛韋、阿替洛爾、吹塞米和氯噻。秦作為標(biāo)準(zhǔn)。化合物分為3個(gè)等級(jí)的類別，即，具有低滲透率(平均效果<0.5xl(T6cm/s;分?jǐn)?shù)1)、中滲透率(lx10-6cm/s>平均效果^0.5xIO-6cm/s;分?jǐn)?shù)2)或高滲透率(21xl(r6cm/s;分?jǐn)?shù)3)。實(shí)施例C.5:代謝穩(wěn)定性根據(jù)Gorrod等人(Xenobiotica5:453-462,1975)在機(jī)械均化組織之后通過(guò)離心分離制備亞細(xì)胞組織制劑。肝臟組織在水冷的0.1MTris-HCl(pH7.4)緩沖液中漂洗以洗滌過(guò)量的血液。然后吸干組織、稱重和用手術(shù)剪粗粗地切碎。組織碎片用裝酉己了Teflon杵的Potter-S(Braun,意大利)或者SorvallOmni-混合勻漿器在3體積水冷的0.1M磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中均化7xlO秒。在兩種情況下，容器在所述均化步驟期間一皮保存在;水上/水內(nèi)。在4。C下將組織勻漿用Sorvall離心機(jī)或Beckman超離心機(jī)以9000xg離心20分鐘。得到的上層清液在-80。C儲(chǔ)藏并標(biāo)記為'S9'。S9級(jí)分可以用Beckman超離心機(jī)以100.000xg進(jìn)一步離心60分鐘(4。C)。得到的上層清液#1小心地吸出，等分并標(biāo)記為'細(xì)胞溶質(zhì)'。將所述顆粒(pellet)重新懸浮在O.lM磷酸鹽緩沖液(pH7.4)中，每0.5g原始組織重量最終體積為lml，標(biāo)記為'微粒體'。所有亞細(xì)胞部分^皮等分試樣，立即在液氮中水凍，在-80。C儲(chǔ)藏直到使用。對(duì)于要測(cè)試的樣品，培養(yǎng)混合物含有PBS(0.1M)、化合物(5(iM)、微粒體(lmg/ml)和NADPH-生成系統(tǒng)(0.8mM葡萄糖-6-磷酸、0.8mM氯化鎂和0.8單位葡萄糖-6-磷酸脫氫酶)。對(duì)照樣品含相同物質(zhì)，但是所述微粒體被加熱失活(在95攝氏度下10分鐘)的微粒體替代。在對(duì)照樣品中化合物的回收率的總是100%。將混合物在374聶氏度預(yù)培養(yǎng)5分鐘。反應(yīng)在0時(shí)間點(diǎn)(1=0)通過(guò)添加0.8mMNADP啟動(dòng)，樣品培養(yǎng)15分鐘(t-15)。通過(guò)加入2體積的DMSO終止反應(yīng)。然后樣品以900xg離心10分鐘，在分析前，上層清液在室溫下儲(chǔ)藏不超過(guò)24小時(shí)。所有培養(yǎng)纟皮在duplo中進(jìn)行。上層清液的分析用LC-MS分析儀進(jìn)行。樣品的洗脫在XterraMSC18(50x4.6mm,5]Lim,Waters,US)上進(jìn)行。使用Alliance2790(供應(yīng)商-.Waters,US)HPLC系統(tǒng)。用緩沖液A(在仏0/乙腈(95/5)中25mM的乙酸銨(pH5.2))、溶劑B乙腈和溶劑C甲醇以2.4毫升/分鐘的流速洗脫。使用的梯度是以線性方式在5分鐘內(nèi)有機(jī)相濃度從0%提高至50%B和50%C,在1分鐘內(nèi)提高到100%B,有機(jī)相濃度再保持穩(wěn)定1.5分鐘。樣品的總注射體積是25jxl。4吏用配備了ESI源的Quattro(供應(yīng)商Micromass，Manchester,UK)三重四極質(zhì)譜4義作為^r測(cè)器。