肽酪氨酸酶抑制劑及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及肽酪氨酸酶抑制劑及其應(yīng)用，具體的公開(kāi)了可抑制酪氨酸酶活性的肽，以及制劑和使用其減少皮膚色素沉著的方法，以及以局部制劑的形式施用所述抑制肽的方法。所述肽以序列RADRADC和PLG-OH為特征。還提供了皮膚處理方法，該方法進(jìn)一步包括使用以氨基酸序列SFLLRN為特征的肽。
【專利說(shuō)明】肽酪氨酸酶抑制劑及其應(yīng)用
[0001]發(fā)明人:BasilM.Hantash
[0002]本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2008年06月25日，申請(qǐng)?zhí)枮?00880105015.7 (國(guó)際申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/US2008/068186)，名稱為“肽酪氨酸酶抑制劑及其應(yīng)用”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0003]相關(guān)申請(qǐng)?jiān)?br> [0004]本申請(qǐng)主張2007年6月27日遞交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)N0.60/937, 331的優(yōu)先權(quán)，且援引并入該申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容。
[0005]政府支持申明
[0006]無(wú)
[0007]序列表、計(jì)算機(jī)程序或光盤(pán)援引
[0008] 申請(qǐng)人:聲明，序列表的紙質(zhì)拷貝與伴隨計(jì)算機(jī)磁盤(pán)上的計(jì)算機(jī)可讀格式中的序列表相同。 申請(qǐng)人:援引并入序列表的全部?jī)?nèi)容。
[0009]發(fā)明背景
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0010]本發(fā)明涉及酪氨酸酶抑制劑領(lǐng)域，并涉及與對(duì)該酶的抑制作用有關(guān)的處理方法和組合物。
[0011]相關(guān)技術(shù)
·[0012]本發(fā)明涉及新型生物作用劑，具體地說(shuō)是可降低酪氨酸酶的酶活性的寡肽。這些作用劑可用作基礎(chǔ)科學(xué)研究和診斷應(yīng)用中的研發(fā)工具，用作治療以色素沉著過(guò)度(hyperpigmentation)為特征的皮膚病的藥妝品(cosmeceuticals),和用作治療依賴?yán)野彼崦富钚源龠M(jìn)其致瘤性的病理狀態(tài)的治療劑。
[0013]黑色素對(duì)于保護(hù)人體免于紫外線的有害影響起重要作用。黑色素還是醫(yī)學(xué)和美容學(xué)中的一種重要因子。已知黑色素在皮膚組織中形成或合成。黑色素過(guò)多導(dǎo)致皮膚變黑，黑色素分布不均勻?qū)е曼S褐斑和雀斑，它們都是皮膚疾病。黑色素的生物合成涉及酪氨酸催化羥基化為L(zhǎng)-3, 4-二羥基苯丙氨酸(L-DOPA)及L-DOPA轉(zhuǎn)變成多巴色素(dopachrome)。抑制黑色素合成的一種有效方法是阻斷酪氨酸的羥基化。
[0014]氫醌(HQ)從1950年代起即被用于可商購(gòu)的非處方皮膚美白產(chǎn)品，從1960年代起即用作可商購(gòu)的醫(yī)藥品。它還被用于化妝品，例如染發(fā)劑和美甲產(chǎn)品。從2001年開(kāi)始，在歐盟國(guó)家HQ已不被許可用于化妝用皮膚美白制劑，盡管含有熊果苷(一種HQ類似物)的產(chǎn)品和植物性藥材(botanicals)，包括天然含有HQ和熊果苷的植物，仍然存在于歐洲國(guó)家的市場(chǎng)上° 另見(jiàn) Matsubayashi 等，“Pharmaceutical and clinical assessment ofhydroquinone ointment prepared by extemporaneous nonsterile compounding,，’BiolPharm Bull.2002Jan; 25 (I):92_6。如該文公開(kāi)的，在日本已經(jīng)模仿在美國(guó)和歐盟可商購(gòu)的皮膚美白霜(skin lightening cream)利用即時(shí)無(wú)消毒的配合法(extemporaneousnonsterile compounding)制備皮膚脫色劑氫醌(HQ)的軟膏。然而，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種問(wèn)題，包括HQ軟膏的色差、相對(duì)較大的效力差異和不良的副作用，盡管它們較為溫和。HQ的公開(kāi)IC50 大約為 700 μ Mo
