積雪草總苷在制備預(yù)防或治療老年癡呆癥的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域。具體涉及積雪草總苷在制備預(yù)防或治療老年癡呆癥的藥物或保健食品或食品中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]隨著人口老齡化進(jìn)程的加快，老年性疾病已成為一個(gè)明顯影響人類健康的突出問題。老年癡呆癥是人進(jìn)入暮年后的一種常見病態(tài)反應(yīng)，其主要表現(xiàn)為記憶功能迅速衰減及識(shí)別能力障礙，是漸進(jìn)性的神經(jīng)功能退化性失調(diào)癥。據(jù)國內(nèi)外資料報(bào)道，隨著年齡的增長，在人體組織老化和基因的影響下，癡呆現(xiàn)象的發(fā)生率不斷升高，老年性癡呆和惡性腫瘤、心腦血管意外，并列為導(dǎo)致老年人死亡的三大疾病，被喻為21世紀(jì)人類健康的第四大敵。老年癡呆癥包括阿爾茨海默氏病(Alzheimer’s disease，簡(jiǎn)稱AD)、血管性癡呆(VD)、混合性癡呆和其他癡呆。其中阿爾茨海默氏病和血管性癡呆是老年癡呆中最主要的類型，患病率分別占所有癡呆病的63%、28%，腦組織損傷后遺癥、化學(xué)藥物中毒以及神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)或營養(yǎng)缺乏等導(dǎo)致的癡呆約占10%。該類疾病的發(fā)生給社會(huì)、家庭帶來沉重的醫(yī)保負(fù)擔(dān)，也給患者自身帶來極大的痛苦，目前在全球仍是較為棘手的病癥之一。
[0003]積雪草總苷是指從積雪草(Centella asiatica L.Urban.)中提取的三職類化合物(積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草酸、羥基積雪草酸等)的含量至少在20%以上的混合物或單一成分的化合物。據(jù)報(bào)道其具有促進(jìn)創(chuàng)傷愈合、抑制瘢痕增生、抗氧化、抗輻射，抗疲勞，抗突變、調(diào)節(jié)免疫功能、抗菌、抗?jié)儭⒖挂钟艏版?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等生物藥理作用，可用于開發(fā)保健食品、傷口愈合促進(jìn)劑、抗腫瘤藥及抗氧化劑等。但至今未見有關(guān)將其用于預(yù)防和治療老年癡呆癥各種藥品或保健食品或食品的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于開發(fā)積雪草總苷的新用途，提供積雪草總苷在制備預(yù)防和治療老年癡呆癥藥物或保健食品或食品中的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明所述的積雪草總苷是指從積雪草(Centella asiatica L.Urban.)中提取的三萜類化合物(積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草酸、羥基積雪草酸等)的含量至少在20%以上的混合物或單一成分的化合物。
[0006]本發(fā)明所述的積雪草總苷從積雪草中提取的方法為常規(guī)的積雪草總苷提取方法，即以積雪草為原料，以稀乙醇或稀丙酮浸泡提取，提取液減壓回收乙醇得浸膏，浸膏加水混溶，后用水飽和的正丁醇萃取，萃取液減壓回收溶劑得膏狀物，用少量甲醇溶解后加入數(shù)倍量無水丙酮使沉淀析出，取沉淀物真空干燥即得。采用紫外分光光度法或高效液相色譜法測(cè)定其中積雪草總苷或單一成分的含量，至少20%。
[0007]積雪草(Centella asiatica L.Urban.)為《中國藥典》收載的常用中藥,為傘形科積雪草屬植物積雪草的干燥全草，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，具有清熱利濕、解毒消腫的功效，臨床上多用于治療跌打損傷、皮膚病等。由其提取得到的積雪草總苷主要是由以五環(huán)三萜為基本結(jié)構(gòu)單元的積雪草酸、羥基積雪草酸及其糖苷(積雪草苷、羥基積雪草苷)組成的混合物或單一成分的化合物。化合物的結(jié)構(gòu)式見圖1。
[0008]當(dāng)前研究發(fā)現(xiàn)21號(hào)染色體的淀粉樣蛋白前體(APP, β -amyloid precursorprotein)的代謝產(chǎn)物β_淀粉樣蛋白(Αβ , β -amyloid protein)的過量產(chǎn)生是AD發(fā)病的重要原因之一。Αβ由可溶性變成不可溶性直至聚集、沉積，大致可分為3個(gè)過程:①核化階段擴(kuò)布聚集階段；③老年斑。自由基和過氧化損傷參與了 Αβ的核化和聚集過程，糖基化可使蛋白發(fā)生交聯(lián)，增加對(duì)蛋白酶的抗性，降低其可溶性；因此，抗氧化、清除自由基、抗糖化可以減少Ap的聚集、沉積。研究還證明，補(bǔ)體和激活的小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞也是老年斑的恒定成分，提示老年斑過程有炎癥參與；因此，抗炎藥也應(yīng)用于治療AD。而積雪草總苷具有極強(qiáng)的抗氧化、清除自由基及抗炎作用，這可能是積雪草總苷對(duì)AD具有防治作用的主要原因。