所述源和脫溶劑溫度分別設(shè)定在120和350°C,用氮?dú)庾鳛殪F化劑和干燥氣體。以正掃描方式(單一離子反應(yīng))方式獲取數(shù)據(jù)。錐體電壓設(shè)定在10V,停留時(shí)間1秒。t=15時(shí)，E(活性的)的總離子電流(TIC)(%代謝=100%-(-)x100)。t=0時(shí)，E(活性的)的TIC具有t=0時(shí)E(活性的)的TIC百分代謝小于20%的化合物定義為高代謝穩(wěn)定的，并給予3分。具有20-70%代謝的化合物定義為中等穩(wěn)定的，并給予2分。顯示百分代謝高于70%的化合物定義為低代謝穩(wěn)定的，并給予1分。當(dāng)進(jìn)行代謝穩(wěn)定性篩選時(shí)，總是包括三個(gè)參比化合物。維拉帕米作為具有低代謝穩(wěn)定性(％代謝=73%)的化合物被包括在內(nèi)。西沙比利作為中等代謝穩(wěn)定性(％代謝=45%)的化合物被包括在內(nèi)，丙醇作為中等至高代謝穩(wěn)定性(25。/。代謝)的化合物被包括在內(nèi)。這些參比化合物用來(lái)確認(rèn)所述的代謝穩(wěn)定性試驗(yàn)。試驗(yàn)了兩個(gè)化合物，分別為3分和2分。實(shí)施例C.6:P21誘導(dǎo)性能在37℃下在5%C02的濕潤(rùn)培養(yǎng)箱中，將A2780細(xì)胞(ATCC)在RPMI1640介質(zhì)中培養(yǎng)，所述RPMI1640介質(zhì)補(bǔ)充了10%FCS、2mM的L-谷氨酸鹽和慶大霉素。所有細(xì)胞培養(yǎng)溶液由Gibco-BRL(Gaithersburg,MD)提供。其它材料由Nunc提供。從增殖的A2780細(xì)胞提取基因組DNA,用作p21啟動(dòng)子的巢床PCR分離的模板。第一次擴(kuò)增用低聚核苷酸對(duì)GAGGGCGCGGTGCTTGG和TGCCGCCGCTCTCTCACC,以基因組DNA為沖莫板，在55。C韌化溫度(annealingtemperature)進(jìn)行20個(gè)周期。得到的4.5kb片段包含相對(duì)于TATA盒的-4551至+88的片段，該片段用低聚核苷酸TCGGGTACCGAGGGCGCGGTGCTTGG和ATACTCGAGTGCCGCCGCTCTCTCACC在88。C韋刃化溫度再擴(kuò)增20個(gè)周期，得到4.5kb片段，隨后用低聚核苷酸對(duì)TCGGGTACCGGTAGATGGGAGCGGATAGACACATC和ATACTCGAGTGCCGCCGCTCTCTCACC在88。C韋刃化溫度擴(kuò)增20個(gè)周期，得到包含相對(duì)于TATA盒的-1300至+88片段的1.3kb片段。存在于低聚核苷酸(力。下劃線的序列)中的限制酶切位點(diǎn)Xhol和Kpnl用于亞克隆。從pGL3-basic去掉熒光素酶指針，在Kpnl和Xbal限制酶切位點(diǎn)用ZsGreen指針(來(lái)自pZsGreenl—Nl質(zhì)粒)替代。通過(guò)將上述人p21啟動(dòng)子區(qū)域的1.3kb片段在Xhol和Kpnl位點(diǎn)插入pGL3-basic-ZsGreenp構(gòu)成GL3-basic-ZsGreen-1300。所有限制性內(nèi)切酶由BoehringerManheim(德國(guó))提供。將A2780細(xì)胞以2xl05細(xì)胞的密度涂敷在6孔板中，培養(yǎng)24小時(shí)，通過(guò)<吏用Lipofectamine2000(Invitrogen,Brussels,比利時(shí))如制造商所述用2貼的pGL3陽(yáng)basic-ZsGreen-1300和0.2pg的pSV2neo介體轉(zhuǎn)染。