[0015]含有氫醌的療法在亞洲國(guó)家已經(jīng)被法律禁止，使得許多受這種疾病困擾的人們無(wú)法接受常規(guī)HQ治療。實(shí)際上，美國(guó)FDA已經(jīng)發(fā)布一項(xiàng)聲明表示其也可能禁止在國(guó)內(nèi)使用氫醌。而且，氫醌與內(nèi)臟惡性腫瘤有關(guān)，選擇長(zhǎng)期局部給藥的治療方式可能帶來(lái)潛在的危害。在最佳條件下，氫醌僅能部分地減輕色素沉著過(guò)度。一些藥妝品制劑包含其它活性成分，例如曲酸(kojic acid)、熊果苷和維生素C，但是由于化學(xué)品的不穩(wěn)定性和不能將活性輸送到合適的皮膚層等問(wèn)題，迄今為止，效果仍然令人失望。盡管采用了更高的濃度，但是患者經(jīng)常由于皮膚刺激而中斷治療。為此，人們添加局部類固醇來(lái)減輕活性成分例如視色素A和氫醌造成的刺激。因?yàn)楹诎卟?melasma)和其它色素沉著過(guò)度(hyperpigmentary)疾病經(jīng)常需要數(shù)月到數(shù)年的治療，所以，以對(duì)抗活性成分刺激效果所需的強(qiáng)度對(duì)面部局部使用類固醇，不可能不會(huì)導(dǎo)致局部類固醇誘發(fā)的副作用。當(dāng)對(duì)面部連續(xù)局部使用中等或更高的效力的類固醇超過(guò)數(shù)周時(shí)，通常會(huì)出現(xiàn)皮膚萎縮(skin atrophy)、變脆和毛細(xì)血管擴(kuò)張(telengiectasia)。這種副作用是不可接受的,特別是在面部等區(qū)域。
[0016]紅外激光器的使用已經(jīng)獲得了一些成功。它們一般對(duì)于將色素定位于較深層皮膚區(qū)域(例如真皮)的疾病效果較好。為了有效地處理表皮，通常采用切除治療(ablativetreatment)。該治療伴隨著患者長(zhǎng)期停工(downtime),包括造成二度燒傷(second-degreebum)或者糜爛(erosion),使患者容易被感染。此外,激光治療是一個(gè)昂貴的治療選項(xiàng),許多患者承擔(dān)不起。在極端的情形，當(dāng)漂白劑不成功時(shí)，有人采取皮膚脫色(depigmentation)的手段。很多病理狀態(tài)會(huì)導(dǎo)致色素異常沉積在皮膚內(nèi)。例如，眾所周知，激素失調(diào)會(huì)導(dǎo)致面部和肢端色素沉著過(guò)度，這最常見(jiàn)于婦女懷孕期間或產(chǎn)后。這種色素沉著過(guò)度往往會(huì)影響到容貌，導(dǎo)致自尊心問(wèn)題和社交尷尬。黑斑病經(jīng)常影響Fitzpatrick型IV-VI皮膚的個(gè)體。這些人占世界人口的相當(dāng)大一部分。
[0017]很多具有Fitzpatrick型IV-VI皮膚的個(gè)體是亞裔。
[0018]根據(jù)Fitzpatrick皮膚類型尺度(scale),基于對(duì)陽(yáng)光照射的外觀和皮膚反應(yīng)測(cè)試，個(gè)體可大體上被如下分類:
[0019]I型:膚色很淺(Very fair skin tone),白膚金發(fā)碧眼(blond)或紅發(fā)(redhead),
[0020]II型:膚色淺(Light skin tone),可曬成棕色(tan),但是經(jīng)常曬黑(burns),
[0021]III型:膚色白到橄欖色，有時(shí)曬黑，
[0022]IV型:膚色中等棕色，很少曬黑，
[0023]V型:膚色暗棕，非常少曬黑，
[0024]VI型:膚色黑，眼睛很黑，不易曬黑(burn resistant)。
