本發(fā)明屬于納米藥物遞送系統(tǒng)抗菌，具體涉及一種基于脂蛋白復(fù)合物靜電吸附介孔二氧化硅納米材料的制備方法及抗菌佐劑應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、目前，抗生素是治療臨床細(xì)菌感染的有效藥物，但抗生素的濫用導(dǎo)致細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性，影響藥物的治療效果，甚至導(dǎo)致無藥可用的困境。

2、1995年發(fā)現(xiàn)的脂蛋白復(fù)合物hamlet/bamlet由人/牛α-乳清白蛋白和油酸構(gòu)成，最初被發(fā)現(xiàn)可以殺滅癌細(xì)胞用于腫瘤治療。研究表明hamlet/bamlet除抗腫瘤外，還可以通過與細(xì)胞凋亡的機(jī)制殺滅細(xì)菌。同時(shí)具有作為抗生素增強(qiáng)劑的潛力，恢復(fù)肺炎鏈球菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的敏感性，但對(duì)耐藥細(xì)菌的研究鮮有報(bào)道。通常hamlet/bamlet通過色譜柱交換法或透析方法制備。

3、介孔二氧化硅(msn)具有較高的比表面積，且粒徑和形貌可調(diào)控，表面易官能化。作為理想的納米遞送平臺(tái)，msn能夠通過靜電吸附或化學(xué)鍵合有效地負(fù)載小分子、蛋白質(zhì)等藥物。msn的粒徑是影響其表面吸附蛋白成分和結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵因素。在生物體液中，不同粒徑二氧化硅納米顆粒表面吸附形成不同的血清蛋白冠，所形成的蛋白冠可能直接影響納米粒子在生物體中的命運(yùn)。

4、針對(duì)耐藥菌的新型抗生素藥物的開發(fā)停滯不前，不足以應(yīng)對(duì)日益增長(zhǎng)的抗生素耐藥性威脅。

5、hamelt/bamlet作為抗菌劑的mic在mg/ml內(nèi)，傳統(tǒng)制備方法耗費(fèi)大量人力物力，阻礙了其實(shí)際應(yīng)用。因此，研發(fā)納米遞送載體通過靜電吸附脂蛋白復(fù)合物大大降低了制備成本與時(shí)間。但未考慮選擇和制備合適尺寸的納米遞送載體，這將極大程度的影響脂蛋白復(fù)合物發(fā)揮作用的效果。

6、因此，迫切需要恢復(fù)耐藥細(xì)菌對(duì)傳統(tǒng)抗生素的敏感性，為緩解抗生素耐藥危機(jī)提供新的策略。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有問題的不足，本發(fā)明的目的是提供一種基于靜電作用穩(wěn)定的介孔二氧化硅脂蛋白復(fù)合物載藥系統(tǒng)及抗菌佐劑應(yīng)用。

2、本發(fā)明解決其技術(shù)問題采用的技術(shù)方案是：

3、第一方面，本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)一種基于靜電作用穩(wěn)定的介孔二氧化硅脂蛋白復(fù)合物載藥系統(tǒng)的制備方法，所述方法包括如下步驟：

4、第一步，準(zhǔn)備氨基化介孔二氧化硅納米粒子；

5、第二步，將抗氧化藥物均勻分散于乙醇中，加入氨基化介孔二氧化硅納米粒子，于室溫下攪拌，干燥后即得負(fù)載藥物的介孔二氧化硅納米粒子；

6、第三步，將負(fù)載藥物的介孔二氧化硅納米粒子超聲均勻分散于磷酸鹽緩沖溶液中，向其中加入牛α-乳清白蛋白(bla)，振蕩孵育；

7、第四步，待孵育結(jié)束后，加入油酸(oa)，再靜置孵育，反應(yīng)后干燥即得脂蛋白包裹介孔二氧化硅負(fù)載抗氧化藥物復(fù)合材料。

8、在具體的實(shí)施方案中，第一步中，所述氨基化介孔二氧化硅為商業(yè)購(gòu)買或自行制備。

9、在更具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種氨基化介孔二氧化硅的制備方法，所述制備方法如下：

10、(1)稱取十六烷基三甲基溴化銨(ctab)和堿于去離子水中80～95℃反應(yīng)0.1～1h，反應(yīng)過程中持續(xù)攪拌；后加入正硅酸四乙酯(teos)繼續(xù)反應(yīng)1～2h經(jīng)離心收集；

11、(2)將步驟(1)中得到的干燥產(chǎn)物于馬弗爐550±50℃煅燒4-8h優(yōu)選6h以去除十六烷基三甲基溴化銨(ctab)得到；

12、(3)將步驟(2)中收集產(chǎn)物分散于乙醇中，加入3-氨基丙基三乙氧基硅烷(aptes)，于78±5℃下冷凝回流12-24h；

13、(4)將步驟(3)中產(chǎn)物離心收集，洗滌干凈后，干燥后得msn-nh2。

14、在更具體的實(shí)施方案中，所述步驟(1)中，堿為三乙醇胺(tea)或naoh等等。通過改變tea或naoh加入量，可以制備不同尺寸的介孔二氧化硅納米載體。例如，步驟(1)加入71.2μl?tea，經(jīng)過后續(xù)處理步驟可以獲得25nm±10nm大小的介孔二氧化硅納米載體；步驟(1)加入50μl?tea，經(jīng)過后續(xù)處理步驟可以獲得50nm±5nm大小的介孔二氧化硅納米載體。步驟(1)先加入0.2g?ctab和700μl?naoh(2.0m)，于96ml去離子水中80℃反應(yīng)0.5h，反應(yīng)過程中持續(xù)攪拌；后滴加1.5ml正硅酸四乙酯(teos)繼續(xù)反應(yīng)1h經(jīng)離心收集，經(jīng)過后續(xù)處理步驟可以獲得100nm±10nm。

