一種利用野生葛根制備高純度葛根黃酮提取物的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，該方法包括如下步驟：將粉碎后的野生葛根加入提前預(yù)冷的磷酸氫二鈉?檸檬酸緩沖液，加入復(fù)合酶和碳酸亞鐵，酶法低溫提??；酶解后將酶解液過(guò)濾，定容，得到葛根提取液，將提取液通過(guò)超微波輻射處理，然后減壓濃縮、冷凍干燥制得葛根黃酮提取物；本發(fā)明采用復(fù)合酶解技術(shù)，酶解前加入提前預(yù)冷的磷酸氫二鈉?檸檬酸緩沖液，由于低溫酶解過(guò)程中加入了一定比例的碳酸亞鐵，使得低溫酶法提取既保證了酶解的效率，同時(shí)酶法低溫提取保持了黃酮的活性，提高了黃酮的純度；同時(shí)結(jié)合超微波輔助提取技術(shù)，充分發(fā)揮化學(xué)酶解和物理提取的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，降低成本，并提高了葛根黃酮的提取率。
【專利說(shuō)明】
一種利用野生葛根制備高純度葛根黃酮提取物的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種黃酮提取物的制備方法，具體涉及一種利用野生葛根制備高純度 葛根黃酮提取物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 葛根為豆科植物野葛的干燥根，其味甘、辛、性平，既是中藥材又是營(yíng)養(yǎng)豐富食用 原料，主要化學(xué)成分為葛根素、大豆素、大豆昔等黃酮類化合物?，F(xiàn)代藥理研究表明，葛根黃 酮有降低血管阻力，改善心腦血液循環(huán)，降低心肌耗氧量等多種藥理作用。
[0003] 傳統(tǒng)的葛根黃酮提取方法為：葛根醇提、提取物正丁醇萃取、萃取物再用乙酸結(jié) 晶、烘干得葛根黃酮，傳統(tǒng)提取方法存在的主要問(wèn)題是正丁醇、乙酸沸點(diǎn)高，高沸點(diǎn)溶劑相 應(yīng)需高溫干燥，干燥過(guò)程又產(chǎn)生膠糖異味，葛根黃酮的水溶性差和溶劑殘留，限制了行業(yè)內(nèi) 許多品種不能應(yīng)用，市場(chǎng)得不到拓展。鑒于目前葛根黃酮傳統(tǒng)提取方法存在能耗大，時(shí)間 長(zhǎng)，效率低的缺點(diǎn)，不宜用于工業(yè)生產(chǎn)。因此結(jié)合化學(xué)酶解與物理提取的方法可有效作用在 葛根細(xì)胞壁并最大程度提高細(xì)胞內(nèi)容物的溶出，從而提高葛根黃酮的提取率，但目前酶法 提取葛根黃酮提取出來(lái)的黃酮提取活性低，并且純度低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種利用野生葛根制備葛根黃 酮提取物的方法。
[0005] 技術(shù)方案：如本發(fā)明所述一種利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征 在于，包括如下步驟：
[0006] (1)將野生葛根冷凍干燥，粉碎過(guò)篩。
[0007] (2)將粉碎后的野生葛根粉加入提前預(yù)冷的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，加入復(fù)合 酶和碳酸亞鐵，在15-20°(：酶解40-601^11，？!1值5.5-6.5。
[0008] (3)酶解后將酶解液過(guò)濾，定容，得到葛根提取液，將提取液通過(guò)超微波輻射處理， 然后減壓濃縮、冷凍干燥制得葛根黃酮提取物。
[0009] 進(jìn)一步地，所述步驟(1)粉碎過(guò)40-60目篩。
[0010] 進(jìn)一步地，所述預(yù)冷的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液溫度為4-10°C。
[0011] 進(jìn)一步地，所述復(fù)合酶為纖維素酶和果膠酶質(zhì)量比為2-5:1。
[0012] 進(jìn)一步地，所述復(fù)合酶和碳酸亞鐵質(zhì)量比為1:0.05-0.1。
[0013] 進(jìn)一步地，所述超微波輻射處理功率50-70W，溫度控制在30-40°C提取20-30min。
[0014]有益效果:本發(fā)明采用纖維素酶和果膠酶復(fù)合酶解技術(shù)，酶解前加入提前預(yù)冷的 磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，由于低溫酶解過(guò)程中加入了一定比例碳酸亞鐵，使得低溫酶法 提取既保證了酶解的效率，同時(shí)酶法低溫提取保持了黃酮的活性，提高了黃酮的純度；同時(shí) 結(jié)合超微波輔助提取技術(shù)，充分發(fā)揮化學(xué)酶解和物理提取的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，降低成本，并提高了 葛根黃酮的提取率。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0016] 實(shí)施例1