[0025]除了黑斑病之外，在粉刺和酒糟鼻等病癥所導(dǎo)致的炎癥等之后可能在容易影響外貌的區(qū)域(例如面部)發(fā)生高色素沉著。這些狀況也會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的心理不適。在美國(guó)，每年有130億美元用于藥妝品消費(fèi)。由于美國(guó)市場(chǎng)上對(duì)氫醌禁用的預(yù)期，加上市場(chǎng)上現(xiàn)有的其它非藥物制劑仍然存在穩(wěn)定性(維生素C)或輸送(熊果苷、曲酸等)方面的問(wèn)題，寡肽抑制劑可能為這種亟待解決的巨大需求提供一條解決之道。
[0026]具體的專利和公開(kāi)
[0027]Scot 等，“Production of cyclic peptides and proteins in vivo,，，Proc.Nat.Acad.Sc1.Vol.96，Issue24, 13638-13643，November23, 1999，公開(kāi)了在細(xì)菌中產(chǎn)生環(huán)狀八氨基酸酪氨酸酶抑制劑(cyclic, eight-amino acid tyrosinase inhibitor)pseudostellarin F0
[0028]Verma 等,“Modulation of agonist binding to human dopamine receptorsubtypes by L-proIy1-L-leucyl-glycinamide and a peptidomimetic analog,”JPharmacol Exp Ther.2005Dec; 315 (3): 1228-36.Epub2005Aug26,公開(kāi)了下丘腦三肽 L-脯氨酰-L-亮氨酰-甘氨酰胺(PLG)及其構(gòu)象約束模擬物(conformationalIy constrainedanalog) 3 (R) - [(2 (S)-吡咯烷基羰基)氨基]_2_氧-1-吡咯烷乙酰胺(PAOPA)在調(diào)節(jié)激動(dòng)劑與人多巴胺(DA)受體亞型的結(jié)合中的作用。
[0029]于2000年12月26日授權(quán)公告的授予Yamada等的US6，165，982，標(biāo)題為“Useof sericin as antioxidants and tyrosinase inhibitors，，的專利，公開(kāi)了一種可用作抗氧化劑或酪氨酸酶活性抑制劑的組合物，其包含作為活性成分的、足夠量的絲膠蛋白(sericin)以發(fā)揮抗氧化能力。絲膠蛋白是絲綢的一種高分子量、天然、可溶性糖蛋白組分。絲膠蛋白與皮膚和毛發(fā)的角蛋白結(jié)合，形成保護(hù)性膜。
[0030]于1992年6月30日授權(quán)公告的授予Takeuchi等的US5，126，327，標(biāo)題為“Melanocyte-stimulating hormone inhibitor and external preparation containingthe same”的專利，公開(kāi)了一種促黑激素抑制劑，其具有一定的氨基酸序列，一個(gè)具有1_12個(gè)碳原子的?；?，一個(gè)氨基酸殘基，或其具有1-12個(gè)碳原子的?；苌?，具有2-40個(gè)氨基酸殘基的肽殘基或其?；苌?。
[0031]于2006 年 4 月 11 日公告的授予 Arquette 的 US7, 025，957，標(biāo)題為“Compositionand method to whiten skin”的專利，公開(kāi)了一種可有效作為皮膚增白劑的組合物。該組合物包括 Simmondsin,—種從加州希蒙得木粉(jojoba meal) (Simmondsia chinensis)提取出的苷。在某些實(shí)施方案中，該組合物包括加州希蒙得木(Simmondsia chinensis)提取物。該組合物通過(guò)向個(gè)體局部涂施可有效美白皮膚的量的制劑，其中該組合物包括加州希蒙得木提取物。
[0032]于2006 年 8 月 I 日公告的授予 Fotinos 等的 US7, 083，781，標(biāo)題為“Film formingpolymers, methods of use, and devices and applications thereof，，的專利，公開(kāi)了用于向受試者的皮膚輸送活性劑的組合物和方法，包括聚合物、活性成分和溶劑，該組合物能夠通過(guò)滾壓(rolling)、涂布(spreading)、噴霧(aerosol)或以液滴形式進(jìn)行輸送,并且能夠形成與皮膚接觸的膜。該成膜組合物中可以摻入本領(lǐng)域已知的化妝活性劑，用于改善皮膚外觀。