用G418(Gibco-BRL,Gaithersburg,MD)選擇所述轉(zhuǎn)染的細(xì)胞10天，取單細(xì)胞懸浮液生長(zhǎng)。3周后，得到單克隆。擴(kuò)增A2780選擇的克隆，以每孔10000細(xì)月包接種在96孔板中。接種24小時(shí)后，用化合物再處理細(xì)胞24小時(shí)(影響鄰近p21啟動(dòng)子區(qū)域的spl位點(diǎn))。隨后，用4%PFA固定細(xì)胞30秒，用Hoechst染料染色。p21啟動(dòng)子活化導(dǎo)致ZsGreen產(chǎn)生，并因此發(fā)熒光，通過(guò)AscentFluoroskan(ThermoLabsystems,Brussels,比利時(shí))片企測(cè)。對(duì)于每個(gè)試^^,對(duì)照樣(不含藥物)和空白樣(不含細(xì)胞或藥物)的培養(yǎng)平行運(yùn)行。從所有的對(duì)照和樣本數(shù)值扣除空白試驗(yàn)值。對(duì)于每個(gè)樣品，p21誘導(dǎo)值可以表示為對(duì)照樣p21值的百分比。誘導(dǎo)百分比高于130。/。的定義為顯著i秀導(dǎo)。實(shí)施例C.7:P450抑制性能將所有被測(cè)試的化合物溶于DMS0(5mM),在乙腈中進(jìn)一步稀釋到5xl(T4M。在試'驗(yàn)緩沖液中制備進(jìn)一步的稀釋物(0.1MNaK磷酸鹽緩沖液pH7.4),最終的溶劑濃度不高于2%。對(duì)CYP3A4蛋白質(zhì)的分析包括每孔15pmo1P450/mg蛋白質(zhì)(在0.01MNaK磷酸鹽緩沖液+1.15%KC1中)、NADPH發(fā)生系統(tǒng)(3.3mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸脫氳酶、1.3mMNADP和3.3mMMgCl2'6H20,在分析緩沖液中)和化合物，總分析體積為100^1。在37°C預(yù)培養(yǎng)5分鐘后，加入在分析緩沖液中150pM的熒光探針底物BFC啟動(dòng)酶促反應(yīng)。在室溫下培養(yǎng)30分鐘后，加入2體積乙腈終止反應(yīng)。在405nm激發(fā)波長(zhǎng)和535nm發(fā)射波長(zhǎng)處進(jìn)行熒光測(cè)定。包括酮康唑(1。50-值3X10-SM)作為該試驗(yàn)的參比化合物。對(duì)CYP2D6蛋白質(zhì)的分析包括每孔6pmo1P450/mg蛋白質(zhì)(在0.01MNaK磷酸鹽緩沖液+1.15%KC1中)、NADPH發(fā)生系統(tǒng)(0.41mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸脫氪酶、0.0082mMNADP和0.41mMMgCl2.6H20,在分析緩沖液中)和化合物，總分析體積lOOnl。在37。C預(yù)培養(yǎng)5分鐘后，加入在分析緩沖液中的3|iM的熒光探針底物AMMC啟動(dòng)酶促反應(yīng)。在室溫下培養(yǎng)45分鐘后，加入2體積乙腈終止反應(yīng)。在405nm激發(fā)波長(zhǎng)和460nm發(fā)射波長(zhǎng)處進(jìn)行熒光測(cè)定。包括奎尼丁(IC5o-值〈5Xl(T8M)作為該試驗(yàn)的參比化合物。