[0009]本發(fā)明將從積雪草中提取的含量在20%以上的積雪草總苷進(jìn)行有關(guān)預(yù)防和治療老年癡呆癥的藥效試驗(yàn)，結(jié)果顯示:積雪草總苷可以明顯改善注射β_淀粉樣蛋白(Αβ，β -amyloid protein)造模動(dòng)物或腦室注射鏈脲霉素造模動(dòng)物的記憶力減退、認(rèn)知功能與行為障礙，說明積雪草總苷在臨床防治老年癡呆癥具有重要的應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明實(shí)施例3對(duì)此有進(jìn)一步的描述。
[0010]藥效試驗(yàn)表明，含量在20%以上的積雪草總苷可作為預(yù)防和治療老年癡呆癥的藥物或輔助治療的保健食品或食品，其使用方法為每日服用積雪草總苷(含量20%以上)，每天3次，每次10mg?300mg。
【附圖說明】
[0011]圖1為積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草酸、羥基積雪草酸的結(jié)構(gòu)式。
【具體實(shí)施方式】
[0012]實(shí)施例1
[0013]1、制備工藝
[0014]取積雪草10公斤粉碎，過20目篩，加5倍量的70%乙醇室溫浸提兩次，每次I小時(shí)，提取液減壓回收乙醇得浸膏，浸膏加水混溶，后用等量的水飽和的正丁醇萃取2次，萃取液減壓回收溶劑得膏狀物，用少量甲醇溶解后加入數(shù)倍量無水丙酮使沉淀析出，取沉淀物真空干燥即得。
[0015]I1、積雪草總苷含量測(cè)定(高效液相色譜法)
[0016]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈:甲醇:水(22: 28: 50)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長204nm，流速0.8ml / min。
[0017]測(cè)定法精密稱取積雪草苷和羥基積雪草苷對(duì)照品適量，以甲醇制成每Iml中約含積雪草苷80ug和羥基積雪草苷120ug的溶液，作為對(duì)照品溶液。精密稱取I制得的產(chǎn)品適量，以甲醇配成約Img / ml的溶液，作為樣品溶液。
[0018]取上述溶液20ul分別注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。結(jié)果測(cè)得積雪草總苷(以積雪草苷和羥基積雪草苷計(jì))的含量為25%。
[0019]實(shí)施例2
[0020]1、制備工藝
[0021]取實(shí)施例1制得的產(chǎn)品10g，加水10ml溶解，調(diào)pH值2?3，用等體積的氯仿分別萃取3次，取水層，調(diào)pH值6?7，用等體積的正丁醇分別萃取3次，萃取液減壓回收溶劑得膏狀物，用少量95%乙醇溶解，真空干燥即得精制品。
[0022]I1、積雪草總苷含量測(cè)定(高效液相色譜法)
[0023]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈:甲醇:水(22: 28: 50)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長204nm，流速0.8ml / min。
[0024]測(cè)定法精密稱取積雪草苷和羥基積雪草苷對(duì)照品適量，以甲醇制成每Iml中約含積雪草苷80ug和羥基積雪草苷120ug的溶液，作為對(duì)照品溶液，精密稱取I制得的產(chǎn)品適量，以甲醇配成約0.2mg / ml的溶液，作為樣品溶液。
[0025]取上述溶液20ul分別注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。結(jié)果測(cè)得積雪草總苷(以積雪草苷和羥基積雪草苷計(jì))的含量為90.5%。
[0026]實(shí)施例3動(dòng)物試驗(yàn)
[0027]1、實(shí)驗(yàn)藥物
[0028]積雪草總苷(Centellaselected triterpenes, CST),含量 20% 以上(實(shí)施例1、實(shí)施例2獲得)，使用前溶于人工腦脊液。
[0029]鏈脲霉素(streptozotocin, STZ), Sigman產(chǎn)品，臨用前溶于人工腦脊液。
[0030]人工腦脊液(artificialcerebrospinal fluid, ACSF, mmol / L), ACSF 組成:NaCl 147, KC12.9，MgCl2L 6，CaCl2L 7，dextrose2.2。