[0017] 本實(shí)施例一種利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征在于，包括如下 步驟：
[0018] (1)取野生葛根1000g進(jìn)行冷凍干燥，通過(guò)粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎過(guò)40目篩；
[0019] (2)將粉碎后的野生葛根粉加入10L提前預(yù)冷的pH為6的4°C磷酸氫二鈉-檸檬酸緩 沖液，加入2g纖維素酶和lg果膠酶的復(fù)合酶以及0.15g碳酸亞鐵，在15°C酶解60min，pH值 5.5；
[0020] (3)酶解后將酶解液過(guò)濾，定容，得到葛根提取液，將提取液通過(guò)超微波輻射處理， 超微波輻射處理功率50W，溫度控制在30 °C提取30min，然后減壓濃縮、冷凍干燥制得葛根黃 酮提取物。
[0021] 實(shí)施例2
[0022] 本實(shí)施例一種利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征在于，包括如下 步驟：
[0023] (1)取野生葛根1000g進(jìn)行冷凍干燥，通過(guò)粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎過(guò)60目篩；
[0024] (2)將粉碎后的野生葛根粉加入10L提前預(yù)冷的pH為6的10°C磷酸氫二鈉-檸檬酸 緩沖液，加入5g纖維素酶和lg果膠酶的復(fù)合酶以及0.6g碳酸亞鐵，在20 °C酶解40min，pH值 6.5；
[0025] (3)酶解后將酶解液過(guò)濾，定容，得到葛根提取液，將提取液通過(guò)超微波輻射處理， 超微波輻射處理功率70W，溫度控制在40 °C提取20min，然后減壓濃縮、冷凍干燥制得葛根黃 酮提取物。
[0026] 實(shí)施例3
[0027] 本實(shí)施例一種利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征在于，包括如下 步驟：
[0028] (1)取野生葛根1000g進(jìn)行冷凍干燥，通過(guò)粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎過(guò)50目篩；
[0029] (2)將粉碎后的野生葛根粉加入10L提前預(yù)冷的pH為6的7°C磷酸氫二鈉-檸檬酸緩 沖液，加入4g纖維素酶和lg果膠酶的復(fù)合酶以及0.4g碳酸亞鐵，在18°C酶解50min，pH值 6.0；
[0030] (3)酶解后將酶解液過(guò)濾，定容，得到葛根提取液，將提取液通過(guò)超微波輻射處理， 超微波輻射處理功率60W，溫度控制在35°C提取25min，然后減壓濃縮、冷凍干燥制得葛根黃 酮提取物。
[0031] 實(shí)施例4
[0032] 本實(shí)施例一種利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征在于，包括如下 步驟：
[0033] (1)取野生葛根1000g進(jìn)行冷凍干燥，通過(guò)粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎過(guò)50目篩；
[0034] (2)將粉碎后的野生葛根粉加入10L提前預(yù)冷的pH為6的7°C磷酸氫二鈉-檸檬酸緩 沖液，加入3g纖維素酶和lg果膠酶的復(fù)合酶以及0.32g碳酸亞鐵，在18°C酶解50min，pH值 6.0；
[0035] (3)酶解后將酶解液過(guò)濾，定容，得到葛根提取液，將提取液通過(guò)超微波輻射處理， 超微波輻射處理功率60W，溫度控制在35°C提取25min，然后減壓濃縮、冷凍干燥制得葛根黃 酮提取物。
[0036] 實(shí)施例5
[0037] 分別取實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、實(shí)施例4得到的葛根黃酮，根據(jù)如下公式計(jì)算 葛根黃酮提取率:葛根黃酮提取率（％)=葛根黃酮重量(g)/野生葛根總重量X 1〇〇,結(jié)果見(jiàn) 表1。
[0038]表1葛根黃酮提取率
[0040] 對(duì)比例1采用本發(fā)明的方法，不同之處在于沒(méi)有加入碳酸亞鐵。
[0041] 對(duì)比例2采用本發(fā)明的方法，不同之處在于沒(méi)有加入碳酸亞鐵，酶解的溫度為40-60°C。從表1可以看出對(duì)比例1沒(méi)有加入碳酸亞鐵在酶法低溫提取下，葛根黃酮提取率明顯 低于實(shí)施例;對(duì)比例2沒(méi)有加入碳酸亞鐵在常溫酶解提取葛根黃酮提取率略低于實(shí)施例。
[0042] 實(shí)施例6
[0043]葛根黃酮提取物純度測(cè)定：