用于制衡該癥候的典型抗色素沉著過(guò)度劑包括酪氨酸酶抑制劑，例如肽混合物和植物提取物、發(fā)酵產(chǎn)物，和抗氧化劑，例如氫醌、曲酸、抗壞血酸衍生物、氫醌的合成或天然衍生物和氫醌的前體。在該發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，抗色素沉著過(guò)度劑是Pentharm公司(巴塞爾，瑞士)的Melawhite ;Coletica(法國(guó))的 BiowhiteTM ;Sederma(法國(guó))的 Etioline ；Kelesima (意大利)的 Arbossa ;Gattefosse (法國(guó))的 Gatuline whitening ;Exsymol (摩納哥)的Ascorbocilan C和Alps Pharm(日本)的曲酸。
[0033]于2006 年 10 月 24 日公告的授予 Lee 的 US7, 125，572，標(biāo)題為 “Tyrosinaseinhibitor extract”的專利,公開(kāi)了來(lái)自朽1檬皮的酪氨酸酶抑制劑提取物。該酪氨酸酶抑制劑提供了有利的皮膚美白效果。根據(jù)該發(fā)明，該發(fā)明的酪氨酸酶抑制劑提取物在280nm具有主吸收。這表明，該酪氨酸酶抑制劑提取物含有某種蛋白或肽。人們認(rèn)為這種蛋白質(zhì)或肽是抑制酪氨酸酶的主要活性成分。提取物的其它成分可能提供額外的效果，例如抗老化和抗氧化。酪氨酸酶抑制劑提取物可以被制備成多種形式，包括護(hù)膚液(lotions)、乳膠、乳霜(creams)、軟膏、貼劑(sticks)、溶液、包劑(pack)和凝膠。酪氨酸酶抑制劑提取物可以和任何化妝品中通常使用的成分混合，例如油性物質(zhì)、保濕劑、增稠劑、防腐劑、乳化劑、藥物成分、香料、乳化穩(wěn)定劑等。
[0034]各種其它的專利和出版物公開(kāi)了無(wú)關(guān)的肽。見(jiàn)例如US6，982，249，其公開(kāi)了 TRAP:凝血酶受體激活肽(與SEQ ID NO:1有關(guān))。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0035]下面的簡(jiǎn)述不意圖包括本發(fā)明的全部特征和方面，也不意味著本發(fā)明必須包含在本簡(jiǎn)述中討論的全部特征和方面。
[0036]本發(fā)明涉及某些肽序列，例如:
[0037]>1SEQ ID NO:1
[0038]SFLLRN ( “ SF 肽”)
[0039]>2SEQ ID NO:2
[0040]RADSRADC ( “RA 肽”)
[0041]>SEQ ID N0:3(比較例)(“VL 肽”)
[0042]VLLK`[0043]此外，使用三肽PLG-OH ( “PLG” )，和對(duì)照聚L-乳酸。
[0044]此外，可以對(duì)RADSRADC序列進(jìn)行改變，例如
[0045]>SEQ ID NO:4:
[0046]RGDSRGDC
[0047]本發(fā)明進(jìn)一步涉及含有本發(fā)明肽的套盒和組合物，和治療涉及酪氨酸表達(dá)的病癥的方法，其中局部施用本發(fā)明肽以治療涉及皮膚內(nèi)黑素細(xì)胞活性的病癥，也可以體內(nèi)施用。需要注意，PLG肽含有天然氨基和羧基末端。它以PLG-OH表記，表示天然的羧基末端。這與已知的具有甘氨酰胺末端的肽PLG-NH2不同。
[0048]而且，本發(fā)明肽對(duì)人皮膚刺激小，并可以在局部應(yīng)用中替代氫醌(HQ)，產(chǎn)生基本上沒(méi)有HQ的制劑。
[0049]本發(fā)明進(jìn)一步涉及含有本發(fā)明肽的套盒和組合物，以及治療涉及酪氨酸酶表達(dá)的病癥的方法，其中局部施用本發(fā)明肽，用于治療涉及皮膚中黑素細(xì)胞活性的疾病。其它制劑也可在身體的其它區(qū)域處理酪氨酸酶活性，并可以體內(nèi)施用。
[0050]因此，在某些方面中，本發(fā)明涉及一種純化的肽，與氨基酸序列RADSRADC具有至少63%同一性，并且對(duì)酪氨酸酶的IC50小于大約10mM。所述肽實(shí)際上可以在最多達(dá)3個(gè)位置上發(fā)生替換，包括缺失。本文提供了產(chǎn)生這些改變以及測(cè)試其抑制效力的指導(dǎo)。在一些情況下，肽的IC50小于大約5mM，或者甚至更低。在一些情況下，用R或F替換某個(gè)殘基落在本發(fā)明的范圍之內(nèi)，因?yàn)檫@些殘基可提高肽與酪氨酸酶的結(jié)合?？梢杂?-3個(gè)氨基酸被V，A，L，M或I替換，因?yàn)檫@些殘基可提高抑制功能。
