洗滌劑組合物的制作方法
【專利摘要】含有脲基基團(tuán)的肽醛是洗滌劑組合物中蛋白酶的有效穩(wěn)定劑，且為含有蛋白酶的液體組合物中第二酶的有效穩(wěn)定劑。
【專利說明】洗滌劑組合物
[0001]本申請是基于申請日為2009年11月11日， 優(yōu)先權(quán)日:為2008年11月13日，申請?zhí)枮?00980144821.X (PCT/EP2009/064972)，發(fā)明名稱為:“洗滌劑組合物”的專利申請的
分案申請。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及包含表面活性劑和蛋白酶的液體洗滌劑組合物，并涉及包含蛋白酶和任選地第二酶的液體酶組合物。更具體而言，其涉及并入穩(wěn)定所述蛋白酶和/或所述第二酶的化合物的此類組合物。此外，本發(fā)明還涉及用于此類組合物的穩(wěn)定化合物。
【背景技術(shù)】
[0003]EP 0 583 534 A、TO 94/04651 A、TO 98/13458 A 和 TO 2007/145963 A 描述了在包含可逆的肽醛蛋白酶抑制劑的液體洗滌劑組合物中的酶穩(wěn)定化。WO 95/25791 A描述了使用非蛋白蛋白酶抑制劑的制備蛋白酶的方法。
[0004]a-MAP1、抗痛素、GE20372A和糜蛋白酶抑制素A、B和C作為具有蛋白酶抑制活性的月太醒描述于 R.J.Broadbridge 等,Chem.Commun.(1998), 1449.E.Sarubbi等,FEBS Letters, 319 (3), 253-256(1993).1.J.Galpin 等,Int.J.Peptide ProteinRes.，23，1984，477-486。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)某些含有“雙重N-封端基團(tuán)(如脲基(N-CO-N)、草酰胺(N-CO-CO-N)、硫脲基(N-CS-N)、二硫代草酰胺(N-CS-CS-N)或硫代草酰胺(N-CS-CO-N)基團(tuán))”的肽醛作為蛋白酶在液體酶配制物和液體洗滌劑組合物中的有效穩(wěn)定劑，且作為第二酶在含有蛋白酶的液體組合物中的有效穩(wěn)定劑。他們還發(fā)現(xiàn)用水稀釋所述酶配制物或洗滌劑組合物時，所述肽醛可從蛋白酶釋放。
[0006]相應(yīng)地，本發(fā)明提供了包含表面活性劑、蛋白酶和下式的穩(wěn)定劑的洗滌劑組合物:
[0007]P-O- (A1-X)n-Antl-H
[0008]其中一個X是所述“雙重N-封端基團(tuán)”，CO、CO-CO, CS、CS-CS或CS_C0(最優(yōu)選CO),而其它X什么基團(tuán)都不是(are nothing)(即，化學(xué)鍵)，
[0009]其中n=l-10，優(yōu)選2-5，最優(yōu)選3
[0010]其中i是從I至n的整數(shù)
[0011]其中每個Ai和An+1是具有下述結(jié)構(gòu)的氨基酸殘基:
[0012]對于所述雙重N-封端基團(tuán)右邊的殘基，-NH-CR-C0-,或
[0013]對于所述雙重N-封端基團(tuán)左邊的殘基，-CO-CR-NH-
[0014]其中R是H-或任選地取代的烷基或烷基芳基，其可任選地包含雜原子，并可任選地連接于N原子，和[0015]其中P是氫或任何C-端保護(hù)基團(tuán)。
[0016]本發(fā)明還提供了一種酶組合物，包含濃度按酶蛋白的重量計為至少0.1%的蛋白酶和上式的穩(wěn)定劑。
[0017]此外，本發(fā)明提供了一種酶組合物，包含蛋白酶，第二酶和上式的穩(wěn)定劑。
[0018]最后，本發(fā)明提供了具有式HO-A1-CO-A2-A3-A4-H的穩(wěn)定劑，其中A1是Phe殘基，A2是Arg或Gly殘基，A3是Val或Gly殘基,而A4是Tyr殘基。