[0031]I1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0032]近交系C57BL / 6健康雄性wi star大鼠，鼠齡3—4個(gè)月，200— 250g，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。大鼠在正常條件下喂養(yǎng)，即飼養(yǎng)室溫度為18 — 20°C，光照和黑暗各12h交替進(jìn)行，可以自由進(jìn)食和飲水。動(dòng)物分組為:正常組，對(duì)照組，CST低劑量組，CST高劑量組，每組15只大鼠。
[0033]II1、實(shí)驗(yàn)方法
[0034]1、給藥方案
[0035]大鼠固定于立體定位器,暴露前囟，以4%水合氯醒麻醉(240mg / kg,腹腔注射)。參照Sawyer等圖譜在PU L5和H5處用牙科鉆在顱骨表面鉆孔，將內(nèi)徑為0.4mm、外徑為
0.6_具有內(nèi)芯的不銹鋼套管植入側(cè)腦室，見有透明的腦脊液(CSF)流出方可確認(rèn)插入側(cè)腦室，插入內(nèi)芯加以封閉。用502膠加牙托粉固定套管，將一長約18cm的聚氯乙烯管(內(nèi)徑為0.1mm)與微量進(jìn)樣器相連，經(jīng)此導(dǎo)管向側(cè)腦室恒速灌注藥物。第I天，正常組注入ACSF (1ul)，對(duì)照組注入 STZ (3mg / kg)，CST 低劑量組注入 STZ (3mg / kg)+CST(100mg /kg), CST高劑量組注入STZ (3mg / kg) +CST (300mg / kg)。灌注時(shí)間為5 — lOmin，完畢后用5ul的ACSF沖洗導(dǎo)管，留針2min。第3天，同法給藥。于第13，14，21天，采用迷宮試驗(yàn)進(jìn)行大鼠的學(xué)習(xí)記憶行為測(cè)試。
[0036]2、學(xué)習(xí)記憶行為測(cè)試(采用迷宮試驗(yàn))。
[0037]IV、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0038]積雪草總苷高、低劑量組均能明顯對(duì)抗鏈脲霉素造成的記憶認(rèn)知與行為障礙。
[0039]V、結(jié)論
[0040]積雪草總苷(含量20%以上)可以明顯改善注射β-淀粉樣蛋白(AD，β —amy1id protein)造模動(dòng)物或腦室注射鏈唑霉素造模動(dòng)物的記憶力減退、認(rèn)知功能與行為障礙，說明積雪草總苷在臨床防治老年癡呆癥具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.積雪草總苷(Centellaselected triterpenes, CST)在制備預(yù)防或治療老年癡呆癥的藥物或保健食品或食品中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于其中所述積雪草總苷是指從積雪草((Centella asiatica L.Urban.)中提取的三職類化合物(積雪草式、輕基積雪草式、積雪草酸、羥基積雪草酸等)的含量至少在20%以上的混合物或單一成分的化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，本發(fā)明公開的含有積雪草總苷的藥物制劑由含量至少在20%以上的積雪草總苷與藥用輔料組成的醫(yī)學(xué)上可接受的各種劑型的制劑如固體制劑(片劑、膠囊、散劑、膜劑、丸劑等)、液體制劑(口服液、注射劑等)、半固體制劑(軟膏劑、糊劑等)及氣體制劑(吸入劑、噴霧劑等)。
【專利摘要】本發(fā)明涉及積雪草總苷(Centella selected triterpenes，CST)在制備預(yù)防或治療老年癡呆癥的藥物或保健食品或食品中的應(yīng)用。所述積雪草總苷是指從積雪草(Centella asiatica L.Urban.)中提取的三萜類化合物(積雪草甙、羥基積雪草甙、積雪草酸、羥基積雪草酸等)的含量至少在20％以上的混合物或單一成分的化合物。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明，積雪草總苷可以明顯改善注射β-淀粉樣蛋白(Aβ，β-amyloid protein)造模動(dòng)物或腦室注射鏈唑霉素造模動(dòng)物的記憶力減退、認(rèn)知功能與行為障礙，說明積雪草總苷在臨床防治老年癡呆癥具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
【IPC分類】A61K36-23, A61P25-28, A23L1-29
【公開號(hào)】CN104857042
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410062354
【發(fā)明人】欒德剛, 董倫, 欒松平, 肖智俊
【申請(qǐng)人】上海蘭蒂斯生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年8月26日
【申請(qǐng)日】2014年2月24日