[0051]此外，可以用L或R替換K;用W或Y替換F ;用D替換E，因?yàn)橐阎@些殘基是相似的。而且，在一些實(shí)施方案中，具有兩個(gè)毗鄰的帶電氨基酸是有利的。在某些方面中，本發(fā)明包括對(duì)一些或全部氨基酸使用D氨基酸。肽可以和調(diào)芐基團(tuán)相連，如下文定義的，例如棕櫚酸或酯。
[0052]在一個(gè)方面中，替換可以用圖表形式提供:
[0053]
【權(quán)利要求】
1.一種純化的肽，其對(duì)酪氨酸酶的IC50小于IOmM,并且其由PLG-OH構(gòu)成。
2.權(quán)利要求1的肽，其IC50小于5mM。
3.權(quán)利要求1的肽，其包含D-氨基酸。
4.權(quán)利要求1的肽，其與調(diào)芐基團(tuán)相連。
5.權(quán)利要求4的肽，其中調(diào)芐基團(tuán)是脂肪酸。
6.權(quán)利要求5的肽，其中PLG-OH的P和L是D氨基酸。
7.一種局部口服或可注射制劑，其包含有效量的酪氨酸酶抑制劑，所述酪氨酸酶抑制劑是由PLG-OH構(gòu)成的肽。
8.權(quán)利要求7的制劑，其中肽的濃度小于IC50的2倍。
9.權(quán)利要求7的制劑，其中肽的濃度大于IC50的2倍。
10.權(quán)利要求7的制劑，其中沒(méi)有氫醌。
11.權(quán)利要求7的制劑，進(jìn)一步包括第二處理劑，所述第二處理劑是可以用于治療或緩解皮膚癥候的成分，或可降低該肽與磨皮處理聯(lián)合施用時(shí)的刺激作用的成分。
12.權(quán)利要求7的制劑，其中所述第二處理劑是RADSRADC肽。
13.權(quán)利要求7的制劑，其處于液體形式。
14.權(quán)利要求7的制劑，進(jìn)一步包括選自下組的材料:保濕制劑、抗氧化制劑和自由基清除劑。
15.權(quán)利要求7的制劑，其中所述肽包含在脂質(zhì)體中。
16.一種皮膚醫(yī)學(xué)上可接受的局部制劑，其包含有效量的皮膚美白劑和選自下組的酪氨酸酶抑制劑=SFLLRN和PLG-OH，和具有針對(duì)SFLRNN的I個(gè)氨基酸替換的化合物，所述替換是依照用第2列的氨基酸對(duì)第I列的氨基酸的置換:
17.與SFLLRN相同的肽或PLG-OH肽在制備用于處理皮膚的藥物中的用途，其中所述藥物包含足以抑制酪氨酸酶從而減輕皮膚色素沉著的量的所述肽。
18.權(quán)利要求17的用途，其中所述肽是SFLLRN。
19.權(quán)利要求17的用途，其中SFLLRN含有一個(gè)或兩個(gè)氨基酸替換，其中不是R或F的殘基可以被替換為R或F，且殘基可被替換為V，A，L，M或I。
20.權(quán)利要求17的用途，其中所述藥物是用于局部施用的。
21.權(quán)利要求17的用途，其中所述藥物是用于與第二處理劑分別施用的，所述第二處理劑是可以用于治療或緩解皮膚癥候的成分，或可降低該肽與磨皮處理聯(lián)合施用時(shí)的刺激作用的成分。
22.權(quán)利要求17的用途，其中所述藥物是用于與微晶皮膚磨削過(guò)程聯(lián)合施用的。
23.權(quán)利要求17的用途，其中所述藥物是用于與微晶皮膚磨削過(guò)程同時(shí)施用的。
24.權(quán)利要求17的用途，其中所述藥物是用于與輻射過(guò)程聯(lián)合施用的。
25.權(quán)利要求17的用途，其中所述藥物是用于與通過(guò)磨削裝置、微針、電穿孔裝置或離子電滲裝置實(shí)施的物理處理聯(lián)合施用的。
26.一種用于實(shí)施皮膚美白程序的套盒，其包含對(duì)酪氨酸酶的IC50小于IOmM的純化的PLG-OH或SFLLRN肽、皮膚醫(yī)學(xué)上可接受的載體、第二處理產(chǎn)品和使用說(shuō)明，所述第二處理產(chǎn)品是可以用于治療或緩解皮膚癥候的成分，可降低該肽與磨皮處理聯(lián)合施用時(shí)的刺激作用的成分。
27.權(quán)利要求2 6的套盒，其中所述肽和所述載體是預(yù)先組合的。
【文檔編號(hào)】A61Q19/02GK103864892SQ201410043510
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2008年6月25日 優(yōu)先權(quán)日:2007年6月27日
【發(fā)明者】巴錫爾·M·漢塔什 申請(qǐng)人:里蘭斯坦福初級(jí)大學(xué)理事會(huì)