[0019]發(fā)明詳述
[0020]穩(wěn)定劑
[0021]用作蛋白酶穩(wěn)定劑的肽醛具有結(jié)構(gòu)P-O-(A1-X)n-Alrt-H,其具有“雙重N-封端基團(tuán)”，x=co、co-co、CS、CS-CS或CS-C0。其優(yōu)選含有四個氨基酸殘基并優(yōu)選在兩個該殘基之間含有脲基(-NH-C0-NH-)。因此，其結(jié)構(gòu)為 P-O-A1-CO-A2-A3-A4-HK-A1-A2-CO-A3-A4-H 或P-O-A1-A2-A3-CO-A4-H,其中在脲基右側(cè)的氨基酸殘基具有結(jié)構(gòu)-NH-CR-C0-，而在脲基基團(tuán)左邊的殘基反轉(zhuǎn)為-C0-CR-NH-。
[0022]Ai和An+1，最優(yōu)選A1和/或A2和/或A3和/或A4可為氨基酸，例如L-氨基酸，特別是天然存在的氨基酸、L-正亮氨酸(Nle)、L-正繳氨酸(Nva)或卷須霉唳(capreomycidine)(Cpd)的殘基。具體而言，A1 可為 Tyr、Leu、Phe、Met、Nle 或 Nva ;A2 可為 Gly、Ala、Val、Arg、Leu 或 Cpd ; A3 可為 Ala、Val、Gly、Leu 或 lie;而 A4 可為 Phe、Tyr > Leu、Nva、Nle、Met或 Arg。
[0023]P可為H-或C-端保護(hù)基團(tuán)Me-、Et-或CF3-
[0024]所述穩(wěn)定劑可具有式HO-A1-CO-A2-A3-A4-H,例如，下述化合物:(其中每個氨基酸均為L-形式，除非另行指明):
[0025]簡稱A1A2A3A4
a-MAPIPhcArgValPhc
P-MAPIPheArgValD-Phe
F-CO-RVY-HPheArgValTyr
F-CO-GGY-HPheGlyGlyTyr
F-CO-GAF-HPheGlyAlaPhc
F-CO-GAY-HPheGlyAlaTyr F-CO-GAL-HPheGlyAlaLcu
F-CO-GA-Nva-HPhcGlyAlaNva
F-CO-GA-Nlc-HPheGlyAlaNlc
Y-CO-RVY-HTyrArgValTyr
Y-CO-GAY-HTyrGlyAlaTyr
F-CS-RVF-HPheArgValPhe
F’-CS-RVY-HPheArgValTyr
F-CS-GAY-HPheGlyAlaTyr
抗痛素PheArgValArg
GE20372ATyrArgValPhc
GE20372BTyrArgValD-Phc
糜蛋白酶抑制素APheCpdLcuPhc
糜蛋白酶抑制素BPheCpdValPhc
糜蛋白酶抑制素CPheCpdHePhc
[0026]所述穩(wěn)定劑可通過本領(lǐng)域已知方法制備，例如，由R.J.Broadbridge等，Chem.Commun.，1998，1449 - 145 ；由 P.Page 等，J.0rg.Chem.，1999，64，794-799 ；或由1.J.Galpin 等,Int.J.Peptide Protein Res., 23, 1984, 477-486 所述的方法。
[0027]抑制劑對蛋白酶的摩爾比可為0.1:1至100:1，例如0.5:1-50:1,1:1-25:1或2:1-10:1。
[0028]任選的第二穩(wěn)定劑
[0029]任選地，所述酶或洗滌劑組合物可包含一種或多種其它蛋白酶穩(wěn)定劑。實(shí)例為硼酸衍生物、有機(jī)酸、蛋白和肽類抑制劑以及肽醛，例如，如W01995/029223、W0 1996/041859、WO 2006/045310, WO 2006/045310, W02007/113142, WO 2008/116915、WO 2009/095425 (專利申請 EP 08150977.0)、TO 2009/118375 (專利申請 EP 08153299.6)、WO 2007/145963 或W02007/141736 中所述的。