對(duì)CYP2C9蛋白質(zhì)的分析包括每孔15pmo1P450/mg蛋白質(zhì)(在0.01MNaK磷酸鹽緩沖液+1.15。/oKCl中)、NADPH發(fā)生系統(tǒng)(3.3mM葡萄糖-6-磷酸、0.4U/ml葡萄糖-6-磷酸脫氬酶、1.3mMNADP和3.3mMMgCl2'6H20,在分析緩沖液中)和化合物，總分析體積100^1。在37。C預(yù)培養(yǎng)5分鐘后，加入在分析緩沖液中200|aM的熒光探針底物MFC啟動(dòng)酶促反應(yīng)。在室溫下培養(yǎng)30分鐘后，加入2體積乙腈終止反應(yīng)。在405nm激發(fā)波長(zhǎng)和535nm發(fā)射波長(zhǎng)處進(jìn)4亍熒光測(cè)定。包括石黃胺苯吡哇(1(:5。-值=6.8X10々M)作為該試驗(yàn)的參比化合物。為了初步篩選的目的，4t合物在單一固定的濃度的lxl(^M測(cè)試。對(duì)于活性化合物，重復(fù)試驗(yàn)建立完整的濃度-響應(yīng)曲線。對(duì)于每個(gè)試驗(yàn)，對(duì)照樣(不含藥物)和空白培養(yǎng)(不含酶或藥物)平行運(yùn)行。所有化合物一式四份分析。從所有的對(duì)照和樣本數(shù)值減去空白試驗(yàn)值。對(duì)于每個(gè)樣本，樣品的P450活性平均值(以相對(duì)熒光度為單位)表示為對(duì)照樣P450活性平均值的百分比。抑制百分比可以表示為100%減去樣品P450活性平均值。如果合適，計(jì)算ICs。-值(將P450活性降低到對(duì)照樣的50%所需的藥物的濃度)。表F-2:列出了根據(jù)實(shí)施例C.l、C.2和C.3.b測(cè)試的化合物結(jié)果(空白表示相應(yīng)化合物未得到值)。表F-2<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>D.組合物實(shí)施例包膜衣的片劑片芯的制備100g式(I)化合物、570g乳糖和200g淀粉的混合物充分混合，然后用5g十二烷基石危酸鹽鈉和10g聚乙烯基吡咯烷酮在約200ml水中的溶液濕潤(rùn)。將濕粉末混合物過(guò)篩，干燥，然后再次過(guò)篩。然后加入100g微晶纖維素和15g氫化植物油。全部混合均勻，壓成片劑，得到10000片，每片含10mg的式(I)化合物。包衣向10g甲基纖維素在75ml變性乙醇中的溶液加入5g乙基纖維素在150ml二氯甲烷中的溶液。然后加入75ml的二氯甲烷和2.5ml1,2,3-丙二醇。熔融10g的聚乙二醇，溶于75ml二氯甲烷。將后一溶液加入前者，然后加入2.5g十八酸鎂、5g聚乙歸吡咯烷酮和30ml濃染料懸浮液，全部材料勻漿。用這樣得到的混合物在包衣設(shè)備中將片芯包衣。權(quán)利要求1.式(I)化合物及其N-氧化物形式、藥學(xué)可接受的加成鹽和立體化學(xué)異構(gòu)形式其中n是整數(shù)0、1或2，并且當(dāng)n是0時(shí)，表示直接鍵；m是整數(shù)1或2；X是N或CH；Y是O、S或NR8；其中R8是氫、C1-6烷基、C1-6烷氧基C1-6烷基、C3-6環(huán)烷基、C3-6環(huán)烷基甲基、苯基C1-6烷基、-C(＝O)-CHR9R10或-S(＝O)2-N(CH3)2；其中各R9和R10獨(dú)立地是氫、氨基或氨基C1-6烷基；以及當(dāng)Y是NR8，并且R2在吲哚基的7-位時(shí)，R2和R8可一起形成二價(jià)基團(tuán)-(CH2)2-(a-1)，或-(CH2)3-(a-2)；R1是氫、C1-6烷基、羥基C1-6烷基、氰基C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基羰基或者單-或二(C1-6烷基)氨基磺?