[0044] 精確稱取實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、實(shí)施例4提取得到的葛根黃酮提取物20mg， 置于250mL容量瓶中，加入70 %乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精確吸取0.1，0.2，0.3， 0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9，1.0于1011^容量瓶中，并各加70%乙醇1.01^，再加蒸餾水稀釋 至刻度搖勻。另取70%乙醇1.〇1^置1〇11^容量瓶中，加蒸餾水至刻度，作空白對(duì)照，在25〇11111 波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品溶液中總黃酮的含量，進(jìn)而計(jì)算出粗葛根 黃酮樣品中葛根黃酮的含量，根據(jù)下列公式計(jì)算出葛根黃酮純度。
[0045] 葛根黃酮純度（％ )=葛根黃酮重量(mg)/5 X 100
[0046] 葛根黃酮提取物抗氧化活性的測(cè)定：
[0047]取實(shí)施例1、實(shí)施例2、實(shí)施例3、實(shí)施例4提取得到的葛根黃酮提取液和DPPH自由基 溶液各2.00ml加入同一具塞試管中，搖勻。30min后用無(wú)水乙醇溶劑作參比，測(cè)定其吸光度 Ai，同時(shí)測(cè)定2. OOmlDPPH自由基溶液與2.00ml溶劑混合后的吸光度A0，以及2.00ml黃酮溶 液與2.00ml無(wú)水乙醇溶劑混合后的吸光度Aj，根據(jù)公式計(jì)算抑制率，抗氧化活性能力用抑 制率來(lái)表示，抑制率越大，抗氧化活性越強(qiáng)。其公式為:抑制率=1 一 (Ai -Aj )/A0 X 100%其 中，Ai為加抗氧劑時(shí)DPPH自由基溶液的吸光度;Aj為提取液在測(cè)定波長(zhǎng)的吸光度;A0為未加 抗氧劑時(shí)DPPH自由基溶液的吸光度，葛根黃酮純度以及葛根黃酮的抗氧化活性見(jiàn)表2。
[0048]表2葛根黃酮純度以及葛根黃酮的抗氧化活性
[0050] 對(duì)比例1采用本發(fā)明的方法，不同之處在于沒(méi)有加入碳酸亞鐵。
[0051] 對(duì)比例2采用本發(fā)明的方法，不同之處在于沒(méi)有加入碳酸亞鐵，酶解的溫度為40-6(TC〇
[0052] 從表1可知，現(xiàn)有葛根黃酮的提取技術(shù)純度一般在50-60%，對(duì)比例1和對(duì)比例2的 黃酮純度和活性要遠(yuǎn)低于本發(fā)明實(shí)施例，本發(fā)明實(shí)施例提供的制取方法可得到純度90%以 上的葛根黃酮，遠(yuǎn)高于現(xiàn)有技術(shù)，并且保持了黃酮的高活性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 將野生葛根冷凍干燥，粉碎過(guò)篩； (2) 將粉碎后的野生葛根粉加入提前預(yù)冷的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，加入復(fù)合酶和 碳酸亞鐵，在 15-20 °C 酶解40-60min，pH值 5 · 5-6 · 5; (3) 酶解后將酶解液過(guò)濾，定容，得到葛根提取液，將提取液通過(guò)超微波輻射處理，然后 減壓濃縮、冷凍干燥制得葛根黃酮提取物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征在于，所述步 驟(1)粉碎過(guò)40-60目篩。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征在于，所述預(yù) 冷的磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液溫度為4_10°C。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征在于，所述復(fù) 合酶為纖維素酶和果膠酶質(zhì)量比為2-5:1。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征在于，所述復(fù) 合酶和碳酸亞鐵質(zhì)量比為1:0.05-0.1。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用野生葛根制備葛根黃酮提取物的方法，其特征在于，所述超 微波輻射處理功率50-70W，溫度控制在30-40°C提取20-30min。
【文檔編號(hào)】A61P9/00GK105902609SQ201610332838
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年5月18日
【發(fā)明人】夏榮光, 趙曉聯(lián), 李書娟, 翁夕鋒
【申請(qǐng)人】江蘇茅寶葛業(yè)有限公司