[0030]蛋白酶
[0031]所述蛋白酶可為絲氨酸、半胱氨酸或天冬氨酸蛋白酶。其可為堿性微生物蛋白酶，胰蛋白酶樣蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶，例如來源于芽孢桿菌屬的枯草桿菌蛋白酶。所述蛋白酶可為枯草桿菌蛋白酶Novo、枯草桿菌蛋白酶Carlsberg、枯草桿菌蛋白酶BPN’、枯草桿菌蛋白酶309、枯草桿菌蛋白酶147和枯草桿菌蛋白酶168 (描述于W089/06279)、胰蛋白酶(例如豬或牛來源的)、WO 89/06270中描述的鐮孢屬(Fusarium)蛋白酶、WO 1998/020115、WOO1/44452, WO 01/58275、WO 01/58276、WO 2003/006602 或 WO 2004/099401 中描述的蛋白酶，或其可具有與這些之一至少90%、至少95%、至少98%或至少99%相同的氨基酸序列。
[0032]商業(yè)上可獲得的蛋白酶(肽酶)的實(shí)例包括Kannase?、Everlase?、Esperase?、Alcalase?、Neutrase?、Durazym?、Savinase?、Ovozyme?、Liquanase?、Polarzyme?、Pyrase?、Pancreatic Trypsin NOVO(PTN) > Bio-Feed? Pro 和 Clear-Lens? Pro (均可從Novozymes A/S、Bagsvaerd、Denmark獲得)。其它商業(yè)上可獲得的蛋白酶包括Ronozyme?Pro、Maxatase?、Maxacal?、Maxapem?、OpticleanTM、ProperaseTM、Purafect?、Purafect Ox?和 Purafact Prime?(可從 Danisco Genencor、Gist-Brocades、BASF 或 DSM NutritionalProducts 獲得)。 [0033]第二酶
[0034]除了蛋白酶之外，所述液體組合物可任選地包含一種或多種其它酶，例如，選自淀粉酶、脂肪分解酶(尤其是脂肪酶)、纖維素酶、甘露聚糖酶和氧化還原酶。
[0035]所述淀粉酶可為細(xì)菌或真菌來源的a-淀粉酶，例如，來自地衣芽孢桿菌(B.1icheniformis)，描述于GB1，296，839的a-淀粉酶。商業(yè)上可獲得的淀粉酶為Duramy 1?> Termamy 1?> Stainzyme?、Stainzyme Plus?、Termamyl Ultra?、Fungamyl? 和BAN?(可從 Novozymes A/S 獲得)以及 Rapidase?、Maxamyl P?> Purastar 和 PurastarOxAm(可從 Gist-Brocades and Danisco Genencor 獲得)。
[0036]所述纖維素酶可為細(xì)菌或真菌來源的。其可為來自特異腐質(zhì)霉(Humicolainsolens) (US4, 435, 307)或來自木霉屬(Trichoderma)例如里氏木霉(T.reesei)或綠色木霉(T.viride)的真菌纖維素酶。纖維素酶的實(shí)例描述于EP 0 495 257。商業(yè)上可獲得的纖維素酶包括 Carezyme?、Celluzyme?、Endolase?、Celluclean ?(可從 Novozymes 獲得)、Puradax> Puradax HA 和 Puradax EG (可從 Danisc。Genencor 獲得)。