15、在具體的實(shí)施方案中，所述步驟(3)中，msn與乙醇的質(zhì)量體積比為100±30mg：20±5ml。在具體的實(shí)施方案中，所述第二步中的抗氧化藥物為姜黃素。

16、優(yōu)選的，所述第二步的方法具體如下：

17、(1)將疏水性抗氧化藥物姜黃素(cur)分散于乙醇中，可按與cur質(zhì)量比為2：1～1：1加入msn-nh2，反應(yīng)溫度為25±5℃，反應(yīng)時(shí)間至少為24h；

18、(2)離心收集反應(yīng)產(chǎn)物，去離子水洗滌，干燥后得負(fù)載姜黃素的介孔二氧化硅納米顆粒(msn-nh2/cur)。

19、在具體的實(shí)施方案中，所述msn-nh2與cur質(zhì)量比為1：1。

20、在具體的實(shí)施方案中，第四步中，油酸與α-乳清白蛋白的摩爾比為30～50：1優(yōu)選40：1，反應(yīng)條件為：反應(yīng)溫度45±5℃，反應(yīng)時(shí)間為15±5min；采用超速離心的方式收集沉淀后經(jīng)冷凍干燥獲得固體材料(bmsn/cur)。

21、第二方面，本發(fā)明保護(hù)一種上述方法制備得到的脂蛋白包裹介孔二氧化硅負(fù)載抗氧化藥物復(fù)合材料(又稱脂蛋白復(fù)合納米粒子)。

22、第三方面，本發(fā)明保護(hù)上述基于脂蛋白包裹介孔二氧化硅負(fù)載抗氧化藥物復(fù)合材料在制備抗生素佐劑中的應(yīng)用。

23、在具體的實(shí)施方案中，所述抗生素佐劑還含有藥學(xué)上可接受的輔料。

24、作為抗生素佐劑的活性成分與氨基糖苷類抗生素聯(lián)用可以恢復(fù)mrsa對(duì)傳統(tǒng)抗生素的敏感性，負(fù)載在孔道中的抗氧化藥物緩慢釋放，清除感染部位生成的自由基利于細(xì)菌感染部位治療與恢復(fù)。

25、有益效果

26、本發(fā)明所獲得的脂蛋白包裹介孔二氧化硅負(fù)載抗氧化藥物復(fù)合材料納米粒子，作為抗生素佐劑的活性成分能夠恢復(fù)mrsa對(duì)氨基糖苷類抗生素的敏感性。

27、本發(fā)明所述的脂蛋白包裹介孔二氧化硅負(fù)載抗氧化藥物復(fù)合材料納米粒子制備方法簡(jiǎn)單，對(duì)正常細(xì)胞毒性小，生物相容性良好。負(fù)載抗氧化藥物可以清除自由基，加速傷口感染部位恢復(fù)。

技術(shù)特征：

1.一種基于靜電作用穩(wěn)定的介孔二氧化硅脂蛋白復(fù)合物載藥系統(tǒng)的制備方法，所述方法包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述氨基化介孔二氧化硅為商業(yè)購(gòu)買或自行制備。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述氨基化介孔二氧化硅的制備方法具體如下：

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，堿為三乙醇胺或naoh；

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二步中的抗氧化藥物為姜黃素。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述第二步的方法具體如下：

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述第四步的方法具體如下：油酸與α-乳清白蛋白的摩爾比為30～50：1優(yōu)選40：1，反應(yīng)條件為：反應(yīng)溫度45±5℃，反應(yīng)時(shí)間為15±5min；

8.權(quán)利要求1-7任一所述的方法制備得到的脂蛋白包裹介孔二氧化硅負(fù)載抗氧化藥物復(fù)合材料。

9.權(quán)利要求8所述的基于脂蛋白包裹介孔二氧化硅負(fù)載抗氧化藥物復(fù)合材料在制備抗生素佐劑中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗生素佐劑還含有藥學(xué)上可接受的輔料。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開一種基于脂蛋白復(fù)合物靜電吸附介孔二氧化硅納米材料的制備方法及抗菌佐劑應(yīng)用；所述方法如下：第一步，準(zhǔn)備氨基化介孔二氧化硅；第二步，將抗氧化藥物均勻分散于乙醇中，加入氨基化介孔二氧化硅，于室溫下攪拌，干燥后即得負(fù)載藥物的介孔二氧化硅；第三步，將負(fù)載藥物的介孔二氧化硅超聲均勻分散于磷酸鹽緩沖溶液中，向其中加入牛α?乳清白蛋白，振蕩孵育；第四步，待孵育結(jié)束后，加入油酸，靜置孵育，反應(yīng)后干燥即得脂蛋白包裹介孔二氧化硅負(fù)載抗生素藥物復(fù)合材料。本發(fā)明所獲得的脂蛋白包裹介孔二氧化硅負(fù)載抗生素藥物復(fù)合材料，作為抗生素佐劑能夠恢復(fù)MRSA對(duì)氨基糖苷類抗生素的敏感性。

技術(shù)研發(fā)人員：陳進(jìn),李雨晴,蔡鈴
受保護(hù)的技術(shù)使用者：南京醫(yī)科大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/30