；?；R2是氫、羥基、氨基、鹵代、C1-6烷基、氰基、C2-6烯基、多鹵代C1-6烷基、硝基、苯基、C1-6烷基羰基、羥基羰基、C1-6烷基羰基氨基、C1-6烷氧基或者單-或二(C1-6烷基)氨基；R3是羥基或氨基；R4是氫、噻吩基、呋喃基或苯基，并且各噻吩基、呋喃基或苯基可任選被以下基團(tuán)取代鹵代、氨基、硝基、氰基、羥基、苯基、C1-6烷基、(二C1-6烷基)氨基、C1-6烷基氧基、苯基C1-6烷基氧基、羥基C1-6烷基、C1-6烷基氧基羰基、羥基羰基、C1-6烷基羰基、多鹵代C1-6烷基氧基、多鹵代C1-6烷基、C1-6烷基磺酰基、羥基羰基C1-6烷基、C1-6烷基羰基氨基、氨基磺?；?、氨基磺?；鵆1-6烷基、異噁唑基、氨基羰基、苯基C2-6烯基、苯基C3-6炔基或吡啶基C3-6炔基；R5、R6和R7各自獨(dú)立地是氫、氨基、硝基、呋喃基、鹵代、C1-6烷基、C1-6烷基氧基、三氟甲基、噻吩基、苯基、C1-6烷基羰基氨基、氨基羰基C1-6烷基或-C≡C-CH2-R11。2、根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中a)n是0或1;b)m是1或2;c)X是N或CH;d)Y是NR8,其中RS是氫、Cw烷基、Cw環(huán)烷基或C3-6環(huán)烷基曱基；e)W是氫、d—6烷基、羥基d—6烷基、Cw烷基羰基或Cw烷基磺?；?；f)W是氫或卣代；g)Rs是氨基；h)R4是氫或噻吩基；和i)R5、R6和R7各為氫。3、根據(jù)權(quán)利要求l的化合物，其中a)n是1;b)m是1;c)X是N;d)Y是NR8,其中118是甲基；e)W是氫；f)W是氫或卣代；g)R"是氨基；h)R"是氫或2-噻吩基；和i)R5、116和117各為氫。4、根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是化合物No.2，即下式所述化合物5、一種藥物組合物，包括藥學(xué)可接受的載體和作為活性成分的治療有效量的權(quán)利要求14任一項(xiàng)所述的化合物。6、制備權(quán)利要求5所述藥物組合物的方法，其中所述的藥學(xué)可接受的載體與權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的化合物被緊密地混合。7、用作藥物的權(quán)利要求14任一項(xiàng)所述的化合物。8、權(quán)利要求14任一項(xiàng)所述的化合物在制備治療增殖疾病的藥物中的用途。9、抗癌劑和權(quán)利要求14任一項(xiàng)所述HDAC抑制劑的組合物。10、制備根據(jù)權(quán)利要求1的化合物的方法，其特征在于，在堿存在下通過(guò)將其中的M表示氫或堿金屬的式(II)中間體與式(m)化合物反全文摘要本發(fā)明包括具有組蛋白脫乙?；敢种泼富钚缘男碌氖?I)化合物，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、X和Y具有所定義的含義；它們制備、含有它們的組合物以及它們作為藥物的用途。文檔編號(hào)C07D401/14GK101370804SQ200780003017公開(kāi)日2009年2月18日申請(qǐng)日期2007年1月16日優(yōu)先權(quán)日2006年1月19日發(fā)明者B·魯克斯,I·N·C·皮拉特,J·阿茨,P·R·安吉鮑德申請(qǐng)人:詹森藥業(yè)有限公司