[0037]所述氧化還原酶可為過氧化物酶或氧化酶如漆酶。所述過氧化物酶可為植物、細(xì)菌或真菌來源的。實(shí)例為來源于鬼傘屬(Coprinus)如灰蓋鬼傘(C.cinerius)或長根鬼傘(C.macrorhizus)菌株的過氧化物酶,或?yàn)閬碜匝挎邨U菌屬，例如，短小芽孢桿菌(B.pumilus)菌株的過氧化物酶，特別是根據(jù)W091/05858的過氧化物酶。本文中合適的漆酶包括細(xì)菌或真菌來源的那些。實(shí)例為來自栓菌屬(Trametes)，例如，長絨毛栓菌(T.villosa)或變色栓菌(T.versicolor)的菌株，或者來自鬼傘屬，例如，灰蓋鬼傘的菌株，或者來自毀絲霉屬(Myceliophthora),例如，嗜熱毀絲霉(M.thermophila)的菌株的漆酶。
[0038]所述脂肪分解酶可為細(xì)菌或真菌來源的脂肪酶或角質(zhì)酶(cutinase)。實(shí)例包括EP 258 068和EP 305 216中所述來自細(xì)毛嗜熱霉(Thermomyces Ianugunosus)(疏棉狀腐質(zhì)霉(Humicola lanuginosa))的脂肪酶，曼赫根毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶，例如，如EP 238 023中所述,念珠菌屬(Candida)脂肪酶,如南極念珠菌(C.antarctica)脂肪酶，例如，EP 214 761中描述的南極念珠菌脂肪酶A或B，尖鐮孢(fusariumoxysporum)脂肪酶(W098/26057),假單胞菌屬(Pseudomonas)脂肪酶如類產(chǎn)堿假單胞菌(P.pseudoalcaligenes)和產(chǎn)堿假單胞菌(P.alcaligenes)脂肪酶，例如，如 EP 218 272中所述，洋蔥假單胞菌(P.cepacia)脂肪酶，例如，如EP 331 376中所述，施氏假單胞菌(P.stutzeri)脂肪酶，例如，如BP I, 372, 034中所公開，突光假單胞菌(P.fluorescens)脂肪酶，芽孢桿菌屬(Bacillus)脂肪酶，例如，枯草芽孢桿菌(B.subtilis)脂肪酶(Dartois 等，(1993)，Biochemica et Biophysica acta 1131，253-260),嗜熱脂肪芽抱桿菌(B.stearothermophiIus)脂肪酶(JP64/744992)和短小芽抱桿菌(B.pumilus)月旨肪酶(WO 91/16422)。沙門柏干酪青霉(Penicillium camenbertii)脂肪酶(Yamaguchi等，(1"1)，GenelO3, 61-67),念珠地絲菌(白地霉)(Geotricum candidum)脂肪酶(Schimada, Y.等,(1989), J.Biochem.106, 383-388)，和多種根霉屬(Rhizopus)脂肪酶如德氏根霉(R.de Iemar)脂肪酶(Hass, M.J 等，(1991)，Genel09，117-113)，雪白根霉(R.niveus)脂肪酶(Kugimiya 等,(1992), Biosc1.Biotech.Bio-chem.56, 716-719)和米根霉(R.0ryzae)脂肪酶。其它實(shí)例為來自門多薩假單胞菌(Pseudomonas mendocina)的角質(zhì)酶(W088/09367),來自豌豆腐皮鐮孢(Fusarium solani pisi)的角質(zhì)酶(WO 90/09446)和來自特異腐質(zhì)霉的角質(zhì)酶(WO 2001/092502)。所述脂肪分解酶可為脂肪酶變體，例如，WO 2000/060063 中所述的。
[0039]商業(yè)上可得到的脂肪酶實(shí)例包括Lipex?、Lipoprime?、Lipopan?、Lipopan F?、Lipopan Xtra?、 Lipolase?、 Lipolase? Ultra、 Lipozyme?、 Palatase?、 Resinase?、Novozym? 435和Lecitase?(全部可從Novozymes A/S獲得)。其它商業(yè)上可得到的脂肪酶包括Lumafast?(來自Danisco Genencor的門多薩假單胞菌脂肪酶)；Lipomax?(來自Gist-Brocades或Danisco Genencor的類產(chǎn)喊假單胞菌脂肪酶)；和來自Solvay enzymes的芽孢桿菌屬菌種脂肪酶。另外的脂肪酶如Lipase P"Amano" (Amano PharmaceuticalC0.Ltd.)可從其它供應(yīng)商獲得。
[0040]甘露聚糖酶的實(shí)例包括 Mannaway?(Novozymes 的產(chǎn)品)和 MannaStar (DaniscoGenencor 的產(chǎn)品)。
[0041]序列同一性
[0042]兩個氨基酸序列之間的同一性程度計算為兩個序列的比對中的準(zhǔn)確匹配數(shù)，除以兩個序列中較短者的長度。結(jié)果表示為百分比同一性。當(dāng)兩個序列在重疊的相同位置具有相同氨基酸時發(fā)生準(zhǔn)確匹配。序列長度為序列中的氨基酸殘基的數(shù)目。
[0043]兩個氨基酸序列的比對可通過使用來自EMBOSS包(http://emboss.0rg)版本
2.8.0 的 Needle 程序來確定。所述Needle 程序執(zhí)行 Needleman, S.B.和 Wunsch, C.D.(1970)J.Mol.Biol.48，443-453中所述的全局比對算法。使用的取代矩陣是BL0SUM62，缺口開放罰分為10，而缺口延伸罰分為0.5。
[0044]或者,可使用由DNASTAR Inc.開發(fā)的MegAlign程序(版本7)進(jìn)行比對,該程序?yàn)?Lasergene 程序組的一部分，基于 Hein, J.J.(1990) ? “Unified approach to alignmentand phylogenies.，，于 Methods in Enzymology, Vol.183:pp.626-645。使用 Jotun HeinMethod和設(shè)置GAP PENALTY=11, GAP LENGTHPENALTY=3用于多重比對，而KTUPLE (K元組)=2用于配對比對，可計算出一系列百分比同一性值。
[0045]洗滌劑組合物
[0046]所述洗滌劑組合物是液體組合物。除了蛋白酶之外，所述組合物還可包含第二酶，尤其是脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶或糖酶。[0047] 本發(fā)明特別適用于在酶穩(wěn)定性問題嚴(yán)重時配制液體洗滌劑。所述液體組合物可為水性的，通常含有5-95%水，例如5-15%或20-70%水和0-20%有機(jī)溶劑(下文中均為按重量計的百分比)。
[0048]所述洗滌劑包含可為陰離子型、非離子型、陽離子型、兩性型或這些類型組合的表面活性劑。所述洗滌劑通常含有5-30%陰離子型表面活性劑如直鏈烷基苯磺酸酯(LAS)、a-鏈烯烴磺酸酯(AOS)、醇乙氧基硫酸酯(alcohol ethoxy sulphate, AES)或阜類。其還可含有3-20%陰離子型表面活性劑如壬基苯酚乙氧基化物或醇乙氧基化物。
[0049]pH(在水性洗滌劑溶液中測量的)通常為中性或堿性的，例如7-10。所述洗滌劑可含有1-40%洗滌劑助洗劑如沸石、磷酸鹽、膦酸鹽、檸檬酸鹽、NTA、EDTA或DTPA，或其可為未助洗的(unbuilt)(即，基本上不含洗滌劑助洗劑)。其還可含有其它常規(guī)的洗滌劑成分，例如織物調(diào)理劑(fabric conditioner)、泡沫增強(qiáng)劑、殺菌劑、光學(xué)增亮劑和香料。
[0050]所述洗漆劑組合物可為織物清潔組合物、硬表面清潔組合物、軟質(zhì)(light duty)清潔組合物包括碗碟清洗組合物和自動洗碗機(jī)洗漆劑組合物。
[0051]所述液體組合物可包含約0.0001%至約10%，更具體而言約0.00015%至約1%，且最具體而言約0.001%至約0.1%的抑制劑。
[0052]因此，穩(wěn)定化的液體酶配制物通常含有按重量計0.5-20%,特別是按重量計1-10%的酶蛋白(蛋白酶和任選地第二酶的總量)和0.01%-10%的抑制劑，更具體而言按重量計
0.05-5%且最具體而言按重量計0.1%-2%的抑制劑。
[0053]液體洗滌劑配制物通常會含有0.04-400微摩爾酶(或1-1OOOOmg EP/L)，更具體而言 0.16-160 微摩爾酶(4-4400mg EP/L)且最具體而言 0.8-80 (20_2200mg EP/L)和約
1-20倍或更多的抑制劑，最具體而言約1-10倍更多的抑制劑。
[0054]所述洗滌劑組合物可含有水和其它溶劑作為載體。低分子量伯醇或仲醇，例如甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇是合適的。一元醇優(yōu)選用于增溶表面活性劑，但也可使用多元醇如含有約2至約6個碳原子的和約2至約6個羥基基團(tuán)的那些(例如1，3-丙二醇、丙二醇、甘油和1，2-丙二醇)。所述組合物可含有約5%至約90%，通常約10%至約50%此類載體。
[0055]優(yōu)選配制本文的洗滌劑組合物使得在用于水性清潔操作過程中，洗滌水會具有約
6.8至約11的pH。成品通常配制為該范圍。將pH控制在推薦使用水平的技術(shù)包括使用例如緩沖劑、堿和酸。此類技術(shù)對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的。
[0056]當(dāng)配制本發(fā)明的硬表面清潔組合物和織物清潔組合物時，配制者可能希望以按重量計約5%至約50%的水平使用多種助洗劑。通常的助洗劑包括1-10微米沸石、多元羧酸如檸檬酸和氧二琥珀酸(oxydisuccinate)、層狀硅酸鹽、磷酸鹽等。其它常規(guī)的助洗劑列于標(biāo)準(zhǔn)的處方集(formulary)。
實(shí)施例
[0057]實(shí)施例1:
[0058]本發(fā)明的多種肽醛是通過定制的肽合成公司產(chǎn)生的，均具有>80%的純度。在使用前，將肽醛溶解于DMSO至濃度為10mg/ml。
[0059]制備模式液體洗滌劑A以供測試多種穩(wěn)定劑:
[0060]
【權(quán)利要求】
1.一種液體洗滌劑組合物，包含表面活性劑、蛋白酶和下式的化合物:
P-O- (A1-X)n-A11+-H 其中一個X是“雙重N-封端基團(tuán)” CO、CO-CO、CS、CS-CS或CS-CO (最優(yōu)選CO)，而其它X什么基團(tuán)都不是(即，化學(xué)鍵)， 其中n=l-10，優(yōu)選2-5，最優(yōu)選3 其中i是從I至n的整數(shù) 其中每個Ai和An+1是具有下述結(jié)構(gòu)的氨基酸殘基: 對于所述雙重N-封端基團(tuán)右邊的殘基，_ NH-CR-C0-,或 對于所述雙重N-封端基團(tuán)左邊的殘基，-CO-CR-NH- 其中R是H-或任選地取代的烷基或烷基芳基，其可任選地包含雜原子，并可任選地連接于N原子,和 其中P是氫或任何C-端 保護(hù)基團(tuán)。
2.前述權(quán)利要求的組合物，其中n=3，且A1和/或A2和/或A3和/或A4是天然存在的氨基酸、L-正亮氨酸(Nle)、L-正纈氨酸(Nva)或卷須霉啶(Cpd)的殘基。
3.前述任一項權(quán)利要求的組合物,其中A1是Tyr、Leu、Phe、Met、Nle或Nva的殘基。
4.前述任一項權(quán)利要求的組合物，其中A2是Gly、Ala、Val、Arg、Leu或Cpd的殘基。
5.前述任一項權(quán)利要求的組合物，其中A3是Val、Gly、Leu或Ile的殘基。
6.前述任一項權(quán)利要求的組合物，其中A4是Phe、Tyr、Leu、Nva、Nle、Met或Arg的殘基。
7.前述任一項權(quán)利要求的組合物，其中P是H-、Me-、Et-或CF3-。
8.前述任一項權(quán)利要求的組合物，其中所述化合物具有式 HO-A1-CO-A2-A3-A4-H, 特別是 F-CO-RVF-H、F-CO-RVY-H 或 F-CO-GGY-H。
9.前述任一項權(quán)利要求的組合物，其還包含第二酶，尤其是脂肪酶、淀粉酶、纖維素酶或糖酶。
10.前述任一項權(quán)利要求的組合物，其中所述蛋白酶是堿性蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶或枯草桿菌蛋白酶。
11.一種液體酶組合物，包含濃度為按酶蛋白的重量計至少0.1%的蛋白酶和下式的化合物:
P-O- (A1-X)n-A11+-H 其中一個X是“雙重N-封端基團(tuán)” CO、CO-CO、CS、CS-CS或CS-CO (最優(yōu)選CO)，而其它X什么基團(tuán)都不是(即，化學(xué)鍵)， 其中n=l-10，優(yōu)選2-5，最優(yōu)選3 其中i是從I至n的整數(shù) 其中每個Ai和An+1是具有下述結(jié)構(gòu)的氨基酸殘基: 對于所述雙重N-封端基團(tuán)右邊的殘基，_ NH-CR-C0-,或 對于所述雙重N-封端基團(tuán)左邊的殘基，-CO-CR-NH- 其中R是H-或任選地取代的烷基或烷基芳基，其可任選地包含雜原子，并可任選地連接于N原子,和其中P是氫或任何C-端保護(hù)基團(tuán)。
12.—種液體酶組合物，包含蛋白酶、第二酶和下式的化合物:
P-O- (A1-X)n-A11+-H 其中一個X是“雙重N-封端基團(tuán)” CO、CO-CO、CS、CS-CS或CS-CO (最優(yōu)選CO)，而其它X什么基團(tuán)都不是(即，化學(xué)鍵)， 其中n=l-10，優(yōu)選2-5，最優(yōu)選3 其中i是從I至n的整數(shù) 其中每個Ai和An+1是具有下述結(jié)構(gòu)的氨基酸殘基: 對于所述雙重N-封端基團(tuán)右邊的殘基，_ NH-CR-C0-,或 對于所述雙重N-封端基團(tuán)左邊的殘基，-CO-CR-NH- 其中R是H-或任選地取代的烷基或烷基芳基，其可任選地包含雜原子，并可任選地連接于N原子,和 其中P是氫或任何C-端保護(hù)基團(tuán)。
13.一種化合物，具有式HO-A1-CO-A2-A3-A4-H,其中A1是Phe殘基，A2是Arg或Gly殘基，A3是Val或Gly殘基，且A4是Tyr殘基。
14.前述權(quán)利要·求的化合物，其為F-CO-RVY-H、F-CO-GGY-H、F-CO-GAF-H、F-CO-GAY-H、F-CO-GAL-H、F-CO-GA-Nl e-H、F-CO-GA-Nva-H、Y-⑶-RVY-H、Y-CO-GAY-H, F-CS-RVF-H、F-CS-RVY-H和 F-CS-GAY-H。
【文檔編號】C11D3/60GK103589529SQ201310516335
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2009年11月11日 優(yōu)先權(quán)日:2008年11月13日
【發(fā)明者】朗.K.尼爾森, 利斯.M.米克爾森, 艾斯本.P.弗里斯, 于爾根.C.F.諾伊策爾, 奧爾.西蒙森 申請人:諾維信公司